Laporan Uji Kualitatif &

Kuantitatif Protein
BAB I
PENDAHULUAN
1.1.

Tujuan Intruksional Khusus

Setelah menyelesaikan praktikum, mahasiswa diharapkan mampu :

1.
2.
3.
4.
5.

1.2.

Untuk menguji atau mengidentifikasi adanya senyawa protein pada suatu larutan
Untuk menguji adanya senyawa protein yang memiliki gugus fenol
Melakukan uji pengendapan protein menggunakan alkohol
Untuk menguji kadar protein dengan metode pewarnaan protein
Untuk mengetahui berat protein dalam suatu sampel

Tinjauan Pustaka

Protein adalah salah satu bio-makromolekul yang penting peranannya dalam makhluk hidup.
Fungsi dari protein itu sendiri secara garis besar dapat dibagi ke dalam dua kelompok besar,
yaitu sebagai bahan struktural dan sebagai mesin yang bekerja pada tingkat molekular.
Apabila tulang dan kitin adalah beton, maka protein struktural adalah dinding batu-batanya.
Beberapa protein struktural fibrous protein, berfungsi sebagai pelindung, sebagai contoh
dan keratin yang terdapat pada kulit, rambut, dan kuku. Sedangkan protein struktural lain
ada juga yang berfungsi sebagai perekat, seperti kolagen. Protein dapat memerankan fungsi
sebagai bahan struktural karena seperti halnya polimer lain, protein memiliki rantai yang
panjang dan juga dapat mengalami cross-linking dan lain-lain. Selain itu protein juga dapat
berperan sebagai biokatalis untuk reaksi-reaksi kimia dalam sistem makhluk hidup.
Makromolekul ini mengendalikan jalur dan waktu metabolisme yang kompleks untuk
menjaga kelangsungan hidup suatu organisme. Suatu sistem metabolisme akan terganggu
apabila biokatalis yang berperan di dalamnya mengalami kerusakan. (Hertadi, 2008.
rhertadi@biotitech.ac.jp).
Protein merupakan makromolekul yang menyusun lebih dari separuh bagian dari sel. Protein
menentukan ukuran dan struktur sel, komponen utama dari sistem komunikasi antar sel serta
sebagai katalis berbagai reaksi biokimia di dalam sel. Karena itulah sebagian besar aktivitas
penelitian biokimia tertuju pada protein khususnya hormon, antibodi dan enzim. Semua jenis
protein terdiri dari rangkaian dan kombinasi dari 20 asam amino. Setiap jenis protein
mempunyai jumlah dan urutan asam amino yang khas. Di dalam sel, protein terdapat baik
pada membran plasma maupun membran internal yang menyusun organel sel seperti
mitokondria, retikulum endoplasma, nukleus dan badan golgi dengan fungsi yang berbedabeda tergantung pada tempatnya. Protein-protein yang terlibat dalam reaksi biokimia
sebagian besar berupa enzim banyak terdapat di dalam sitoplasma dan sebagian terdapat pada
kompartemen dari organel sel. Protein merupakan kelompok biomakromolekul yang sangat
heterogen. Ketika berada di luar makhluk hidup atau sel, protein sangat tidak stabil. Protein

merupakan komponen utama bagi semua benda hidup termasuk mikroorganisme, hewan dan
tumbuhan. Keistimewaan lain dari protein ini adalah strukturnya yang mengandung N (15,3018%), C (52,40%), H (6,90-7,30%), O (21- 23,50%), S (0,8-2%), disamping C, H, O (seperti
juga karbohidrat dan lemak), dan S kadang-kadang P, Fe dan Cu (sebagai senyawa kompleks
dengan protein). Dengan demikian maka salah satu cara terpenting yang cukup spesifik untuk
menentukan jumlah protein secara kuantitatif adalah dengan penentuan kandungan N yang
ada dalam bahan makanan atau bahan lain (Sudarmaji, S, dkk. 1989. Analisa Bahan Makanan
dan Pertanian. Penerbit Liberty: Yogyakarta).
Protein diperkenalkan sebagai molekul makro pemberi keterangan, karena urutan asam amino
dari protein tertentu mencerminkan keterangan genetik yang terkandung dalam urutan basa
dari bagian yang bersangkutan dalam DNA yang mengarahkan
biosintesis protein. Tiap jenis protein ditandai ciri-cirinya oleh:
1. Susunan kimia yang khas
Setiap protein individual merupakan senyawa murni
2. Bobot molekular yang khas
Semua molekul dalam suatu contoh tertentu dari protein murni mempunyai bobot molekular
yang sama. Karena molekulnya yang besar maka protein mudah sekali mengalami perubahan
fisik ataupun aktivitas biologisnya.
3. Urutan asam amino yang khas
Urutan asam amino dari protein tertentu adalah terinci secara genetik. Akan tetapi,
perubahan-perubahan kecil dalam urutan asam amino dari protein tertentu (Page, D.S. 1997).
Protein pada bagian tubuh tanaman terdapat hampir dalam seluruh bagian tubuh tumbuhan.
Protein ditemukan pada daun muda dan pada bagian tubuh lainnya seperti polong, dan buah .
Protein adalah senyawa organik kompleks berbobot molekul tinggi yang merupakan polimer
dari monomer-monomer asam amino yang dihubungkan satu sama lain dengan ikatan peptida.
Tumbuhan menyerap unsur-unsur hara dalam tanah melalui akar dan disalurkan keseluruh
bagian tanaman sampai ke daun sehingga tumbuhan membentuk protein dan melakukan
perombakan (proses katabolisme). Nitrogen berperan dalam pembentukan sel , jaringan , dan
organ tanaman. Ia berfungsi sebagai sebagai bahan sintetis klorofil , protein , dan asam amino.
Karena itu kehadirannya dibutuhkan dalam jumlah besar , terutama saat pertumbuhan
vegetatif. Dalam unsur-unsur tersebut mengandung unsure Nitrogen yang merupakan unsure
pembentuk pada protein. Unsur Nitrogen yang terdapat pada protein adalah 16% dari protein
tersebut. Yang banyak tersimpan pada pucuk dan daun muda. Dan masih banyak lagi unsurunsur yang merupakan pembentuk dari protein yang tersedia pada
tumbuhan.
Beberapa penelitian menunjukkan keberadaan protein yang memiliki letak berbeda-beda pada
tumbuhan. Pada famili serealia seperti gandum, padi, polong polongan dan jagung protein
berada pada bagian bijinya. Pada tanaman tembakau, protein banyak ditemukan di bagian
daunnya. Sedangkan pada kantong semar, protein banyak ditemukan pada bagian antara

batang dengan bunga, selain itu pada buah petai terdapat kandungan protein yang tinggi .
Terbentuknya protein bermula dari proses anabolisme dan kemudian dirombak pada
tumbuhan tersebut melalui proses katabolisme. Pada tumbuhan protein dapat dilihat dari
kandungan Nitrogen pada tumbuhan. Kandungan Nitrogen merupakan unsur yang dominan
mempengaruhi pertumbuhan tanaman tersebut. Sehingga tanaman sangat memerlukan
Nitrogen untuk pembentukan protein pada tanaman dan apabila kekurangan Nitrogen dapat
diartikan sebagai kekurangan protein.
Protein yang terdapat pada makhluk hidup memiliki jenis yang berbeda dan memiliki
fungsi masing-masing. Protein yang dihasilkan oleh tumbuhan berbeda beda dapat
dicontohkan pada beberapa tanaman sebagai berikut:
Protein prolamin banyak terdapat pada tanaman biji-bijian/sereal seperti beras, polong
polongan dan jagung, tidak memiliki lysine. Pada tanaman polong/kacang-kacangan yang
mayoritas mengandung protein yaitu protein globulin, kekurangan cysteine, dan methionine.
Protein ini memiliki asam amino yang esensial. Selain itu Menurut Davidson, tanaman
memiliki unsur kimia yang dapat melindungi mereka dari herbivora pemakan daun seperti
jenis serangga tertentu dan monyet. hal ini menunjukan bahwa tanaman memiliki kandungan
protein sebagai pelindung dirinya dari serangan organisme pengganggu.
Kekurangan protein pada tanaman sama dengan kekurangan Nitrogen karena pada
tanaman terdapat 16% Nitrogen penyusun protein gejala kekurangannya yaitu:
a. Tanaman tumbuh kerdil,
b. Daun menguning karena kekurangan klorofil. Lebih lanjut mengering dan rontok.
c. Tulang-tulang di bawah permukaan daun muda tampak pucat.
d. Pertumbuhan tanaman lambat , kerdil dan lemah.
e. Produksi bunga dan biji rendah.
f. Jaringan tanaman mengering dan mati,
BAB IV
PEMBAHASAN
4.1. Uji Millon

Uji Millon merupakan suatu uji yang dilakukan untuk mengidentifikasi

adanya senyawa protein yang memiliki gugus fenol (seperti tiroksin ) pada suatu
sampel. Adanya protein dalam sampel dapat diketahui apabila dalam sampel
tersebut terdapat endapan putih dan apabila endapan putih itu dipanaskan akan

menjadi merah. Pada uji millon yang telah dilakukan, ada tiga sampel yang
digunakan diantaranya : albumin, kasein dan gelatin. Dari praktikum tersebut
didapatkan hasil sebagai berikut : 1) pada albumin ketika ditambahkan reagen
millon terjadi endapan putih (endapan lebih banyak) dan ketika dipanaskan
berwarna merah (agak pekat) serta terdapat endapan. 2) pada gelatin ketika
ditambahkan reagen millon tidak terdapat endapan dan setelah dipanaskan
berwarna merah (agak pudar) dan tidak ada endapan. 3) pada kasein ketika
ditambahkan reagen millon terdapat endapan putih (lebih banyak dan jelas) dan
ketika dipanaskan berwarna putih dan terdapat endapan. Dari hasil tersebut,
dapat diketahui bahwa albumin memiliki senyawa protein yang mengandung
gugus fenol. Gelatin tidak memiliki senyawa protein karena pada saat
ditambahkan reagen millon tidak terdapat endapan putih padahal secara teori
tidak. Hal ini dapat terjadi karena kesalahan praktikan pada saat praktikum.
Misalnya, reagen millon yang ditambahkan terlalu sedikit atau tidak tepat pada
cairan gelatin (hanya menempel pada dinding tabung reaksi). Padahal, jika
dilihat pada saat setelah dipanaskan gelatin tersebut berwarna merah dan ini
merupakan indikasi adanya gugus fenol. Kasein memiliki senyawa protein tetapi
tidak mengandung gugus fenol karena pada saat dipanaskan kasein tidak berubah
warna menjadi merah.
1.2.Uji Biuret
Uji biuret merupakan suatu uji untuk mengetahui ada atau tidaknya ikatan peptide
dalam suatu senyawa sehingga uji biuret dapat dipakai untuk menunjukkan adanya
senyawa protein. Indikasi adanya protein dapat diketahui apabila larutan berubah
warna menjadi ungu. Pada uji biuret yang telah dilakukan, ada tiga sampel yang
digunakan diantaranya : albumin, gelatin dan kasein. Hasil yang diperoleh dari
praktikum tersebut diantaranya: 1). Pada albumin, larutan berubah warna menjadi
ungu (++ = terjadi perubahan warna lebih banyak), 2). Pada gelatin, larutan berubah
warna menjadi ungu (+++ = warna lebih pekat), 3). Pada kasein, larutan berubah
warna menjadi ungu (+ = sedikit berubah). Dari hasil pengamatan tersebut dapat
diketahui bahwa pada albumin terdapat ikatan peptide (senyawa protein). Pada gelatin

juga terdapat ikatan peptide (senyawa organik) dan pada kasein juga terdapat ikatan
peptide (senyawa organik).
1.3.Uji Pengendapan Oleh Alkohol
Protein dapat diendapkan dengan penambahan alkohol. Pada praktikum ini praktikum
dilaksanakan dua kali yakni uji pengendapan alkohol 1 & 2 dengan menggunakan
sampel kasein dan albumin. Didapatkan hasil sebagai berikut : pada uji pengendapan
alkohol 1, pada albumin + (HCl & Etanol) tidak ditemukan endapan. Pada albumin +
(NaOH & Etanol) tidak ditemukan endapan dan pada albumin + (Buffer Asetat &
Etanol) ditemukan endapan lebih banyak (++). Pada kedua sampel di atas terjadi
kesalahan, seharusnya secara teori albumin dapat diendapkan dengan penambahan
HCl + Etanol serta NaOH + Etanol. Namun, pada kenyataannya tidak ada endapan.
Hal ini dapat terjadi karena penambahan HCl + Etanol maupun NaOH + Etanol
kurang, sehingga masih belum mampu mendenaturasi protein yang ada pada albumin
secara sempurna & bisa juga dari kualitas albumin yang menurun karena
penyimpanan yang terlalu lama.
Pada uji pengendapan alkohol 2, pada kasein + (HCl & Etanol) ditemukan adanya
endapan lebih banyak (++). Pada kasein + (NaOH & Etanol) ditemukan adanya
endapan yang sedikit (+). Dan pada kasein + (Buffer Asetat & NaOH) ditemukan
endapan yang jelas dan sangat banyak (++). Jadi dapat diketahui, pada saat dilarutkan
dengan buffer asetat protein pada kasein yang mengendap jauh lebih banyak dari
kasein yang dilarutkan pada HCl dan NaOH. Hal ini dapat terjadi karena protein
berada pada titik isolistriknya.
1.4.Uji Bradford
a. Persiapan sampel
Pada saat uji bradford, sampel yang digunakan adalah serbuk kedelai. Setelah
dilakukan beberapa langkah kerja, didapatkan hasil absorbansi ( 595 nm) sebesar
0,431 dan -0,283. Hasil absorbansi ini merupakan hasil yang berarti kurang baik
karena pada absorbansi pertama (0,431) nilainya terlalu besar dan tidak berada pada
hasil absorbansi larutan standart (lihat tabel 3.2.) dan absorbansi kedua (-0,283)
nilainya minus sehingga tidak dapat digunakan untuk perhitungan kadar protein

sampel. Hasil absorbansi yang terlalu besar dapat berarti larutan tersebut masih
sangat pekat sehingga masih perlu dilakukan pengenceran kembali dan hasil
absorbansi yang terlalu kecil dapat berarti bahwa larutan sampel tersebut terlalu
encer (kedua hal ini merupakan ketidaktelitian praktikan dalam proses pengenceran.
b. Persiapan Kurva Standart
Selain mempersiapkan sampel, praktikan juga harus membuat larutan standart
dengan menggunakan BSA (Buffin Serum Albumin) pada konsentrasi tertentu.
Setelah melui beberapa langkah kerja, didapatkan hasil absorbansi sebagai berikut :

Eppendorf

Konsentrasi

Hasil Absorbansi

1
2
3
4
5
6

0
0,1
0,2
0,3
0,5
1

0
0,010
0,028
0,046
0,052
0,190

Hasil absorbansi ini merupakan hasil yang bagus karena dari konsentrasi rendah ke
konsentrasi tinggi mengalami kenaikan.
BAB V
PENUTUP
1.1.Kesimpulan
1. Protein merupakan suatu makromolekul yang sangat penting pada makhluk hidup
dan monomernya adalah asam amino
2. Adanya protein dalam suatu bahan/sampel dapat diketahui dengan menggunakan uji
millon dan uji biuret
3. Pengendapan protein oleh alkohol dapat terjadi karena alkohol merupakan pelarut
organik yang dapat menurunkan kelarutan protein, sedangkan HCl dan NaOH
merupakan asam kuat dan basa kuat yang dapat memutuskan jembatan garam pada
struktur tersier protein (sehingga terjadi denaturasi)

4.

Uji bradford (persiapan sampel & penyiapan kurva standart) merupakan uji
kuantitatif untuk mengetahui kadar protein dalam sampel