PRACTICA N 6

ESTUDIO DE POLLMORFISMOS
ANLISIS DEL GRUPO SANGUNEO

Objetivo:
El objetivo del anlisis del grupo sanguneo es analizar un polimorfismo evidente fenotpicamente, como
es el de los grupos sanguneos. Se pretende dar a conocer la base gentica de los grupos sanguneos
ms importantes. Se determinarn los grupos sanguneos de cada alumno mediante la extraccin de unas
gotas de sangre por puncin del cuarto dedo de una mano con una lanceta estril.
Introduccin:
Los polimorfismos son el reflejo de la diversidad gentica de la especie. Se dice que existe un
polimorfismo en un determinado locus cuando hay ms de un alelo presente en la poblacin con una
frecuencia superior al 1%. Aunque un individuo slo puede presentar como mximo dos alelos distintos
para un locus, un estudio poblacional puede revelar la presencia de mltiples alelos para ese locus,
especialmente en ciertos loci que son altamente polimrficos. Una pequea proporcin de los
polimorfismos en el ADN dar lugar a diferencias a nivel de los aminocidos codificados, produciendo por
tanto un polimorfismo de protenas. Pero la mayora de los polimorfismos en las secuencias de ADN
ocurren en ADN no codificante, y no tienen por tanto efecto fenotpico (se denominan silenciosos). La
causa de que la mayor parte de polimorfismos sean silenciosos es, por una parte, que la gran mayora del
genoma humano consiste en ADN no codificante; y por otra, que este ADN est sometido a menores
presiones selectivas.
En esta prctica abordaremos el estudio de polimorfismos humanos de dos maneras muy distintas.
En primer lugar se estudiar el polimorfismo del locus ASO que determina el grupo sanguneo.
Puesto que es ste un polimorfismo fenotpico, y adems la penetrancia es del 100%, el anlisis se har
directamente sobre el producto gnico
.
Materiales:
Sangre de los individuos.
Metodologia:
Sistema ASO
La determinacin de grupos del sistema ASO se efecta enfrentando los hemates problema con
antisueros de especificidad conocida: anti-A,' anti-S y anti A, S (grupo O). Lq aglutinacin o no
aglutinacin de los hemates ensayados frente a cada uno de los antisueros es indicativa de la presencia
o ausencia de los correspondientes antgenos en los mismos.
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Dividir una porta en cuadrados. Rotular las divisiones: anti-A, anti-S yanti-AS.
Con una lanceta estril realizar una puncin en el cuarto dedo de una mano.
Depositar en cada cuadrado una gota muy pequea de la sangre a ensayar.
Aadir 1 gota de cada antisuero en su respectivo cuadrado.
Mezclar bien la sangre con el reactivo empleando palillos distintos para cada ensayo.
Mover la placa lentamente por rotacin a temperatura ambiente. Examinar macroscpicamente la
aparicin de aglutinacin a los 2 minutos.

Sistema Rh (anti-D)
La presencia del antgeno D se determina enfrentando los hemates problema, en un, medio proteico alto,
con suero anti-D. La aglutinacin o no aglutinacin de los hemates ensayados es indicativa de la
presencia o ausencia del correspondiente antgeno en los mismos.
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Depositar una gota de suero anti-D sobre un porta rotulado.

Sobre otro porta depositar una gota de Autocontrol Rh.
Aadir a cada porta 2 gotas de sangre de un tamao aproximado a la gota de suero en l
depositada.
Con palillos distintos mezclar reactivo y sangre de forma que cubran una extensin de unos 2 cm
cuadrados.
Colocar las portas sobre la lmpara visualizadora precalentada (45 ).
Mover la lmpara lentamente con movimientos pendulares durante 2 minutos, observando
macroscpicamente la aparicin de cualquier signo de aglutinacin.

Lectura
Reaccin negativa: ausencia de aglutinacin al cabo de los 2 minutos.
Reaccin positiva: aglutinacin visible a los dos minutos y ausencia de aglutinacin con el autocontrol.
La reaccin positiva indicar cul es el antgeno presente en los eritrocitos (por ej. Si sale aglutinacin en
la casilla "A" el grupo sanguneo ser A). Si los hemates presentasen aglutinacin en el Autocontrol, dar
el resultado como no vlido.
Cuestionario:
1. Anotar los resultados obtenidos y deducir el genotipo genotipos posibles.

Este tipo de sangre es de Tipo O Factor Rh Positivo

2.

Por qu se tiene en cuenta el grupo sanguneo de las series ASO y Rh en las

transfusiones y no la serie MN?
Los antgenos A y B son los ms inmunognicos. En forma natural y espontnea se generan
anticuerpos antieritrocitarios anti A o anti B que son del tipo IgM. La transfusin de glbulos rojos
con incompatibilidad de grupo ABO genera reacciones hemolticas graves que pueden ser fatales
pues la IgM produce hemlisis intravascular y genera coagulacin intravascular diseminada e
insuficiencia renal aguda.En raras ocasiones la incompatibilidad de grupo puede producir
enfermedad hemoltica del recin nacido (EHRN) cuando se forman anticuerpos del tipo IgG que
atraviesan la barrera placentaria.
Rh: la mayora de estos anticuerpos son del tipo IgG y se adquieren despus de un contacto
transfusional previo o por embarazo. Pueden causar reacciones hemolticas significativas, as
como EHRN. El anti D, que es del tipo IgG, lleva a la forma ms grave de EHRN. Anti c y anti e
son tambin causas frecuentes de EHRN as como de reacciones hemolticas tardas. Anti C
puede producir hemlisis y hemoglobinuria. MNSs: el anticuerpo anti M en general no causa
reacciones transfusionales a menos que sea reactivo a la temperatura corporal. El anti N se
considera de poca significancia clnica. El anti En (a) produce reacciones hemoltcas graves pero
es muy raro. Tanto anti S como anti s pueden provocar reacciones hemolticas transfusionales, la
mayora de ellas entre leves y moderadas. Son del tipo IgG por lo que pueden atravesar la
placenta y causar EHRN. El anti U puede producir reacciones hemolticas graves y EHRN.

3.

Por qu el antgeno O define bsicamente al grupo Rh?

El locus RH, localizado en cromosoma 1 p34-36, est constituido por 2 genes adyacentes
altamente homlogos: el gen RHD y el gen RHCE. El primero codifica para el polipptido D
donde se localiza el antgeno Rh(D), y el gen RHCE codifica para los polipptidos donde se
localizan los antgenos C/c y E/e, respectivamente. Ambos genes estn presentes en los
individuos Rh (D) positivo (el 85% de la poblacin), mientras que nicamente el gen RHCE se
encuentra en los Rh (D) negativo. Estudios recientes parecen indicar que los alelos RHD con
expresin dbil (D dbil y D parcial) presentan diferentes tipos de mutaciones en la secuencia
codificante del polipptido D que alteran la expresin final del correspondiente antgeno.

4.

Por qu el anlisis de los grupos sanguneos slo sirve en algunos casos para excluir la
paternidad y no para asignarla?
Esto se debe a que si el padre tiene grupo B y la madre grupo 0 el hijo de esta pareja nunca
puede ser A, entonces se dice que el hombre no es el padre (si es este el que realiza el pedido) ,
pero no se puede decir en un caso por ejemplo la madre A y el padre B sale hijo AB no se puede
decir el hombre es el padre porque puede haber un tercero en discordia que puede ser grupo AB
y ser compatible con el grupo del nio en cuestin

5.

En qu casos la eritroblastosis fetal puede manifestarse en el primer embarazo

asumiendo incompatibilidad Rh?
La enfermedad hemoltica perinatal (EHPN) es una afeccin inmunolgica aloinmune contra
antgenos de origen paterno presentes en los hemates fetales y del recin nacido. Se han
reportado numerosos aloanticuerpos dirigidos contra antgenos eritrocitarios como causa de la
EHPN, ms frecuentemente los del sistema ABO y Rh. La EHPN por el sistema Rh (EHPN-Rh)
suele ser severa, en particular por el antgeno D. Es muy comn encontrar el anti-D asociado con
otros anticuerpos Rh (C, E, de ttulo menor). El anticuerpo anti-c por s solo puede producir
EHPN severa. Los avances en la prevencin de la inmunizacin por el antgeno D han
disminuido la incidencia de esta enfermedad. La EHPN por ABO (EHPN-ABO) ha sido siempre
ms frecuente, pero su relacin con muerte fetal o neonatal es menor que la de la EHPN-Rh. En
este tipo de EHPN los anticuerpos estn preformados. Las subclases de IgG, predominantes en
esta enfermedad son las IgG1 y las IgG3. A la luz de los conocimientos actuales, el diagnstico
de esta enfermedad puede efectuarse precozmente, es posible incluso hacerlo antes del
nacimiento e indicar la transfusin fetal intrauterina como mtodo de salvamento de los fetos con
hematcritos (Hto) menores o iguales al 30 %. En los recin nacidos se emplean la fototerapia y
la exanguinotransfusin para disminuir los niveles sricos de bilirrubina producida por la
hemlisis y evitar el kernctero. Siempre que se sospeche la enfermedad deber actuarse con
rapidez y precisar los anticuerpos involucrados, para de esta forma disminuir su incidencia y
morbimortalidad.