DETECCION ANTIBACTERIANA DE NANOPARTICULAS DE PLATA

SINTETIZADAS POR MICROALGAS MARINAS

RESUMEN
Objetivo: Explorar la biosntesis de nanparticulas de plata sintetizadas por
microalgas marinas. Metodo: las microalgas marinas fueron recolectadas desde el
CMFRI y cultivadas en el laboratorio. La sntesis de nanopartculas de plata fueron
observadas en microalgas normales e irradiadas por microondas y protegidas contra
patgenos humanos de la presencia antimicrobiana. Resultados: la presencia de
nanoparticulas fue confirmada por espectroscopia UVV a 420 nanometros por la
presencia de picos de plasmones. Adems fue confirmada por escaneo microscpico
de electrones (SEM). Conclusion: Estos resultados no solo proveen una base para
futuras investigaciones pero son tiles para el desarrollo de frmacos en el presente y
futuro.

INTRODUCCION
La nanotecnologa ofrece la posibilidad de disear las propiedades de los materiales
mediante el control de su tamao, y sta ha impulsado la investigacin hacia una
multitud de usos potenciales para nano materiales. Nanopartculas metlicas
presentan inusuales propiedades pticas, trmicas, qumicos y fsicas. La dimensin
de la reduccin de los materiales tiene efectos pronunciados en las propiedades
fsicas que pueden ser significativamente diferentes desde el material a granel
correspondiente.
Parte de las propiedades fsicas exhibidas por los nano materiales se deben a la
superficie atmica, la energa superficial, confinacin espacial, y las imperfecciones
reducidas.
Hoy en da, los cientficos tratan de alcanzar una amplia gama de posibles
aplicaciones de las nanotecnologas disponible y procesos de manufactura amigables
con el medio ambiente que reducen los productos de desecho, conduciendo en ltima
instancia la precisa manufactura molecular atmicamente con cero residuos.
El uso de nano materiales como catalizadores para una mayor eficiencia en los
procesos de fabricacin actuales para minimizar o eliminar el uso de materiales
txicos, el uso de nano materiales y nano dispositivos para reducir la contaminacin
(por ejemplo, filtros de agua y aire) y el uso de nano materiales
para la produccin de energa alternativa ms eficiente, son algunos ejemplos para la
aplicacin de las nano partculas.
Desafortunadamente hay otra cara para estos beneficios. Como experimentos
cientficos con el desarrollo de nuevos mtodos qumicos o fsicos para producir nano
materiales, la preocupacin por un impacto negativo en el ambiente tambin es
mayor.

Algunos procedimientos qumicos correspondientes a la sntesis de nano materiales,

usan solventes txicos que pueden generar subproductos potencialmente peligrosos y
siempre envuelven altos consumos energticos, y sin mencionar los problema sin
resolver de la toxicidad potencial de ciertos nano materiales. Esto est guiando a una
conciencia creciente de la necesidad de desarrollar procedimientos limpios, no
txicos y amigables para el medio ambiente para la sntesis y elaboracin de nano
partculas. Mucho inters ha sido creado por el trmino nanotecnologa verde con la
floreciente demanda de procesos de sntesis de nano partculas verdes. El campo de
la sntesis de nano partculas ha desarrollado recientemente nuevas rutas. Mtodos
biosintticos empleados, ya sea por microorganismos biolgicos o extraccin de
plantas han surgido como una alternativa simple y viable para procedimientos de
sntesis qumicos y mtodos fsicos. Aunque esto es conocido como microorganismos
tales como bacterias, levaduras y ahora fung, juegan un papel importante en la
remediacin de metales txicos a travs de la reduccin de iones metlicos, se haba
considerado interesante como nano industrias recientemente.
Esto ha sido conocido por mucho tiempo naturalmente como una variedad de nano
materiales que son sintetizados por procesos biolgicos. Por ejemplo, la tctica de
bacterias de magneto de sintetizar magnetita intracelular o nano cristales de greigita,
los otros ejemplos son diatomas, como sntesis de materiales silceos y bacterias capa
S que producen capas carbonadas de yeso y calcio. Estos resultados mostraron que
los microorganismos pueden ser usados sin duda para la sntesis de nano partculas.
Aqu en este artculo, una sntesis aproximada es rpida, simple y verde para la
sntesis de partculas metlicas, nano estructuras de metales nobles como la plata,
para usando una combinacin de cultivos de algas y radiacin microondas en agua en
ausencia de un surfactante o una plantilla ligera son descritos. Este trabajo ayudar a
encaminar investigaciones para las cuales ms valor de los productos aadidos puede
ser obtenido de las algas Chaetoceros calcitrans, Chlorella salina, isochrysis y
tetraselmis gracilis.
2. MATERIALES Y METODOS
2.1. Cultivo de microalgas marinas.
Las especies Chaetoceros calcitrans, Chlorella salina, isochrysis y tetraselmis gracilis,
fueron recolectadas en el CMFRI. El almacenado fue mantenido en Walnes Media.
El crecimiento de cada alga fue estudiado para medir sus valores de absorbancia para
su respectiva longitud de onda mxima. La fase exponencial de las clulas de algas
fueron observadas durante los primeros 15 das.
2.2 Sntesis de nano partculas de plata.
La sntesis de nano partculas de plata de las microalgas marinas fue llevada a cabo
por dos mtodos nombrados como micro algas marinas normales y radiacin
microondas. Para esto, la media de los cultivos de algas de la fase exponencial de este
crecimiento fue recolectada aunque los experimentos fueron llevados a cabo en seis
mtodos. Para todos los mtodos de control de experimentos fueron conducidos a la
revisin del papel del alga en la produccin de nano partculas de plata.

2.2.1 Sntesis de nano partculas de platas por micro algas normal

Hubo tres mtodos usados para la sntesis de nano partculas de plata por micro algas
marinas normales. En el primer mtodo, el alga fue cultivada con una solucin de 1
mM de AgNO3 y despus fue mantenido en una incubadora vibratorio por dos
semanas. En el segundo mtodos el cultivo de algas fue llevado a la media de la fase
exponencial y sometido a centrifugacin a los 5000 rpm por 5 min. La solucin de
nitrato de plata fue adicionada a ambos: pellets y sobrenadante. En el tercer mtodo,
las clulas fueron sometidas a ultrasonificacin y despus centrifugadas. Otra vez una
solucin de 1 mM de AgNO3 fue aadida y mantenida en un incubadora vibratorio
por dos semanas.
2.2.2 Sntesis de nano partculas de plata por microondas irradiadas por microalgas
marinas.
En este mtodo, el cultivo de algas fueron recolectadas a mitad de la fase de
crecimiento y sometida a radiacin por microondas de 5 a 15 segundos durante 5
veces. Adems los experimentos fueron llevados a cabo como se describen
anteriormente.
2.3 Prueba de sensibilidad antimicrobiana.
La prueba de sensibilidad antimicrobiana fue hecha para detectar si las nanopartculas
de plata tienen algn carcter antagnico contra patgenos como la Escherichia coli,
Klebsiella sp, Proteus sp y Pseudomonas sp, usando agar de Muller Hinton e
incubadas a 37 C por 24 horas.
3. RESULTADOS
La fase estacionaria de la clula de algas fue observada despus de 15 das de
crecimiento y despus empez a decrecer. (Figura 1. Curva de crecimiento del alga).

3.1. Sntesis de nanopartculas de plata

La aparicin de un color negro parduzco en la solucin sugiri la formacin de
nanopartculas con picos de resonancia de plasmones a 420 nanmetros. Por lo tanto,
fue evidente que metabolitos excretados por el cultivo expuesto a la plata puedo
reducir iones de plata, indicando claramente que la reduccin de los iones ocurre a
travs del traslado de electrones o a travs de agentes reductores relacionados en la
solucin del cultivo de algas. Estas reacciones solo ocurrieron en la luz y las
nanopartculas no fueron producidas en la oscuridad. Por otro lado, la reduccin de
iones de plata no ocurri en ausencia de clulas de algas. La resonancia de plasmones
observada a 420 nanmetros para nanopartculas de plata producidas por normal e
irradiacin microonda por microalgas marinas mostradas en la figura 2 (Figura 2.
Espectros UVV registrados por la presencia de solucin acuosa de AgNO3).

El cambio de color en el cultivo de algas debido a las nanopartculas de plata

producidas es escaneada por un microscopio electrnico (Figura 3. Imagen SEM de
nanopartculas producidas por microalgas marinas).

3.2. Prueba de sensibilidad antimicrobiana.

Los patgenos humanos Klebsiella sps, Proteus vulgaricus y Pseudomonas aeujinosa
fueron revisados con algas normales para buscar la presencia de actividad
antimicrobiana. Las nanopartculas de plata producidas por C. Calcitrans mostraron
inhibicin contra Klebsiella sps, Proteus vulgaricus, Pseudomonas aeujinosa y contra
E. coli. Las nanopartculas de plata producidas por C. salina, I. galbana y T. gracilis
tambin mostraron mejor zona de inhibicin contra Klebsiella sps, Proteus
vulgaricus, Pseudomonas aeujinosa y contra E. coli. (Figura 4. Actividad
Antimicrobiana de nanopartculas de plata producida por microalgas contra
patgenos).

4. DISCUSIN
La sntesis de nanopartculas est en el centro de atencin en la nanotecnologa
moderna. El desarrollo de procesos experimentales biolgicos inspirados para la
sntesis de nanopartculas est evolucionando hacia una rama importante de la
nanotecnologa. En el presente estudio, 4 cepas de microalgas fueron aisladas y
visualizadas para la sntesis de nanopartculas. Sobre adicin de iones Ag+ en cultivos
libres de clulas en la oscuridad, las muestras cambiaron de color casi incoloras a
marrn oscuro con intensidad creciente durante el perodo de incubacin. Esto no
mostr cambios en el color de las clulas filtradas cuando incubaron a la misma
condicin. La aparicin de un marrn amarillento en la solucin fue una clara
indicacin de formacin de nanopartculas de plata en la mezcla de reaccin. Una
superficie caracterstica de pico de absorcin de plasmones a 420 nanmetros fue
observada las 24 horas que alcanz la intensidad mxima despus de 72 horas. Las
bandas de plasmones son amplias con una cola de absorcin en la mayor longitud de
onda, lo cual puede ser en principio debido al tamao de distribucin de las
partculas. La estabilidad de las nanopartculas de plata sintetizadas medidas a una

intensidad de 420 nanmetros sobre un perodo de un mes a temperatura ambiente.

Cambios insignificantes en la intensidad fueron observados probando estabilidad
sobre un perodo de un mes mientras que el pico a 234 nanmetros tal vez debido a la
absorcin por el enlace de amida. Esto indica que la secrecin de algn componente
de protena en el medio por la biomasa fung juega un papel importante en la
reduccin de los iones metlicos en forma de nanopartculas. En consecuencia, las
protenas pueden tambin enlazar a las nanopartculas y mejorar la estabilidad.
La plata metlica es relativamente no reactiva, sin embargo, cuando es expuesta a
condiciones acuosas algo de ion plata (Ag+) es liberada. Ciertas sales (como nitrato
de plata) son fcilmente solubles en agua y tienden a ser aprovechadas como agentes
antispticos durante varias dcadas. Nanopartculas de plata pueden ser demostradas
para exponer propiedades antimicrobianas contra bacterias con un apego cercano de
las nanopartculas entre ellas mismas con las clulas microbianas y el tamao de la
actividad seria dependiente. El tamao y la estructura de nanopartculas fueron
adems caracterizados usando anlisis de escaneos de microscopios electrnicos. La
superficie depositada en nanopartculas de plata fue claramente vistas con alta
ampliacin en el microscopio.
La rpida sntesis biolgica de nanopartculas de plata por las microalgas marinas
provee una ruta simple y eficiente para la sntesis de nanopartculas con propiedades
pticas sintonizables dirigidas a tamaos de partculas. La investigacin del efecto
antibacterial de una solucin de plata coloidal nanoparticulada contra patgenos
revela alta eficiencia de nanopartculas de plata como un fuerte agente antimicrobiano
el cual puede ser til en industrias de alimentos, cosmticos y farmacuticas.
Futuras propuestas de estas investigaciones pueden ser para ampliar la produccin
biosinttica de nanopartculas de plata usando estas algas y probando su eficacia
contra un amplio espectro de poblacin microbiana. Otras investigaciones pueden
involucrar la exploracin del potencial de las microalgas para sintetizar
nanopartculas de oro.