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PROLOGO

La presente Gua de Prcticas para el Laboratorio de Biologa Celular


contempla experimentos y actividades debidamente organizados de acuerdo al
programa establecido; que permitir al estudiante vincular los aspectos
estudiados en teora con actividades prcticas mediante la realizacin de
proyectos comunes.
Cabe mencionar que esta gua de Laboratorio de Biologa Celular tuvo
un antecedente muy importante, ya que en el plan rgido tambin hubo un
manual de laboratorio para esta materia, pero debido a que el plan de estudios
de la Facultad de Qumica Farmacutica Biolgica en el ao 2002 fue
reestructurado por consiguiente tuvo que ser modificado el contenido de esta
experiencia educativa y por lo tanto, las practicas de laboratorio en su mayora
cambiaron.
Por otra parte, la Biologa Celular es una ciencia bien fundamentada,
reconocida como disciplina despus de establecerse la teora celular; dotada
de instrumentos de anlisis cada vez ms poderosos para explorar los
procesos internos de la clula. Su objetivo inicial fue describir con mxima
precisin todas las estructuras caractersticas de las clulas animales y
vegetales y de los seres unicelulares, las modificaciones en el curso de la vida
de las clulas, su diversidad dentro de estos seres o a lo largo del desarrollo
embrionario, etc.
La Biologa Celular, se coloc con prontitud dentro de los campos ms
importantes de la biologa y constituy un foco de convergencia y fundamento
de todos los mtodos; slo el estudio de las propiedades de las clulas
individuales permitira comprender el funcionamiento y la constitucin de las
estructuras pluricelulares. De ser una ciencia descriptiva, la biologa celular se
transform en ciencia experimental con el objetivo esencial de mejorar la
comprensin de las estructuras y de los mecanismos a nivel molecular.
Actualmente sus principales metas de estudio son: el trfico membranario en el
interior de las clulas, el citoesqueleto, la biognesis de los organelos llamados
semiautnomos, las funciones de las matrices extracelulares y la sealizacin
de la membrana. Por ser una ciencia integrativa y multidisciplinaria, la biologa
celular suprime las fronteras artificiales entre diversos mtodos y aporta una
visin ms completa de las estructuras y de las funciones celulares; identifica a
las molculas constitutivas de los organelos, ubica las enzimas en
compartimientos, estudia las relaciones fisiolgicas entre ellas y mide los flujos
metablicos y energticos en las condiciones fsico-qumicas que se
encuentran in vivo.
Los experimentos que aqu se incluyen estn diseados para realizarse
con el equipo de laboratorio con el que cuenta nuestra facultad, la metodologa
incluida est centrada en el desarrollo de habilidades de ejecucin y de
razonamiento que permitan al alumno tener un buen desempeo en un
laboratorio de biologa celular; fomentando as, tanto el trabajo individual como
colectivo.

Cada prctica incluye una breve revisin terica, sin la intencin de


suplir los libros de texto, que contienen informacin ms detallada. En la
evaluacin del aprendizaje se consideran la realizacin de prcticas,
participacin, entrega de reportes escritos y exmenes tericos. Adems, sta
gua de prcticas para el laboratorio de biologa celular incluye un glosario de
trminos para que el alumno alcance una mayor comprensin en su
aprendizaje.

UNIVERSIDAD VERACRUZANA
FACULTAD DE QUMICA FARMACUTICA BIOLGICA
LABORATORIO DE BIOLOGA CELULAR
PRCTICA No. 01
USO Y CUIDADO DE UN MICROSCOPIO
OBJETIVO:
Conocer la importancia del microscopio en el campo de la Biologa
Celular, as como las partes que lo integran, uso y cuidado del mismo.
FUNDAMENTO:
Un microscopio es un instrumento que permite observar objetos no
perceptibles a simple vista (Ver Fig. 1.1). Ello se consigue mediante un sistema
ptico compuesto por lentes de cristal, que al ser atravesadas por los rayos de
luz reflejados por el objeto, forman una imagen amplificada de l.(5)
Ocular binocular
Anillo de dioptra

Cabezal

Ocular
Tornillo del cabezal

Portaobjetos giratorio
Brazo

Objetivo

Platina
Condensador
Tornillo del carro mvil
Anillo para la abertura del diafragma del
condensador

Tornillo micromtrico

Transportador del condensador


Tornillo para fijar el condensador
Tornillo macromtrico
Fuente de luz
Base
Botn de encendido

Figura 1.1 Partes del microscopio

Los microscopios se pueden clasificar desde un punto de vista muy


sencillo en: Simples y compuestos. Se le da el nombre de microscopio simple a
todas aquellas lentes con montura o sin ella, de distintos espesores y
dimetros, biconvexas o planoconvexas, que nos permiten amplificar los
objetos, comnmente conocidas como lupas. Un microscopio compuesto est
constituido por la combinacin de dos sistemas de lentes convergentes. Uno,

prximo al ojo del observador, por lo cual se llama ocular y que acta como
microscopio simple. Otro prximo al objeto denominado objetivo.(1)
GENERALIDADES:
Descripcin del microscopio compuesto:
Sistema de soporte:

Pie o base: la funcin de esta pieza es dar estabilidad al


microscopio y soporte a las dems partes que lo integran.

Platina: es una pieza metlica cuadrada con un orificio en el


centro por el cual pasa la luz, posee a su vez un carro mvil con una
pinza que sujeta la muestra permitiendo su movilizacin para la
observacin.

Brazo: es el soporte que va desde la base hasta el sistema


ptico, es el sostn de dicho sistema.
Sistema ptico:

Oculares: son lentes que se encuentran en el cabezal del


microscopio, separados por un diafragma que permite el movimiento de
estos para obtener una imagen con mejor calidad y comodidad de visin.

Objetivos (seco dbil 10X, seco fuerte 40X e inmersin 100X): es


la parte mas importante del microscopio, se conforman por varias lentes
que corrigen las aberraciones, se encuentran en la parte baja del
cabezal sujetos a un carrusel o revolver que permite el cambio de un
objetivo a otro.
Sistema de iluminacin:

Fuente luminosa: es la luz proporcionada por una lmpara


ubicada en la base del microscopio, la cual pasa a travs de la platina
proporcionando iluminacin a la muestra.

Condensador: es un sistema de lentes con gran abertura, que se


encuentra entre la platina y la fuente de iluminacin; puede subir o bajar
dependiendo del objetivo que se este utilizando.

Diafragma: se encuentra situado debajo de la platina y permite


regular la cantidad de luz que pasa por el condensador.
Sistema de ajuste:

Tornillo macromtrico o de enfoque rpido: se utiliza para


conseguir un ajuste aproximado de la imagen a observar.

Tornillo micromtrico o de enfoque fino: su desplazamiento es


mucho ms lento y permite enfocar claramente nuestra imagen.

Tornillo de carro mvil: se utiliza para desplazar la laminilla sobre


la platina hacia los lados, hacia atrs y hacia delante.
MANIPULACIN DE UN MICROSCOPIO:
1.
El banco y la mesa debern encontrarse a una altura que le
permita al observador el uso del microscopio en posicin vertical y de
manera confortable.
2.

Encender la fuente de iluminacin.

3.
Montar la preparacin que se desea observar.
4.
Separar los binoculares ajustndolos a su propia distancia
interpupilar.
5.
Enfocar entre el ojo derecho y el izquierdo. Los tubos
portaoculares son susceptibles de ajuste, esto se logra enfocando primero
la imagen con el objetivo de menor aumento, usando los tornillos macro y
micromtrico. Si la imagen no es clara, sube o baja el ocular izquierdo
mediante el movimiento del anillo que rodea el tubo portaocular hasta
obtener una imagen ntida, as el microscopio queda ajustado a su propia
visin ocular.
6.
Para enfocar con cualquier objetivo, especficamente el seco
fuerte (40 X) y con el de inmersin (100X), debers acercar el objetivo a la
preparacin, mirndolo de lado para controlar el descenso hasta que la
lente frontal de dicho objetivo quede dentro de la distancia focal. Solamente
entonces debers mirar por el ocular alejando lentamente el objetivo hasta
obtener el enfoque correcto, el cual se obtendr moviendo el tornillo
micromtrico.
A) Objetivos de menor aumento (5X Y 10X): descender el condensador a
fondo, bajar el objetivo sobre la preparacin (sin tocarla), subir el
objetivo con el tornillo macromtrico hasta ver la imagen a travs de los
oculares. Suba un poco el condensador en caso de que la iluminacin
sea insuficiente.
B) Objetivo de gran aumento (40X): Colocar el condensador a la mitad de
la distancia, bajar el objetivo sobre la preparacin (sin tocarla). Subir el
objetivo con el tornillo macromtrico muy lentamente hasta ver la imagen
en el campo y perfeccionar el enfoque con el tornillo micromtrico.
Mover el condensador hasta obtener iluminacin suficiente.
C) Objetivo de inmersin: Colocar la preparacin perfectamente seca,
poner una pequea gota de aceite de inmersin sobre la parte a
examinar, subir el condensador a tope. Observa por los oculares y
enfoca con el tornillo micromtrico.(1)
ABERTURA NUMRICA.
La abertura numrica (A.N.) de un objetivo es una cifra exacta calculada
matemticamente a partir de su dimetro y su longitud focal equivalente, pero a
pesar de ser una caracterstica importante, slo es necesario saber que la
abertura numrica se encuentra marcada sobre la lente, que expresa el
tamao del cono de la luz y que de ella depende la cantidad que atraviesa la
lente y en particular su poder de resolucin y su mxima amplificacin til.(5)
CUIDADOS PARA UN MICROSCOPIO.

El microscopio deber guardarse en un lugar seco y cubierto del polvo,


ya que ste adems de dificultar la observacin, daa las lentes cuando
se frotan sin que stas se hayan limpiado.
Al trasladarlo de un lugar a otro debe tomarse del brazo con una mano
y con la otra sostenerlo de la base.
Debers de cerciorarte que las lentes se encuentran limpias de polvo
antes de utilizarlo, de no ser as, deben limpiarse cuidadosamente
utilizando para ello un papel especial para lentes, el cual se obtiene en
las pticas o en las tiendas de artculos fotogrficos.
Las lentes no debern quitarse del sitio que les corresponde para que
no se llene de polvo el interior del equipo, adems es necesario
desmontar partes internas para limpiarlo.
Cuando emplees aceite de inmersin debers limpiar las lentes una
vez terminada la observacin, ya que si llegara a secarse sera difcil de
limpiarse, esto puedes hacerlo con el mismo papel para las lentes.
Nunca debers desarmar un microscopio, ya que si lo llegaras a hacer
sin tener conocimientos de ello, podrs desajustarlo o daarlo de sus
partes. Es por ello que existe personal especializado.
Las lentes podrn limpiarse con agua destilada, partes metlicas o
plsticas del microscopio debern limpiarse con un trapo de algodn y
se les da brillo con aceite mineral.
Todas las preparaciones que se hagan y se tengan que teir,
limpiarlas del reverso para que no pierdan nitidez.
Al terminar la observacin, debers limpiar perfectamente las lentes.
En caso de tener alguna duda en el cuidado del equipo o alguna falla
mecnica o elctrica, debers de dar aviso al encargado del laboratorio.
(6)
FACTORES QUE DAAN AL MICROSCOPIO.
1. Lavar las lentes con alcohol.
2. Mojar los objetivos con xilol o alcohol, o bien con alguna otra
sustancia.
3. Usar papel ordinario para limpiar las lentes.
4. Poner los dedos sobre las lentes.

5. Limpiar el soporte o la platina con xilol.


6. Limpiar el interior de las lentes con tela o papel, en caso de que sea
completamente necesario, utiliza un pincel de cerdas muy pequeas
y/o utiliza papel seda.
7. Dejar el microscopio sin oculares.
8. Guardar el microscopio con aceite de inmersin en el objetivo.
9. Transportar el microscopio con una sola mano.(3)
OTROS TIPOS DE MICROSCOPIOS:
Microscopio de Contraste de Fases.
o Su sistema est compuesto por lente ocular, anillo de fases, lente
del objetivo, lente del condensador y diafragma anular. Tiene una
amplificacin de 1,000 a 2,000 nm. Permite observar estructuras
muy difciles de distinguir. No requiere de una tincin.
Microscopio de Fluorescencia.
o Se compone de un primer filtro de corte o filtro de excitacin, espejo
dicroico, segundo filtro de corte o filtro de emisin, fuente de
iluminacin y condensador. Se observan muestras teidas,
inmunofluorescencia directa o indirecta.
Microscopio de Interferencia.
o Es un instrumento que permite la medida de la masa de regiones
pequeas y transparentes de clulas vivas, obtenindose datos de
tipo cualitativo y cuantitativo. Sus componentes son analizador
rotable, un cuarto de longitud de onda, objetivo de interferencia,
condensador, polarizador y filtro de interferencia.
Microscopio Electrnico de Barrido.
o Est compuesto por un can de electrones (nodo, ctodo y
electroimn), sistema de barrido y de lentes. Su resolucin depende
de la cantidad de electrones emitidos, contando as con un lmite de
resolucin. Tiene una amplificacin de 100,000 a 200,000 veces y
una alta resolucin en 3D.
Microscopio Electrnico de Transmisin.
o Est compuesto por can electrnico, lente condensadora,
cmara de muestra, lente objetiva, lente intermedia, proyector,
pantalla fluorescente y cmara (placa fotogrfica). Utiliza electrones
con una longitud de onda de 0.5 . Proporciona un aumento de las
clulas de 100, 000 veces aproximadamente.(4)
CONCLUSIONES:
CUESTIONARIO:

1) Cul es la diferencia entre un microscopio simple y uno compuesto?


2) Qu importancia tiene el uso del microscopio en la Biologa Celular?
3) Por qu es necesario utilizar aceite de inmersin al utilizar el objetivo
del mismo nombre?
4) Qu significa resolucin, poder de resolucin y amplificacin, as
mismo de qu factores depende cada uno de ellos? Presenta tus
respuestas a manera de tabla.
5) Realiza una tabla comparativa de todos los tipos de microscopios
incluyendo: fuente de iluminacin, condensador, longitud de onda, tipo
de tincin, resolucin, amplificacin, tipo de lentes, etc.
FECHA DE REALIZACIN:
BIBLIOGRAFA:
1. Bernis, M. 1998. Atlas de Microscopa. Mxico D.F. Segunda edicin.
Editorial Fernando Aldape Barrera. Pgs. 95-107
2. Coll, J. 2000. Experimentos con el microscopio. Mxico D.F. Primera
edicin. Ediciones Omega S.A. Pgs. 63-65
3. Lpez, C. 1987. Microscopia en el laboratorio. Xalapa. Facultad de
Bioanlisis, U. V. Pgs. 10-21
4. Nachtigall, W. 2002. Microscopa. Materiales. Instrumental. Mtodos.
Mxico D.F. Segunda edicin. Editorial Omega. Pgs. 8-13
5. Vovides, A. 2000. Microscopa ptica: para las ciencias biolgicas.
Chiapas. Universidad de Ciencias y Artes del Estado de Chiapas.
Pgs. 14-19
6. Wallis, T. 1998. Microscopa analtica. Mxico D.F. Primera edicin.
Editorial ACRIBIA. Pgs. 9-23

UNIVERSIDAD VERACRUZANA
FACULTAD DE QUMICA FARMACUTICA BIOLGICA
LABORATORIO DE BIOLOGA CELULAR
PRCTICA No. 02
MICROTOMO
OBJETIVO:
Aprender a realizar cortes histolgicos utilizando el microtomo.
FUNDAMENTO:
Los microtomos son mquinas o instrumentos empleados para obtener
lminas muy delgadas (cortes) de los tejidos que sern estudiados. Segn el
tipo de trabajo, la forma en que se hizo la preparacin y la inclusin del tejido,
se emplean muchos tipos de microtomos; algunos estn adaptados para un
trabajo especial (Ver Fig. 2.1).

Botn
micromtrico
Soporte de
muestra

Botn para
desbastar

Portanavajas

Cabezal

Figura 2.1 Microtomo

Generalmente se consideran cinco clases de microtomos:


1) De deslizamiento
2) Rotatorios
3) De balanceo
4) De congelacin
5) Para cortes ultradelgados (microscopia electrnica)
Estos tipos pueden ser subdivididos segn sus cuchillas, ya sean
mviles o fijas, o tambin segn el plano de seccin, vertical u horizontal.

Los microtomos consisten bsicamente en una base pesada que soporta una
superficie por la que se desliza una cuchilla, un tornillo que acerca el material y
lo ponga al alcance del filo de la navaja, de modo que siempre su avance
ofrezca la misma medida del material. (1)
GENERALIDADES:
La tcnica histolgica comprende la preparacin de los tejidos para su
estudio microscpico, lo cual se logra sometiendo a la totalidad o a una parte
seleccionada del tejido por examinar, a una serie de procesos: fijacin,
deshidratacin, aclaracin, inclusin, corte y tincin. El tipo de muestras que se
procesa con el microtomo es diverso, puede realizarse el corte de cualquier
material animal o vegetal; pero lo ms comn son los cortes de rganos
perfundidos.
Fijacin: Es el proceso mediante el cual los elementos constitutivos de las
clulas, y por tanto de los tejidos, son fijados en cuanto a su estado fsico, y
parcialmente en su estado qumico, de manera que puedan resistir el
tratamiento sucesivo con varios reactivos sin prdida, distorsin importante o
descomposicin. La mayora de los agentes fijadores actan desnaturalizando
o precipitando las protenas, que forman entonces una esponja o malla que
tiende a englobar los otros componentes celulares. En condiciones ideales, un
fijador debe penetrar rpidamente al tejido, su accin debe ser inmediata, y
debe causar una prdida y una alteracin qumica y fsica mnima de las
clulas y de sus componentes; debe adems ser barato, estable y de fcil
manejo.
La mayora de los fijadores producen cierto endurecimiento tisular, facilitando
as el corte; pero, generalmente este efecto endurecedor es reforzado por la
accin de los alcoholes, que son empleados durante el proceso de
deshidratacin. Los fijadores tambin aumentan, por lo general, la
diferenciacin ptica de las estructuras celulares y tisulares; al mismo tiempo,
hacen que la clula resista a las soluciones hipo e hipertnicas que son
empleadas despus de la fijacin; reducen tambin el riesgo de infeccin en las
personas que manejan los tejidos.
Deshidratacin: Los tejidos contiene gran cantidad de agua, tanto intra como
extracelular, que debe ser eliminada y reemplazada por parafina. Este proceso
debe ser realizado mediante el uso de alguna sustancia que se mezcle con el
agua y tenga cierta afinidad con ella, de manera que pueda penetrar fcilmente
entre las clulas de los tejidos. El alcohol etlico es el mejor agente para la
deshidratacin, esto se logra utilizando alcoholes en distinta concentracin,
empezando por el 70%. No se aconseja el paso directo del tejido de formol al
alcohol concentrado, porque provoca distorsin de los tejidos; cuando estos
son delicados, la deshidratacin debe ser ms gradual. Algunos agentes
aclarantes actan parcialmente como deshidratantes. La deshidratacin es
tambin indispensable antes de que puedan montarse los cortes teidos.
Aclaramiento: Permite que el alcohol de los tejidos sea reemplazado por un
lquido que disuelva la parafina con la cual el tejido va a ser impregnado. Los
aclaradores adems de eliminar el alcohol, muchas de estas sustancias tienen
la propiedad de volver transparentes los tejidos. Ello se debe a sus elevados

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ndices de refraccin, y a los cambios pticos que se producen cuando el


agente aclarante penetra entre los elementos tisulares muy refractantes; es
decir, el ndice de refraccin de los agentes aclarantes es aproximadamente
igual al de los tejidos. La mayora de las sustancias verdaderamente aclarantes
son aceites esenciales. Los buenos agentes aclarantes deben eliminar pronto
el alcohol y aclarar rpidamente sin endurecimiento; no deben disolver los
colorantes de anilina, ni evaporarse demasiado rpido en los baos de
parafina.
Inclusin: Este proceso comprende la impregnacin de los tejidos con un
medio que llene todas las cavidades naturales, espacios o intersticios tisulares
y an los espacios intracelulares, y que proporcione la consistencia firme
necesaria para hacer cortes bastante delgados sin provocar distorsin y sin
alterar las relaciones espaciales del tejido y los elementos celulares. Otra
ventaja fsica ms en el caso de especmenes pequeos deriva de la maniobra
de encerrarlos en un bloque o una masa de material de inclusin, que permite
manejar y fijar la muestra al microtomo sin daar el tejido en s.
Microtomo de deslizamiento: Se dividen en un tipo en el cual la cuchilla se
mantiene entre pinzas, y en el cual la cuchilla es mvil. Este ltimo no es muy
satisfactorio, solo si se mantiene la cuchilla bien controlada, la variedad de
cuchilla fija, donde lo que se desliza es la pieza de tejido. Este tipo de
microtomo es el ms utilizado ya que es rgido, resistente, de diseo y
construccin sencillos, fcil de mantener, y que la calidad de los cortes
obtenidos con l es difcilmente igualada por cualquier otro instrumento.
Asimismo, permite obtener grandes cortes y resulta fcil hacer cortes seriados.
Microtomo rotatorio: En este microtomo solo puede emplearse una longitud
de cuchilla relativamente pequea, y la cuchilla ocupa una situacin peligrosa.
Adems, su diseo y construccin son complicados, lo que significa un costo
elevado. No es conveniente para cortar bloques grandes como el de
deslizamiento; la mayor parte de los investigadores lo encuentran ms rpido
en caso de cortes numerosos de bloques ordinarios.
Microtomo de balanceo: Este tipo de microtomo es probablemente el ms
simple de todos, el bloque de tejido se monta en el extremo de un brazo mvil
de resorte y la cuchilla se mantiene rgida en posicin horizontal con el filo
hacia arriba y ligeramente inclinado hacia el bloque. Fcilmente pueden
obtenerse con l series de 60 a 90 cortes; stos, sin embargo, no son
absolutamente plano, sino que muestran una ligera curvatura.
Microtomo de congelacin: Posee una cremallera central sobre la cual se
coloca el sujetador del bloque, el cual es perforado y unido por un tubo a un
cilindro conteniendo bixido de carbono. Una simple vlvula permite la
liberacin de chorros rpidos e intermitentes de bixido de carbono que
congelan el bloque y el tejido. La cuchilla suele ir montada en un pivote por
encima del bloque.

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Microtomo para cortes ultradelgados: Para la microscopa electrnica, los


cortes deben tener de 50 a 120 m; para ello existen microtomos especiales.
Suelen recurrir a expansin trmica para hacer avanzar el bloque.
MATERIAL:
Microtomo de deslizamiento.
Pincel
Bao de flotacin
Portaobjetos
Algodn
Termmetro
REACTIVOS:
Alcohol
Xilol
Parafina
TCNICA:
1) Para el manejo del tejido debe fijarse:
a. Si es procesado por perfusin, debe mantenerse el tejido en el
fijador durante 24 hrs.
b. Despus se enjuaga con agua y se pone a deshidratar en alcohol,
pasando por diferentes concentraciones.
c. Despus de la deshidratacin se realiza el aclaramiento con xilol
durante 3 hrs.
d. Se pone a derretir la parafina, entre 52 y 54 C.
e. Pasando el aclaramiento se coloca el tejido en un cassette con
marbete y se coloca en la parafina durante 4 hrs., realizando 2
baos, uno para quitar el exceso de xilol y otro para cubrir
completamente el tejido. El molde debe rociarse con alcohol para
desprender fcilmente, una vez endurecida la parafina.
f. Cuando el tejido ya est encapsulado en la parafina se realizan
unos cortes gruesos para quitar el exceso de la misma
(desbastar).
2)
El microtomo cuenta con dos palancas una que acerca el
portamuestras hacia el cabezal, y la otra, la que mueve a la muestra de
arriba hacia abajo para realizar los cortes.
3)
El botn micromtrico con el cual se calibra el grosor de
los cortes, el cabezal que porta la navaja para la realizacin de los
cortes puede ser fijo o moverse de izquierda a derecha, hacia el frente y
hacia atrs.

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Realizacin de los cortes:


4)
Una vez que el tejido est listo, se coloca de 5 a 10
minutos en refrigeracin para la realizacin de los cortes.
5)
Elegido el espesor que se desea dar a los cortes, se
coloca el portamuestras a la distancia deseada con ayuda de las
palancas y se desliza la cuchilla haciendo as el primer corte.
6)
Junto al microtomo se tiene preparado el bao de
flotacin a una temperatura de 2 C debajo de la temperatura a la que
derrite la parafina (Ver Fig. 2.2).

Figura 2.2 Bao de flotacin

7)
Si el corte realizado sale completo, se toma por un
extremo con la ayuda de un pincel ligeramente humedecido para
colocarlo en el bao de flotacin.
8)
Este bao tiene como fin extender la parafina para
colocarla en el portaobjetos.
9)
Teniendo ya el portaobjetos rotulado, se introduce en el
bao por debajo de la muestra y se levanta hacia la muestra para que se
coloque sobre este, una vez fro y seco se puede observar.
OBSERVACIONES CON DIBUJOS:
CONCLUSIONES :
CUESTIONARIO:
1) Qu es el microtomo y para que sirve?
2) Qu precisin tiene el microtomo al realizar los cortes?
3) Qu importancia tiene usar el bao de flotacin?
4) Por qu es necesario utilizar el proceso de fijacin?
5) Cul es la importancia de utilizar el aclaramiento en una muestra?
FECHA DE REALIZACIN:
BIBLIOGRAFA:

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1. Lynch, M. 1992. Mtodos de laboratorio. Mxico. Segunda edicin.


Editorial interamericana. Pgs. 1129-1145

UNIVERSIDAD VERACRUZANA
FACULTAD DE QUMICA FARMACUTICA BIOLGICA
LABORATORIO DE BIOLOGA CELULAR
PRCTICA No. 03
PREPARACIONES TEMPORALES
OBJETIVO:
Aprender a realizar una preparacin temporal, til en la observacin de
diversos tipos de muestras.
FUNDAMENTO:
Las preparaciones pueden ser temporales, frescas y permanentes. Una
preparacin temporal es aquella que es utilizada en el momento de la
observacin, ya que requiere que el medio de montaje no se evapore tan
rpidamente y que sea posible que el material biolgico se conserve por un
tiempo (algunos das) en condiciones de ser observado; las frescas solo se
usan durante la prctica y posteriormente se lavan. Y las permanentes son
aquellas preparaciones que duran para siempre, por lo que se debe hacerse
con un material especial como el blsamo de Canad, para que el cubreobjetos
permanezca perfectamente adherido al portaobjetos durante aos (Ver Fig.
3.1).(2)

Fig. 3.1 Preparacin temporal

GENERALIDADES:
En general una preparacin microscpica se define como el resultado de
una serie de operaciones destinadas a colocar material de observacin en una
capa de poco espesor, lo ms pequea y representativa posible. Pudiendo ser
en seco, lquido o en vivo, o en partes sobre una superficie de vidrio
transparente (portaobjetos) y cubierta algunas veces con otra de menor
aumento
y
ms
delgada
(cubreobjetos). (Ver
Fig. 3.2) (4)

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Fig. 3.2 Material para montaje de muestras

Los portaobjetos deben ser de vidrio lo ms transparente posible, de un


espesor aproximado de 2 mm y de unas medidas estndar de 16 x 26 mm. Los
bordes pueden ser o no esmerilados. Algunos tienen una concavidad circular
en su centro destinada a recibir gotas de lquido con elementos para su
estudio.
Los cubreobjetos son de muchos tamaos, los habituales son de 18 x 18
mm, 20 x 20 mm y 22 x 32 mm y diversas formas, los ms comunes son
cuadrangulares. Su espesor es aproximadamente de 0.25 mm.
A manera de sugerencia, tanto el portaobjetos como el cubreobjetos
antes de ser utilizados debern limpiarse con alcohol para eliminar la grasa y el
polvo.(3)
MATERIAL:
Microscopio compuesto.
Portaobjetos.
Cubreobjetos.
Pipeta pasteur o gotero.
Frasco gotero con agua.
Aguja de diseccin.
MATERIAL BIOLOGICO:
Hongo de pan.
TCNICA:
1. Colocar en un portaobjetos una gota de agua con el gotero.
2. Tomar una pequea muestra con la aguja de diseccin del hongo de
pan y extindelo sobre la gota de agua que aplicaste en el
portaobjetos.
3. Colocar el cubreobjetos sobre tu muestra, cuidando que no vaya a
tener aire al momento de que sea colocado.
4. Proceder a observar con el objetivo seco dbil y seco fuerte, cuidando
que al momento de enfocar no rompas el cubreobjetos.
5. Dibuja lo que observaste en tu preparacin.

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OBSERVACIONES CON DIBUJOS:


CONCLUSIONES:
CUESTIONARIO:
1) Por qu son importantes las preparaciones temporales?
2) Qu propiedades tiene este medio de montaje?
3) Cules son las preparaciones que se pueden hacer en el laboratorio?
FECHA DE REALIZACIN:
BIBLIOGRAFA:
1. Alberts, B. 2006. "Introduccin a la biologa celular". Madrid. Segunda
edicin. Editorial Mdica Panamericana. Pgs. 24-27
2. Curtis, H. 2004. Biologa. Mxico D.F. Sexta edicin. Editorial
panamericana. Pgs. 17-18
3. Johnson, G. 2006. Biologa Celular. Mxico D.F. Segunda edicin.
Editorial Panamericana. Pgs. 13-15
4. Villee, C. 2003. Biologa. Mxico D.F. Octava edicin. Editorial Mc
Graw Hill. Pgs. 43-45

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UNIVERSIDAD VERACRUZANA
FACULTAD DE QUMICA FARMACUTICA BIOLGICA
LABORATORIO DE BIOLOGA CELULAR
PRCTICA No. 04
DIVERSIDAD CELULAR
OBJETIVO:
Establecer las semejanzas y diferencias entre las clulas vegetales y
animales.
FUNDAMENTO:
La clula es la unidad bsica funcional y estructural ms pequea de los
organismos vivos. Se compone de partes caractersticas, cuyo trabajo esta
coordinado de tal manera que cada tipo de clula lleva a cabo una funcin
estructural bioqumica nica. Las clulas realizan numerosas reacciones
qumicas para dar origen al proceso vital que se lleva a cabo de manera
compartimentalizada; es decir, estructuras especializadas dentro de la clula
efectan reacciones qumicas aisladas, las cuales estn coordinadas unas con
otras para mantener con vida tanto la clula como los tejidos, rganos,
sistemas y todo el organismo.(4)
Regulan el flujo de entrada y de salida de los materiales a fin de
asegurar las condiciones ptimas para el proceso vital prevaleciente dentro de
ellas. Asimismo, utilizan su informacin gentica para guiar la sntesis de la
mayora de sus componentes y dirigir gran parte de sus actividades qumicas;
entre stas, la generacin de ATP, por desdoblamiento de los nutrientes, la
sntesis molecular, la transportacin de las molculas dentro y entre las clulas,
la remocin de los desechos y el movimiento parcial o incluso de toda la clula.
GENERALIDADES:
Las unidades bsicas de todos los organismos tienen muchas
caractersticas en comn, pero no todas ellas poseen todo el conjunto de
componentes. (1)
Caractersticas de las clulas animales, clulas vegetales y protistas.
Las clulas animales se pueden distinguir fcilmente de las vegetales en
virtud de marcadas diferencias. Los animales poseen ciertos sistemas
organizados caractersticos, son capaces de moverse por s mismos y
dependen completamente de sustancias preformadas para obtener energa y
carbono; stas son nicamente algunas de sus caractersticas ms notorias.

17

Las plantas superiores contienen el pigmento verde llamado clorofila, lo que les
permite efectuar la fotosntesis, son generalmente inmviles y tienen sistemas
organizados de manera peculiar.
Un nmero considerable de organismos unicelulares exhiben caracteres
tanto de plantas como de animales, a estos como poseen esta peculiaridad los
clasifican como protistas.(5)

Caractersticas exclusivas de la clula animal.


Centrosoma, cilios y flagelos. Virtualmente todas las clulas animales y
un escaso nmero de clulas vegetales muy primitivas o inferiores, tienen una
estructura citoplasmtica, llamada centrosoma. En la clula en reposo se
presenta usualmente cerca del ncleo a manera de una pequea regin mas
clara con fibras radiadas a manera de una estrella y una o dos pequeas
granulaciones que se tien profundamente en su parte central, a las que se les
ha dado el nombre de centriolos. Las clulas de las plantas superiores no
tienen centrosoma, aunque en su lugar presentan dos pequeas reas claras
durante la divisin celular a las que se les llama casquetes polares, que
aparentemente tienen la misma funcin que el centrosoma durante la divisin
celular.
Adems, el centrosoma controla la actividad y la formacin de los cilios y
flagelos, estructuras citoplasmticas filamentosas y distendidas que se
proyectan a partes de la superficie externa de la membrana celular en cierto
tipo de clulas. Los cilios son relativamente cortos y se presentan en gran
cantidad, mientras que los flagelos son considerablemente ms largos y en
menor numero. Ciertos organismos unicelulares poseen un gran nmero de
cilios o flagelos que se mueven rtmica y coordinadamente; pueden contarse
por cientos y son los causantes de la movilidad de estas formas unicelulares.
Ciertos epitelios que tapizan las superficies internas del organismo, tales como
la trquea humana, poseen grandes cantidades de cilios. Estos movimientos
coordinados originan corriente de fluidos y de aire hacia el exterior de la
superficie celular, expulsando partculas extraas pequesimas que penetran a
la trquea. Los flagelos tambin se encuentran en muchos organismos
unicelulares y en la gran mayora de las clulas espermticas de animales y
vegetales. Su accin, a manera de ltigo, favorece la movilidad de estas
clulas
(Ver
Fig.
4.1).
(2)

18

Fig. 4.1 Clula animal

Caracteres exclusivos de la clula vegetal.


Pared celular. Esta, es una de las caractersticas ms sobresalientes de
la clula vegetal. Consiste de una envoltura moderadamente rgida de material
inerte, que rodea a cada uno de los protoplastos. Aunque es sintetizada y
secretada por el citoplasma de la clula vegetal, estrictamente hablando no
puede considerarse esta pared celular como un componente de la clula, sino
como un deposito extracelular. En la mayora de las plantas verdes, est
compuesta principalmente de un carbohidrato muy complejo llamado celulosa y
segn el tipo de clula vegetal que se trate, adems de la celulosa, puede tener
varias sustancias, incluyendo sales, lignina, sustancias parecidas a las grasas
repelentes de agua tales como ceras y suberina.
La pared celular vara considerablemente en grosor dependiendo del tipo
de tejido vegetal y de las condiciones de crecimiento. En clulas vegetales
maduras consiste, por lo regular, de tres capas y casi siempre es mucho ms
gruesa que la membrana celular adyacente. A diferencia de la membrana
celular, es permeable a la mayora de las molculas y no controla el paso de
materiales hacia dentro y hacia fuera de la clula. En efecto, la pared celular es
como una especie de armazn que le sirve a la clula vegetal para proteger,
mantener y servir de apoyo a la clula y a la planta en general.
Muchas clulas animales tambin depositan materiales extracelulares
alrededor de la superficie externa de sus membranas celulares. Estos
depsitos no contienen celulosa o cera, varan considerablemente en su
composicin y se les llama sustancias intersticiales. A diferencia de esta pared
celulsica, estas sustancias no tienen una organizacin definida y no dan el
efecto de una estructura a manera de una pared. En la mayora de los tejidos
vegetales, la sustancia intersticial acta como un cemento que mantiene unidas
a las clulas; se extiende al hincharse la clula, ofreciendo poca o ninguna
proteccin contra las rupturas del protoplasto. Cuando la clula pierde agua se
adapta a la forma que toma al contraerse. Por el contrario, las membranas
celulsicas o paredes celulares de las plantas superiores, bacterias y hongos,
mantienen mas o menos su forma y tamao, a pesar de los cambios en el
volumen del protoplasto debido a los cambios en el contenido de agua,
evitando as la ruptura del protoplasto (Ver Fig. 4.2).(2)

19

Plastos.
Son
Fig. 4.2 Clula vegetal
estructuras citoplasmticas unidas
que se encuentran en las clulas de las
plantas superiores y en ciertos organismos unicelulares, pero nunca en las
clulas de animales superiores. Aunque su tamao, forma y color pueden variar
de manera considerable, segn el tejido de que se trate, del organismo y de las
condiciones de desarrollo, a menudo se presentan en forma de cuerpecillos
discoides o esfricos que se encuentran libremente en el citoplasma.(3)
MATERIAL:
Microscopio compuesto.
Porta y cubreobjetos.
Gotero con bulbo.
Corcho de botella.
Navaja de rasurar nueva.
Pinzas.
Hisopos estriles.
Lancetas estriles.
Torundas con alcohol.
Tubos al vaco Vacutainer de tapa morada.
Ligadura.
Pipeta pasteur.
Tubos de ensayo de 13 x 100 mm.
Centrfuga clnica.
Frascos de boca ancha limpios y secos.
MATERIAL BIOLGICO:
Bulbo de cebolla.
Sangre.
Semen.
Orina.
Polen.

20

REACTIVOS:
Solucin salina isotnica.
Solucin de Locke.
Azul de metileno al 1%.
Colorante de Wright.
Buffer de Fosfatos.
Aceite de inmersin.
TCNICA PARA LAS CLULAS DEL CORCHO:
1.
Toma el corcho con la mano izquierda, sujeta firmemente y corta
una rebanada muy fina colocando la navaja un poco oblicua a la superficie.
2.
Cuando se haya obtenido el corte lo suficientemente delgado, se
coloca en un portaobjetos y se le agrega una gota de agua y se cubre.
3.

Debe evitarse las burbujas de aire.

4.
Obsrvese con menor aumento sobre todo las orillas del corte
donde habitualmente es ms delgado.
5.
Dibuja una pequea porcin de este material e indica la forma y el
tamao de las clulas.
6.

Responde lo siguiente:
a) Qu estructura se ve dentro de ella?
b) Qu parte de la clula es la que evita que el agua penetre en
las clulas?

TCNICA PARA LAS CLULAS DE CEBOLLA:


1. Corta un bulbo de cebolla en 4 partes, se observar que cada parte se
separa por s sola en capas llamadas envolturas u hojas.
2. Toma una de estas escamas con la superficie cncava y rmpela.
Entonces observars que se desprende con facilidad una capa muy
delgada y transparente que es la epidermis.
3. Toma un fragmento y colcalo sobre un portaobjetos con una gota de
agua de modo que la superficie que estaba en contacto con la escama
quede hacia arriba. Usa un fragmento de epidermis de no ms de 1 cm 2
y cbrelo con un cubreobjetos.
4. Observa con menor aumento y contesta lo siguiente:
a) Cmo se aprecia la morfologa de las clulas y sus paredes?
5. Retira la preparacin de la platina del microscopio y coloca una gota de
azul de metileno de un lado de la preparacin, en el borde del
cubreobjeto para que la solucin entre por capilaridad. Observa con un
menor aumento.
6. Contesta lo siguiente:
21

a) Cul es el color y la forma del ncleo? Observa los ncleos


con seco fuerte.
b) Cul es la ubicacin de este organelo en la clula?
7. Alrededor del ncleo se encuentra una sustancia granular que se ha
teido ligeramente que es el citoplasma, descrbelo. Compara las clulas
de la cebolla con las del corcho.
a) En qu difieren?
b) En qu se asemejan?
c) Consideras que las formas y tamaos celulares estn
relacionados con las funciones de las mismas?
TCNICA PARA LAS CLULAS DE POLEN:
1. Colocar unas partculas de polen sobre un portaobjetos.
2. Agregar una gota de agua y colocarle un cubreobjetos cuidando de no
dejar burbujas de aire.
3. Observar la morfologa al microscopio con el objetivo de menor
aumento.
TCNICA PARA CLULAS ANIMALES:
1. Coloca una gota de solucin salina isotnica en un portaobjetos limpio,
con un hisopo frota ligeramente la cara interna de la mejilla y el material
que obtengas mzclalo con movimientos rotatorios junto con la solucin
salina isotnica hasta obtener un material con aspecto lechoso
homogneo. Agrega una gota de azul de metileno y cubre la preparacin
con un cubreobjetos.
2. Con el objetivo seco dbil, localiza las clulas y compralas con las de
las plantas. Vas a encontrar algunas clulas asociadas, otras dobladas o
rotas. Busca una o dos que estn completas con el objetivo seco fuerte.
El ncleo es claramente visible si se ajusta la luz convenientemente,
tambin se podr observar el citoplasma.
TCNICA PARA PUNCIN VENOSA:
1.
Una vez seleccionado el sitio de puncin, con una torunda se
frota perfectamente el lugar elegido, sin pasar la torunda por el mismo sitio.
Con esto se eliminan suciedad y detritus celulares y se evita la introduccin
de grmenes al puncionar.
2.
Mientras el alcohol se seca, se aplica un torniquete con la
ligadura, unos 7 centmetros por encima del sitio de puncin. No se debe
dejar muy apretado pues provocara xtasis venosa que podra modificar los
valores hemticos. Desde luego que el torniquete no debe ser muy
apretado, pues podra ser molesto para el paciente. Se invita al paciente a
apretar el puo, con lo que favorece la fijacin de la vena adems de que la
compresin muscular aumenta el flujo venoso con la dilatacin de las
venas.

22

3.
Se fija la vena en posicin, sosteniendo el brazo del paciente con
la mano mientras se estiran y comprimen los tejidos blandos situados
debajo de donde se va a puncionar. Se toma el maneral del vacutainer y
haciendo un ngulo de 15 con el brazo, se perfora la piel a lo largo de la
cara lateral de la vena. Se hace avanzar la punta de la aguja debajo de la
piel de 0.5 a 1 cm y luego se perfora la pared de la vena. La introduccin se
hace con suavidad pero con suficiente rapidez para reducir las molestias.
Una vez que est saliendo la sangre, se retira la ligadura para evitar
hemlisis.
4.
Cuando la aguja haya penetrado la vena, se introduce el tubo en
el maneral de sujecin, el que se mantiene fijo con la otra mano, hasta que
el tapn del tubo sea atravesado por la aguja situada dentro del maneral.
Una vez que el tubo se llen, se extrae y se repite la operacin con tantos
tubos como sea necesario.
5.
Se invita al paciente a abrir su puo. La aguja se retira en sentido
inverso a como se introdujo tambin de manera suave pero con un solo
movimiento. De inmediato, se coloca una torunda impregnada de alcohol en
el sitio de puncin, ejerciendo presin sobre la zona y mantenindola as
por lo menos de 3 a 4 minutos para evitar la formacin de hematomas.
6.
Una vez extrada la muestra, es indispensable mezclarla,
invirtiendo la muestra para que se mezcle con el anticoagulante y de esta
manera evitar una posible coagulacin de la misma.
FROTIS DE SANGRE:
1. Coloca una gota de sangre en el extremo de un portaobjetos y con otro
extiende hacia el otro extremo.
2. Seca el frotis al aire.
3. Una vez seco el frotis se coloca en un puente de tincin, para realizar la
tincin de Wright de la siguiente manera: con un gotero, agregar
colorante de Wright a todo el frotis y dejarlo reposar 5 minutos, una vez
pasado el tiempo agregar sobre el mismo colorante con otro gotero
buffer de fosfatos y dejarlo reposar durante 15 minutos, a intervalos de 5
minutos, soplar sobre el frotis con una pipeta pasteur hasta observar la
presencia de capa verde metlica.
4. Una vez cumplido el tiempo, quitar el colorante al chorro de agua
durante 5 30 segundos.
5. Despus del lavado, quitar el exceso de agua inclinando el frotis y
tocando con un papel secante el borde inferior. Limpiar la parte posterior
del portaobjetos.
6. Secar las preparaciones al aire.

23

7. Para montar la preparacin al microscopio, se deber agregar una gota


de aceite de inmersin y observar a 100X.
8. Imgenes de las diferentes clulas sanguneas que pueden ser
observadas en un frotis (Ver Fig. 4.3).

a) Neutrfilo segmentado

b) Basfilo

d) Monocito

c) Eosinfilo

e) Linfocito
Figura 4.3 Tipos de leucocitos

TCNICA PARA LA OBTENCIN DEL SEMEN:


1. La muestra deber obtenerse por masturbacin y depositarla en un
frasco de boca ancha el cual deber estar perfectamente limpio. Esta
muestra preferentemente deber estar lista pocos minutos antes de la
realizacin de la prctica, para observar la movilidad de los
espermatozoides (Ver Fig. 4.4).
2. Una vez que se tiene la muestra, colocar una gota de semen en el
centro de un portaobjetos, agregar una gota de azul de metileno al 1% y
cubrirla con un cubreobjetos.
3. Observar la muestra a 10 y 40X, realizando dibujos de las estructuras
observadas.

24

Figura 4.4 Partes del espermatozoide

TCNICA PARA LA PREPARACIN DE MUESTRA DE ORINA:


1. Obtener una muestra de orina (aproximadamente 10 a 15 ml) en un
frasco de boca ancha perfectamente limpio sin restos de detergente.
2. Colocar en un tubo de ensayo de 13 x 100 mm, aproximadamente 5 ml.
de orina y centrifugarla durante 5 minutos a 2,500 rpm.
3. Una vez pasado el tiempo, saque el tubo de la centrfuga y por
decantacin eliminar el sobrenadante, resuspenda el sedimento y
agregue unas de azul de metileno, espera 5 minutos y agrega una gota
de la solucin de orina con azul de metileno a un portaobjetos y cbrela
con un cubreobjetos.
4. Observa al microscopio con el objetivo seco dbil y seco fuerte (Ver Fig.
4.5).
5. Realiza dibujos de las estructuras observadas en cada preparacin.

Figura 4.5 Clulas del epitelio pavimentoso

NOTA:

Resuelve cada una de las preguntas anteriores.

25

Elabora una tabla comparativa de las clulas observadas.

OBSERVACIONES CON DIBUJOS:


CONCLUSIONES:
CUESTIONARIO:
1) Qu diversidad celular se encuentra en el frotis de sangre?
2) En el frotis de semen Qu clulas identificas? Todos son normales?
3) Qu funcin tienen cada una de las clulas sanguneas?
4) Qu analoga estructural existe entre los espermatozoides y los
protozoarios?
FECHA DE REALIZACIN:
BIBLIOGRAFA:
1. Johnson, G. 2006. Biologa Celular. Mxico D.F. Segunda edicin.
Editorial Panamericana. Pgs. 42-47
2. Margulis, L. 2000. El origen de la clula. Barcelona; Mxico. Segunda
edicin. Editorial Revert. Pgs. 23-29
3. Nason, A. 1990. El mundo biolgico. Mxico D.F. Primera edicin.
Editorial Limusa. Pgs. 176-184
4. Villee, C. 2003. Biologa. Mxico D.F. Octava edicin. Editorial Mc
Graw Hill. Pgs. 56-58, 121-124, 128
5. Young, A. 2001. Biologa II. Mxico D.F. Primera edicin. Editorial
Nueva Imagen. Pgs. 101-108

26

UNIVERSIDAD VERACRUZANA
FACULTAD DE QUMICA FARMACUTICA BIOLGICA
LABORATORIO DE BIOLOGA CELULAR
PRCTICA No. 05
CLULAS PROCARITICAS Y EUCARITICAS
OBJETIVO:
Establecer algunas diferencias morfolgicas entre clulas procariticas y
eucariticas, as como entre clulas vegetales y animales mediante la
observacin de las mismas.
FUNDAMENTO:
Desde que Robert Hooke observ las celdas de corcho, otros cientficos
se dieron a la tarea de investigar cmo estaban formados los seres vivos.
Fueron tres de ellos quienes conformaron lo que conocemos ahora como la
Teora Celular: el botnico Matthew Schleiden quien propuso a la clula como
la unidad estructural de las plantas, el zologo Theodor Schawn que hizo lo
mismo con los animales, y el mdico y fisilogo Rudolph Virchow que conjunt
las propuestas anteriores y propuso que la clula se origina de otra clula.(4)
Existen dos tipos de clulas en la naturaleza: las procariticas como las
bacterias, que estn conformadas por una membrana celular, citoplasma,
material gentico y ribosomas (Ver Fig. 5.1). Y las eucariticas como las de los
protistas, hongos, plantas y animales, que adems de las estructuras de las
bacterias, tiene organelos membranosos, con material gentico encapsulado
en un ncleo (Ver Fig.5.2). Todo esto se conoce gracias a la microscopa
electrnica.(1)

27

Figura 5.1 Clula procarionte (Bacteria)

GENERALIDADES:
Las clulas comparten muchas caractersticas estructurales, pero hay
una clara diferencia entre la organizacin de las clulas procariticas y la de las
eucariticas. En particular, las clulas de los procariotes (bacterias, algas
verde-azules y algas herbiverdes) son pequeas y simples. Tienen una
Figura 5.2 Tipos
de clulas
membrana citoplsmica, generalmente
delimitada
por una pared celular rgida;
un nucleoide que consta de una sola molcula de ADN circular y que
representa todos los genes del organismo (genoma); y un citoplasma que
contiene ribosomas y una gran variedad de molculas que median el
metabolismo pero carecen de membranas internas permanentes. Al carecer de
estas membranas sus clulas no poseen un ncleo, no poseen mitocondrias, ni
cloroplastos, ni retculo endoplsmico, ni aparato de golgi, ni lisosomas, ni
peroxisomas, ni vacuolas. Si bien, algunas bacterias poseen flagelos, estos
constan de un solo filamento, a manera de un solo microtbulo. No est
presente, pues, el ordenamiento multifilar que se encuentra en los cilios y
flagelos de otros organismos.(3)
El trmino procaritico se utiliza a menudo para distinguir las clulas de
las bacterias y de las algas, de las clulas provistas de ncleo o eucariticas,
de todos los dems organismos. Todos los procariotes son organismos
unicelulares.
En contraste, las clulas de los cuatro reinos de los organismos
eucariticos (protistas, hongos, animales y vegetales) son ms grandes y estn

28

caracterizadas por muchos compartimientos membranosos (Ver Fig. 5.3, 5.4).


La caracterstica primaria de las clulas eucariticas es el ncleo con sus
cromosomas. El citoplasma que rodea al ncleo, limitado a su vez por la
membrana, incluye una variedad de organelos, teniendo cada clase su propia
organizacin estructural y funcin o funciones particulares en la clula. Adems
de los organelos membranosos, como el retculo endoplsmico, al aparato de
Golgi, las mitocondrias, los lisosomas, los cloroplastos (en las clulas
fotosintticas) y otros, tambin hay ribosomas, centriolos, microfilamentos,
microtbulos y una multitud de protenas suspendidas en la porcin citoslica
del citoplasma.

Figura 5.3 Clula animal

Figura 5.4 Clula vegetal


Figura 5.5 Clulas eucariontes

Una membrana rodea al citoplasma y sta misma puede estar delimitada


por una pared celular rgida o por cubiertas superficiales de otras clases. En
muchas clulas la superficie celular incluye especializaciones caractersticas,
como los cilios o flagelos, las microvellosidades y las uniones con otras clulas
en los tejidos. (2)
Los eucariontes pueden ser unicelulares o multicelulares; ser sexuales o
asexuales, o bien variar considerablemente en su forma externa. Las

29

relaciones evolutivas entre los tipos de las clulas modernas no estn todava
muy claras, pero los procariontes son, sin duda, ms antiguos y comparten un
ancestro comn con los organismos eucariticos. Todas las clulas ofrecen
similitud en la estructura de su membrana, en sus mecanismos para
almacenamiento y transferencia de informacin y en su metabolismo; de modo
que es posible que estos aspectos hayan evolucionado muy temprano y hayan
sido retenidos desde entonces en todos los linajes descendientes. Los nuevos
mtodos del anlisis molecular podrn aclarar estos hechos evolutivos
fundamentales.(5)
MATERIAL:
Lupa.
Microscopios.
Porta y cubreobjetos.
Hisopos estriles.
Mechero Bunsen.
Caja petri.
Gotero.
Aguja de diseccin.
Navaja.
Palillo de dientes.
MATERIAL BIOLOGICO:
Agua de estanque o de acuario (agua verde).
Pan y frutas con mohos.
Sarro dentario.
REACTIVOS:
Lugol.
Fucsina bsica.
Cristal violeta.
Alcohol de 90.
Azul de metileno.
TCNICA PARA LA OBSERVACIN DE BACTERIAS:
1.
Disolver en una gota de agua sobre un portaobjetos, una pequea
porcin de sarro dentario y con sta se realiza un frotis o extensin.
Enseguida fijarlo a la llama de un mechero bunsen, para esto pasar varias
veces el portaobjetos sobre la flama cuidando que no hierva la preparacin.
2.
Coloca dentro de una caja petri el portaobjetos, cubrindolo con la
solucin de cristal violeta por un minuto. Lavar al chorro de agua cuidando
que no se arrastre la muestra.
3.
agua.

Agrega una gota de lugol, dejar 1 minuto y lavar al chorro de

4.
Decolorar con alcohol de 90. Esta operacin debe ser rpida
para que no se elimine todo el colorante.
30

5.
Cubrir con fucsina bsica por medio minuto. Escurrir el colorante
y lavar al chorro de agua.
6.

Dejar secar la preparacin al aire.

7.
Observar al microscopio con objetivo de inmersin. Algunas
bacterias se vern teidas de color rosa y otras de violeta.
8.
Hacer esquemas de las observaciones, sealando con su nombre
las estructuras que se puedan distinguir.
TCNICA PARA LA OBSERVACIN DE PROTOZOARIOS Y ALGAS:
1. Colocar sobre un portaobjetos una gota de agua verde de estanque o
bien raspar las paredes de un acuario con un portaobjetos.
2. Colocarle un cubreobjetos para observar en el microscopio con los
objetivos seco dbil y seco fuerte.
3. Realizar esquemas de los organismos observados y sealar los
nombres de las estructuras que se puedan visualizar.
TCNICA
PARA
LA
OBSERVACIN
DE
MOHOS
(HONGOS
PLURICELULARES):
1. Colocar algunas hifas sobre un portaobjetos (desprender el moho del
pan y verduras mediante una aguja de diseccin, con movimientos
suaves para no destruirlo).
2. Cubrirlas con una solucin de azul de metileno por 2 minutos.
3. Escurrir el colorante con cuidado y colocar un cubreobjetos sobre las
hifas. Observar a seco dbil. Realizar los esquemas correspondientes,
sealando las estructuras visibles.
OBSERVACIONES CON DIBUJOS:
CONCLUSIONES:
CUESTIONARIO:
1) Cules fueron las diferencias que observaste al microscopio entre las
clulas eucariontes y procariontes?
2) Clasifica las clulas observadas en:
Clulas Procariticas
Clulas Eucariticas

3) Mencionar una diferencia estructural entre las clulas vegetales y


animales observadas al microscopio.

31

FECHA DE REALIZACIN:
BIBLIOGRAFA:
1. Alberts, B. 2006. "Introduccin a la biologa celular". Madrid. Segunda
edicin. Editorial Mdica Panamericana. Pgs. 53-57
2. Callen J. 2003. Biologa celular: de las molculas a los organismos.
Mxico, D.F. Segunda edicin. Editorial Continental. Pgs. 41-46
3. Cooper, G. 2002. La clula. Segunda edicin. Editorial Marbn. Pgs.
23-25
4. Nelson J. 2002. Principios de Biologa. Enfoque humana. Mxico D.F.
Segunda edicin. Editorial Limusa, S.A. Pgs. 10-12
5. Madigan, M. 2003. Biologa de los Microorganismos. Madrid. Dcima
edicin. Editorial Prentice-Hall. Pgs. 17-22

UNIVERSIDAD VERACRUZANA
FACULTAD DE QUMICA FARMACUTICA BIOLGICA
LABORATORIO DE BIOLOGA CELULAR
PRCTICA No. 06
OBSERVACIN DE ORGANELOS CELULARES
OBJETIVO:
Identificar las estructuras que integran las clulas vegetales y animales
como plastos, ncleo, etc., mediante la observacin de las preparaciones.
FUNDAMENTO:
Los organelos son estructuras especializadas que tienen formas
caractersticas y realizan funciones especficas en el crecimiento,
mantenimiento y reproduccin de las clulas (Ver Fig. 6.1). Muchas reacciones
qumicas ocurren en una clula simultneamente, sin embargo hay poca
interferencia entre los distintos tipos de reacciones porque ocurren en
diferentes organelos.

32

Figura 6.1 Organelos celulares

Cada tipo de stos tiene un conjunto de enzimas caractersticas propias


que desempean reacciones especficas, y cada uno se encuentra en un
comportamiento funcional, donde ocurren procesos fisiolgicos particulares. No
obstante, los organelos con frecuencia colaboran entre ellos para mantener la
homeostasis.(4)

GENERALIDADES:
La parte interior de la clula se llama citoplasma y este se divide en dos
componentes: el citosol y los organelos.
Citosol: Es la parte liquida en la que circundan los organelos y
constituye aproximadamente el 55% del volumen total de la clula. Si
bien vara en su composicin y consistencia de una parte a otra de la
clula, contiene de 75 a 90 % de agua ms componentes disueltos y
suspendidos. Entre ellos hay varios iones, glucosa, aminocidos,
cidos grasos, protenas y lpidos, ATP y productos de desecho.
Tambin estn presentes varias molculas orgnicas que se agregan
en masas y son almacenadas. Dichas molculas pueden aparecer y
desaparecer varias veces a lo largo de la vida de las clulas.(1)
Los organelos a su vez se dividen en varios tipos y realizan funciones diversas.
Centrosoma: Se ubica cerca del ncleo, consta de dos componentes, el
rea pericentriolar y los centrolos. El rea pericentriolar constituye una
regin del citosol compuesta por una densa red de pequeas fibras de
protena. Esta zona es un centro de organizacin para el huso mittico,

33

que desempea un papel bsico en la divisin celular y en la formacin


de microtbulos en las clulas indivisibles. Dentro del rea
pericentriolar hay un par de estructuras cilndricas llamadas centrolos,
cada una de las cuales est compuesta por nueve racimos o haces de
tres microtbulos dispuestos en forma circular.(5)
Cilios: Son numerosos filamentos cortos que se extienden desde la
superficie celular. Cada uno contiene un centro de microtbulos
envueltos por la membrana plasmtica. Cada cilio se halla fijo a un
cuerpo basal justo debajo de la membrana plasmtica.
Flagelos: Son similares en estructura a los cilios pero mucho ms
largos. Con frecuencia mueven a una clula entera. Un flagelo genera
movimiento hacia delante a lo largo de su eje mediante un culebreo
rpido conforme a un patrn oscilante.(2)
Ribosomas: Son sitios donde se sintetizan protenas. stos diminutos
organelos constituyen haces de cadenas ARN ribosmico y muchas
protenas tambin ribosmicas. Los ribosomas reciben este nombre
porque tienen un alto contenido de cido ribonucleico.(5)
Retculo endoplsmico: Es una red de membranas que forman sacos
planos o tbulos denominados cisternas (cavidades). Se extiende de la
membrana que envuelve al ncleo (cubierta nuclear), a la cual est
conectado, por todo el citoplasma. El retculo endoplsmico es tan
extenso que constituye ms de la mitad de las superficies
membranosas dentro del citoplasma de la mayora de las clulas.
Complejo de Golgi: La mayora de las protenas sintetizadas por los
ribosomas que se unen al retculo endoplsmico rugoso finalmente son
transportadas a otras regiones de la clula. El primer paso en la va de
transporte es el complejo de Golgi, que est formado por 3 a 20 sacos
membranosos aplanados con bordes predominantes. La mayor parte
de las clulas solo tienen un complejo de Golgi, aunque algunas
poseen muchos. Dicho complejo es ms extenso en las clulas que
secretan protenas en el lquido extracelular. La entrada, las cavidades
intermedias y la salida del complejo de Golgi contienen enzimas
diferentes que les permiten a cada una modificar, ordenar y empacar
las protenas para que puedan ser transportadas a su destino.(6)
Lisosomas: Son membranas envueltas en vesculas que se forman en
el complejo de Golgi. Dentro de ellas hay hasta 40 clases de poderosas
enzimas digestivas o hidrolticas que tienen la capacidad de
descomponer una amplia variedad de molculas. Las enzimas
lisosmicas trabajan mejor en pH cido y la nica membrana
lisosmica incluye bombas de transporte activo que mueve iones
hidrogeno (H+). La membrana lisosmica tambin permite que los
productos finales de la digestin, como los azcares y aminocidos
sean transportados dentro del citosol. Un lisosoma puede engullir otro

34

organelo, digerirlo y regresar sus componentes al citosol para que


vuelvan a ser usados.
Mitocondria: Constituye la central energtica de la clula. Una clula
puede tener unos pocos cientos o miles de mitocondrias. Las clulas
con actividad fisiolgica tienen un gran nmero de mitocondrias porque
usan ATP en grandes cantidades. Una mitocondria est limitada por
dos membranas, cada una de las cuales es similar en estructura a la
membrana plasmtica. Las mitocondrias se autorreplican, un proceso
que ocurre cuando se incrementa la demanda de energa o antes de la
divisin celular. (3)
MATERIAL:
Aguja de diseccin.
Vasos de precipitado.
Tubos de ensayo de 13 x 100 mm.
Cubreobjetos y portaobjetos.
Microscopio compuesto.
Navajas.
Algodn.
Frasco de boca ancha.
MATERIAL BIOLGICO:
Elodea.(Elodea canadensis, planta acutica)
Geranio.(Pelargonium grandiflorum)
Jitomate.
Cultivo de paramecios.
Nopal.
Sanda.
Insecto.
REACTIVOS:
Azul de metileno.
Alcohol absoluto.
ter.
Solucin de yodo.
Solucin de lugol.
Cristal violeta.
TCNICA PARA CLULAS VEGETALES:
1. Coloca entre el cubreobjetos una hoja de Elodea con una gota de agua,
selecciona una clula y cuenta el nmero de cloroplastos. Haz lo mismo
en diez clulas y obtn el promedio. Observa su forma y localizacin.
2. Haz la misma operacin en clulas de corte de nopal.

35

3. Preparar con 48 horas de anticipacin una planta de geranio expuesta a


la luz y otra a la oscuridad.
4. Haz un corte transversal de una hoja de la planta de geranio expuesta a
la luz y otra expuesta a la oscuridad.
5. Observa y compara el contenido de cloroplastos en cada una.
6. Haz un corte delgado de pulpa de jitomate y colcalo entre porta y
cubreobjetos. Obsrvalo al microscopio y anota su forma, color y tamao
de los cromoplastos. Puede observarse lo mismo macerando en agua el
ptalo de una flor colorida.
7. Observa a seco dbil y seco fuerte una preparacin de un corte delgado
de la parte blanca de la sanda para identificar la presencia de
leucoplastos.
8. Esquematiza la posicin que ocupan las vacuolas y el nmero de ellas.
Se recomienda teir con cristal violeta.
9. De las preparaciones anteriores esquematiza los ncleos y contesta lo
siguiente:
a) Cul es la localizacin de los ncleos?
b) Llena el citoplasma toda la clula?
c) Con respecto al geranio Qu podras concluir?
TCNICA PARA CLULAS ANIMALES:
1. Coloca una gota del cultivo de paramecios en un portaobjetos y encima
un cubreobjetos.
2. Localiza un paramecio de buen tamao y trata de apreciar las vacuolas.
3. Coloca en un frasco un insecto con un algodn impregnado con un poco
de ter y tapa el frasco. Cuando ya no tenga ningn movimiento,
extrpale uno de los msculos de la pata; desmencela con una navaja y
deseque con calor suave. Coloca algunas fibras en un portaobjetos con
una gota de suero fisiolgico y examina a seco fuerte.
4. Observa la forma, el tamao y el ncleo de las clulas y contesta lo
siguiente:
a) Son semejantes las estructuras observadas en las clulas vegetales a
las del insecto?
NOTA: Para realizar un cultivo de paramecios se puede conseguir agua de
florero de panten o bien colocar un poco de paja en un frasco con agua por lo
menos con una semana de anterioridad y verificar al cabo de este tiempo la
presencia de paramecios.
OBSERVACIONES CON DIBUJOS:

36

CONCLUSIONES:
CUESTIONARIO:
1) Realiza un cuadro sinptico describiendo cada organelo y su funcin
dentro de la clula.
2) Elabora una tabla comparativa de organelos entre la clula animal y la
vegetal.
FECHA DE REALIZACIN:
BIBLIOGRAFA:
1. Johnson, G. 2006. Biologa Celular. Mxico D.F. Segunda edicin.
Editorial Panamericana. Pgs. 71-82
2. Nason, A. 1990. El mundo biolgico. Mxico D.F. Primera edicin.
Editorial Limusa. Pgs. 162-175
3. Weisz, P. 2000. La Ciencia de la Biologa. Mxico D.F. Segunda
edicin. Editorial Omega, S.A. Pgs.69-75
4. Ramrez, I. 2000. Biologa celular. Mxico D.F. Primera edicin.
Educacin superior tecnolgica. Editorial dgeta. Pgs. 10-17
5. Villee, C. 2003. Biologa. Mxico D.F. Octava edicin. Editorial Mc
Graw Hill. Pgs. 52-56
6. Young, A. 2001. Biologa II. Mxico D.F. Primera edicin. Editorial
Nueva Imagen. Pgs. 64-73

UNIVERSIDAD VERACRUZANA
FACULTAD DE QUMICA FARMACUTICA BIOLGICA
LABORATORIO DE BIOLOGA CELULAR
PRCTICA No. 07
PERMEABILIDAD CELULAR
OBJETIVO:
Observar y comparar el efecto de diversas sustancias qumicas a travs
de la difusin en una membrana celular por medio de la hemlisis.
FUNDAMENTO:
Existen varios mtodos para medir la presin osmtica celular; la mayor
parte son fsicos. Algunos de stos mtodos son utilizando tanto a la zanahoria
37

como al celofn, por lo que es conveniente comparar los anteriores modelos


utilizando clulas vivas, como en este caso sern glbulos rojos.(1)
GENERALIDADES:
El movimiento de agua de adentro hacia afuera de las clulas est
infludo por la semipermeabilidad de la membrana celular, o sea, su capacidad
de permitir el paso de ciertas molculas o bien impedrselo (Ver Fig. 7.1).(3)

Hipotnica

Isotnica

Hipertnica

Figura 7.1 Permeabilidad de la membrana

El trmino smosis se deriva de la palabra griega que significa empujar.


La tendencia de empujar sus molculas desde la porcin ms concentrada
hacia la menos concentrada, puede ser el resultado de una fuerza que
llamamos presin osmtica. Puesto que la presin osmtica depende de la
concentracin de los materiales en suspensin, mientras ms grande es la
concentracin mayor es la presin osmtica y, el objetivo de esta es igualar la
concentracin de las molculas de agua en ambos lados (Ver Fig. 7.2).(2)

38

Figura 7.2 Mecanismos de transporte

En los lquidos de cualquier clula viva se encuentran sales, azcares y


otras sustancias en solucin; el liquido tiene, pues, cierta presin osmtica.
Cuando la clula se sumerge en un lquido con la misma presin osmtica, no
hay movimiento neto de molculas de agua dentro ni fuera de la clula; esto es
que la clula ni se hincha ni se encoge, por lo que se dice que se encuentra en
un medio isotnico o isosmtico respecto a la clula. Normalmente el plasma
sanguneo y todos los lquidos del organismo son isotnicos pues contienen la
misma concentracin de sustancias disueltas que en las clulas.(1)
Si la concentracin de las sustancias disueltas en el lquido circundante
es mayor que la existente dentro de la clula el agua tiende a salir de la clula,
por lo que esta se contrae. Este lquido es hipertnico respecto a la clula, es
decir, que tiene una concentracin mayor de solutos. Si el lquido tiene menos
sustancias disueltas que la clula, es hipotnico, es decir que tiene menor
concentracin de solutos.
Cuando una clula se coloca en una solucin no isotnica, puede
ajustarse al nuevo medio por modificacin de su contenido de agua, para lograr
finalmente la misma concentracin que el medio; a esto se le conoce como
regulacin del volumen intracelular. Muchas clulas pueden impeler agua o
ciertos solutos hacia uno u otro lado de la membrana plasmtica, de manera
que en esta forma mantienen una presin osmtica distinta de la del medio
ambiente.(4)
MATERIAL:
5 tubos de ensayo 13 x100 mm.
1 gradilla.
2 pipetas graduadas de 5 ml.
1 cronmetro.
Equipo para venopuncin.
MATERIAL BIOLOGICO:
Sangre.
REACTIVOS:
Glicerol 0.5 M.
Glucosa 0.5 M.
Solucin de urea 0.5 M.
Solucin de etilenglicol 0.5 M.
Solucin salina isotnica.
TCNICA PARA DETERMINAR EL PESO MOLECULAR:
1.
Preparar una serie de 4 tubos marcados de la siguiente manera,
utilizando la sangre que se extrajo por venopuncin con previas
indicaciones del Maestro.
Tubo
No.
1
2
3
4

2 ml. de sol.
0.5 M
Urea
Etilenglicol
Glicerol
Glucosa

Peso
Molecular

Suspensin
de eritrocitos
2 gotas
2 gotas
2 gotas
2 gotas

Tiempo
Hemlisis

de

39

2.
Es importante utilizar una pipeta limpia y diferente para cada
sustancia.
3.
Centrifugar a 2500 rpm durante 5 minutos y observar tanto
macroscpica como microscpicamente si se presenta la lisis.
OBSERVACIONES CON DIBUJOS:
CONCLUSIONES:
CUESTIONARIO:
1) Por qu se dice que la membrana tiene permeabilidad selectiva?
2) Por qu se dice que la bicapa de la membrana constituye una barrera
natural?
3) Cules con los factores que afectan la velocidad de difusin a travs
de la membrana celular?
4) Cmo esta constituida la membrana celular de tal manera que permite
la permeabilidad?
FECHA DE REALIZACIN:
BIBLIOGRAFA:
1. Madigan, M. 2003. Biologa de los Microorganismos. Madrid. Decima
edicin. Editorial Prentice-Hall. Pgs. 63-68
2. Margulis, L. 2000. El origen de la clula. Barcelona; Mxico. Segunda
edicin. Editorial Revert. Pgs. 55-61
3. Oram, R. 2002. Biologa. Sistemas vivientes. Mxico D.F. Primera
edicin. Compaa editorial continental. Pgs. 89-91
4. Villee, C. 2003. Biologa. Mxico D.F. Octava edicin. Editorial Mc
Graw Hill. Pgs. 34-39

UNIVERSIDAD VERACRUZANA
FACULTAD DE QUMICA FARMACUTICA BIOLGICA
LABORATORIO DE BIOLOGA CELULAR
PRCTICA No. 08
FRAGILIDAD OSMTICA DE LOS ERITROCITOS
OBJETIVO:
Aprender a realizar la determinacin de la fragilidad osmtica de los
eritrocitos para demostrar el fenmeno de osmosis.
FUNDAMENTO:
Existen varios mtodos para medir la presin osmtica celular; la mayor
parte son fsicos. Algunos de stos mtodos son utilizando tanto a la zanahoria
como al celofn, por lo que es conveniente comparar los anteriores modelos
utilizando clulas vivas, como en este caso sern glbulos rojos. La forma de
disco bicncavo del eritrocito normal, implica un exceso de extensin superficial
40

con relacin a su volumen, lo que le proporciona una gran capacidad de


deformabilidad. Como la membrana eritrocitaria es semipermeable, cuando los
eritrocitos son colocados en una solucin hipotnica, el agua entra
osmticamente haciendo que aumente el volumen y adquiere la forma esfrica.
Con ello, la superficie disminuye respecto a su volumen dando a la clula cierto
grado de rigidez que interfiere con el paso de la misma a travs de pequeas
aberturas, por lo que fcilmente se rompe. Otro fenmeno adicional es la salida
de hemoglobina, que es permitida por el estiramiento de la membrana
eritrocitaria. En esta prctica se harn una serie de diluciones de NaCl, de
concentracin progresiva, en las que los eritrocitos problema se sometern a
diferentes concentraciones y se valorar la concentracin de NaCl que produce
la hemlisis en comparacin con una sangre normal. (1)
GENERALIDADES:
La prueba de fragilidad osmtica es una medida de la resistencia del
eritrocito, a la hemlisis por estrs osmtico, la cual depende principalmente
del volumen de la clula, del rea de su superficie y de la funcin de su
membrana (Ver Fig. 8.1). Los eritrocitos se incuban en solucin hipotnica de
NaCl, los eritrocitos absorben agua en un esfuerzo para conservar o para lograr
el equilibrio osmtico, y las clulas se hinchan hasta que se forma un
esferocito. La captacin adicional del agua produce una membrana porosa que
permite la liberacin de hemoglobina (hemlisis). Las clulas normales
comienzan a hemolizar a concentraciones de NaCl cercanas a 0.50% y la
hemlisis es completa a una concentracin aproximadamente de 0.30 % de
NaCl. Debido a la disminucin en la proporcin de superficie a volumen, los
esferocitos son incapaces de expandirse tanto como las clulas normales de
forma discoide. Se necesita absorber muy poco liquido antes que las clulas se
hemolicen. Los esferocitos tambin tienen un aumento en la permeabilidad de
la membrana, la cual contribuye al aumento de su fragilidad. (4)

41

Figura 8.1 Membrana plasmtica

MATERIAL:
Centrfuga.
Gradilla.
16 tubos de ensayo de 13 x 100 mm.
Equipo de venopuncin.
Papel parafilm.
Pipetas graduadas de 5 ml.
Pipeta graduada de 0.2 ml.
MATERIAL BIOLGICO:
Sangre obtenida con EDTA.
REACTIVOS:
Solucin salina al 1% tamponada, pH 7.4
TECNICA:
1.
Se obtienen 5 ml de sangre venosa y se mezclan perfectamente.
2.
Se colocan 16 tubos de ensayo en una gradilla y se numeran de
izquierda a derecha.
3.
Montar la prueba de la siguiente manera:
# de tubo
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16

ml de sol. salina al
1% tamponada
3.8
3.6
3.4
3.2
3.0
2.8
2.6
2.4
2.2
2.0
1.8
1.6
1.4
1.2
1.0
0.8

ml de agua
destilada
1.2
1.4
1.6
1.8
2.0
2.2
2.4
2.6
2.8
3.0
3.2
3.4
3.6
3.8
4.0
4.2

Concentracin de
la solucin (%)
0.76
0.72
0.68
0.64
0.60
0.56
0.52
0.48
0.44
0.40
0.36
0.32
0.28
0.24
0.20
0.16

4.
Mezclar del contenido de los tubos.
5.
Agregar a cada tubo 0.2 ml de sangre. Invertir cuidadosamente
cada tubo con papel parafilm, para asegurar la mezcla.
6.
Las gradillas que contienen los tubos se dejan reposar a
temperatura ambiente durante 30 minutos.
7.
Transcurrido el tiempo indicado se mezcla cuidadosamente su
contenido y se centrifugan los tubos a 2000 rpm durante 5 minutos.

42

8.
Examinar los tubos observando macroscpicamente en que punto
comienza la hemlisis y en que punto es completa. El menor indicio de
color rojo en el lquido sobrenadante indica el inicio de la hemlisis de los
glbulos menos resistentes; la hemlisis completa queda indicada por una
solucin rojo claro y ausencia de eritrocitos residuales en el fondo del tubo
o enturbiamiento al agitar el tubo ligeramente.
OBSERVACIONES CON DIBUJOS:
CONCLUSIONES:
CUESTIONARIO:
1) Qu es la fragilidad osmtica?
2) Qu es osmolaridad?
3) Qu importancia clnica tiene la fragilidad osmtica?
FECHA DE REALIZACIN:
BIBLIOGRAFA:
1. Balcells, A. 1998. La ciencia y el laboratorio. Medicina. Barcelona,
Espaa. 18 Edicin. Editorial Masson-Salvat. Pgs. 87-93
2. Mckenzie, S. 2000. Hepatologa clnica Editorial El Manual Moderno.
Segunda edicin. Mxico D.F. Pgs. 104-112
3. Lynch, M. 1992. Mtodos de laboratorio. Mxico. Segunda edicin.
Editorial interamericana. Pgs. 358-365
4. Tortora, G. 2002. Principios de anatoma y fisiologa. Mxico. Novena
edicin. Editorial Oxford. Pgs. 68-70, 622-626

UNIVERSIDAD VERACRUZANA
FACULTAD DE QUMICA FARMACUTICA BIOLGICA
LABORATORIO DE BIOLOGA CELULAR
PRCTICA No. 09
FACTORES QUE AFECTAN LA VELOCIDAD DE DIFUSIN
OBJETIVO:
Aprender a establecer el efecto de la concentracin y la temperatura
sobre la velocidad de difusin de un colorante orgnico.
FUNDAMENTO:
El estudio de la difusin como proceso biolgico que se lleva acabo a
nivel de la membrana celular, puede ser estudiado utilizando un modelo fsico,
cuyo manejo sea sencillo con el propsito de conocer los factores que afectan
a dicho fenmeno.(1)
43

Es necesario recordar que la difusin simple, que es la que se estudiar


en esta prctica, slo es vlida para explicar la transferencia de ciertas
sustancias tales como el oxgeno, el bixido de carbono y algunas molculas
sencillas, especialmente aquellas que no son ionizables. Para la mayor parte
de las sustancias que entran en la clula o salen de ella, existen otros tipos de
procesos de intercambio, mismos que se analizarn posteriormente.(3)
GENERALIDADES:
Todas las molculas de lquidos y gases tienden caractersticamente a
moverse o difundirse en todas direcciones hasta que se encuentran distribudas
regularmente en todo el espacio disponible. Se define la difusin como el
movimiento de molculas de una regin de alta concentracin, producido por la
energa cintica de las molculas. La velocidad de difusin es una funcin del
tamao de la molcula y temperatura (Ver Fig. 9.1). Las molculas, formadoras
de toda suerte de sustancias, siempre se encuentran en movimiento. La
principal diferencia entre los tres estados de la materia (slido, lquido y gas) es
simplemente la libertad de movimiento de las molculas en cada caso.(2)

Figura 9.1 Velocidad de difusin

La velocidad de difusin es el proceso por medio del cual cada molcula


individual se mueve en lnea recta hasta que choca con algo y luego rebota y
sigue otra direccin. Las molculas siguen movindose aunque se hayan
distribuido uniformemente por un espacio dado; sin embargo, con la misma
rapidez con que algunas molculas se mueven de un lado a otro, es as como
se mantiene un equilibrio.
Cuando el medio en el que se difundir una sustancia es ms largo, le
velocidad con la cual se distribuirn las partculas ser ms lento, esto puede
modificarse acortando el medio o manipulando la temperatura.
Algunas sustancias pasan al interior o al exterior de las clulas y se
mueven dentro de stas mediante la difusin simple, proceso fsico basado en
el movimiento al azar. A temperaturas mayores al cero absoluto, todos los
tomos y molculas tienen energa cintica o de movimiento. Aunque el
movimiento de las partculas individuales es indirecto e impredecible, es posible

44

hacer predicciones acerca del comportamiento de grupos de partculas. Si


stas no estn distribuidas de manera uniforme, entonces existen cuando
menos dos regiones, una con alta concentracin de partculas y otra con baja.
Tal diferencia de concentracin de una sustancia de un lugar a otro es un
gradiente de concentracin.(5)
La membrana celular es como la va de acceso de la clula. Todos los
materiales que entran a la clula o salen de ella, deben de hacerlo a travs de
la membrana celular, la clula no puede funcionar apropiadamente y
permanecer viva a menos que su membrana regule este paso de materiales.(1)
Las membranas celulares son selectivas y la entrada o salida depende
del tamao de las molculas, espacios intermoleculares, la carga elctrica y la
concentracin.(2)
Existen dos mecanismos de transporte de sustancias a la clula.
o Transporte pasivo. En el que la clula realiza escaso trabajo ya que
ste fenmeno depende ms bien del grado de concentracin de
sustancia. se puede dividir en tres tipos:
o Difusin: Paso de molculas de mayor a menor concentracin
debido a la energa cintica de las mismas.
o Dilisis: Paso de molculas del solvente a menor concentracin a
travs de la membrana.
o smosis: Paso de molculas de solvente o de agua de una regin
de mayor concentracin a otra de menor concentracin a travs de la
membrana.
o Transporte activo: Se lleva a cabo en contra del gradiente de
concentracin por lo que la clula requiere de mayor gasto energtico
(ATP). Esto indica que la energa generada por algunas de las
reacciones metablicas que ocurren en la clula es utilizada para este
tipo de transporte.(4)
MATERIAL:
Parrilla elctrica.
Un termmetro.
5 vasos de precipitado de 250 ml.
Etiquetas.
Cronmetro.
1 gotero.
Hojas de papel milimtrico.
Hielo.
REACTIVOS:
Solucin de azul de metileno al 10%.
Agua destilada.
45

TCNICA PARA EL EFECTO DE LA VARIACIN DE LA CONCENTRACIN


DEL COLORANTE SOBRE LA DIFUSIN:
1.
Coloca volmenes iguales de agua destilada en los 5 vasos de
precipitado. Verifica que la temperatura sea igual en todos. (Observar
esquema en el catalogo de imgenes)
2.
Numera los vasos de precipitado del 1 al 5; en cada uno coloca
un nmero de gotas del colorante igual a su propio nmero (una gota en el
vaso 1, 2 gotas en el vaso 2, etc.).
3.
Mide el intervalo el cual llamaremos tiempo de difusin que
existe entre el tiempo cero (tiempo en que se coloca el colorante) y el
tiempo final (momento en que la distribucin del colorante es uniforme).
4.
Registra grficamente los resultados en papel milimtrico. En el
eje de las X concentracin y en el eje de las Y tiempo de difusin en
minutos.
5.

Contesta lo siguiente:
a)
Qu efecto tiene la concentracin sobre la velocidad de
difusin?
b)
A qu obedecen los resultados obtenidos?

TCNICA PARA EL EFECTO DE LA VARIACIN DE TEMPERATURA


SOBRE LA DIFUSIN:
1. Utilizando los mismos recipientes del experimento anterior (lavados y
secos) y con la misma cantidad de agua destilada, mide el tiempo de
difusin del colorante en las siguientes condiciones: se colocar una
gota de azul de metileno en varios recipientes cuya agua estar a
diferentes temperaturas (5, 15 ,25 ,35 y 45 C).
2. Representa grficamente los resultados en papel milimtrico.
3. Contesta lo siguiente:
a)
Cules son las variables de este experimento y cmo se
deben situar en los ejes coordenados?
b)
Qu efectos tiene la temperatura sobre la velocidad de
difusin?
c)
A que obedecen los resultados obtenidos?
4. Realiza los dibujos correspondientes para cada una de las actividades
anteriores.
OBSERVACIONES CON DIBUJOS:
CONCLUSIONES:
CUESTIONARIO:

46

1) Elabora un cuadro comparativo de los tipos de transporte de


membrana.
2) Qu es la difusin?
3) Qu es la velocidad de difusin y que factores depende? Describe
cada uno.
FECHA DE REALIZACIN:
BIBLIOGRAFA:
1. Baker, J. 2002. Biologa e investigacin cientfica. Mxico D.F. Primera
edicin. Editorial Fondo educativo interamericano. Pgs. 29-32
2. Maillet, M. 2002. Biologa celular: manual. Barcelona. Segunda
edicin. Editorial Masson. Pgs. 47-50
3. Ondarza, R. 2000.Biologa moderna: la clula, bioqumica, gentica y
biologa molecular, biologa general. Mxico D.F. Dcima edicin.
Editorial Trillas. Pgs. 41-42
4. Tortora, G. 2002. Principios de anatoma y fisiologa. Mxico. Novena
edicin. Editorial Oxford. Pgs. 62-73
5. Villee, C. 2003. Biologa. Mxico D.F. Octava edicin. Editorial Mc
Graw Hill. Pgs. 36-38

UNIVERSIDAD VERACRUZANA
FACULTAD DE QUMICA FARMACUTICA BIOLGICA
LABORATORIO DE BIOLOGA CELULAR
PRCTICA No. 10
PERMEABILIDAD DE MEMBRANA
OBJETIVO:
Comprobar la selectividad de la membrana celular por medio de
reacciones qumicas en un modelo artificial.
FUNDAMENTO:

47

La membrana citoplasmtica regula la entrada y salida de materiales,


permitiendo la entrada de unos y restringiendo el paso de otros. Esta propiedad
se llama permeabilidad selectiva. La permeabilidad de la membrana depende
de varios factores relacionados con las propiedades fsico-qumicas de la
sustancia:
Solubilidad en los lpidos: Las sustancias que se disuelven en los lpidos
(molculas hidrfobas, no polares) penetran con facilidad en la
membrana dado que esta est compuesta en la mayor parte por
fosfolpidos.
Tamao: La mayor parte de las molculas de gran tamao no pasan a
travs de la membrana. Solo un pequeo nmero de molculas no
polares de tamao pequeo pueden atravesar la capa de fosfolpidos.
Carga: Las molculas cargadas y los iones no pueden pasar, en
condiciones normales, a travs de la membrana. Sin embargo, algunas
sustancias cargadas pueden pasar por los canales proteicos o con la
ayuda de una protena transportadora.
Gracias a sta seleccin es posible mantener dentro de la clula
molculas de alto peso molecular como protenas y cidos nucleicos, y de bajo
peso molecular como gases, sales y algunos iones. (3)
GENERALIDADES:
El transporte de materia puede realizarse gracias a la presencia de
ciertas sustancias que conforman a las membranas: unas se encargan de
formar una compleja estructura, otras de facilitar el paso de sustancias de una
manera selectiva y controlada, y algunas ms tienen como funcin relacionar a
la clula con el medio circundante.
Entre los compuestos bsicos que conforman a las membranas
podemos reconocer los lpidos, las protenas y los carbohidratos. Los lpidos
conforman la estructura o matriz de la membrana y estn representados
bsicamente por los fosfolpidos, es decir, compuestos que presentan una
cabeza hidroflica constituida por grupos fosfato, y una cola hidrofbica
formada por cadenas de carbonos de naturaleza lipdica. Tanto la cabeza como
la cola pueden tener diferente composicin y complejidad, de acuerdo con el
tipo de membrana de que se trate.(1)
Por la presencia de dos zonas (una hidroflica y otra hidrofbica) los
fosfolpidos en presencia de agua forman una bicapa. El movimiento continuo
que presentan las colas de las molculas da una enorme flexibilidad a esta
zona, por lo que se considera que en la membrana hay un flujo bidimensional
continuo, ya que las molculas tienen gran movimiento lateral a lo largo y
ancho de cada monocapa. Por el contrario, el movimiento de molculas entre
dos monocapas opuestas es extremadamente lento.(4)
Que una membrana permita o no el paso de una sustancia a travs de
ella depende del tamao y la carga de la sustancia y de la composicin de la
membrana. Se dice que la membrana es permeable a una sustancia dada si
48

permite que esta la cruce, e impermeable en caso contrario. Una membrana


con una permeabilidad selectiva (semipermeable) permite el paso solo de
algunas sustancias. En general, las membranas biolgicas son ms
permeables a las molculas pequeas y a sustancias liposolubles capaces de
cruzar el interior hidrfobo de la bicapa (Ver Fig. 10.1).(2)

Fig. 10.1 Estructura de la membrana plasmtica

Aunque son polares (no liposolubles), las molculas de agua pueden


cruzar con rapidez las bicapas lipidicas fludas que constituyen las membranas
porque son lo suficientemente pequeas para pasar por los huecos que se
crean cuando una cadena de cido graso se desplaza en forma momentnea.
Tambin pueden atravesar con libertad algunos gases como el oxgeno,
dixido de carbono y nitrgeno; molculas polares pequeas como el glicerol, y
sustancias no polares de mayor tamao (hidrfobas), entre stas los
hidrocarburos. Algunas molculas polares un poco ms grandes, como la
glucosa, as como los iones con carga de cualquier tamao, cruzan con mayor
lentitud la bicapa.(4)
Si bien la bicapa es relativamente impermeable a los iones, las clulas
necesitan desplazar iones y molculas polares grandes y pequeas, como
aminocidos y azucares, a travs de las membranas. La permeabilidad de
estas ltimas a sustancias de esos tipos se debe sobre todo a actividades de
protenas de membrana especializadas. Las membranas biolgicas que rodean
a clulas, ncleos, vacuolas, mitocondrias, cloroplastos y otros organelos
subcelulares son semipermeables a diferentes tipos de molculas.
En respuesta a las condiciones ambientales o a las necesidades
celulares cambiantes, una membrana plasmtica puede constituirse en barrera
para una sustancia dada en un momento y promover de modo activo su paso
en otro instante. Al regular el trnsito qumico de esta manera, la clula ejerce
algn control sobre su propia composicin inica y molecular interna, que
puede ser diferente de la que corresponde al medio extracelular.(5)
MATERIAL:
Mechero
Probeta
Vaso de precipitado de 500ml
Embudo
Pelcula de gel
49

REACTIVOS:
Lugol.
Reactivo de Benedict
Solucin de albmina.
cido ntrico concentrado.
Agua destilada.
Hidrxido de amonio concentrado.
Reactivo de Biuret y de Fehling.
Solucin de almidn al 1%.
Solucin de glucosa al 30%.
Solucin de nitrato de plata al 1%.
Solucin de cloruro de sodio al 5%.
TCNICA:
1.
Preparar la pelcula de gel utilizando gelatina libre de azcares,
bacteriolgica bioxon 2g en 50ml de agua destilada. Colocarla en un molde
circular para obtener la forma de ste, procurando que la capa sea delgada
(mx. 5 mm) puede ser una tapa, cristalizador o caja petri colocando entre
este y el gel un pedazo de bolsa de plstico para que no pegue el gel en el
recipiente.
2.
Una vez que se tenga la pelcula de gel, colocarla en el embudo y
agregarle 5 ml de las soluciones de almidn, glucosa, NaCl y albmina.
(Observar esquema en el catalogo de imgenes)
3.
Colocar el embudo con la pelcula de gel en un vaso con agua
destilada hasta tener contacto con la pelcula, al agua se le habrn
practicado previamente las pruebas para almidn, glucosa, protenas y
cloruros, para asegurarse que el agua no contenga ninguna de stas
sustancias.
4.
Se deja reposar el embudo con el vaso, en posicin vertical
durante 24 hrs.
5.
Los procedimientos para realizar las pruebas de identificacin de
almidn, glucosa y protenas se describe a continuacin:
PRUEBA DEL LUGOL PARA IDENTIFICAR ALMIDN:
a) Colocar una pequea cantidad de la muestra en un tubo de ensayo.
b) Agregar 2 a 3 gotas de lugol.
c) Observar la reaccin. Si la muestra contiene almidn con lugol adquirir
una coloracin azul oscuro (reaccin positiva).
PRUEBA DE FEHLING PARA IDENTIFICACIN DE AZCARES
REDUCTORES:
a) Colocar una pequea cantidad de la muestra en un tubo de ensayo.

50

b) Agregar 0.5 ml de solucin de Fehling A y 0.5 ml de solucin de Fehling


B.
c) Calentar a ebullicin por 2 minutos (en bao mara). Observar la
reaccin.
d) Si en la reaccin existen azcares reductores con el reactivo de Fehling
se formar un precipitado caf-rojizo (reaccin positiva) o por lo menos
la solucin debe tomar sta coloracin.
PRUEBA DE BIURET PARA IDENTIFICACIN DE PROTENAS:
Es una prueba general para protenas y polipptidos de cadena no
menor de tres unidades de aminocidos.
a) Colocar una pequea porcin de la muestra en un tubo de ensayo y
agregar 3 a 5 gotas de reactivo de Biuret.
b) Observar la reaccin. Si en la muestra existen protenas se observar
que el reactivo agregado adquirir una coloracin violeta (reaccin
positiva).
REACCIN XANTOPROTICA:
Esta reaccin es positiva tanto en protenas en solucin como en estado
slido y es mucho ms sensible cuando se encuentran perfectamente
secas.
a) A una pequea porcin de muestra agregar 1 ml de cido ntrico
concentrado.
b) Calentar y enfriar.
c) Dejar resbalar por las paredes del tubo 1 ml de hidrxido de amonio
concentrado sin agitar.
d) La formacin de un anillo color naranja en la superficie indica la
presencia de protenas en la muestra (reaccin positiva).
PRUEBA PARA IDENTIFICAR CLORUROS:
a) Colocar 1 ml de muestra en un tubo de ensayo.
b) Agregar 5 gotas de solucin de nitrato de plata.
c) Agitar y observar.
d) La presencia de un precipitado blanco indica la presencia de cloruros.
NOTA: Si el resultado de las pruebas anteriores es positivo indica que la
sustancia se encuentra en la muestra que se est analizando, o de que no hay
si es negativo. En el cuadro de reacciones de identificacin se indican las

51

caractersticas de los resultados de las pruebas para cuando son positivas y/o
negativas.
5. Tomar cuatro muestras del agua destilada donde estuvo sumergida la
pelcula de gel en tubos de ensayo numerados y efectuar las reacciones para
las sustancias de la mezcla, anotando en cada caso, si la reaccin fue
positiva y/o negativa de acuerdo con la informacin del cuadro que se
presenta a continuacin:
REACCIONES DE IDENTIFICACIN
SUSTANCIA REACTIVOS
REACCIONES
POSITIVAS
Glucosa
Fehling
Coloracin o
precipitado cafrojizo
Almidn
Lugol
Solucin color azul
oscuro
Albmina
Xantoprotica
Precipitado amarillo
huevo
Biuret
Solucin violcea
Cloruro
sodio

de Nitrato de plata

Precipitado blanco

REACCIONES
NEGATIVAS
Solucin del color del
reactivo.
Solucin del color del
reactivo.
Solucin del color de
la albmina
Solucin del color del
reactivo.
Solucin transparente
incolora.

Informe de resultados
En el siguiente cuadro anotar los resultados de las pruebas realizadas al agua
donde se sumergi la pelcula de gel.
PRUEBA

ANTES (POSITIVA Y/O DESPUS


(POSITIVA
NEGATIVA)
Y/O NEGATIVA)

Fehling
Lugol
Biuret
Nitrato de plata
Xantoprotica
OBSERVACIONES CON DIBUJOS:
CONCLUSIONES:
CUESTIONARIO:
1) De las sustancias utilizadas incluyendo el agua, decir cules son de
alto peso molecular y de bajo peso molecular.
Alto peso molecular
Bajo peso molecular
2) Indicar qu sustancias se encontraban en ambos lados de la
membrana de gel en el siguiente esquema:

52

Interior

Exterior

3) Qu sustancias atravesaron la membrana de gel de afuera hacia


adentro, as como de dentro hacia fuera?
4) Porqu dichas sustancias atravesaron la membrana?
5) Qu tipo de transporte se efectu a travs de la membrana durante el
experimento?
FECHA DE REALIZACIN:
BIBLIOGRAFA:
1. Johnson, G. 2006. Biologa Celular. Mxico D.F. Segunda edicin.
Editorial Panamericana. Pgs. 73-77
2. Nason, A. 1990. El mundo biolgico. Mxico D.F. Primera edicin.
Editorial Limusa. Pgs. 53-55
3. Tortora, G. 2002. Principios de anatoma y fisiologa. Mxico. Novena
edicin. Editorial Oxford. Pgs. 61-74
4. Villee, C. 2003. Biologa. Mxico D.F. Octava edicin. Editorial Mc
Graw Hill. Pgs. 37-39
5. Young, A. 2001. Biologa II. Mxico D.F. Primera edicin. Editorial
Nueva Imagen. Pgs. 40-43

UNIVERSIDAD VERACRUZANA
FACULTAD DE QUMICA FARMACUTICA BIOLGICA
LABORATORIO DE BIOLOGA CELULAR
PRCTICA No. 11
OSMOSIS EN PLANTAS
OBJETIVO:
Demostrar el fenmeno de smosis mediante un modelo fsico que
simule este mecanismo en las clulas vegetales.
FUNDAMENTO:
53

El fenmeno de smosis adems de mantener la consistencia de la


planta, interviene en el transporte pasivo de materiales a travs de los tejidos
vegetales.
Las paredes celulares son membranas semipermeables que permiten el paso
de agua pero restringen el paso de otro tipo de sustancias moleculares
grandes.
Las clulas de las plantas suelen ser hipertnicas con respecto a su
medio circundante y por lo tanto, el agua tiende a difundirse hacia ellas. Este
ingreso de agua en la clula vegetal, genera una presin dentro de ella contra
la pared celular. La presin hace que la pared celular se expanda y que la
clula se agrande. El alargamiento que ocurre, a medida que la clula de la
planta madura, es consecuencia directa del movimiento osmtico de agua
hacia la clula.(3)
GENERALIDADES:
El crecimiento de las clulas y el normal funcionamiento de los procesos
fisiolgicos dependen de su turgencia (tensin de la membrana plasmtica
debida a la presin interior), y sta depende de la capacidad de las clulas y
tejidos de absorber agua del ambiente (Ver Fig. 11.1). Llamamos potencial
hdrico de las clulas a su capacidad de absorber agua. En las clulas
vegetales el potencial hdrico viene determinado por la interaccin entre los
solutos (que lo bajan) y la presin ejercida por la pared celular (que lo sube).(4)

Figura 11.1 Movimiento molecular a travs de la membrana

Cuando una membrana separa una solucin o un coloide de un medio


de distinta clase, sucede a menudo que algunas partculas presentes en cada
uno de los lados de la membrana no pueden atravesarla.
La permeabilidad selectiva o semipermeabilidad de las membranas
celulares da por resultado un tipo especial de difusin llamado smosis, que
implica el movimiento de molculas del solvente a travs de una membrana
semipermeable de una zona de potencial hdrico alto a una zona de potencial
hdrico bajo. En el caso de movimiento de agua al interior de una clula
vegetal, la smosis implica una combinacin de difusin a travs de la bicapa
de la membrana y flujo de masas a travs de los poros de la membrana. Esos
poros estn formados por aquaporinas, protenas integrales que forman

54

canales selectivos al agua a travs de la membrana. La smosis es un proceso


pasivo, por lo tanto no utiliza energa metablica.(5)
La smosis es un fenmeno que debe cumplir ciertos requisitos:
Movimiento neto de agua, esto es, que molculas de agua masivamente
se desplacen de un compartimiento a otro, provocando un flujo de agua.

Atravesar una membrana, el movimiento de las molculas de agua se


debe producir a travs de una membrana que limita (por lo menos) dos
espacios o compartimentos, con soluciones acuosas de diferente
concentracin. Esto es que en un compartimiento hay ms solutos que
en el otro en relacin al agua.

La caracterstica principal de la membrana es que permite el paso del las


molculas de agua, pero no de otras sustancias osmticamente activas
(solutos). Este tipo de membranas se denominan membranas
selectivamente permeables. La permeabilidad selectiva est
determinada por diferentes factores (carga elctrica, polaridad,
presencia de canales, etc.).

El gradiente transmembrana, implica una diferencia en la concentracin


de la solucin acuosa a ambos lados de la membrana (compartimentos),
y esto es lo que produce el movimiento de agua desde la zona de menor
concentracin de solutos (y alta concentracin de agua) a la de mayor
concentracin de solutos (y baja concentracin de agua). Consecuencia
de la tendencia intermolecular (afinidad) del agua y de sustancias
osmticamente activas a agruparse entre s uniformemente.

La smosis cesa cuando las concentraciones de ambos espacios se


igualan (se vuelven isotnicos) y el gradiente transmembrana es nulo,
ello implica que se detiene el flujo neto de agua. (2)

El movimiento molecular y la tendencia agregativa de las molculas de


agua y soluto ocurren siempre. La condicin aqu es la permeabilidad selectiva,
pues como la membrana slo permite el paso del agua, es el agua la que tiene
libertad de desplazamiento, ya que los solutos quedan retenidos en su
compartimiento.(1)
MATERIAL:
Navaja de un solo filo o de doble filo u horadador.
Frasco de boca ancha.
Tapn de hule con orificio.
Tubo de vidrio de 15 centmetros aprox.
Palillos para dientes.
Vasos de precipitado.
Papel absorbente.
Balanza granataria.
MATERIAL BIOLGICO:
Papa grande.
55

Miel de abeja.
REACTIVOS:
Solucin de almidn al 1%.
Solucin de glucosa al 30%.
TCNICA:
1. Realizar un corte en uno de los extremos de la papa del tamao del
tapn de hule que se va a utilizar.
2. Quitar la pulpa dejando una capa delgada sin romper las orillas (5 mm
aproximadamente).
3. En el lado contrario pelar y dejar la superficie lisa. Esta parte ser la que
entre en contacto con el agua.
4. Llenar la papa con miel de abeja y coloca el tapn con el tubo de vidrio,
haz un poco de presin hasta que la mezcla suba ligeramente por el
tubo.
5. Ahora coloca la papa dentro del frasco embonndola sin romper, si no
puede sostenerse as, colocarle transversalmente los palillos para
dientes por debajo del tapn de hule para sostenerla dentro del frasco.
Llena el frasco con agua y coloca la papa en el frasco de manera que la
parte superior quede afuera del agua.
6. Marcar el tubo de vidrio donde se encuentre el nivel de la miel al
comienzo del experimento. Djalo en reposo durante 48 horas
aproximadamente y al cabo de este tiempo marca el nivel final
alcanzado por la miel.
7. Con el extremo que se le cort a la papa en el paso 1, realizar cortes en
forma de tiras y mantener cubiertos con una toalla de papel hmedo.
8. Los cortes deben ser uniformes y deben pesarse.
9. Colocar por partes iguales en los vasos con las soluciones de almidn y
glucosa. Anotar la hora en la cual se comenz e incubar durante 2
horas.
10. Retirar las rodajas y quitar el exceso de agua con una toalla absorbente,
anotar los cambios en textura y peso, realizando una tabla.
OBSERVACIONES CON DIBUJOS:
CONCLUSIONES:
CUESTIONARIO:
1. Por qu subi la miel a travs del tubo?
56

2.
3.
4.
5.

Qu es la presin osmtica?
Qu es un osmmetro? Dibuja uno.
Qu cambios fsicos se observaron en las rodajas de papa?
Qu variacin hubo con respecto al peso?

FECHA DE REALIZACIN:
BIBLIOGRAFA:
1. Jimnez, L. 2003. Biologa celular y molecular. Mxico D.F. Pearson
Educacin. Segunda edicin. Editorial Prentice Hall. Pgs. 82-86
2. Nason, A. 1990. El mundo biolgico. Mxico D.F. Primera edicin.
Editorial Limusa. Pgs. 110-112
3. Oram, R. 2002. Biologa. Sistemas vivientes. Mxico D.F. Primera
edicin. Compaa editorial continental. Pgs. 94-95
4. Tortora, G. 2002. Principios de anatoma y fisiologa. Mxico. Novena
edicin. Editorial Oxford. Pgs. 68-70
5. Villee, C. 2003. Biologa. Mxico D.F. Octava edicin. Editorial Mc
Graw Hill. Pg. 38

UNIVERSIDAD VERACRUZANA
FACULTAD DE QUMICA FARMACUTICA BIOLGICA
LABORATORIO DE BIOLOGA CELULAR
PRCTICA No. 12
PLASMOLISIS EN PLANTAS
OBJETIVO:
Observar el fenmeno de plasmlisis en clulas vegetales y comparar la
morfologa de una clula turgente normal con la de una clula plasmolizada.
FUNDAMENTO:

57

Dentro de su pared de celulosa, la clula vegetal posee una o varias


vacuolas grandes de savia celular. Esta savia es una solucin de distintas
sales, azcares, y otras sustancias orgnicas en agua. Las membranas
plasmticas y vacuolas que separan la savia celular del lquido fuera de la
clula, son de permeabilidad diferencial, pues el agua las atraviesa mucho ms
fcilmente que las sales. Los iones inorgnicos y molculas orgnicas
atraviesan estas membranas con mucha menor facilidad. Cuando la
concentracin de sales es mayor en la savia celular que en el lquido externo,
lo que suele ser normal, el agua tiende a entrar, pues pasa por difusin de una
regin de alta concentracin a otra de concentracin baja. Esta adicin de agua
distiende la vacuola y presiona el citoplasma contra la pared externa de
celulosa.
La pared de celulosa por ser ligeramente elstica resulta distendida por
la presin interna. Cuando ha entrado en la clula cierta cantidad de agua se
alcanza un equilibrio, en el cual la presin ejercida por la pared celular
distendida es igual a la presin ejercida por la savia celular. Por lo que la
cantidad de molculas de agua que entran a la vacuola es igual a las que salen
y as, el volumen total de la savia celular es constante.(1)
GENERALIDADES:
Si una clula provista de pared es sumergida en una solucin
hipertnica, pierde agua, la cual pasa a su entorno. Su contenido se contrae, y
la membrana plasmtica se separa de la pared celular, proceso denominado
plasmlisis (Ver Fig. 12.1). La pared celular relativamente rgida de clulas
vegetales, algas, bacterias y hongos les permite soportar sin estallar un
ambiente externo muy diludo, con concentraciones muy bajas de solutos.
Debido a las sustancias disueltas en el citoplasma, las clulas son hipertnicas
respecto a su entorno.(3)

Figura 12.1 Fenmeno de plasmolisis

58

El agua pasa a las clulas por smosis, con lo que llena las vacuolas
centrales y distiende las clulas. Estas se hinchan, con lo que se acumula la
llamada presin de turgencia, contra la pared celular rgida de celulosa. Esta
ltima puede estirarse muy poco, de modo que se alcanza un estado de
equilibrio dinmico en que la resistencia de la pared celular al estiramiento
impide cualquier incremento adicional en el tamao celular y no ocurre
movimiento neto de molculas de agua hacia el interior de las clulas.(2)
La presin de turgencia en las clulas es un factor de sostn importante
para el cuerpo de plantas no leosas. La presin de turgencia es aquella que
es ejercida por el contenido de la clula contra la pared celular. Ahora si el
lquido fuera de la clula es de ms concentracin de sales que la savia celular,
como al colocar la hoja de lechuga en solucin salina concentrada
(hipertnica), sale de la clula el agua de la savia. Finalmente, el contenido
celular ya no ejerce presin contra la pared celular. La presin de turgencia es
nula y la clula vegetal se ha marchitado. Cuando el volumen de la savia
celular disminuye por prdida de agua, la clula ya no es comprimida contra la
pared de celulosa, se retrae alejndose de dicha pared, a esto es, lo que se
conoce como fenmeno de plasmlisis (Ver Fig. 12.2).(3)

a) Antes

b) Despus
Figura 12.2 Plasmolisis 40x

MATERIAL:
Microscopio compuesto.
Vaso de precipitado de 500 ml.
Cajas petri.
Gotero.
Navaja de un solo filo o de doble filo.
Pinzas de diseccin.
MATERIAL BIOLGICO:
Hojas de lechuga recin cortadas.
REACTIVOS:
Solucin saturada de sal.
TCNICA:
1. Cortar un fragmento de tejido vegetal, en este caso la hoja de lechuga
que trajiste y obsrvalo al microscopio haciendo una preparacin fresca.
Es conveniente de que realices un esquema de las clulas que ests
59

observando, para que puedas hacer la comparacin con las clulas


plasmolizadas.
2. En un vaso de precipitado de 500 ml prepara una solucin salina
saturada agregando en un poco de agua sal hasta que se forme un
precipitado que ya no pueda disolverse.
3. Con un gotero tomar un poco de sta solucin y colcala en la caja petri.
Corta nuevamente un pedazo de lechuga y colcalo en la solucin, la
cual es hipertnica con respecto a la clula. Djala unos minutos
reposando y scala.
4. Observa al microscopio y describe la morfologa de las clulas en
comparacin con las que observaste en el paso 1.
OBSERVACIONES CON DIBUJOS:
CONCLUSIONES:
CUESTIONARIO:
1) Qu es turgencia?
2) Las clulas animales tambin son turgentes? Por qu?
3) A qu se debe que las molculas como las sales atraviesan la
membrana celular con menor facilidad?
4) Es lo mismo turgencia y plasmolisis? Explique.
FECHA DE REALIZACIN:
BIBLIOGRAFA:
1. Johnson, G. 2006. Biologa Celular. Mxico D.F. Segunda edicin.
Editorial Panamericana. Pgs. 49-52
2. Tortora, G. 2002. Principios de anatoma y fisiologa. Mxico. Novena
edicin. Editorial Oxford. Pg. 70
3. Villee, C. 2003. Biologa. Mxico D.F. Octava edicin. Editorial Mc
Graw Hill. Pgs. 201-202

60

UNIVERSIDAD VERACRUZANA
FACULTAD DE QUMICA FARMACUTICA BIOLGICA
LABORATORIO DE BIOLOGA CELULAR
PRCTICA No. 13
OBSERVACIN DE PLASTOS Y ESTOMAS
OBJETIVO:
Observar los diferentes plstidos que integran a las clulas vegetales,
as como tambin identificar los estomas presentes en las clulas de origen
vegetal.
FUNDAMENTO:
Las superficies de hojas y otros vegetales expuestas estn cubiertas con
una capa impermeable que ayuda a impedir la prdida excesiva de vapor de
agua. De este modo, la entrada y salida de gases se limita a poros diminutos,
denominados estomas, que suelen contraerse en las caras inferiores de las
hojas.

61

Tales aberturas conducen al interior de la hoja, constitudo por una capa


de clulas que contienen cloroplastos llamada mesfilo, con muchos espacios
areos y muy alta concentracin de vapor de agua.(2)
GENERALIDADES:
Las clulas epidrmicas estn bien adaptadas para proteger las clulas
subyacentes y disminuir las perdidas de agua, pero sin impedir del paso de la
luz. Sobre toda la superficie epidrmica hay repartidos poros pequeos
llamados estomas, cada uno rodeado por dos clulas de proteccin (Ver Fig.
13.1). Estas clulas, al cambiar su forma, pueden modificar el tamao de la
abertura y regular as la salida de agua y el intercambio de gases. A diferencia
de otras clulas epidrmicas, las clulas de proteccin contienen cloroplastos.
Hay de 50 a 500 estomas por mm2 de hoja; son mucho ms numerosos en la
superficie inferior, en las hojas de casi todas las especies.(1)

Figura 13.1 Estomas

Las clulas de proteccin en forma de haba poseen paredes ms


gruesas hacia el lado del estoma que hacia los otros. En general, los estomas
se abren en presencia de luz y se cierran en la oscuridad, la abertura y cierre
son regulados por cambios de la presin de turgencia en el interior de las
clulas de proteccin. El aumento de la presin de turgencia cambia las
paredes externas, y curva las internas, separando unas de otras y creando la
abertura del estoma entre ellas. Cuando disminuye la presin de turgencia en
las clulas de proteccin, las paredes internas, elsticas, recuperan su forma
original y la estoma se cierra (Ver Fig 13.2).(2)

Figura 13.2 Movimiento del estoma

El mecanismo que aumenta la presin de turgencia es complejo, e


implica en parte la produccin de glucosa y otras sustancias osmticamente
activas por fotosntesis en las propias clulas de proteccin. Los plastos son

62

estructuras citoplasmticas unidas que se encuentran en las clulas de las


plantas superiores y en ciertos organismos unicelulares, pero nunca en las
clulas de animales superiores. Aunque su tamao, forma y color pueden variar
de manera considerable, segn el tejido de que se trate, del organismo y de las
condiciones de desarrollo, a menudo se presentan en forma de cuerpecillos
discoides o esfricos que se encuentran libremente en el citoplasma.
Los plastos estn agrupados generalmente en dos clases: los incoloros
o leucoplastos y los pigmentados o cromoplastos. Los primeros se encuentran
a menudo en las plantas que no estn expuestas a la luz e intervienen en la
formacin y almacenamiento de grnulos de almidn y gotas de grasa.(3)
Los cloroplastos de las clulas vegetales son estructuras aplanadas
cuya longitud promedio alcanza 7 m y 3-4 m de ancho. Cada cloroplasto est
rodeado por una membrana lisa. Dentro de la membrana exterior se hala una
segunda membrana interior y una matriz lquida denominada estroma. La
membrana interior se pliega de acuerdo con un patrn intrincado.
Prolongaciones de la membrana interior se pliegan y unen en pares
denominados lamelas. Peridicamente, las lamelas se dilatan y forman
vesculas aplanadas membranosas denominadas tilacoides. Estas se
amontonan a manera de apilamientos de monedas. Tales apilamientos o
conglomerados de tilacoides reciben el nombre de grana.
Las membranas, al igual que otras membranas de la clula, son capas
biestratificadas de lpidos que contienen cantidades sustanciales de protenas
intrnsecas. Entre tales protenas se encuentra una gran variedad de enzimas,
tanto enzimas citocrmicas como enzimas sintetizadoras de ATP. Las
membranas de los cloroplastos contienen tambin la clorofila y algunos
carotenoides (Ver Fig. 13.3).

63

Figura 13.3 Cloroplasto

La clorofila es una molcula anfiptica, siendo su cadena


hidrocarbonada fitol fuertemente hidrofbica, mientras parte del anillo porfirnico
es hidroflico. Posiblemente la cadena fitlica y parte del anillo porfirnico estn
embebidos en el lpido biestratificado y el resto del anillo porfirnico se proyecta
hacia arriba. Los carotenoides son molculas fuertemente hidrofbicas y se
supone que se encuentran totalmente sumergidas en el lpido biestratificado.(2)
El estroma del cloroplasto es rico en enzimas, contiene tambin ADN y
muchos ribosomas. Estos ribosomas son ms pequeos que los del citoplasma
de la clula vegetal. La presencia de ADN permite explicar la peculiar anatoma
de los cloroplastos. Los cloroplastos se originan ya sea por divisin de un
cloroplasto en dos o por medio del desarrollo de una estructura incolora
diminuta denominada proplstido. Para la conversin de los proplstidos en
cloroplastos se requiere la presencia de luz. De ah el color plido de las
plntulas que crecen en la oscuridad. Los proplstidos tiene la capacidad de
autoreplicarse.

64

En efecto, esta es la nica manera de que pueden formarse nuevos


proplstidos. Los ncleos de las clulas vegetales no intervienen en la
produccin de nuevos proplstidos. Por tanto, es importante que cuando las
clulas vegetales sufran mitosis, cada clula hija reciba proplstidos en su
citoplasma, de las mima manera que cada clula hija recibe el contenido
cromosmico del ncleo.(1)
MATERIAL:
Portaobjetos.
Cubreobjetos.
Frasco gotero con agua.
Microscopio compuesto.
Navaja de un solo filo o de doble filo.
MATERIAL BIOLGICO:
Epidermis de limn y/o nopal.
Ptalos de flores (colores y blancos).
Hojas recin cortadas.
Manzana.
REACTIVOS:
Lugol de gram.
TCNICA:
1. Realizar un corte en la epidermis del limn y/o nopal procurando que sea
lo ms delgado posible y hacer lo mismo con el resto de las muestras.
2. Colocar el corte sobre un portaobjetos y agrgale una gota de lugol
procediendo posteriormente a colocarle el cubreobjetos.
3. Observar al microscopio la preparacin y realiza dibujos de lo que
observes. Identificar si se trata de cloroplastos, leucoplastos o
cromoplastos.
4. Utilizando la navaja, corta una porcin muy delgada de la superficie
inferior de la hoja recin cortada, al igual que de la hoja de lechuga
fresca.
5. Colocar la porcin de las hojas en portaobjetos limpios y aadirles una
gota de agua a cada portaobjetos y colocarles un cubreobjetos
respectivamente.
6. Observar al microscopio utilizando diferentes aumentos.
7. Realizar dibujos de lo observado.
OBSERVACIONES CON DIBUJOS:
Figura 13.2 CloroplastosCONCLUSIONES:

65

CUESTIONARIO:
1) Qu color toman los cloroplastos con el lugol y porqu?
2) Cmo regulan las clulas protectoras las aberturas y los cierres de los
estomas?
3) Existe alguna relacin entre la apertura y cierre de los estomas con la
fotosntesis?
4) Realiza un dibujo de un estoma poniendo en evidencia la circulacin de
agua y dixido de carbono.
5) Qu es un ostiolo?
FECHA DE REALIZACIN:
BIBLIOGRAFA:
1. Nason, A. 1990. El mundo biolgico. Mxico D.F. Primera
edicin.
Editorial Limusa. Pgs. 67-68, 364, 372-373
2. Villee, C. 2003. Biologa. Mxico D.F. Octava edicin. Editorial Mc
Graw Hill. Pg. 54
3. Young, G. 2001. Biologa II. Mxico D.F. Primera edicin. Editorial
Nueva Imagen. Pgs. 74-75

66

UNIVERSIDAD VERACRUZANA
FACULTAD DE QUMICA FARMACUTICA BIOLGICA
LABORATORIO DE BIOLOGA CELULAR
PRCTICA No. 14
FOTOSNTESIS
OBJETIVO:
Observar el fenmeno de fotosntesis a travs del montaje de un
dispositivo artificial.
FUNDAMENTO:
La fotosntesis es el proceso que permite a los vegetales obtener la
materia y la energa que necesitan para desarrollar sus funciones vitales, se
lleva a cabo gracias a la presencia en las hojas y en los tallos jvenes de
pigmentos capaces de captar la energa qumica.
Esta transforman en sus hojas a las sales minerales y el agua por
intervencin del bixido de carbono (CO2) en sustancias orgnicas sencillas
que despus pasan a formar la glucosa y finalmente el almidn desprendiendo
oxgeno (O2) El aporte de energa en los tejidos vivos procede de la conversin
de glucosa en bixido de carbono y agua para formar ATP (Ver Fig. 14.1).(2)

Figura 14.1 Fotosntesis

GENERALIDADES:
Los pigmentos que pueden ser encontrados en las hojas, los cuales
captan la energa qumica son:

La clorofila, que se encuentra en los cloroplastos de cada clula. Este


pigmento es indispensable para que se lleve a cabo la fotosntesis.

Los carotenos, es un pigmento amarillo anaranjado que se encuentra en


ciertas clulas vegetales y da su color a la zanahoria.

Las xantfilas, son unas sustancias cristalinas de color amarillo oscuro,


que se encuentra juntamente con la clorofila en los cloroplastos de las
plantas.(4)

67

En la fotosntesis se reconocen dos fases sucesivas: una dependiente


de la luz o reacciones luminosas (fase luminosa) y otra que no depende de ella,
reacciones oscuras (fase oscura) (Ver Fig. 14.2).

Figura 14.2 Mecanismo de la fotosntesis

En la fase luminosa, la luz que incide (fotones) es absorbida por la


clorofila a la que excita, provocando que sta libere electrones
cargndose as positivamente. Por cada fotn de luz se libera un
electrn. Simultneamente los fotones provocan la ruptura de la
molcula del agua (fotlisis) en dos subproductos: oxgeno, que se libera
al medio y los protones (H+). Los electrones liberados por la clorofila
activada son captados por los protones a travs de unos
transportadores, de manera que se forma el hidrgeno molecular (H2)
que se utiliza para que la molcula de NADP (Nicotidamina adenina
dinucletido) se reduzca a NADP2. Los protones que se acumulen en el
estroma pueden comportarse como enzimas activas catalizando la
formacin de molculas de ATP a partir de ADP y P. En resumen: en la
fase luminosa de la fotosntesis el impacto de los fotones de luz sobre la
clorofila y la fotolisis del agua son el origen de un estado de desequilibrio
molecular (fenmeno qumico) que se reequilibra constantemente
gracias al flujo de protones a travs de la membrana de los tilacoides
(fenmeno fsico).

La fase oscura es indiferente a la presencia de luz y sus reacciones


tienen lugar en el estroma de los cloroplastos. En ella se utiliza la
energa qumica almacenada en el ATP y el poder reductor del NADPH 2,
sintetizados en la fase luminosa, para la fijacin del O2 atmosfrico. ste
es incorporado a una molcula de 5 tomos de carbono: la ribulosa 1-5
difosfato que abunda en el estroma. El resultado, tras una molcula
inestable de 6 tomos de carbono, es el cido 3-fosfoglicrico.(3)

MATERIAL:
1 Popote.
2 matraces de 125 ml con su respectivo tapn de hule no horadado.

68

MATERIAL BIOLOGICO:
Elodea (Elodea canadensis; planta acutica).
REACTIVOS:
Agua mineral de cualquier marca.
Azul de bromotimol.
TCNICA:
1.
Colocar una gota de azul de bromotimol en un matraz de 125 ml
(matraz 1).
2.
Diluir con agua carbonatada el azul de bromotimol y observar la
coloracin. Anotando en el cuadro de resultados (Nota: Tapar el matraz
hermticamente con el tapn de hule para evitar fugas de dixido de
carbono).(Observar esquema en el catalogo de imgenes)
3.
Colocar en otro matraz (matraz 2), una gota de azul de
bromotimol y diluir con agua (Nota: el pH del agua con que se trabaja debe
tomarse en cuenta ya que modificar los resultados, en este caso debe ser
neutra o ligeramente alcalina).
4.
Soplar con un popote dentro del agua hasta cambio de
coloracin. Tapar el matraz. Anotar observaciones.
5.
Colocar dentro de ambos matraces una ramita de Elodea,
taparlos nuevamente y esperar de 30 a 60 minutos.
6.

Realizar observaciones con dibujos.

Llenar el siguiente cuadro con los resultados obtenidos:


Matraz 1
Agua carbonatada

Matraz 2
Con aire exhalado

Azul de bromotimol
Planta acutica
OBSERVACIONES CON DIBUJOS
CONCLUSIONES:
CUESTIONARIO:
1) Qu indica el color de la solucin del matraz 1 del experimento?
2) Anotar la reaccin qumica que se lleva a cabo en el matraz 2 debido a
la cual se da el cambio de coloracin. Debajo de la reaccin anotar el
nombre de cada una de las sustancias.
3) Qu compuesto est presente en la solucin del matraz 2 el cual es
responsable del cambio de coloracin?
4) Qu sucede en las soluciones de ambos matraces con la presencia
de la planta acutica?

69

FECHA DE REALIZACIN:
BIBLIOGRAFA:
1. Callen J. 2003. Biologa celular: de las molculas a los organismos.
Mxico, D.F. Segunda edicin. Editorial Continental. Pgs. 97-102
2. Cooper, G. 2002. La clula. Segunda edicin. Editorial Marbn. Pgs.
131-136
3. Nason, A. 1990. El mundo biolgico. Mxico D.F. Primera edicin.
Editorial Limusa. Pgs. 185-187, 371-377
4. Villee, C. 2003. Biologa. Mxico D.F. Octava edicin. Editorial Mc
Graw Hill. Pgs. 79-86

70

UNIVERSIDAD VERACRUZANA
FACULTAD DE QUMICA FARMACUTICA BIOLGICA
LABORATORIO DE BIOLOGA CELULAR
PRCTICA No. 15
ELABORACIN DE ALMIDN EN LAS PLANTAS VERDES
OBJETIVO:
Verificar si la energa que la hoja de geranio recibe se distribuye
uniformemente y permite que haya fotosntesis en toda la hoja cuando solo una
parte de ella es iluminada por la luz solar.
FUNDAMENTO:
Las hojas contienen pigmentos que estn asociados con la produccin
de almidn, sustancia de reserva insoluble producto de la fotosntesis. Para su
elaboracin se necesita energa, y la fuente de sta es el sol. El almidn es la
sustancia con la que las plantas almacenan su alimento en races, tubrculos,
frutas y semillas. Pero, no slo es una importante reserva para las plantas,
tambin para los seres humanos tiene una alta importancia energtica,
proporciona gran parte de la energa que consumimos los humanos por va de
los alimentos.
El almidn se diferencia de los dems hidratos de carbono presentes en
la naturaleza en que se presenta como un conjunto de grnulos o partculas.
Estos grnulos son relativamente densos e insolubles en agua fra, aunque
pueden dar lugar a suspensiones cuando se dispersan en el agua.
Suspensiones que pueden variar en sus propiedades en funcin de su origen.
(3)
GENERALIDADES:
Los azcares, almidones y celulosa son carbohidratos. Los azcares y
los almidones sirven como fuentes de energa para las clulas, en tanto que la
celulosa es el componente estructural principal de las paredes que rodean a las
clulas vegetales. Los carbohidratos se componen de tomos de carbono,
hidrogeno y oxgeno en proporcin aproximada de un tomo de carbono por
dos de hidrogeno y uno de oxgeno.
El almidn, que es la forma habitual de carbohidrato empleado para
almacenamiento de energa en las plantas, es un polmero consistente en
subunidades de -glucosa. Los monmeros estn unidos por enlaces 1-4 , lo
cual significa que el carbono 1 de una glucosa est unido al carbono 4 de la
siguiente glucosa en la cadena. El almidn tiene dos formas, amilasa y
amilopectina. La primera, ms sencilla, no est ramificada, en tanto que la
amilopectina, que es ms frecuente, suele consistir en alrededor de 1000
unidades en una cadena ramificada (Ver Fig. 15.1).(4)

71

Figura 15.1 Estructura del almidn

Los vegetales almacenan almidn principalmente en la forma de


grnulos dentro de organelos especializados llamados amiloplastos. Cuando se
requiere energa para realizar trabajo celular, la planta hidroliza el almidn, con
lo que se libera las subunidades de glucosa. Seres humanos y otros animales
que comen alimentos vegetales cuentan con enzimas para realizar dicha
hidrlisis.(1)
Tambin existe un almidn vegetal o glucgeno como se le llama, que
es la forma en la que la glucosa se almacena en los tejidos animales. Su
estructura es similar a la del almidn, aunque est ms ramificado y es ms
hidrosoluble. El glucgeno se almacena sobre todo en las clulas del hgado y
msculos. (2)
MATERIAL:
Tubos de ensayo 13 x 100 mm.
1 vaso de precipitado.
Parrilla.
Aluminio.
Papel peridico.
Tijeras.
Clips.
Caja de petri.
Pinzas.
Recipiente para bao mara.
Papel absorbente.
MATERIAL BIOLGICO:
Planta de geranio (Pelargonium grandiflorum) (capote).
REACTIVOS:
Alcohol etlico al 95%.
Lugol.
TCNICA:
1.
Realiza pequeos recortes con el aluminio y colcalos sobre las
hojas del geranio, sujetndolos con los clips. Cubre la planta con el papel
peridico y gurdala al abrigo de la luz un par de das.

72

2.
Transcurrido este tiempo, saca la planta, qutale el papel
peridico y exponla a la luz solar durante un par de horas.
3.

Quita los pedazos de aluminio y corta las hojas.

4.
Extraer la clorofila hirvindolas a bao mara en el alcohol etlico
hasta total decoloracin
5.

Escurre las hojas y sumrgelas en el lugol durante medio minuto.

6.
Transcurrido el tiempo, retira las hojas y colcalas sobre papel
absorbente, procurando extenderlas perfectamente, coloca otro papel
encima de ellas, adems algo pesado para evitar que se deformen.
7.
Una vez seca la hoja, observa los pequeos puntos negros
distribuidos en la superficie de la hoja. Basndose en las evidencias
obtenidas en este experimento, establece un enunciado sobre el efecto de
la luz en el proceso de fotosntesis.
OBSERVACIONES CON DIBUJOS:
CONCLUSIONES:
CUESTIONARIO:
1) Cul es la estructura qumica del almidn?
2) Cul es la funcin del almidn en las plantas?
3) Qu funcin tiene el lugol en esta practica?
FECHA DE REALIZACIN:
BIBLIOGRAFA:
1. Campbell, N. 2005. Biology. Mxico D.F. Sptima edicin. Editorial
Pearson-Benjamin Cummings. Pgs. 103-104
2. Lodish, H. 2005. Biologa celular y molecular. Mxico D.F. Quinta
edicin. Editorial panamericana. Pgs. 77-79
3. Villee, C. 2003. Biologa. Mxico D.F. Octava edicin. Editorial Mc Graw
Hill. Pgs. 92-93
4. Young, A. 2001. Biologa II. Mxico D.F. Primera edicin. Editorial Nueva
Imagen. Pgs. 89-91
5. El rincn de la ciencia. Abril 2003. M.A. Gmez.
http://centros5.pntic.mec.es/ies.victoria.kent/Rincon-C/Curiosid/Rc-58.htm

73

UNIVERSIDAD VERACRUZANA
FACULTAD DE QUMICA FARMACUTICA BIOLGICA
LABORATORIO DE BIOLOGA CELULAR
PRCTICA No. 16
PRESENCIA DE GLUCOSA EN LAS HOJAS DE LAS PLANTAS VERDES
OBJETIVO:
Demostrar la presencia de glucosa en las hojas de las plantas verdes
utilizando el reactivo de Fehling para identificacin de azcares reductores.
FUNDAMENTO:
Cada hoja es un rgano de nutricin especializado, cuyo papel es la
fotosntesis. A la luz solar una planta puede producir 20 veces ms alimento del
que gasta por unidad de tiempo. En otros momentos, durante la noche o el
invierno consumen ms alimento del que producen. Cada planta acumula
reservas de alimentos para resistir los periodos en los cuales no hay
fotosntesis (Ver Fig. 16.1). (3)

Figura 16.1 Mecanismo de fotosntesis

Existen varias sustancias que se utilizan para demostrar la presencia de


azcares, una de ellas es la solucin de Fehling, que al combinarse con ellos
cambia de color, variando desde un tono amarillento hasta un color rojo ladrillo,
lo cual depende de la cantidad de azcares presentes.
GENERALIDADES:
La glucosa, el monosacrido ms abundante, es utilizado por la mayor
parte de los organismos como fuente de energa. Durante la respiracin celular,
las clulas oxidan molculas de glucosa y convierten la energa almacenada a
una forma fcil de utilizar en sus actividades. La glucosa tambin es
componente de la sntesis de otros tipos de compuestos, como aminocidos y
cidos grasos; su importancia en el metabolismo es tal que su concentracin se
mantiene cuidadosamente en valores homeostticos en la sangre de seres
humanos y otros animales complejos.(1)
La glucosa y la fructuosa son ismeros estructurales, o sea que poseen
frmula molecular idntica, pero sus tomos estn dispuestos de manera

74

distinta, la glucosa tiene depsitos en hojas, tallos o races. Las hojas son
depsitos momentneos de los alimentos, poco adecuados para los periodos
prolongados, pues se pierden rpidamente.(5)
Gran parte de la glucosa producida en un da es convertida en almidn y
almacenada en las hojas. El almidn es hidrolizado subsecuentemente de
nuevo a glucosa, la cual es translocada en el floema al tallo y races. El
movimiento de sustancias alimenticias en el floema depende de la actividad
metablica de las clulas del floema. Una variedad de pruebas que penetran en
forma de solutos que se mueven en soluciones, que a su vez se movilizan
debido a diferencias en el potencial hdrico, causado por gradientes de
concentracin de azcar y otros productos de fotosntesis y agua. Esto
aumenta la presin dentro de las clulas del floema y tiende a empujar lquido
de una clula a la adyacente, a esta hiptesis se le conoce como de presin de
flujo.(2)
MATERIAL:
Mortero.
Bao mara
Pinzas para tubo de ensayo.
Mechero
Tubos de ensayo de 15 x 125 mm.
Embudo mediano.
Vaso de precipitado de 500 ml.
Vaso de precipitado de 250 ml.
Agitador de vidrio.
Gasa.
Pipeta de 5 ml.
MATERIAL BIOLGICO:
6 7 hojas verdes de espinacas.
REACTIVOS:
Solucin de Fehling A
Solucin de Fehling B.
TCNICA:
1. Triturar perfectamente las hojas de espinacas en el mortero,
posteriormente del triturado, colocarlas en un vaso de precipitado de 500
ml.
2. Agregar agua corriente suficiente para cubrir el triturado y agitar hasta
que obtengas una mezcla uniforme, cuidando que la mezcla no te quede
muy diluida, deber quedar semilquida.
3. Filtrar la mezcla en el segundo vaso de precipitado, esta filtracin la
debers de hacer con la gasa para que sea un poco ms rpido y no
tenga restos de las hojas que trituraste.

75

4. Listo ya el filtrado, toma de 3 a 4 ml, del mismo agregndolo al tubo de


ensayo que debers tener listo. A este filtrado le debers agregar 2 ml
de solucin de Fehling (1 ml de solucin de Fehling A y 1ml de solucin
de Fehling B). Agitar vigorosamente durante aproximadamente un
minuto. Esto es con el fin de mezclar perfectamente tu muestra.
5. Proceder a calentar el tubo hasta ebullicin, cuidando de que no te vaya
a saltar la muestra, y sufras algn tipo de quemadura. Mantn la
muestra durante algunos minutos hasta que observes que el cambio de
color se estabiliza.
6. Observa qu coloracin toma tu muestra y con la tabla de comparacin,
establece si hay presencia de glucosa (porcentaje) a partir de las hojas
que trituraste.
7. Realiza dibujos de lo que observaste en los tubos de ensayo con su
cambio de coloracin antes y despus.
TABLA PARA LA IDENTIFICACIN DE CARBOHIDRATOS (GLUCOSA) EN
LAS HOJAS DE LAS PLANTAS VERDES SEGN BIURET, BENEDICT Y
FEHLING.
% DE GLUCOSA
25

POSITIVIDAD
+

INTENSIDAD DE COLOR
Color verde, precipitado verde
o amarillo.
50
++
Color amarillo a verde,
precipitado amarillo.
75
+++
Color amarillo anaranjado,
precipitado amarillo a naranja.
100
++++
Color amarillo rojizo,
precipitado rojo ladrillo o rojo
Negativa: Color azul claro (Puede formarse un precipitado amarillo).
Trazas: Color verde azulado.
OBSERVACIONES CON DIBUJOS:
CONCLUSIONES:
CUESTIONARIO:
1) Para qu utilizan la glucosa los seres vivos?
2) Cmo est integrada la solucin de Fehling y cul es su utilidad?
3) Cul es la funcin del tejido vascular en una planta?
4) Cmo est integrado el tejido vascular en las plantas?
FECHA DE REALIZACIN:
BIBLIOGRAFA:
1. Callen J. 2003. Biologa celular: de las molculas a los organismos.
Mxico, D.F. Segunda edicin. Editorial Continental. Pgs. 87-91

76

2. Ondarza R. 2000.Biologa moderna: la clula, bioqumica, gentica y


biologa molecular, biologa general. Mxico D.F. Dcima edicin.
Editorial Trillas. Pgs. 92-94
3. Oram, R. 2002. Biologa. Sistemas vivientes. Mxico D.F. Primera
edicin. Compaa editorial continental. Pgs. 103-104
4. Tortora, G. 2002. Principios de anatoma y fisiologa. Mxico. Novena
edicin. Editorial Oxford. Pgs. 892-893
5. Villee, C. 2003. Biologa. Mxico D.F. Octava edicin. Editorial Mc
Graw Hill. Pgs. 92-95
6. Heidcamp,
W.
H.
Cell
Biology
Laboratory
Manual.
http://homepages.gac.edu/~cellab/index-1.html

77

UNIVERSIDAD VERACRUZANA
FACULTAD DE QUMICA FARMACUTICA BIOLGICA
LABORATORIO DE BIOLOGA CELULAR
PRCTICA No. 17
CENTRIFUGACIN DIFERENCIAL DE ORGANELOS CELULARES
OBJETIVO:
Realizar un fraccionamiento celular e identificar en ste los organelos de
clulas animales.
FUNDAMENTO:
Las clulas eucariontes tienen organelos celulares delimitados por una
sola membrana. Todos ellos pueden ser separados utilizando mtodos de
centrifugacin diferencial y por gradientes de densidad. Dado que la mayora
de los organelos tienen diferente peso molecular, viscosidad o densidad.
Existen diversos tipos de purificacin de organelos, uno de ellos es la
ultracentrifugacin, que consiste en separar las clulas u organelos presentes
en una mezcla celular sometindola a una fuerza centrifuga. Mediante una
ultracentrfuga se alcanzan velocidades de ms de 100 000 rpm, para generar
una fuerza centrifuga de 500 000 G; con lo cual se logra separar a la mezcla en
dos porciones.(2)
GENERALIDADES:
Las membranas tienen propiedades nicas que permiten a los organelos
membranosos realizar una amplia variedad de funciones. Las membranas
celulares nunca tiene extremos libres; as, un organelo membranoso siempre
contiene cuando menos un espacio interno cerrado o compartimiento. Estos
compartimientos rodeados por membrana permiten que determinadas
actividades celulares se localicen dentro de regiones cerradas especficas de la
clula.
Los reactivos que se concentran en solo una pequea parte del
volumen celular total tienen mucha mayor probabilidad de entrar en contacto, y
la velocidad de reaccin puede aumentar en grado notable. Los
compartimientos rodeados por membrana tambin mantienen determinados
compuestos reactivos alejados de otras partes de la clula que podran verse
afectadas adversamente por ellos.(1)
Los procedimientos de fraccionamiento celular son mtodos de
purificacin de organelos. En general, se fraccionan las clulas con la mayor
suavidad posible y la mezcla, llamada extracto celular, se somete a fuerza
centrfuga para hacerla girar en un dispositivo llamado centrfuga (Ver Fig.
17.1). Tal fuerza separa el extracto en dos fracciones: un comprimido y un
sobrenadante. El comprimido, que contiene los materiales ms pesados
densamente compactados, se forma en el fondo del tubo. El sobrenadante, o
sea el lquido que queda encima del comprimido, contiene las partculas ms
ligeras, molculas disueltas, e iones.

78

Figura 17.1 Ultracentrifugacin

Es posible volver a centrifugar el sobrenadante a una mayor velocidad


para obtener un comprimido que contenga los siguientes componentes
celulares ms pesados, por ejemplo mitocondrias y cloroplastos. En la
centrifugacin diferencial, el sobrenadante se hace girar a velocidades cada
vez mayores, lo cual permite separar diversos componentes celulares con base
en sus diferentes tamaos y densidades.
Los componentes celulares de los comprimidos pueden ser puestos de
nuevo en suspensin y purificarse an ms por centrifugacin en gradiente de
densidad. En este procedimiento, el comprimido resuspendido se coloca en
una capa en la parte superior de un gradiente de densidad, por lo comn
constituido por una solucin de sacarosa y agua. La concentracin de sacarosa
es mxima en el fondo del tubo y disminuye en forma gradual, hasta hacerse
mnima en la parte superior. Como la densidad de los organelos difiere, cada
uno de stos emigrar durante la centrifugacin y formar una banda en la
posicin del gradiente en que su densidad iguale la propia de la solucin de
sacarosa.
Los organelos purificados pueden ser objeto de examen para determinar
qu tipo de protenas y otras molculas contienen, as como la naturaleza de
las reacciones qumicas que ocurren en ellos.(4)
MATERIAL:
Centrifuga.
Tubos de ensayo de 13 x 100 mm.
Pipetas graduadas.
Vasos de precipitado.
Mortero con pistilo.
Pipeta pasteur.
Microscopio
Licuadora
79

Portaobjetos
Cubreobjetos

MATERIAL BIOLGICO:
Hgado de pollo fresco.
REACTIVOS:
Buffer de separacin (buffer de fosfatos 10mM y de cloruro de sodio
0.15 M, KCl 3.3 mM y MgCl 2.6 mM a pH 7.4)
Gradiente de sacarosa 25 M
Verde janus
Azul de bromotimol
TCNICA:
Tcnica para centrifugacin celular. Fraccionamiento celular.
1. El hgado se enjuaga con agua de la llave y se coloca en un vaso de
precipitado, que contenga 20 ml del medio de extraccin, se desmenuza
con las tijeras remplazando de 2 a 3 veces el medio.
2. Se vierte el contenido del vaso en una licuadora y se lica. Pasar a los
tubos y centrifugar a 2000 rpm durante 10 minutos, retirar el
sobrenadante y guardarlo.
3. A la fraccin obtenida, se le agrega buffer en proporcin 1:4 (colocar 4
veces el volumen de la fraccin obtenida de buffer) y se guarda para
hacer las observaciones de los organelos.
Observacin de mitocondrias: el sobrenadante que se obtuvo de la
centrifugacin anterior, pngalo a centrifugar a 5000 rpm durante
15 minutos. Quite el sobrenadante y no lo tire, el sedimento
contiene las mitocondrias, resuspenda con buffer en proporcin 1:4.
tome 0.1 ml y se tie con 1 ml de verde janus por 10 minutos y se
observa al microscopio buscando en seco fuerte la estructura
(bastoncillos de color verde) y despus observando con el objetivo
de inmersin.
Observacin de uricosomas: El sobrenadante de la centrifugacin
anterior se vuelve a centrifugar aproximadamente 20 minutos a
7000 rpm. El sedimento presuntamente contiene las uricosomas, el
cual debe resuspenderse suavemente con buffer con la proporcin
1:4. colocar el un portaobjetos con una gota de azul de bromotimol
y observar al microscopio buscando en seco fuerte la estructura
(bastoncillos de color azul) y despus observando con el objetivo
de inmersin.
Observacin de lisosomas: Se centrifuga el sobrenadante anterior a
7000 rpm durante 30 minutos, el sobrenadante de la centrifugacin
ser posible fuente de lisosomas. Colocar en un portaobjetos con
una gota de azul de bromotimol y observar al microscopio

80

buscando en seco fuerte la estructura (bastoncillos de color azul) y


despus observando con el objetivo de inmersin.
Observacin de retculo endoplsmico: ste sistema microsomal,
aparece en cualquiera de los sobrenadantes obtenidos
anteriormente. Se coloca con una gota de azul de bromotimol y se
observa al microscopio buscando en seco fuerte la estructura
(fragmentos de color azul) y despus observando con el objetivo de
inmersin.
NOTA:
>Guardar en refrigeracin para la siguiente sesin de laboratorio.
Tcnica de gradiente de sacarosa: (tcnica alternativa)
1. En un tubo de ensayo se colocan 5 ml de sacarosa 25 M y se agrega la
parte superficial 2 ml del extracto de heptico.
2. Se centrifuga a 7000 rpm durante 30 minutos.
3. Separe los gradientes que se formaron despus de la centrifugacin con
una pipeta pasteur y se colocan en tubos graduados para medir el
volumen.
4. Tomar una alcuota de cada uno de los gradientes y se tien con los
colorantes respectivos para cada organelos.
5. Observar al microscopio buscando en seco fuerte la estructura y
despus observando con el objetivo de inmersin, mantener los tubos a
4C.
OBSERVACIONES CON DIBUJOS:
CONCLUSIONES:
CUESTIONARIO:
1) Para la separacin de organelos celulares, Qu otras tcnicas
existen?
2) Cules son los principios de la centrifugacin diferencial o
ultracentrifugacin?
3) Cules son las ventajas y las desventajas de trabajar con clulas
enteras o fraccionadas?
FECHA DE REALIZACIN:
BIBLIOGRAFA:
1. Callen J. 2003. Biologa celular: de las molculas a los organismos.
Mxico, D.F. Segunda edicin. Editorial Continental. Pgs. 122-125
2. Cooper, G. 2002. La clula. Segunda edicin. Editorial Marbn. Pgs.
17-24

81

3. Coutio, R. y Fernandez, S. 1997. Biologa celular. Manual de


laboratorio experimental. Textos universitarios. Primera edicin. Pgs.
21-22
4. Curtis, H. 2004. Biologa. Mxico D.F. Sexta edicin. Editorial
panamericana. Pgs. 100-112

82

UNIVERSIDAD VERACRUZANA
FACULTAD DE QUMICA FARMACUTICA BIOLGICA
LABORATORIO DE BIOLOGA CELULAR
PRCTICA No. 18
CATALASA: UNA ENZIMA PRESENTE EN TEJIDOS ANIMALES Y
VEGETALES
OBJETIVO:
Identificar la presencia de la catalasa en diversos tejidos de origen
animal y vegetal.
FUNDAMENTO:
La catalasa es una enzima oxidante que se encuentra en organismos
vivos y cataliza la descomposicin del perxido de hidrgeno (H202) en oxgeno
y agua. Existe prcticamente en todas las clulas excepto en ciertas bacterias
anaerobias. El perxido de hidrgeno es un residuo del metabolismo celular de
muchos organismos vivos, pero dada su toxicidad debe transformarse
rpidamente en compuestos menos peligrosos. Para ello se usa con frecuencia
esta enzima que cataliza su descomposicin. Adems la catalasa se usa en la
industria textil para la eliminacin del perxido de hidrgeno, as como en
menor medida se emplea en la limpieza de lentes de contacto que se han
esterilizado en una solucin de perxido de hidrgeno.
La catalasa es una proteina tetrmero formada por cuatro subunidades
idnticas (350,000 kD). Cada monmero contiene un grupo prosttico Hemo en
el centro activo. En algunas especies tambin contiene una molcula de NADP
por subunidad cuya funcin es proteger a la enzima de la oxidacin por su
sustrato H2O2.(1)
GENERALIDADES:
Las enzimas son protenas catalizadoras producidas por las clulas
vivas; regulan la rapidez y especificidad de las miles de reacciones qumicas
intracelulares. Aunque las enzimas son sintetizadas dentro de las clulas, no
tienen que estar en el interior de la clula para actuar como catalizador;
muchas se han extrado de las clulas y as conservan su actividad completa.
Pueden purificarse o cristalizarse para estudiar sus propiedades catalticas.
Las reacciones reguladas por enzimas son fundamentales para todos
los fenmenos vitales: respiracin, crecimiento, fotosntesis, contraccin
muscular, conduccin nerviosa, fijacin de nitrgeno, desaminacin, digestin
etctera.(2)
Las enzimas suelen ser incoloras, pero las hay amarillas, verdes, azules,
pardas o rojas. Casi todas ellas son solubles en agua o soluciones salinas
diluidas, aunque algunas, por ejemplo, las de las mitocondrias, estn unidas
por una lipoprotena y resultan insolubles en agua.
El poder cataltico de algunas enzimas es en verdad extraordinario. Una
molcula de catalasa, que contiene hierro, obtenida de hgado de res, logra el
desdoblamiento de unos cinco millones de molculas de perxido de hidrogeno

83

(H2O2) por minuto a 0C. La sustancia sobre la cual acta la enzima se llama
sustrato; en este caso, el perxido de hidrogeno es el sustrato de la enzima
catalasa. (Ver Fig. 18.1).

Figura 18.1 Captacin de la catalasa

El nmero de molculas de sustrato sobre las cuales acta una molcula


de enzima por minuto se llama nmero de recambio de la enzima; en particular
el de la catalasa es de 5 000 000. Casi todas las enzimas tienen nmeros muy
altos, lo cual explica que puedan ser tan activas, a pesar de que las cantidades
son muy pequeas en la clula. El perxido de hidrogeno, txico, es un
producto colateral de distintas reacciones enzimticas. La catalasa protege la
clula al destruir el perxido.(3)
El perxido de hidrogeno puede ser desdoblado nicamente por tomos
de hierro, pero en este caso la velocidad disminuye. Se necesitaran unos 300
aos para que un tomo de hierro pudiera desdoblar el mismo nmero de
molculas de H2O2 que una molcula de catalasa desdobla en un segundo.(2)
MATERIAL:
Navaja.
Pinzas de diseccin.
Probetas de 50 ml.
Termmetro de 0-1000C.
Mechero.
Mortero.
Tapn horadado.
84

2 tubos de ensayo 15 x 125 mm.


Toallas de papel.
Guantes de ltex.
Dispositivo para bao mara.
Pinzas para tubo de ensayo.
MATERIAL BIOLGICO:
Diversos tejidos de origen animal como: hgado de res y de pollo, sesos
de res, msculo, y tejidos vegetales como: hojas y races, espinacas,
etc.
REACTIVOS:
Solucin de perxido de hidrgeno al 3%.
TCNICA:
1.
Se harn cortes de varios tejidos animales y vegetales debiendo
anotar cuidadosamente su origen, evitando tocarlos con las manos porque
se pueden contaminar con las sustancias de la piel del experimentador.
2.
Con las pinzas de diseccin toma un fragmento de 1 cm2
aproximadamente de cada uno de los tejidos y colcalos en un pedazo de
papel absorbente cuidando que los tejidos no se toquen entre s. Mrcalos
para su identificacin.
3.
En otro pedazo de papel toma cortes de tejidos iguales a los
primeros, pero que hayan sido hervidos previamente. Manjalos tambin
con las pinzas.
4.
En dos tubos de ensayo limpios, coloca 5 ml de solucin de
perxido de hidrgeno al 3%. Toma una porcin de uno de los tejidos
hervidos y otro del mismo sin hervir y colcalos en tubos de ensayo que
contengan el perxido.
5.

Observa y anota los resultados.

6.
Tomar otro par de tubos y agrgales 5 ml de perxido de
hidrgeno al 3% en cada uno.
7.
Repite la operacin anterior con un par de porciones de otro
tejido. Contina de esta manera hasta que se haya investigado todas las
muestras de tejido.
8.
Realiza otros cortes y tritralos en un mortero por separado.
Enjuaga el mortero cada vez que se vaya a triturar un tejido distinto.
9.
Colcalos en 5 ml de solucin de perxido de hidrgeno al 3% en
tubos de ensayo limpios y agrega una porcin de tejido. Observa y anota los
resultados. Contina de esta manera hasta que se hayan investigado todas
las muestras de tejido.

85

10.
Se recomienda que los tubos se sujeten con las pinzas para tubo
de ensayo, para evitar la transferencia de calor y por lo tanto la activacion
del peroxido de hidrogeno.
11.
Armar el calorimetro como lo muestra la figura 18.2 y colocar en
el 10 ml de perxido de hidrgeno al 3% en la cmara de reaccin, moja el
bulbo del termmetro y psalo a travs del tapn horadado, el bulbo del
termmetro debe tocar el lquido.

Figura 18.2 Calormetro

12.
Anota la temperatura inicial. Una vez que se ha determinado la
temperatura inicial del perxido de hidrgeno, en el calormetro, introduce
dos gotas de extracto de hgado. Inserta el tapn en su lugar sin que quede
apretado, para permitir el escape de cualquier gas que se genere.
13.
Anota los cambios de temperatura de la cmara de reaccin cada
30 segundos, hasta un periodo de 5 minutos y repite este procedimiento dos
veces ms con perxido de hidrgeno fresco y ms extracto de hgado.
Calcula el promedio de las mediciones de temperatura para cada intervalo
de 30 segundos anotando los resultados. Posteriormente realiza una grfica
con los resultados, en el eje de las x tiempo en segundos y en el eje de las
Y temperatura en C.
ANOTA LOS RESULTADOS EN LAS SIGUIENTES TABLAS:
TEJIDO

TEJIDO TRITURADO

HERVIDO

SIN HERVIR

RESULTADOS

86

ANOTA RESULTADOS EN LA SIGUIENTE TABLA DE LAS TEMPERATURAS


OBTENIDAS EN EL CALORMETRO:
30
seg

60
seg

30
seg

60
seg

30
seg

60
seg

30
seg

60
seg

30
seg

60
seg

Temperatura
s iniciales
Temperatura
s iniciales
Temperatura
s iniciales
Promedio
OBSERVACIONES CON DIBUJOS:
CONCLUSIONES:
CUESTIONARIO:
1) Cul es el cambio total de temperatura que tuvo lugar en la cmara de
reaccin?
2) Cul es la fuente del calor determinado en este experimento?
3) Si la catalasa es una enzima que rompe el perxido de hidrgeno
formando oxgeno y agua, De qu manera se muestra en nuestro
experimento la presencia o ausencia de catalasa en los tejidos?
4) De los tejidos experimentados, Cul de ellos es el ms activo?, Cul
es el menos activo?
5) Qu se puede inferir de los resultados obtenidos, sobre la actividad de
la catalasa en los tejidos hervidos y sin hervir?
6) Frecuentemente se utiliza perxido de hidrgeno como antisptico y se
observa que al aplicarlo a una herida se produce burbujeo, Qu es lo
que indica este hecho?
FECHA DE REALIZACIN:
BIBLIOGRAFA:
1. Nelson, J. 2002. Principios de Biologa. Enfoque humana. Mxico D.F.
Segunda edicin. Editorial Limusa, S.A. Pgs. 119-122
2. Maillet M. 2002. Biologa celular: manual. Barcelona. Segunda edicin.
Editorial Masson. Pgs. 157-158
3. Plattner, H. 2001. Manual de biologa celular. Barcelona. Primera
edicin. Editorial Omega. Pgs. 137-139
4. M Beln Garrido Garrido 2002.
http://w3.cnice.mec.es/eos/MaterialesEducativos/mem2002/proteinas/pr
ctica/catalasaboton.html
http://br.geocities.com/saladefisica5/leituras/calorimetro20.gif

87

UNIVERSIDAD VERACRUZANA
FACULTAD DE QUMICA FARMACUTICA BIOLGICA
LABORATORIO DE BIOLOGA CELULAR
PRCTICA No. 19
IDENTIFICACIN DE FOSFATASA ACIDA EN LISOSOMAS
OBJETIVO:
Identificar la presencia de fosfatasa cida como marcador de los
lisosomas.
FUNDAMENTO:
En el citoplasma de la mayor parte de las clulas eucariticas hay
dispersos pequeos sacos de enzimas digestivas, llamados lisosomas. Las
enzimas de stos organelos desdoblan molculas complejas cuyo origen es
tanto intracelular como extracelular. Se han identificado 40 enzimas digestivas
distintas en los lisosomas; la mayor parte son activas en condiciones bastante
cidas (pH 5). La potencia de las enzimas y el bajo pH mantenido por el
lisosoma son buenos ejemplos de la importancia de la separacin de funciones
en distintos compartimientos. (4)
En la mayor parte de las condiciones normales, las enzimas lisosmicas
y sus acciones estn limitadas por la membrana de dicho organelo. Algunas
formas de dao tisular se han atribuido a la fuga del contenido de los
lisosomas. Los lisosomas primarios se forman por gemacin en el complejo de
Golgi. Sus enzimas hidrolticas se sintetizan en el retculo endoplsmico
rugoso. A medida que estas enzimas pasan por la luz del retculo
endoplsmico, se agregan azcares a cada molcula, a manera de seales de
identificacin. Esta seal permite al complejo de Golgi enviar de manera
apropiada la enzima a los lisosomas en lugar de exportarla de la clula.(5)
GENERALIDADES:
Los lisosomas degradan bacterias o desechos que han sido ingeridos
por clulas fagocticas. El material ingerido es rodeado por una vescula que se
forma con parte de la membrana plasmtica. Uno o ms lisosomas primarios se
fusionan con la vescula que contiene la materia extraa y se forma una
vescula mayor, llamada lisosoma secundario. Las potentes enzimas digestivas
del lisosoma entran en contacto con las molculas ingeridas y las degradan en
sus componentes.
Las enzimas lisosmicas tambin son liberadas en la clula en algunos
procesos normales. Las enzimas lisosmicas son recicladas por la propia
estructura de la clula. Un lisosoma puede engullir otro organelo, digerirlo y
regresar sus componentes al citosol para que vuelvan a ser usados. De esta
manera hay un reemplazo contnuo de los organelos viejos. En resumen, las
principales funciones de los lisosomas son: la digestin de los organelos
desechados, digestin de la clula entera, digestin extracelular y fusiona y
digiere el contenido de los endosomas tardos, vesculas pinocitticas y
fagosomas.(3)

88

Las fosfatasas cidas se encuentran presentes en casi todos los tejidos


del organismo, siendo particularmente altas sus cantidades en prstata,
estmago, hgado, msculo, bazo, eritrocitos y plaquetas. La actividad de las
fosfatasas (cida y alcalina) se mide mediante la hidrlisis de los steres
orgnicos (mononucletidos) transformados en nuclesidos y liberacin de
fosfatos inorgnicos, o bien con sustratos acoplados a travs de unin ster a
un cromforo.
Se ha visto que en individuos con carcinoma de prstata, se produce
una elevacin en los niveles de la enzima en suero, como consecuencia del
aumento de isoenzima prosttica. Cuando no se ha producido metstasis y el
tumor se encuentra circunscrito a la glndula, el incremento ser pequeo o
nulo. En cambio, ste ser importante cuando existe compromiso de otros
tejidos, especialmente, el seo. En principio, se pens que la fraccin tartrato
lbil era especfica de prstata. Hoy se sabe que existen fosfatasas cidas
tartrato lbil de origen no prosttico.(2)
MATERIAL:
Tubos de ensayo de 13 x 100 mm.
Pipetas graduadas.
Espectrofotmetro.
Mortero con pistilo.
Embudo.
Vasos de precipitado.
Papel filtro.
MATERIAL BIOLGICO:
Hgado de res.
REACTIVOS:
Buffer de acetatos 20 mM pH 4.8
P-nitrofenol 50 mM
Hidrxido de sodio 20 mM
TCNICA:
1. Se marca una serie de tubos con los datos de la siguiente tabla:
Tubo
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10

Buffer
acetatos ml
3
2.7
3
2.7
3
2.7
3
2.7
3
2.7

Sustrato
(p-Nf) ml
0.3
0.3
0.3
0.3
0.3
0.3

Fracciones de
hgado ml
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5

89

2. Los tubos se preparan a 4C en un bao de hielo y se incuban durante


30 minutos a 37C.
3. Se detiene la reaccin agregando 0.5 ml de NaOH 0.1 N.
4. La actividad de la fosfatasa se mide a travs de la liberacin de nitro
fenil que absorbe a 420 nm. Utilizando el tubo numero 1 como blanco.
5. Realizar una curva de concentracin de sustrato, cuantificando el nitro
fenil liberado (Lecturas tomadas del espectrofotmetro).
OBSERVACIONES CON DIBUJOS:
CONCLUSIONES:
CUESTIONARIO:
1) En que organelos celulares se localiza la fosfatasa cida?
2) Qu importancia clnica tiene la cuantificacin de fosfatasa cida?
3) Qu enfermedades se relacin con esta enzima?
4) Cul es la clasificacin de las enzimas y a que grupo pertenece la
fosfatasa cida?
FECHA DE REALIZACIN:
BIBLIOGRAFA:
1. Coutio, R. y Fernndez, S. 1997. Biologa celular. Manual de
laboratorio experimental. Textos universitarios. Primera edicin. Pgs.
29-30
2. Curtis, H. 2004. Biologa. Mxico D.F. Sexta edicin. Editorial
panamericana. Pg. 110
3. De Robertis, E. 2003. Biologa celular y molecular. Argentina. Doceava
edicin. Editorial El Ateneo. Pg. 129
4. Fosfatasa acida
http://www.medicentro.com.co/labclinico/analisis/a_f/FOSFATASA_ACIDA.html
5. Clasificacin enzimtica
http://www.ehu.es/biomoleculas/ENZ/ENZ1-3.htm

90

UNIVERSIDAD VERACRUZANA
FACULTAD DE QUMICA FARMACUTICA BIOLGICA
LABORATORIO DE BIOLOGA CELULAR
PRCTICA No. 20
NCLEO
OBJETIVO:
Observar e identificar el ncleo en clulas origen animal.
FUNDAMENTO:
El ncleo suele ser el organelo ms predominante de la clula. Se
encuentra rodeado por una envoltura nuclear y se encuentra solo en clulas
eucariotas, y es la localizacin de la mayora de los diferentes tipos de cidos
nucleicos. Por lo comn es esfrico u oval y tiene un dimetro promedio de 5
m debido a su tamao y al hecho de que ocupa una posicin relativamente fija
en el centro de las clulas se le denomin el centro de regulacin de la clula.
En su interior encontramos toda la informacin gentica de la clula en forma
de acido desoxirribonucleico (ADN), que presenta diversas organizaciones a lo
largo de la vida celular.(2)
Para esta prctica utilizaremos una sustancia buffer o amortiguador que
sirve como regulador del pH al adicionarse al agua, volvindose este constante.
De esta manera, si se agregan un cido o una base, no tendrn efecto alguno
sobre el agua, ya que sta siempre se estabilizar de inmediato.(4)
GENERALIDADES:
El ncleo est rodeado por un par de membranas concntricas, que
separan el contenido nuclear respecto del citoplasma circundante. Estas dos
membranas guardan entre s una distancia de 40 a 40 nm y se fusionan a
intervalos, en los llamados poros nucleares, que regulan el paso de
determinados materiales hacia el citoplasma desde el interior del ncleo, y a la
inversa.
Dentro de la membrana nuclear se encuentra un medio semifluido en el
cual estn suspendidos los cromosomas. Por lo general se encuentran en
forma de estructuras muy alargadas y no pueden ser observados fcilmente
con el microscopio ptico. Se utiliza el trmino cromatina para referirse a los
cromosomas cuando se hallan bajo esta condicin.
Cuando la clula va a dividirse en dos clulas, se modifica la apariencia
de los cromosomas. Los hilos largos y delgados se enrollan en forma de
cuerpos espesos, densos, los cuales pueden verse en el microscopio ptico
con la ayuda de un colorante apropiado. Durante el proceso de la divisin
celular, los cromosomas se distribuyen en nmeros exactamente iguales entre
ambas clulas hijas.(3)
Qumicamente, los cromosomas estn compuestos de ADN y protenas,
llamadas histonas que son las principales asociadas a los cromosomas. Las
histonas son protenas bsicas, debido a que son ricas en aminocidos tales

91

como lisina y arginina. Cada uno de estos aminocidos contiene un grupo


amino libre, capaz de adquirir un protn por poseer un par de electrones no
compartido. Por consiguiente, las histonas tienen carga positiva. El ADN lleva
carga negativa debido a la presencia de numerosos grupos fosfato. Por tanto,
no es sorprendente que las histonas se enlacen fuertemente con el ADN.
Cuando se prepara la cromatina de cierta manera, el microscopio
electrnico revela la presencia de hilos largos que contienen hinchamientos
regularmente espaciados que dan la apariencia de cuentas sobre una cuerda.
Los hinchamientos o cuentas reciben el nombre de nucleosomas. El hilo que
las une es ADN. Cada nucleosoma contiene ADN y cuatro de los cinco tipos de
histonas.
Asociadas con el ADN de la cromatina se hallan tambin otras protenas,
aunque en cantidades menores que las histonas. Estas otras protenas se
mencionan a veces como las protenas acidas, pero quizs el trmino no
histnicas es el ms exacto.
Durante el periodo comprendido entre las divisiones celulares, cuando
los cromosomas se hallan extendidos, uno o ms de ellos pueden estar
adheridos a un cuerpo esfrico de buen tamao. Este cuerpo recibe el nombre
de nucleolo y es fcilmente visible con el microscopio ptico. En el nucleolo se
sintetizan varios tipos de molculas de ARN. Parte de este ARN se utiliza en la
configuracin de los ribosomas. Los ribosomas son esenciales para la sntesis
de protenas en las clulas (Ver Fig. 20.1).(1)

Figura 20.1 Ciclo celular

MATERIAL:
Microscopio.
Portaobjetos.
Cubreobjetos.
Mortero con pistilo.
Embudo.
Papel filtro.
Vaso de precipitado.
92

Pipetas graduadas.
Pipeta pasteur.
Tubos de ensayo de 13 x 100 mm.
Centrifuga.
Licuadora.

MATERIAL BIOLGICO:
Hgado de pollo fresco.
REACTIVOS:
Buffer de separacin (buffer de fosfatos 10mM
sodio0.15 M, KCl 3.3 mM y MgCl 2.6 mM a pH 7.4)
Acetorcena.

y cloruro de

TCNICA PARA CENTRIFUGACIN CELULAR. FRACCIONAMIENTO


CELULAR:
1. El hgado se enjuaga con agua de la llave y se coloca en un vaso de
precipitado, que contenga 20 ml del medio de extraccin o buffer de
separacin, se desmenuza con las tijeras remplazando de 2 a 3 veces el
medio.
2. Se vierte el contenido del vaso en una licuadora y se licua. Pasar a los
tubos y centrifugas a 2000 rpm durante 10 minutos, retirar el
sobrenadante y guardarlo a una temperatura de 4C por si se necesitara
ms adelante en la prctica.
Observacin de ncleos: el sedimento contiene los ncleos o
clulas enteras que no se rompen. Tomar una alcuota, hacer un
frotis y teirlo con Acetorcena.
Observar al microscopio en seco fuerte localizando la estructura
(cuerpos discoides de color rosa) para despus observar en el
objetivo de inmersin.
OBSERVACIONES CON DIBUJOS:
CONCLUSIONES:
CUESTIONARIO:
1) Qu funciones realiza el ncleo cuando se dice que esta interfsico?
2) Qu es el ADN y ARN?
3) Qu clase de sustancias qumicas pueden ser utilizadas como buffer?
4) Qu funcin tiene la acetorcena en la tincin?
FECHA DE REALIZACIN:
BIBLIOGRAFA:
1. Tortora, G. 2002. Principios de anatoma y fisiologa. Mxico. Novena
edicin. Editorial Oxford. Pgs. 87-88

93

2. Villee, C. 2003. Biologa. Mxico D.F. Octava edicin. Editorial Mc Graw


Hill. Pgs. 39-41
3. Hipertextos de rea de la biologa
http://fai.unne.edu.ar/biologia/cel_euca/celula2.htm
4. Qumica del agua. Las soluciones buffer.
http://www.elacuarista.com/secciones/quimica4_buffer.htm

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FACULTAD DE QUMICA FARMACUTICA BIOLGICA
LABORATORIO DE BIOLOGA CELULAR
PRCTICA No. 21
DETERMINACIN DEL SEXO A TRAVS DE LA OBSERVACIN DEL
CORPSCULO DE BARR
OBJETIVO:
Observar el corpsculo de Barr en clulas de epitelio bucal de mujeres y
contrastando con clulas de epitelio bucal de varones.
FUNDAMENTO:
Barr y Bertrn descubrieron en 1949 un diminuto cuerpo cromtico en
las clulas nerviosas de un gato hembra, el cual, no estaba presente en las
clulas de los machos. Dado que la observacin se repiti en otros tejidos y en
otros animales incluyendo el ser humano.
Actualmente la tcnica se utiliza en la determinacin del sexo, (en atletas
que participan en pruebas olmpicas y otras de carcter internacional), en la
investigacin de estados intersexuales y en algunos de aberraciones
cromosmicas.(1)
GENERALIDADES:
El cromosoma X contiene numerosos genes requeridos por ambos
sexos, aunque una hembra normal tiene dos copias de cada locus, en tanto
que un macho normal tiene solo una. La compensacin de dosis es un
mecanismo que hace equivalentes las dosis de la hembra y la dosis nica del
macho. En la mayor parte de los tejidos, el cromosoma X masculino es tan
activo como los dos cromosomas X presentes en la hembra.
En los mamferos, la compensacin de dosis por lo general implica la
desactivacin de uno de los cromosomas X de la hembra. Durante la interfase,
en el borde del ncleo de cada clula femenina de los mamferos es visible una
mancha oscura de cromatina, llamada cuerpo o corpsculo de Barr (Ver Fig.
21.1). Se ha observado que el cuerpo de Barr representa uno de los dos
cromosomas X, que se ha hecho denso.

Figura 21.1 Observacin del corpsculo de Barr

95

Se tie de color oscuro y es metablicamente inactivo. El otro


cromosoma X se parece a los autosomas metablicamente activos por el
hecho de que durante la interfase es un largo filamento no visible al
microscopio ptico. A partir de stos y otros datos, se sugiri que en cualquier
clula de una hembra mamfero slo uno de los cromosomas X es activo; el
otro es inactivo y se observa como un cuerpo de Barr.(2)
Cuando se tien clulas con colorantes bsicos, sus ncleos presentan
zonas ms densamente teidas como las observadas alrededor del nucleolo,
correspondientes a la heterocromatina y, zonas con coloracin ligera, la
eucromatina.
M.L. Barr encontr cuerpos cromatnicos en clulas nerviosas de gatas
que no estaban presentes en el macho. Observ adems, que en diferentes
clases de tejidos, incluyendo el epitelio de mucosa bucal, se presentan esos
cuerpos heterocromatnicos, en el ser humano se presentan solo en la mujer,
por lo cual tambin se les ha denominado cromatina sexual.
Cuando en una clula existen dos cromosomas X, uno de ellos se vuelve
relativamente inactivo y se hace heterocromtico (el cuerpo de Barr). Se ha
descubierto que el nmero de corpsculo de Barr es igual al nmero de
cromosomas X menos uno. Entonces, el cuerpo de Barr proviene de un
cromosoma X que se conserva enrollado fuertemente en casi toda su longitud o
todo en l durante la interfase. A consecuencia de tal enrollamiento apretado,
tiene densidad suficiente para que, al teirse constituya un cuerpo visible.(3)
Los cuerpos de Barr en las clulas de las hembras se observan de
preferencia en los ncleos. Un cuerpo de Barr se observa como una pequea
masa oscura, frecuentemente de forma planoconvexa, comprimida contra la
superficie interna de la membrana nuclear. Suele tener una micra
aproximadamente de dimetro, de manera que resulta netamente visible si el
plano de seccin la atraviesa en la periferia.(2)
MATERIAL:
Microscopio.
Abatelenguas.
Porta y cubreobjetos.
Portaobjetos.
Cubreobjetos.
Etiquetas.
MATERIAL BIOLGICO:
Clulas del epitelio bucal de mujeres y hombres.
REACTIVOS:
Barniz o parafina.
Agua destilada.
Solucin salina isotnica.

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Colorante de acetorcena.
cido clorhdrico 0.1 M.
Acetorcena al 2%.
Mezcla de cido actico al 45% y alcohol etlico (3:1).
TCNICA:
1.
Tomar una muestra de la mucosa bucal, raspando suavemente
con abatelenguas.
2.
Colocar la muestra en un portaobjetos y con otro hacer un
extendido.
3.
En seguida colocar dos gotas de colorante en la lmina.
Posteriormente se coloca el cubreobjetos pudindose hacer la lectura en el
momento.
4.
Observar al microscopio con los objetivos seco dbil, seco fuerte
e inmersin.
5.
Asegurarse de barrer todos los campos antes de reportar la
ausencia de corpsculos de Barr. La literatura indica que en muestras de
mucosa bucal la frecuencia puede variar entre el 20% y 50%.
6.
Realizar dibujos de las muestras observadas tanto en hombres
como en mujeres.
TCNICA ALTERNATIVA:
1.
Lavar perfectamente los portaobjetos y cubreobjetos con una
mezcla de alcohol etlico-cido actico al 45%.
2.
Con el abatelenguas raspar nuevamente la parte interna de la
mejilla para tomar la muestra.
3.

Depositar el material en el portaobjetos y hacer un frotis.

4.
Etiquetar el portaobjetos segn sea el origen de la muestra
(hombre y/o mujer).
5.
Agregar una gota de cido clorhdrico y dejarla reposar por 20
minutos.
6.

Absorber el cido con una toalla de papel.

7.
Agregar una gota de acetorcena al 2% y dejarla reposar por 20
minutos.
8.
Lavar con el cido actico dejndolo gotear sobre el portaobjetos
inclinado. Enjuagar con agua destilada.

97

9.
Colocar el cubreobjetos y sellar sus bordes con el barniz o con
parafina caliente.
10.
Observar al microscopio con el objetivo seco dbil, seco fuerte e
inmersin.
11.
Realizar dibujos de las observaciones, tanto en las muestras
provenientes del varn como de mujer, resaltando en su caso el
corpsculo de Barr.
NOTA: Para obtener mejores resultados es necesario filtrar momentos antes a
la realizacin de la prctica, la solucin de acetorcena al 2% para que el
precipitado no interfiera en la observacin.
OBSERVACIONES CON DIBUJOS:
CONCLUSIONES:
CUESTIONARIO:
1) Por qu no se observa el Corpsculo de Barr en varones?
2) En que enfermedades puede observarse el Corpsculo de Barr en
hombres y no en mujeres?
3) Cul es la utilidad que se le puede dar a esta prueba y en que reas
puede ser aplicada?
FECHA DE REALIZACIN:
BIBLIOGRAFA:
1. Johnson, G. 2006. Biologa Celular. Mxico D.F. Segunda edicin.
Editorial Panamericana. Pgs. 173-174
2. Tortora, G. 2002. Principios de anatoma y fisiologa. Mxico. Novena
edicin. Editorial Oxford. Pgs. 1059-1060
3. Villee, C. 2003. Biologa. Mxico D.F. Octava edicin. Editorial Mc
Graw Hill. Pgs. 578-579

98

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FACULTAD DE QUMICA FARMACUTICA BIOLGICA
LABORATORIO DE BIOLOGA CELULAR
PRCTICA No. 22
MITOSIS EN CLULAS VEGETALES
OBJETIVO:
Observar en clulas de origen vegetal las diferentes fases de la divisin
mittica.
FUNDAMENTO:
Se llama ciclo celular al periodo de crecimiento y divisin de una clula.
La mitosis es un proceso mediante el cual las clulas se multiplican. Cada
clula madre dar por resultado dos clulas hijas que tendrn el mismo nmero
de cromosomas que la original (Ver Fig. 22.1).

Figura 22.1 Divisin celular

En un sentido estricto, el trmino mitosis se refiere a la divisin del


ncleo en dos ncleos hijos (cariocinesis), y se aplica el trmino citocinesis a la
divisin del citoplasma para formar dos clulas hijas que contiene un ncleo
cada una.

99

Toda clula proviene de otra ya preexistente; as, la divisin celular es


un proceso mediante el cual las clulas se autorreproducen con la finalidad de
perpetuarse. En los organismos pluricelulares existen dos tipos de clulas: las
somticas, que conforman prcticamente todo el organismo, y las germinales,
localizadas en las gnadas (testculos y ovarios).(3)
GENERALIDADES:
Reproduccin asexual.
Los organismos unicelulares se reproducen mediante mitosis, la cual es
un tipo de reproduccin asexual que se caracteriza porque se produce una
descendencia sin la intervencin de gametos. Las diferentes formas de este
tipo de reproduccin celular son: fisin binaria, gemacin y esporulacin.
La fisin binaria es el proceso ms generalizado de reproduccin entre
los seres unicelulares. El organismo se divide en dos partes aproximadamente
iguales, cada una de las cuales crece hasta alcanzar el tamao adecuado
segn la especie, y el proceso reproductor se repite. Este tipo de reproduccin
es comn en los protozoarios, como las amibas.
La gemacin difiere de la fisin binaria en que las dos partes resultantes
de la divisin no son de igual tamao y, en consecuencia, se forma una gema o
yema en la clula progenitora. El material gentico de la clula madre se
duplica para originar una rplica; despus, una porcin de cromosomas,
idntica a la que queda en la clula madre, emigra hacia la yema. Esta ltima
puede independizarse, aumentar su tamao y repetir el ciclo de nuevo.
La esporulacin es un proceso mediante el cual la clula se divide en
repetidas ocasiones en el interior de la membrana; despus, sta se rompe y
libera a las clulas hijas en forma de esporas. Cada espora posee una pared
protectora muy resistente a condiciones desfavorables y tiene muy poco peso;
estas caractersticas le permiten diseminarse en mltiples lugares. Los hongos
y algunos protozoarios se reproducen por esporulacin.(8)
INTERFASE.
Antes de iniciarse el proceso de mitosis, ocurre la duplicacin del
material gentico durante la interfase, que comienza en el momento del
nacimiento de las clulas, cuando las dos clulas hijas se han separado. La
interfase tiene tres etapas: G1, S y G2 (Ver Fig. 22.2).

100

Figura 22.2 Fases de la mitosis

ETAPA G1: Durante esta etapa se realiza el crecimiento de la clulas y,


casi para finalizar aumenta la actividad de las enzimas necesarias para la
sntesis de ADN.
ETAPA S: Se reconoce porque incluye la duplicacin de ADN.
ETAPA G2: La clula realiza un incremento en la sntesis de protenas y
se prepara la divisin celular o mitosis, representada por la fase M del ciclo.(7)
FASES DE LA MITOSIS.
PROFASE: A travs del microscopio es posible notar que los
cromosomas se distinguen en el ncleo, la membrana nuclear desaparece y los
cromosomas se dispersan al azar en el citoplasma.
Despus se inicia la formacin del huso acromtico, integrado por fibras
de protena que salen de extremos opuestos de la clula y que la cruzan en su
totalidad.
METAFASE: Durante la metafase se observa que los cromosomas se
ubican en el centro de la clula y forman la placa ecuatorial. En este momento,
los cromosomas se encuentran unidos por los centrmeros a las fibras del huso
acromtico.
ANAFASE: Al principio de la anafase, los centrmeros se dividen y las
dos partes iguales de cada cromosoma se separan, despus, se dirigen hacia
la mitad de la clula. Los cromosomas viajan hacia los polos opuestos
siguiendo las fibras del huso acromtico. Esta fase puede ser reconocida por
los dos grupos de cromosomas en forma de V en ambos polos de la clula.
TELOFASE: La divisin celular se completa durante la telofase. En esta
fase empieza a formar una lnea muy fina a travs del centro de la clula.
Cuando sta lnea se manifiesta, la clula original empieza a dividirse en dos
clulas hijas, la membrana nuclear se restablece y el nucleolo se condensa
dentro del ncleo. Aqu finaliza la mitosis o cariocinesis (Ver Fig. 22.3).

101

Figura 22.3 Divisin mittica

Por ltimo la clula se divide completamente en dos clulas hijas, las


cuales crecern y se prepararan para la reproduccin.(4)
MATERIAL:
Portaobjetos.
Cubreobjetos.
Navaja de afeitar.
Papel seda.
Papel absorbente.
Parafina o barniz para uas.
Pincel.
Lpiz con goma de borrar.
Microscopio de campo claro.
MATERIAL BIOLGICO:
Chcharos germinados.
REACTIVOS:
cido clorhdrico 0.1 M.
cido actico al 45%.
Acetorcena al 2%.
Aceite de inmersin.
TCNICA:
1.
Poner a germinar semillas de chcharos con cinco das de
anticipacin a la prctica, siguiendo las indicaciones del Maestro. Los
germinados deben tener una radcula de 1.5 a 2 cm de longitud.
2.
El da de la prctica, cortar transversalmente una porcin lo ms
delgada posible, de la parte apical de la radcula. Realizar 6 a 8 cortes en
una raz si la longitud es la indicada, si mide de 2 a 3 cm la raz del
germinado, realizar 2 cortes por cada raz (se recomiendan 6 a 8 cortes por
preparacin, es decir, en este caso tres o cuatro races).
3.
Colocar la porcin cortada en un portaobjetos, cubrirla con el
cido clorhdrico 0.1M, dejndole actuar de 8 a 10 minutos.
4.

Quitar el cido utilizando el papel absorbente.

5.
Agregar al corte 2 3 gotas de solucin de acetorcena. Dejar as
de 18 a 20 minutos. Indispensable cronometrar los tiempos indicados
anteriormente.

102

6.
Lavar el excedente de acetorcena con cido actico al 45%.
Enjuagar con agua destilada.
7.
Con una gota de agua, poner el cubreobjetos sobre el corte.
Presionar firmemente con la goma del lpiz, sobre el cubreobjetos,
movindolo suavemente para extender el tejido.
8.
Sellar los bordes del cubreobjetos con el barniz o con parafina
caliente, usando un pincel.
9.
Buscar al microscopio, a seco fuerte, una zona de clulas
meristemticas, observando despus con el objetivo de inmersin.
10.
Realizar los dibujos correspondientes de las diferentes fases de la
mitosis en la(s) muestra(s) observada(s)
OBSERVACIONES CON DIBUJOS:
CONCLUSIONES:
CUESTIONARIO:
1) Cuantos tipos de reproduccin existen? Descrbalos con sus
caractersticas en un cuadro sinptico.
2) En que fase del ciclo celular ocurre la replicacin del ADN?
3) En que momento principia la citocinesis?
FECHA DE REALIZACIN:
BIBLIOGRAFA:
1. Alarcn-Segovia, D. 2003. Fronteras de la biologa en los inicios del
siglo XXI. Mxico, D.F. Segunda edicin. Editorial El Colegio Nacional.
Pgs. 89-95
2. Barthelemy, R. 2003. Tcnicas para el laboratorio de biologa. Mxico
D.F. Primera edicin. Compaa editorial continental. Pgs. 121-129
3. Curtis, H. 2004. Biologa. Mxico D.F. Sexta edicin. Editorial
panamericana. Pgs. 139-149
4. Nelson, J. 2002. Principios de Biologa. Enfoque humana. Mxico D.F.
Segunda edicin. Editorial Limusa, S.A. Pgs. 166-171
5. Johnson, G. 2006. Biologa Celular. Mxico D.F. Segunda edicin.
Editorial Panamericana. Pgs. 95-107
6. Lodish, H. 2005. Biologa celular y molecular. Mxico D.F. Quinta
edicin. Editorial panamericana. Pgs. 178-181
7. Tortora, G. 2002. Principios de anatoma y fisiologa. Mxico. Novena
edicin. Editorial Oxford. Pgs. 93-97
8. Villee, C. 2003. Biologa. Mxico D.F. Octava edicin. Editorial Mc
Graw Hill. Pgs. 47-52
9. Young, A. 2001. Biologa II. Mxico D.F. Primera edicin. Editorial
Nueva Imagen. Pgs. 115-123

103

UNIVERSIDAD VERACRUZANA
FACULTAD DE QUMICA FARMACUTICA BIOLGICA
LABORATORIO DE BIOLOGA CELULAR
PRCTICA No. 23
MEIOSIS
OBJETIVO:
Observar en clulas de origen animal las diferentes fases de la divisin
meitica.
FUNDAMENTO:
La meiosis consiste en dos divisiones nucleares y citoplasmticas,
designadas primera y segunda divisiones meiticas, o simplemente meiosis I y
meiosis II. Cada una comprende profase, metafase, anafase y telofase (Ver
Fig. 23.1).

Figura 23.1 Meiosis

Durante la meiosis I, los miembros de cada par homlogo de


cromosomas se unen primero y luego se separan y se distribuyen en ncleos
distintos.
En la meiosis II, las cromtides hermanas que constituyen cada
cromosoma se separan y se distribuyen en los ncleos de las clulas hijas.(3)

104

GENERALIDADES:
La mitosis produce la formacin de clulas que tiene exactamente el
mismo nmero de cromosomas que la clula madre. Ello implicara dificultades
si stas clulas formadas por mitosis tuvieran que servir de gametos. Si se
uniera un espermatozoo humano provisto de 46 cromosomas con un vulo que
tuviera 46 cromosomas, se producira un cigoto con 92 cromosomas; es decir,
el doble del numero normal de cromosomas de la especie humana. El
desarrollo del cigoto mediante mitosis implicara que todas las clulas
subsiguientes tendran el nuevo nmero de cromosomas. Se comprender
inmediatamente que despus de unas pocas generaciones en la cuales se
repite el proceso, no habra espacio disponible en la clula para nada ms que
cromosomas.
En realidad, esta situacin raras veces ocurre en los seres vivientes. En
determinado momento entre la formacin del cigoto y la de los gametos debe
ocurrir un tipo especial de divisin celular. Este tipo especial de divisin celular
se denomina meiosis. La meiosis consiste en dos divisiones celulares
consecutivas, pero que comprenden una sola duplicacin de los cromosomas.
(5)
Por consiguiente, cuando una clula se divide por meiosis se producen
cuatro clulas. Cada una contiene precisamente la mitad del nmero diploide
normal 2n de cromosomas. Este medio nmero se denomina haploide o n. La
reduccin del nmero de cromosomas no es un proceso al azar. En las clulas
que se han reproducido por meiosis est presente nicamente un solo miembro
de cada uno de los pares de cromosomas homlogos de la clula diploide.
De tal manera que cuando los dos gametos se unen, el cigoto resultante
(2n) obtiene un miembro de cada par de cromosomas homlogos procedente
de cada gameto y por ende de cada progenitor. Cada una de las dos divisiones
meiticas puede subdividirse en fases similares a las que ocurre en la mitosis.
Sin embargo, en la primera de dichas divisiones se observan diferencias
significativas en el comportamiento de los cromosomas.(7)
PROFASE I. la profase de la primera divisin meitica es un proceso
mucho mas lento y ms complejo que en la mitosis. Los citlogos subdividen la
primera profase meitica en cinco estadios. Cuando los cromosomas se hacen
visibles por primera vez (leptoteno de la profase I), cada homlogo aparece
como una estructura individual. Pero en gran parte, sino todo, el ADN de la
clula se ha duplicado durante la fase S que precede de la profase I, de tal
manera que podemos concluir que los cromosomas en realidad ya se han
duplicado.
A medida que contina la profase (cigoteno y paquiteno), cada
cromosoma presente en la clula se aparea longitudinalmente con su
homlogo. Este proceso de apareamiento (llamado sinapsis) es un rasgo
excluido de la meiosis; no ocurre en la mitosis. Los homlogos apareados
reciben el nombre de bivalentes. Luego (estadio diploteno), los dos homlogos
comienzan a separarse. En este momento la estructura doble de cada

105

cromosoma en el sentido de que cada uno consta de un par de cromtidas


hermanas, es ya visible.(9)
De modo que cada bivalente contiene cuatro cromtidas. Sin embargo,
las cuatro cromtidas permanecen conectadas entre si por dos mecanismos:
(1) las cromtidas hermanas de cada homlogo permanecen adheridas al
centrmero compartido y (2) en uno o ms puntos, dos cromtidas no
hermanas estn fusionadas. Estos puntos de fusionamiento se denominan
quiasmas. En cada quiasma las cromtidas no hermanas ya han intercambiado
segmentos. ste proceso de intercambio recibe el nombre de
entrecruzamiento. El proceso es recproco, en cuanto a las partes
intercambiadas por cada cromtida intercambiada son idnticas. Cada
cromtida puede presentar dos, tres o ms quiasmas, de modo que si se cifran
las cromtidas hermanas de un homlogo con los nmeros 1 y 2, y del otro
homlogo con los nmeros 3 y 4, en un mismo bivalente se pueden dar una o
ms de las siguientes combinaciones: 1-3, 2-3, 1-4 y 2-4.
Cualquiera de stas combinaciones puede aparecer ms de una vez.
Los sucesos que deben excluirse son los siguientes: (1) quiasmas entre
cromtidas hermanas (los cuales no tendrn sentido por cuanto a su
composicin gentica es idntica) y (2) participacin de ms de dos cromtidas
no hermanas en cualquier punto a lo largo de la longitud del cromosoma (es
decir, tres o cuatro cromtidas no pueden intercambiar segmentos en el mismo
punto).(4)
METAFASE I. La metafase I de la meiosis se parece a la metafase de la
mitosis en cuanto a la desaparicin de la membrana nuclear y la aparicin del
huso polar. Sin embargo, difiere en un aspecto importante de la metafase de la
mitosis. En la metafase I los centrmeros de cada par de cromosomas
homlogos se adhieren al huso: uno por encima y otro por debajo del ecuador
celular.
ANAFASE I Y TELOFASE I. Con la iniciacin de la anafase I, los dos
centrmeros de cada bivalente migran hacia sus polos respectivos. Esto separa
a los bivalentes en semibivalentes. Ntese que no se presenta rajadura o
divisin de los centrmeros, tal como ocurre en la anafase mittica. Lo que
ocurre es la separacin de los cromosomas homlogos. De tal manera, que la
telofase produce dos clulas, cada una de las cuales posee un solo miembro
de cada pareja de cromosomas homlogos presente en la clula original
(aunque los homlogos originales han intercambiado recprocamente uno o
ms segmentos de cromatida).(6)
INTERCINESIS. En algunos organismos no se interpone ni una telofase
ni una interfase entre la meiosis I y la meiosis II. La clula va directamente a la
anafase I y a la profase II. Sin embargo, en aquellos organismos donde ocurre
una interfase entres las dos divisiones, no se presenta tampoco una fase S. por
consiguiente, no hay sntesis adicional de ADN.
SEGUNDA DIVISIN. La segunda divisin meitica es similar a la
divisin mittica. Los cromosomas estn todava presentes como dobletes. Los

106

centrmeros se adhieren al huso polar y se colocan en la placa ecuatorial


durante la metafase II. En la anafase II la divisin de los centrmeros separa
las cromtidas y cada una es llevada a su polo respectivo.
Al terminar la segunda divisin meitica se han producido cuatro clulas.
Cada una contiene un miembro para cada pareja homloga de cromosomas
presente en la clula original. Por consiguiente, stas clulas contienen
precisamente la mitad de los cromosomas de la clula progenitora (nmero
haploide).(8)
MATERIAL:
Portaobjetos.
Cubreobjetos.
Navaja de afeitar o bistur.
Pinzas.
Tijeras.
Lanceta.
Pipeta pasteur.
Microscopio.
Trozo de cartulina o papel negro.
Vidrio de reloj.
MATERIAL BIOLGICO:
Pez macho trucha. (Oncorhynchus mykiss)
REACTIVOS:
Parafina o barniz para uas.
Etanol absoluto y cido actico glacial en proporcin 3:1.
cido clorhdrico 0.1 M.
cido actico al 50%.
Acetorcena al 2%.
Aceite de inmersin.
TCNICA:
o Introduzca el pez en una cubeta de diseccin y realice un corte
rectangular desde el ano hasta el oprculo y observe la musculatura
(Ver Fig. 23.2).

Figura 23.2 Diseccin de un pez

107

o Retire la musculatura y de esta manera quedan a la vista las vsceras


del pez.
o Con la ayuda de la pinza tome los testculos, los cuales aparecen como
cintas alargadas de color blanco situadas en la parte superior de la
cavidad abdominal desde la regin occipital hasta el poro genital.
o Coloque los testculos sobre un portaobjetos.
o Coloque encima otra laminilla, realice una suave presin y observe al
microscopio con el objetivo seco fuerte.
Para la fijacin:
Utilizar una solucin fijadora compuesta por etanol absoluto y cido
actico glacial en proporcin 3:1.
Colocar la muestra en la solucin fijadora y 24 horas despus debe
cambiarla por una preparada en el momento.
El material debe conservarse en refrigeracin a -20C o en su
defecto a 4 C.
Para la tincin:
Se deben limpiar los portaobjetos con una mezcla de 30 ml de agua
destilada ms 10 ml de etanol y 10 ml de cido actic, dejando reposar
por unos minutos.
Limpiarlos con toallas o pauelos de papel que no dejen residuos ni
fibras.
Se coloca en un vidrio de reloj, un fragmento de la gnada en 5 ml
de la solucin de etanol absoluto y cido actico glacial en proporcin
3:1 de 2 a 3 minutos.
Una vez limpias, los fragmentos seleccionados de gnadas se
colocan en otro vidrio de reloj con cido actico al 50 % preparado al
momento no excediendo de 2 a 3 minutos.
Una vez transcurrido el tiempo, se coloca sobre una superficie
oscura para realizar la disgregacin y se agregan 2 o 3 gotas de
acetorcena, cuidando que el material no se seque.

Se le coloca un cubreobjetos y se deja reposar durante una hora.

Despus se dispersa la muestra golpeando suavemente el


portaobjetos con un lpiz en la parte central, realzando despus el
aplastado.

108

Observar e identificar en la preparacin alguna de las etapas de la


meiosis al microscopio con objetivo seco fuerte localizando la estructura
y posteriormente utilizar aceite de inmersin para observar en 100x.
OBSERVACIONES CON DIBUJOS:
CONCLUSIONES:
CUESTIONARIO:
1) En que difieren la mitosis con la meiosis?
2) Hay puntos de similitud entre ambas? Explique.
FECHA DE REALIZACIN:
BIBLIOGRAFA:
1. Alarcn-Segovia, D. 2003. Fronteras de la biologa en los inicios del siglo
XXI. Mxico, D.F. Segunda edicin. Editorial El Colegio Nacional. Pgs.
105-109
2. Barthelemy, R. 2003. Tcnicas para el laboratorio de biologa. Mxico
D.F. Primera edicin. Compaa editorial continental. Pgs. 134-137
3. Curtis, H. 2004. Biologa. Mxico D.F. Sexta edicin. Editorial
panamericana. Pgs. 249-261
4. Nelson, J. 2002. Principios de Biologa. Enfoque humana. Mxico D.F.
Segunda edicin. Editorial Limusa, S.A. Pgs. 193-201
5. Johnson, G. 2006. Biologa Celular. Mxico D.F. Segunda edicin.
Editorial Panamericana. Pgs. 117-120
6. Lodish, H. 2005. Biologa celular y molecular. Mxico D.F. Quinta
edicin. Editorial panamericana. Pgs. 181-185
7. Tortora, G. 2002. Principios de anatoma y fisiologa. Mxico. Novena
edicin. Editorial Oxford. Pgs. 985-986
8. Villee, C. 2003. Biologa. Mxico D.F. Octava edicin. Editorial Mc Graw
Hill. Pgs. 507-509
9. Young, A. 2001. Biologa II. Mxico D.F. Primera edicin. Editorial Nueva
Imagen. Pgs. 130-132
10. http://www.accessexcellence.org/RC/VL/GG/images/meiosis.gif

109

UNIVERSIDAD VERACRUZANA
FACULTAD DE QUMICA FARMACUTICA BIOLGICA
LABORATORIO DE BIOLOGA CELULAR
PRCTICA No. 24
EXTRACCIN DE ADN
OBJETIVO:
Observar la hlice del ADN, realizando una extraccin sencilla a partir de
sangre total.
FUNDAMENTO:
Los cidos nuclicos reciben este nombre porque fueron los primeros
que se descubrieron en el ncleo de las clulas; se trata de molculas
orgnicas gigantes que contienen carbono, nitrgeno, hidrgeno, oxgeno y
fsforo. Los cidos nuclicos son de dos tipos: el primero, el cido
desoxirribonuclico (ADN), constituye el material gentico dentro de la clula.
Cada gen es un segmento de una molcula de ADN. Nuestros genes
determinan los rasgos que heredaremos y, que mediante el control de las
sntesis de protenas, regulan las actividades que tienen lugar en nuestras
clulas a lo largo de la vida y, el segundo el acido ribonucleico (ARN). (1)
GENERALIDADES:
La molcula de ADN es lineal sin ramificaciones, forma hebras largas,
est formada por dos cadenas de polinucletidos enrolladas alrededor del
mismo eje, comnmente conocida como doble hlice con giro a la derecha,
cada una de ellas est formada por los fosfatos al exterior en contacto con el
medio acuoso, stos se unen en el C5 y C3 de un azcar de cinco tomos de
carbono llamado desoxirribosa se une a cada base en el ADN.(3)
Las bases pricas y pirimdicas se enlazan en el extremo opuesto del
azcar; las cuatro bases son: Adenina (A), Guanina (G), Tiamina (T) y Citosina
(C). La adenina y la guanina son bases grandes de anillos dobles llamadas
purinas; la timina y la citosina son bases ms pequeas de un solo anillo
denominadas pirimidinas; se sitan en la parte interna de la molcula,
quedando perpendicularmente al eje, se enlaza una base prica con una
pirimdica por medio de puentes de hidrogeno, lo que le da mayor resistencia a
la desnaturalizacin. Las cadenas de ADN son antiparalelas, es decir siguen
direcciones opuestas, una va en sentido 5 a 3 y la opuesta en direccin 3 a 5
(Ver Fig. 24.1).(5)
110

Al
enrollarse
las
cadenas,
se Figura 24.1 Unin de las bases pricas y pirimdicas del ADN
forman
dos
surcos o hendiduras paralelos a los giros de la hlice, uno mayor que el otro.
En estos sitios las protenas interactan con los tomos de los nucletidos y
controlan la expresin de genes especficos. La estructura mencionada se
denomina configuracin B, si las condiciones fisiolgicas se alteran, poca sal o
hidratacin elevada, la doble hlice cambia de forma y adquiere conformacin
A, C, D, E y Z. La configuracin B es la ms estable y contiene por cada vuelta
10 pares de bases, se observa in vivo. La configuracin A es la ms torcida,
tiene 11 pares de bases por cada vuelta, las bases estn inclinadas 20 grados
de la perpendicular al eje de la hlice, fue la primera obtenida in vitro. La
configuracin C es estrechamente espiralaza, compacta, tiene 9 1/3 pares de
bases, la posicin de los nucletidos es diferente. La configuracin Z tiene un
giro a la izquierda, el eje est en zigzag, es poco estable ya que diferentes
partes de la molcula quedan expuestas.(6)

Figura. 24.2 Conformacin del ADN

MATERIAL:
Microscopio
Cubreobjetos
Portaobjetos
Pipetas
Probeta.
Varilla de vidrio.
Mortero
Vasos de precipitado
Arena
111

Trozos de tela para filtrar o gasa.


MATERIAL BIOLGICO:
Hgado de pollo.
REACTIVOS:
Alcohol de 96
Cloruro sdico 2M
Dodecilsulfato de sodio. (SDS)
TCNICA:
1. Triturar un fragmento pequeo de hgado de pollo en un mortero. Aadir
arena para que al triturar se puedan romper las membranas y se liberen
los ncleos sueltos.
2. Aadir al triturado, 50 ml de agua destilada. Remover hasta hacer una
especie de papilla o pur.
3. Filtrar varias veces sobre una tela para separar los restos de tejidos que
hayan quedado por romper.
4. Medir el volumen del filtrado con una probeta.
5. Aadir al filtrado un volumen igual de cloruro sdico 2M. Con sto
conseguimos producir el estallido de los ncleos para que queden libres
las fibras de cromatina.
6. A continuacin se aade 1 g de SDS. As nos quedar el ADN libre de
las protenas que tiene asociadas.
7. Aadir mediante una pipeta 50 ml de alcohol de 96. Hay que hacerlo de
forma que el alcohol resbale por las paredes del vaso y se formen dos
capas. En la interfase, precipita el ADN (Ver Fig. 24.3).

Figura 24.3 Interfase con ADN

112

8. Introducir una varilla de vidrio e ir removiendo en la misma direccin.


Sobre la varilla se van adhiriendo unas fibras blancas, visibles a simple
vista, que son el resultado de la agrupacin de muchas fibras de ADN.
OBSERVACIONES CON DIBUJOS:
CONCLUSIONES:
CUESTIONARIO:
1) Cmo se compone un nucletido? Dibuja su estructura.
2) En que difieren el ADN y el ARN?
3) Elabora una tabla comparativa entre ADN y ARN.
FECHA DE REALIZACIN:
BIBLIOGRAFA:
1. Nelson, J. 2002. Principios de Biologa. Enfoque humana. Mxico
D.F. Segunda edicin. Editorial Limusa, S.A. Pgs. 67-73
2. Lodish, H. 2005. Biologa celular y molecular. Mxico D.F. Quinta
edicin. Editorial panamericana. Pgs. 104-111
3. Luque, J. 2003. Texto Ilustrado de Biologa Celular e Ingeniera
Gentica. Madrid. Segunda edicin. Editorial Harcourt S. A. Pgs. 9298
4. Ondarza R. 2000. Biologa moderna: la clula, bioqumica,
gentica y biologa molecular, biologa general. Mxico D.F. Dcima
edicin. Editorial Trillas. Pg. 277
5. Tortora, G. 2002. Principios de anatoma y fisiologa. Mxico.
Novena edicin. Editorial Oxford. Pgs. 53-55
6. Villee, C. 2003. Biologa. Mxico D.F. Octava edicin. Editorial Mc
Graw Hill. Pgs. 583-593
7. http://www.arrakis.es/~rfluengo/anucleico.html
8. http://www.explora.cl/otros/biotec/adn.html

113

APNDICE A
REGLAMENTO DEL LABORATORIO DE BIOLOGA CELULAR
El laboratorio es un rea de trabajo en la cual hay muchos riesgos en
general, tanto para los alumnos como el personal acadmico y de investigacin
que laboran en el.
Todo trabajo o practica que se realice dentro de dicha rea debe contar
con las precauciones debidas para evitar accidentes. El trabajo individual del
alumno hace ver la importancia que tienen las precauciones de seguridad en el
laboratorio.
El alumno debe asistir con regularidad y puntualidad a las sesiones de
laboratorio programadas.
Dentro del laboratorio debers guardar disciplina, evitando as los
accidentes.
Cuando necesites ayuda o informacin adicional, debes consultar al
maestro del laboratorio.
MEDIDAS DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO.
Equipo de proteccin.

Lentes de seguridad
Gafas (goggles)
Lentes de seguridad con careta
Bata de laboratorio
Bata y mandil
Guantes apropiados
Campana de extraccin
Extinguidor de lquidos inflamables
Extinguidor de fuego de metales
Regadera
Extractores
Conexin de agua, aire y gas.

Seguridad y precaucin

114

La accin de reactivos qumicos pueden ocasionar quemaduras por


contacto, intoxicacin y por contacto.
Leer cuidadosamente y con anticipacin las instrucciones de cada
prctica antes de realizarla en el laboratorio.
Actuar despus de saber lo que se tiene que hacer.
Emplear el sentido comn si algo en el desarrollo experimental se
considera peligroso.
Escuchar atentamente las indicaciones de manejo y cuidado de los
reactivos.
Evitar fumar, jugar e ingerir alimentos dentro del laboratorio.
Utilizar bata, lentes y guantes a la hora de realizar el experimento.
Comprobar que el material seleccionado para el desarrollo de la prctica
est en condiciones de trabajo.
Emplear los reactivos despus de cerciorarse que son los requeridos y
poniendo atencin a las indicaciones de precaucin que marcan las
etiquetas.
No utilice reactivos sin etiqueta.
No probar sustancias y no aspirar los vapores directamente.
No lleve a las mesas o lugares particulares los reactivos de uso general.
Tapar los frascos de reactivos inmediatamente despus de ser
empleados.
En caso de preparar una solucin o reactivo, etiquetar inmediatamente.
No succionar con la boca sustancias txicas.
Maneje cuidadosamente las sustancias flamables y corrosivas para los
reactivos.
Medir los reactivos lquidos.
Encender el cerillo antes de la vlvula de gas.
Revisar que las vlvulas de agua estn cerradas.
Cuidar las reas de trabajo no tirando desechos.
No se realizar ningn experimento no autorizado.
No trabaje jams solo en el laboratorio.
No dejar una reaccin sin vigilancia.
Si observa alguna situacin fuera de lo normal reprtela.
No correr en el laboratorio.
La calma es la mejor proteccin.

115

APNDICE B
MANEJO DE RESIDUOS BIOLGICO-INFECCIOSOS EN EL LABORATORIO
Clasificacin de los residuos biolgico-infecciosos.
La sangre.- la sangre y los componentes de esta, solo en su forma liquida, as
como los derivados no comerciales, incluyendo las clulas progenitoras,
hematopoyticas y las funciones celulares de la sangre resultante
(hemoderivados).
Los cultivos y cepas de agentes biolgico-infecciosos.- los cultivos
generados en los procedimientos de diagnostico e investigacin, as como los
generados en la produccin y control de agentes biolgico-infecciosos.
Utensilios desechables usados para contener, transferir, inocular y mezclar
cultivos de agentes biolgico-infecciosos.
Los patolgicos.- los tejidos, rganos y partes que se extirpan o remueven
durante las necropsias, la ciruga o algn tipo de intervencin quirrgica, que
no se encuentren en formol. Las muestras biolgicas para anlisis qumico,
microbiolgico, citolgico e histolgico, excluyendo la orina y excremento. Los
cadveres y partes de animales que fueron inoculados con agentes
enteropatgenos en centros de investigacin y bioterios.
Los residuos no anatmicos son los siguientes:

Los recipientes desechables que contengan sangre liquida.


Los materiales de curacin, saturados, goteando sangre o cualquiera de
los siguientes fluidos corporales: liquido sinovial, liquido pericrdico,
liquido pleural, liquido cefalorraqudeo o liquido peritoneal.
Los materiales desechables que contengan esputo, secreciones
pulmonares y cualquier material usado para contener estos, de
pacientes con sospecha o diagnstico de tuberculosis o de otra
enfermedad infecciosa segn sea determinado por la SSA mediante
memorndum interno o el boletn epidemiolgico.
Los materiales desechables que estn empapados, saturados o
goteando sangre, o secreciones de pacientes son sospecha o
diagnstico de fiebres hemorrgicas, as como otras enfermedades

116

infecciosas emergentes segn sea determinado por la SSA mediante


memorndum interno o el boletn epidemiolgico.
Materiales absorbentes utilizados en las jaulas de animales que hayan
sido expuestos a agentes enteropatgenos.

Los objetos punzocortantes.- los que han estado en contacto con humanos o
animales o sus muestras biolgicas durante el diagnstico y tratamiento,
nicamente: tubos capilares, navajas, lancetas, agujas de jeringas
desechables, agujas hipodrmicas, de sutura, de acupuntura y para tatuaje,
bisturs y estiletes de catter, excepto todo material de vidrio roto utilizado en el
laboratorio, el cual deber desinfectar o esterilizar antes de ser dispuesto como
residuo municipal.
Manejo de residuos peligrosos biolgico-infecciosos
Los generadores y prestadores de servicios, adems de cumplir con las
disposiciones legales aplicables, deben cumplir con las disposiciones
correspondientes a las siguientes fases de manejo, segn el caso:

Identificacin de los residuos.


Envasado de los residuos generados.

Identificacin y envasado.
Durante el envasado, los residuos peligrosos biolgico-infecciosos no debern
mezclarse con ningn otro tipo de residuos municipales o peligrosos. Se deben
separar y envasar los residuos peligrosos biolgico-infecciosos de acuerdo con
sus caractersticas fsicas y biolgico-infecciosas conforme a la siguiente tabla:
Clasificacin y separacin de los residuos peligrosos biolgicoinfecciosos.
Tipo de residuos Estado fsico
Envasado
Color
Sangre
Lquidos
Recipientes
Rojo
hermticos
Cultivos y cepas Slidos
Bolsas de polietileno rojo
de
agentes
infecciosos
Patolgicos
Slidos /lquidos
Bolsas
de Amarillo
polietileno/recipientes
hermticos
Residuos
no Slidos/lquidos
Bolsas
de Rojo
anatmicos
polietileno/recipientes
hermticos
Objetos
Slidos
Recipientes rgidos rojo
punzocortantes
polipropileno
*tomada de la norma oficial mexicana NOM-087-ECOL-SSA1-2002.
Las bolsas debern ser de polietileno de color rojo traslucido de calibre mnimo
200 y de color amarillo traslucido de calibre mnimo 300, impermeables y con
un contenido de metales pesados de no mas de una parte por milln y libres de
cloro, adems debern estar marcadas con el smbolo universal de riesgo
117

biolgico (Ver Fig. 25.1), y la leyenda Residuos peligrosos biolgicoinfecciosos. Las bolsas se llenaran al 80 por ciento de su capacidad,
cerrndose antes de ser transportadas al sitio de almacenamiento temporal y
no podrn ser abiertas o vaciadas (Ver Fig. 25.2).

Figura 25.1 Smbolo universal de riesgo biolgico

Figura 25.2 Bolsa de polietileno color rojo para guardar y


desechar residuos slidos biolgico-infecciosos

Figura 25.3 Bolsa de polietileno color amarillo para guardar


y desechar residuos slidos patolgicos

Los recipientes de los residuos peligrosos punzocortantes debern ser rgidos,


de polipropileno color rojo, con un contenido de metales pesados de no mas de
una parte por milln y libres de cloro, que permitan verificar el volumen
ocupado por el mismo, resistentes a fracturas y perdidas de contenido al
caerse, destructibles por mtodos fsicos, tener separador de agujas y abertura
para deposito, con tapa(s) de ensamble seguro y cierre permanente (Ver Fig.
25.4). Adems, debern contar con la leyenda que indique residuos peligrosos
biolgico-infecciosos y marcados con el smbolo universal de riesgo biolgico.
Los recipientes para los residuos peligrosos punzocortantes y lquidos se

118

llenaran hasta el 80% de su capacidad, asegurndose los depsitos de cierre y


no debern ser abiertos o vaciados.

Figura 25.4 Recolector de Polipropileno para punzocortantes.

Los recipientes de los residuos peligrosos deben ser rgidos, con tapa
hermtica de polipropileno color rojo o amarillo, con un contenido de metales
pesados de no mas de una parte por milln y libres de cloro, resistente a
fracturas y perdidas de contenido al caerse, destructible por mtodos fsicos,
deber contar con la leyenda que indique residuos peligrosos biolgicoinfecciosos y marcados con el smbolo universal de riesgo biolgico (Ver Fig.
25.5).

Figura 25.5 Recolector de Polipropileno para lquidos


biolgico infecciosos.

Bibliografa:
Norma oficial mexicana NOM-087-ECOL-SSA1-2002.
Norma oficial mexicana NOM-052-SEMARNAT-2005

119

APNDICE C
PREPARACIN DE SOLUCIONES EMPLEADAS EN EL LABORATORIO DE
BIOLOGA CELULAR.

Acetorcena
Orceina 1 g
Acido actico glacial 45 ml
Agua destilada 55 ml
Colocar 1 g de orceina y 45 ml de acido actico glacial en un recipiente
tapndolo bien con lana de algodn, proceder a calentar a casi ebullicin. Una
vez fro aadir 55 ml de agua destilada.

Acido actico 45%


Mezclar 45 ml de acido actico y 55 ml de agua destilada.

Acido clorhdrico 0.1M


Medir 4.8 ml de acido clorhdrico concentrado y aforar a 100 ml con agua
destilada.

Azul de bromotimol
Mtodo 1: disolver 0.1 g de indicador en 100 ml de alcohol de 60%.
Mtodo 2: disolver 0.1 g de indicador en 88 ml de solucin de hidrxido
de sodio 0.02 N y diluir con agua a 250 ml.

Azul de metileno al 10%


Pesar 10g de azul de metileno y disolver en 100 ml de agua destilada
hasta obtener una solucin uniforme.

Azul de metileno 1%
Pesar 1g de azul de metileno y disolver en 100 ml de agua destilada
hasta obtener una solucin uniforme.

Buffer de fosfatos
Solucin I: Pesar 13.8 g de NaH2PO4 y disolverlo en 250 ml de agua
destilada
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Solucin II: Pesar 35.85 g de Na2HPO4 y disolverlo en 500 ml de agua


destilada. Mezclar 212.5 ml de solucin I +37.5 ml de sol II y aforar a 500 ml
con agua destilada.

Cloruro de sodio al 5%
5 g de cloruro de sodio
100 ml de agua destilada

Cristal violeta
Pesar 3 g de cristal violeta y disolverlo en 20 ml de etanol, agregar
inmediatamente 0.8 g de oxalato de amonio y 20 ml de agua destilada.

Glucosa al 30%
30 g de glucosa
100 ml de agua destilada

Fucsina bsica
Pesar 1 g de fucsina y disolverlo en 100 ml de agua destilada.

Lugol
Pesar 0.5 g de yodo, 1 g de yoduro de potasio, mezclar ambos en un
mortero. Diluir con 150 ml de agua destilada, filtrar la solucin y guardarlo en
frasco mbar.

Reactivo de Benedict
Solucin A: Pesar 173 g de citrato de sodio, adicionarle 100g de Na2CO3
completar a 800 ml de agua destilada. Filtrar y completar hasta 850 ml de agua.
Solucin B: Pesar 17.3g de CuSO4 y disolverlo en 150 ml de agua
destilada. Disolver suavemente la solucin b en la a agitando continuamente.

Reactivo de Biuret
Sulfato de cobre pentahidratado 1.5 g
Tartrato de sodio y potasio tetrahidratado 6 g
Hidrxido de sodio al 10 % 300 ml
Disolver el sulfato de cobre pentahidratado y el tartrato de sodio y potasio
tetrahidratado en 500 ml de agua destilada, agregar 300 ml de hidrxido de
sodio al 10% y aforar a 1000 ml de agua destilada.

Reactivo de Fehling
Solucin a: disolver 34.65g de sulfato de cobre en 300 ml de agua
destilada, aforar a 500 ml y conservar en frasco con tapn de hule.
Solucin b: disolver 125g de hidrxido potsico y 173g de tartrato de
sodio y potasio en agua destilada aforando a 500 ml conservar en frasco
revestido de parafina.

Solucin de almidn al 1%
Pesar 1g de almidn y disolverlo en 100 ml de agua caliente.

Solucin de albmina

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Separar la clara de un huevo y diluir en 2 a 4 volmenes de agua


destilada. Filtrar a travs de gasa o algodn.

Solucin de Locke.
Cloruro sdico 0.9g, cloruro potsico 0.042g, cloruro de calcio 0.048g,
bicarbonato sdico 0.02g, glucosa 0.2g, agua destilada 100 ml.

Solucin de nitrato de plata al 1%


Pesar 1g de nitrato de plata y disolverlo en 100 ml de agua destilada.
Guardar en un frasco oscuro.

GLOSARIO DE TRMINOS UTILIZADOS EN BIOLOGA CELULAR.


Aberracin: Desviacin del tipo normal que en determinados casos
experimenta un carcter fisiolgico o morfolgico.
ADN: Siglas del acido desoxirribonucleico, grupo prosttico
nucleoprotenas depositario de las caractersticas genticas.

de

las

ADP: Siglas que designan el adenosindifosfato.


Adyacente: Situado en la inmediacin o proximidad de otra cosa.
Almidn: Polisacrido de los rganos verdes de las plantas.
Anaerobio: Organismo que no precisa un ambiente
molecular para desarrollar su metabolismo.

con oxigeno libre

Aprestar: Engomar los tejidos.


ARN: Siglas del acido ribonucleco. Componente
nucleoprotenas, presente en el ncleo y en el citoplasma.

esencial

de

las

Asexual: Dcese de la reproduccin que se verifica sin intervencin de los dos


sexos.
ATP: Siglas del adenosintrifosfato.
Autosoma: Cada uno de los cromosomas, a excepcin de los sexuales o
heterocrosomas, de una clula, organismo o especie.
Biconvexa: Dcese del cuerpo que tiene dos superficies convexas opuestas.
Carotenoide: Cada uno de los pigmentos vegetales amarillos, anaranjados y
rojos presentes en los cloroplastos y en los plastidios. Coadyuvan a la

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fotosntesis mediante la absorcin de luz y la transmisin de energa a la


clorofila.
Celulosa: Glcido polisacrido que forma las membranas de las clulas
vegetales. Se utiliza para fabricar papel, seda artificial, colodin, celuloide y
nitrocelulosa.
Cigoto: Resultante de la unin de dos gametos, uno masculino y otro
femenino. Macrogameto fecundado.
Cromtida: Cada uno de los dos filamentos de cromatina que resultan de la
duplicacin de un cromosoma.
Cromforo: Dcese de los grupos de tomos no saturados que, estando
presentes en la molcula de la sustancia qumica, hacen que esta sea
coloreada.
Diafragma: Disco horadado que sirve para regular la cantidad de luz que se ha
de dejar pasar.
Dicroico: Propiedad de algunos cuerpos de presentar dos coloraciones.
Discorde: Ser opuestas entre si dos o ms cosas.
Distensin: Tensin que sufren los tejidos, rganos, msculos o tendones.
Estoma: Cada una de las pequesimas aberturas que hay en la epidermis de
las hojas de los vegetales.
Estroma: Tejido que sirve para el sostenimiento entre sus mallas de los
elementos celulares, o de las sustancias activas contenidas en algunas clulas.
Eucariota: Dcese de las clulas cuyos organelos estn compartimentalizados
y tienen ncleo.
Fiambre: Que despus de asado o cocido se ha dejado enfriar para no
comerlo caliente.
Fructuosa: Monosacrido que se descubri como producto de hidrlisis del
azcar de caa.
Glucosa: Monosacrido de color blanco, sabor dulce y soluble en agua. Se
utiliza como edulcorante y en farmacia.
Gnada: rgano del aparato reproductor de los animales en el que se forman
y liberan los gametos.
Gradiente: Diferencia que se presenta entre dos concentraciones en una
mezcla de sustancias.

123

Hidrfilica: Dcese de la sustancia que absorbe el agua con gran facilidad.


Hidrfobica: Dcese de la sustancia que repele el agua con facilidad.
Hipertnica: Dcese de una solucin cuya presin osmtica es mayor que la
otra.
Hipotnica: Dcese de una solucin cuya presin osmtica es menor a la de
otra solucin.
Homeostasis: Tendencia de los seres vivos a presentar una constancia de
condiciones ambientales en su medio interno.
Homlogo: Dcese de los rganos de animales o vegetales de especies
diferentes que tienen el mismo origen embriolgico, sin tener necesariamente
la misma forma o funcin.
Impeler: Dar empuje para producir movimiento.
Inclusin: Estructura normal o patolgica que se encuentra en el interior de la
clula y que resulta de sus procesos metablicos.
Inmersin: Accin de introducir o introducirse una cosa en un liquido.
Intersticio: Espacio pequeo que media entre dos cuerpos o entre dos partes
de un mismo cuerpo.
Isotnico: Dcese de las soluciones que a la misma temperatura tienen igual
presin osmtica.
Lignina: Sustancia de proteccin de las membranas de las clulas de los
tejidos de accin mecnica y de sostn de las plantas.
Locus: Punto peculiar en el cromosoma en el cual se encuentra el gen para un
carcter dado.
Longitud de onda: Es una vibracin peridica, distancia entre dos puntos que
se encuentran en el mismo estado de fase.
Metstasis: Reproduccin de una enfermedad en rganos distintos de aquel
en que se present primero.
Ntida: Limpio, terso, claro, puro, resplandeciente.
Peroxidasa: Enzima de oxidorreduccin que cataliza las reacciones de
aceptacin de electrones o de hidrgeno por parte de los perxidos.
Procariota: Grupo de microorganismos carentes de estructura celular tpica,
sin membrana nuclear ni orgnulos citoplasmticos, como los virus, las algas
azules y las bacterias o esquizomicetes.

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Suberina: Sustancia lipdica, impermeable, que se halla en el corcho o sber


de ciertos vegetales.
Tisular: Relativo a los tejidos.
Turgencia: Presin ejercida sobre el interior de la pared celular de la planta por
el contenido liquido de la clula; el interior de la clula es hipertnico en
relacin con los lquidos que la rodea y entonces recibe ms agua por smosis.

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