UNIVERSIDAD DE LAS FUERZAS ARMADAS ESPE

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA VIDA Y AGRICULTURACARRERA DE

INGENIERIA AGROPECUARIA I.A.S.A PROYECTO INTEGRADOR DE
MICROBIOLOGIA

Evaluacin del efecto de tres tratamientos sobre Colletotrichum

acutatum causante de la antracnosis del chocho (Lupinus
mutabilis).

Tercer Nivel A

Nombres: Gabriela Hinojosa A

Carla Moya A

I.

INTRODUCCION

El INIAP destaca que el chocho es una leguminosa de alto valor nutritivo, que se distingue
por su alto contenido de protena y por sus caractersticas agronmicas como: rusticidad,
capacidad de fijar nitrgeno atmosfrico al suelo y adaptabilidad a zonas agro ecolgicas
secas, ubicadas entre los 2 800 a 3 600 m de altura.

En el Ecuador existe un ndice elevado en cuanto a las perdidas por enfermedades

patgenas una de las cuales es la Antracnosis (Colletothrichum acutatum) que es una
enfermedad foliar que se presentan en la floracin o despus de esta etapa, es decir
cuando los surcos se han cerrado por el crecimiento vegetativo de las plantas, lo que
hace difcil las aspersiones para el control. Adems existen problemas en a la salud por
la aplicacin exposicin del agricultor a estos productos.

Actualmente se estn introduciendo mtodos de control biolgico los cuales tratan de

resolver este problema y proponer una solucin ms amigable para el hombre y la
naturaleza. Las actuales medidas de manejo de este hongo comprenden el
aprovechamiento de la distinta resistencia de cultivares, formas y manejo de los
cultivos, mtodos qumicos y de control biolgico, as como estrategias preventivas tales
como modelos de prediccin de las enfermedades.

As pues, el objetivo de este trabajo es presentar los conocimientos acta les sobre
distintos aspectos del control qumico y biolgico de C. acutatum para el control de
este hongo.

II.

PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

La antracnosis es una enfermedad de difcil control, causa efectos devastadores en la

produccin de varios cultivos especialmente en chocho. El mtodo utilizado generalmente
para controlar la antracnosis es mediante la aplicacin constante de fungicidas sintticos,
pero esto ha causado riesgos para la salud humana, perjudica al ambiente y adems
provoca cambios metablicos en la planta con disminucin de la resistencia a
enfermedades y plagas, siendo as un mtodo ineficaz y costoso. El mtodo que ser
utilizado para controlar la antracnosis en esta investigacin es mediante la aplicacin
constante con cepas de Trichoderma spp. y dos agroqumicos como Benomil y Captan.
Esta investigacin ayudara a determinar cul control es la ms efectivo para la eliminacin
de la antracnosis del chocho.

III.

OBJETIVOS

3.1. OBJETIVO GENERAL

Evaluar el efecto de tres tratamientos sobre Colletotrichum acutacum causante
de antracnosis en Lupinus mutabilis.

3.2.

OBJETIVOS ESPECIFICOS

Realizar un anlisis comparativo entre los tratamientos y su efectividad en la

antracnosis.

Establecer si la aplicacin de los mtodos de control biolgico o qumico utilizados

es el ms efectivo para eliminar esta enfermedad.

IV.

JUSTIFICACIN

El beneficio de obtener granos de chocho de buena calidad, es condicin prioritaria para el

productor, ya que puede beneficiarse econmicamente. En el campo y en la poca de post
cosecha se observa el efecto negativo de las especies del gnero Colletotrichum, este
patgeno ataca una gran variedad de cultivos tropicales y subtropicales (Rodrguez, 2007).
Cuando este patgeno afecta a los frutos, las estructuras reproductivas germinan sobre la
superficie, ingresan a las capas externas y provocan maceracin y muerte de los tejidos
adyacentes, lo que provoca prdida en la produccin por reduccin de la calidad y cantidad
de frutos a ser cosechados (Rodrguez, 2007).
El patgeno causante de la antracnosis conocido como Colletotrichum spp. tiene gran
variabilidad morfolgica, e inestabilidad en pruebas bioqumicas (Rodrguez, 2007). El slo
uso de estas pruebas no da resultados confiables. Debido a stas razones en la actualidad
se aplican tcnicas moleculares para estudiar el genoma de dicho patgeno y as identificar
especies de manera confiable (Rodrguez, 2007).
La caracterizacin gentica de las especies del gnero Colletotrichum que se asocian a la
antracnosis de cultivos de chocho contribuir con estudios para el mejoramiento gentico
en la bsqueda de variedades resistentes.
Mediante el uso de control qumico y biolgico se lograr un correcto diagnstico de
enfermedades relacionadas con Colletotrichum, esto permite desarrollar alternativas de
manejo apropiado de la enfermedad (Rodrguez, 2007), minimizando costos de produccin
y mejorando la calidad de los granos en el caso de chocho.

V.

REVISION DE LITERATURA

5.1.

El cultivo de chocho

El chocho, es una leguminosa muy conocida en nuestro pas, pero en la regio andina
se lo puede encontrar con otro nombre como es el de Tarwi, ( Garca, 1985). Tiene
relevancia en la gastronoma de esos pases desde la poca prehispnica. Su alto
contenido de protenas, mayor que el de la soja, lo hace una planta de inters para la
nutricin humana y animal. Segn los especialistas, su consumo en diversas
presentaciones (cremas, guisos, postres) ayuda a los nios en su crecimiento y
desarrollo cerebral, pues tiene calcio y aminocido. (Mc Cawley, 1985)

Taxonoma
Orden: Rosales (Fabales),
Suborden: Leguminosinae, Requeri Leguminosae (Fabaceae),
Subfamlia: Papilionatae (Faboideae) Papilionatae, Lotoideae,
Tribu: Genisteae,
Subtribu: Genistinae (Crotalarilinae),
Gnero: Lupinus,
Espcie: Eulupinus (Lupinus )mutabilis

5.2.

Colletotrichum acutatum

Agente causal de la antracnosis, ataca tejidos jvenes y viejos, fsicamente dbiles.

Existen algunos reportes de la patogenicidad de ste, en varias especies frutales

como tomate de rbol. Es uno de los hongos con mayor xito en su estrategia de
ataque a los vegetales, debido a que las estrategias fsicas y qumicas de defensa de las
plantas se presentan cuando la infeccin ha avanzado significativamente y el hongo
ha invadido las clulas casi en su totalidad, lo que demuestra la efectividad del
ataque fotoqumico del hongo que prcticamente pasa desapercibido por las
plantas. ste hongo se encuentra en la naturaleza en su estado asexual, presenta un
micelio

enramado

inmerso,

septado

de

color

blanco.

Clasificacin taxonmica

Reino: Fungi
Phylum: Ascomycota
Clase: Sordariomycetes
Subclase: Incertae sedis
Orden: Phyllachorales
Familia: Phyllachoraceae
Gnero: Colletotrichum
Especie: C.acutatum
Nombre Comn: Antracnosis, ojo de pollo.
Desarrollo de la enfermedad

5.3.

Desarrollo de la enfermedad

El proceso de infeccin de Colletotrichum involucra una secuencia comn de

eventos ademas germinacin, formacin del tubo germinativo, formacin del
apresorio, penetracin y colonizacin.

5.4.

Infeccin y Colonizacin de tejidos vegetales

Cuando las lesiones de Colletotrichum son examinados con microscopia electrnica, las
hifas se encuentran a travs de los tejidos, donde las clulas estn muertas y a
menudo descoloridas, presentndose la degradacin de la pared celular del
hospedero. Las hifas pueden presentarse por dentro de las clulas, dentro de la
pared celular y en espacios intercelulares, la gran cantidad de patgeno y de tejido
destruido es evidencia de la gran eficacia de este microorganismo. Pese a su
naturaleza destructiva, su xito como patgeno es casi exclusivamente determinado
por las formas en las cuales inicia la infeccin y coloniza los tejidos vegetales.

5.5.

Fuentes de inculo y Dispersin

La principal fuente de inculo son las esporas del hongo, que se encuentran en las
hojas, ramas, inflorescencias, flores y en los frutos, en trminos generales en todo el
rbol. Las esporas se localizan en acrvulos que se distribuyen en formaciones
concntricas bien diferenciadas, y estn cubiertas por una sustancia formada por
polisacridos y glicoprotenas, que las protegen de temperaturas extremas, la luz
ultravioleta y de los metabolitos txicos de las plantas. Los frutos pequeos
momificados son la fuente activa de inoculo dentro del rbol, ya que el parsito
sobrevive en ellos como saprfito. En invierno, la lluvia y la intensidad de sta,
producen la separacin y transporte de las esporas, diseminando el hongo a travs de
las gotas de agua en el mismo rbol y por salpique a otros rboles. En verano, el viento
se encarga de la dispersin de las esporas. Otro mecanismo de dispersin de las
esporas, son los insectos de los rdenes Dptera, Coleptera y Homptera, que
transportan las esporas adheridas a su cuerpo, mientras mantienen permanente
contacto entre frutos enfermos en el rbol y el suelo, hojas, flores y frutos sanos. Las
aves, los pequeos mamferos, las herramientas utilizadas en las labores agrcolas y la
circulacin de personas en el interior de los cultivos, se consideran medios de

dispersin secundarios (Vliz, 2005).

5.6.

Mtodos de control Control cultural

Se debe seleccionar una zona apta para el cultivo, evitando regiones que tengan
prolongados perodos de lluvia, alta humedad relativa y excesiva nubosidad, con
suelos adecuados, sanos y tratados para empezar la siembra. Incorporar materia
orgnica peridicamente, separada del tronco del rbol para evitar daos al
cuello, que faciliten la entrada de enfermedades y utilizar fertilizantes con altos
contenidos de fsforo y elementos menores, de acuerdo con los requerimientos
propios del cultivo.

El control de malezas debe realizrselo de manera que, la vegetacin alrededor de

los rboles se mantenga baja, para evitar ambientes de humedad permanente,
que favorecen

el

desarrollo

de

la

enfermedad.

Realizar

cuidadosos

monitoreos semanales para determinar la presencia de antracnosis en forma

oportuna, eliminarlos frutos afectados y recoger los frutos cados. Despus de
cada cosecha, se debedeterminar el nmero de frutos afectados, y si stos
superan el 4% del total, es necesario cambiar las estrategias de control. ( Viera,
W. 2002)

5.7.

Control biolgico

Definido como como la reduccin de un patgeno o de su capacidad para producir

la enfermedad, por la accin de uno o ms microorganismo. Los mtodos de
control biolgico para la antracnosis tienen ahora gran importancia, debido
al uso indiscriminado de productos qumicos que han causado serios problemas en
el entorno Los gneros Bacillus, Pseudomonas

Trchoderma

han

sido

involucrados en los estudios de control biolgico frente a C.acutatum. Se

recomienda la aplicacin de Trichoderma lignorum y T. viridae en dosis de tres
gramos de producto comercial por bomba de 20 litros. ( Katzung, 2005)

5.8.

Control qumico

Es necesario el uso de fungicidas, con un manejo estricto y cuidadoso,

especialmente en las pocas de mayor floracin y cuajamiento de frutos, que son
las etapas de mayor susceptibilidad. Se deben utilizar equipos de bajo volumen,
buscando una mejor cobertura, una mayor eficiencia del producto y disminuir el
uso excesivo de agua. La aplicacin de los fungicidas debe realizarse despus de las
podas sanitarias y de la cosecha, donde se recogen tambin los frutos enfermos.

5.9.

Resistencia

As como la variacin del patgeno se expresa como virulencia, la del hospedero se

expresa como resistencia. La diferente reaccin de las plantas a un patgeno es un
fenmeno universal. La caracterstica ms decisiva en la separacin de grupos dentro de
una especie es la resistencia a enfermedades, misma que se considera como una
habilidad de la planta para reducir el crecimiento y/o desarrollo del parsito luego de
haber establecido contacto. La resistencia es medida, comparando la cantidad de
patgeno por planta con la cantidad en una planta susceptible (menos resistente).
Benomil
Accin fitosanitaria: Fungicida sistmico, de aplicacin foliar, con accin preventiva y
curativa para combatir una amplia gama de enfermedades en cultivos de ciclo corto y
perenne. Es un polvo mojable que viene formulado especialmente para dispersin en
aceite agrcola para el control de Sigatoka negra en banano. En agua para aplicacin en
otros cultivos.
El producto utilizado fue PILAR-BEN O.D. que tiene una formulacin y concentracin
Dispersable en aceite o agua que contiene 500 g de ingrediente activo por kg de
producto comercial.
Captan
Accin fitosanitaria: captan es un fungicida protectante y erradicante que combate
diversas enfermedades causadas por hongos habitantes del suelo y foliares. Se obtiene
un efectivo con-trol cuando se aplica a niveles bajos de infeccin. Puede ser aplicado en

campo abierto y en cultivos bajo invernadero; como desinfectante del suelo, semilleros,
viveros y en forma foliar para la prevencin del complejo de enfermedades indicadas.
El producto utilizado fue captan 80 que tiene una formulacin y concentracin::
Grnulos dispersarles en Agua, que contiene 800 g de i.a por kg de producto
comercial.(Edifarm,2012)

VI.

MATERIALES Y METODOS

6.1.

Ubicacin Geogrfica

La investigacin se llev a cabo en la Hacienda el Prado- I.A.S.A. en los invernaderos del

rea de Fitopatologa.

Longitud: 7824`44`` O

Latitud: 023`20`` S

Altitud: 2721 m s.n.m.

Figura 1. Localizacin geogrfica de la Hacienda el Prado (IASA). Fuente: Google earth, 2014.

MATERIALES Y METODOLOGIA
6.2.

MATERIALES
Muestra de material vegetal de chocho infectado
Guantes quirrgicos
Agua
Cotonetes o hisopos
Autoclave
Balanza electrnica
Mechero
Cajas Petri
Aza de inoculacin
Matraz
Parafilm
Agar P.D.A
Varilla de inoculacin
Cmara de flujo laminar
Incubadora

6.3.

AGROQUIMICOS
Benomil
Captan

6.4.

MUESTRA BIOLOGICA
Trichoderma spp.

6.5.

Recoleccin de la muestra

La antracnosis se aisl a partir de las hojas contaminadas del hogo Collecutricum sp del
Lupinuss Mutabilis que se encuentra en Facultad de Ingeniera en Ciencias Agropecuarias
IASA.
Se us fundas plsticas para trasladar la muestra del invernadero
microbiologa, para luego proceder a sembrar la muestra.
6.6.

al laboratorio de

Medio de cultivo ( anexos I)

Para la preparacin del medio seguimos los siguientes pasos:

1. Se midi 20 g. de PDA en una balanza analtica para disolverlos en 500ml de agua
destilada.
2. Fue colocado en un matraz la solucin para poder mezclar y obtener un producto
homogneo.
3. Llevamos al mechero hasta tener una solucin completamente lquida, ya que la
temperatura hace que la solucin no sea gelatinosa.
4. Colocamos la mezcla en el frasco de vidrio de 500 ml, y llevar al auto clave por dos
horas.
5. Luego dispensamos en las cajas Petri.

6.7.

Siembra de la muestra en el medio p.d.a (anexos II)

Se procede de la siguiente manera.

1. Se esteriliz con

alcohol los materiales y la cmara de flujo laminar.

2. Se cort una muestra pequea de hoja que este afectada con el hongo
Colletutrichum.
3. Con la ayuda de la asa de inoculacin se procedi a colocarla la muestra tomada en
el medio de cultivo P.D.A.
4. Se sell con parafilm y de nuevo volvieron a la incubadora, para que crezca el
Colletutrichum.

6.8.

Siembra del Trichoderma spp. (anexos III)

Se procede de la siguiente manera.

1. Se esteriliz con alcohol los materiales y la cmara de flujo laminar.
2. Se frot el asa de inoculacin en el cultivo de Trichoderma spp. y se lo siembra en
el cultivo de PDA.
3. Se sell con parafilm y de nuevo volvieron a la incubadora ,para que crezca el
Trichoderma spp.

Elaboracin de los sensi-discos ( anexos IV)

1. En primer lugar los sensi-discos previos a su uso deben estar completamente

esterilizados y a partir de este proceso se los va colocando en cada una de las cajas
petri que contienen los tratamientos preparados.
2. Se coloc cada uno de los antibiticos a ser analizados en diferentes lugares de la
caja petri, en nuestro caso usamos 2 antibiticos captan, benomil y Trichoderma
spp.
3. Cuando se tiene el antibitico de forma slida se procede a diluirlos en agua
destilada como sucedi con el captan, binomil. Los cuales necesitaron ser disuelta
en agua destilada de 50 ml para su uso
4. Los sensi-discos deben ser completamente mojados para lo cual se coloc los sensidiscos en la caja petri correspondiente a cada antibitico y se los dejo junto con el
antibitico durante 3 minutos.
5. Una vez empapados se procedi a colocarlos en la caja petri en diferentes lugares.
6. Una vez colocados los sensi-discos en las cajas petri se las sello con parafilm y de
nuevo volvieron a la incubadora por 3 das para luego diagnosticar cual es el
tratamiento
ms
efectivo.

VII.

ANALISIS
7.1.

Respuesta frente al uso de los 3 antibioticos

Despus de 3 das en incubacin es tomada la caja petri para la lectura del antibiograma
para lo cual se las lleva a contra luz para observar los halos de inhibicin y segn sea el
efecto del captan, benomil y el tricoderma spp. y se va determinando su efectividad con
dos categoras que son sensible o resistente.
De acuerdo a lo mencionado anteriormente se dictamino que el Collecutricum sp son
sensibles al Tricoderma spp en menor grado y en mayor grado al antibitico Benomil.

VIII.

RECOMENDACIONES

Realizar la investigacin a campo abierto y en plantas adultas para verificar el

nivel de resistencia.

Es necesario que el Agricultor se informe adecuadamente acerca de la

antracnosis y su agente causal. El agricultor debe pedir ayuda a expertos para
que puedan determinar molecularmente la especie del patgeno que ataca a sus
cultivos, para que pueda controlar la plaga usando el agroqumico adecuado.
Que el cultivo en la incubadora este a la temperatura y humedad ptimas para
su crecimiento y multiplicacin.

IX.

La

RESUMEN

antracnosis

en

el

Ecuador

ha

causado

varias

prdidas

econmicas

especialmente a nivel post cosecha, razn por la cual se realiz el presente trabajo, que
tiene como objetivo la caracterizacin morfolgica, patolgica y molecular de
Colletotrichum spp. Aislado de

L. mutabilis.

Actualmente se estn introduciendo mtodos de control biolgico los cuales tratan de

resolver este problema y proponer una solucin ms amigable para el hombre y la
naturaleza. Las actuales medidas de manejo de este hongo comprenden el
aprovechamiento de la distinta resistencia de cultivares, formas y manejo de los
cultivos, mtodos qumicos y de control biolgico, as como estrategias preventivas tales
como modelos de prediccin de las enfermedades.

As pues, el objetivo de este trabajo es presentar los conocimientos acta les sobre
distintos aspectos del control qumico y biolgico de C. acutatum para el control de
este hongo.

X.

BIBLIOGRAFA

Rodrguez, A. 2007. (en lnea). Caracterizacin molecular de poblaciones de Colletotrichum spp.

Asociadas a Coffea arabica en Colombia y su aplicacin en el diagnstico del CBD. Bogot.
Pontificia Universidad Javeriana. Consultado el 17 de septiembre del 2010. Disponible en:
http://www.uach.cl/facultad/agrarias/instituto/prod_sanidad_vegetal/Lab_Bio_Mol/Tesis
Colletotrichum.htm.
Mc Cawley, E. 1985. Cardioactive Alkaloids. The alkaloids, chemistry and physiology. New York:
Academic Press. pp. 85 88
Vliz, F. 2005. Caracterizacin molecular de aislamientos de Colletotrichum sp. causante
de antracnosis en lupino (Lupinus sp. L) mediante marcadores ITS-RFLPs y RAPDs.
Universidad Austral De Chile Facultad De Ciencias Agrarias Escuela De agronoma,
Valdivia, Chile.

Katzung, B. G. 2005. Farmacologa Bsica y Clnica. 9a.ed. Mxico: Manual

Moderno. pp. 64-68

XI.

ANEXOS

Anexos I

Anexos II

Anexos III

Anexos IV

XIII. INDICE DE CONTENIDOS

Tabla de contenido
I.

INTRODUCCION ............................................................................................................................... 1

II.

PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA ................................................................................................. 3

III.

OBJETIVOS 3.1. GENERAL ..................................................................................................... 3

3.2.

OBJETIVOS ESPECIFICOS ......................................................................................................... 3

IV.

JUSTIFICACIN ............................................................................................................................ 4

V.

REVISION DE LITERATURA .............................................................................................................. 5

5.1.

El cultivo de chocho ................................................................................................................ 5

5.2.

Descripcin botnica de Lupinus mutabilis .......................... Error! Bookmark not defined.

5.3.

Composicin qumica y valor nutricional del chocho .......... Error! Bookmark not defined.

5.4.

Colletotrichum acutatum ...................................................................................................... 5

5.5.

Desarrollo de la enfermedad ................................................................................................ 6

5.6.

Infeccin y Colonizacin de tejidos vegetales..................................................................... 7

5.7.

Fuentes de inculo y Dispersin ........................................................................................... 7

5.8.

Mtodos de control Control cultural ................................................................................... 8

5.9.

Control biolgico.......................................................................................................................... 8

5.10.

Control qumico.................................................................................................................. 9

5.11.

Resistencia ........................................................................................................................... 9

VI.

MATERIALES Y METODOS ......................................................................................................... 10

6.1.

Ubicacin Geogrfica ........................................................................................................... 10

6.2.

Ubicacin Poltica .................................................................... Error! Bookmark not defined.

6.3.

MATERIALES .......................................................................................................................... 11

6.4.

REACTIVOS ............................................................................... Error! Bookmark not defined.

6.5.

Recoleccin de la muestra .................................................................................................... 12

6.6.

Medio de cultivo ................................................................................................................... 12

6.7.

Siembra de la muestra en el medio p.d.a ............................................................................ 12

6.8.

Siembra del Trichoderma spp. .............................................................................................. 13

6.9.

Categorias de respuesta frente al uso de los 3 antibioticos ................................................ 14

VII.

ANALISIS DE RESULTADOS ....................................................... Error! Bookmark not defined.

VIII.

CONCLUSIONES ............................................................................ Error! Bookmark not defined.

IX.

RECOMENDACIONES ................................................................................................................. 15

X.

RESUMEN ...................................................................................................................................... 16

XI.

BIBLIOGRAFA ............................................................................................................................ 17

XII.

ANEXOS ..................................................................................................................................... 18

Fig. 8 y 9 medio de cultivo ........................................................................ Error! Bookmark not defined.

XIII. INDICE DE CONTENIDOS ................................................................................................................. 20