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OBJETIVO

El objetivo de esta prctica es conocer el modo en que un tejido se procesa y se le hace


inclusin con tal de que pueda estar listo para ser estudiado histolgicamente. Adems la
orientacin espacial con la que deben ser tratados.
INTRODUCCION
Nuestro fin es preparar un muy fino corte de tejido para colocar arriba de un portaobjetos y
observarla en un microscopio ptico. Debe ser una fina capa de tejido para que la luz del
microscopio la atraviese y observemos bien los detalles. Antes de seccionar el tejido el mismo
debe ser incluido en un medio rgido que me permita hacer secciones muy finas (5 a 15 m).
El medio de inclusin utilizado en forma rutinaria es la parafina, debemos hacer que la
parafina se introduzca dentro de la muestra fijada, pero la muestra hasta ahora se halla en el
fijador acuoso y la parafina no es soluble en agua, por lo tanto la muestra fijada debe ser
deshidratada.
Despus de la fijacin la muestra es colocada sucesivamente en concentraciones crecientes de
alcohol. Luego de la deshidratacin total en alcohol 100%, el siguiente paso es la aclaracin o
diafanizacin.
Lamentablemente la parafina no es soluble en el alcohol 100% y por lo tanto se utiliza una
sustancia intermedia (soluble en alcohol 100% y en parafina). Antes de incluir la muestra en
parafina se extrae el alcohol 100% mediante el uso de xilol.
Una vez que la muestra ha sido totalmente embebida por el xilol (aclaramiento) se transfiere a
un bao de parafina derretida dentro de una estufa. La estufa es mantenida a 58 grados
centgrados (el punto de fusin de la parafina es 56-57 grados) y la muestra es transferida a
travs de tres baos sucesivos de parafina. De esta forma la parafina caliente desplaza al xilol y
difunde dentro de la muestra o tejido. A este paso se lo denomina inclusin en parafina
Luego de la inclusin en parafina se saca la muestra y se la coloca en un molde metlico donde
se orienta la muestra antes de que se enfre la parafina
Ahora que ya tenemos la muestra incluida en un medio rgido que nos permitir realizar cortes
o secciones sumamente delgados. El siguiente paso de la tcnica histolgica es la seccin en
microtomo
PREGUNTAS DE EXAMEN
*Cual es el propsito de la inclusin?
Ubicar en un medio suficientemente rgido que permita hacer secciones muy finas
*Que medio de inclusin hay para microscopia ptica y microscopia electrnica?
Microscopia ptica:
-Parafina: Es el proceso que se utiliza habitualmente
-Metacrilato: Para estudio de biopsias seas no descalificadas.
-Celoidina

-Congelacin en un medio gelatinoso: El tejido en fresco es congelado a temperaturas entre 20 a -40.


Microscopa electrnica: Resinas polimerizadas, principalmente de tipo acrclicas o epoxy.
*Que es la parafina?
Las parafinas son mezclas de hidrocarburos saturados de cadena que oscilan entre 22 y 28
tomos de carbono. El punto de fusin depende del nmero de tomos de carbono y se
encuentra entre 46 y 60. Las mezclas de parafinas comerciales tienen un punto de fusin entre
54 y 56C.
*En qu consiste la deshidratacin?
En el desplazamiento del contenido de agua en un tejido por las sucesivas difusiones de
alcohol en orden creciente de concentracin.
*Mencione 2 agentes deshidratantes
Alcohol etlico y acetona
*Es necesaria siempre la deshidratacin de la muestra en el procesamiento de los tejidos
tanto para microscopia ptica como para electrnica? justifique su respuesta
S, porque el medio de inclusin en ambos casos es hidrfobo y podr penetrar
adecuadamente en ausencia de agua
*En qu consiste el aclarado de las muestras?
En el desplazamiento del alcohol etlico contenido en la muestra por xilol. Este compuesto
altera el ndice de refraccin de la muestra y la torna ligeramente translcida. Debido a este
hecho este paso de la tcnica histolgica se denomina aclaramiento.
CONCLUSION
Es importante entender y conocer como se lleva a cabo el procesamiento de tejidos desde la
fijacin hasta la inclusin, tanto de manera terica como experimental, porque es parte
fundamental para desempear bien la profesin tanto en el campo laboral como en el rea de
investigacin. En un trabajo de investigacin de ciencias qumico-biolgicas es bsico saber
cmo tratar un tejido para su posterior observacin in vitro.

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