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DETERMINACIN DE AZUCARES REDUCTORES

Luis Acevedo Castilla, Kevyn Alfonso Ariza Gmez, Jonathan Lambrao Len, Eliab Lopez
Murillo, Valmer Peralta Mercado

Resumen:
Mediante la aplicacin del mtodo del cido 3,5 dinitro saliclico (DNS) se cuantificaron las
azucares reductores totales (Cantidad aproximada) de distintas soluciones de glucosa con diferentes
concentraciones, preparando disoluciones a diferente concentracin a partir de una solucin
original, de glucosa a , en presencia de calor. Los resultados fueron registrados con el propsito
de establecer un modelo o curva patrn para la determinacin de azucares usando dicho mtodo.
Palabras clave: Azucares reductores, cido 3,5 dinitro saliclico (DNS), concentracin, glucosa.

Abstract:
Total reducing sugars (Approximate number) of different solutions with different glucose
concentrations were quantified by application of salicylic acid 3,5 dinitro method (DNS), preparing
solutions at different concentration from a stock solution of glucose at , in the presence of heat.
The results were recorded in order to make a model or standard curve for determination of sugars
using this method.
Keywords: Reducing sugars, 3,5 dinitro salicylic acid (DNS), concentration, glucose.

Introduccin:
El constante desarrollo tecnolgico de las
industrias de transformacin de sustratos tales
como los azucares reductores en productos
consumibles (Industria sucro-licorera) y de
utilidad para el ser humano han creado en s,
una necesidad de desarrollar y optimizar las
tcnicas que se utilizan en dicha
transformacin.
El mtodo DNS es en particular un mtodo
muy
efectivo
para
determinar
la
concentracin de azucares reductores en
distintos materiales. Por medio de una
reaccin redox entre el DNS y el agente

reductor (monosacridos y disacridos en su


mayora) que deben su comportamiento
debido al grupo carbonilo presente en su
estructura molecular, as en una solucin
alcalina el agente reductor reduce al cido 3,5
dinitro saliclico en cido 3 amino, 5nitrosaliclico, con la caracterstica de
presentar un cambio de coloracin del
amarillo de la solucin alcalina hasta un
rojizo caracterstico del 3 amino, 5nitrosaliclico. La intensidad del color que
puede
ser
medida
por
tcnicas
espectrofotomtricas es proporcional a la
concentracin de sacarosa (azcar reductor).

Aunque muy eficiente el mtodo no es


recomendable en materiales que presenten
coloracin muy intensa, como mieles o caldos
de fermentacin que ya contengan el DNS
debido a los Niveles de dispersin que se
pueden encontrar al ensayar las mezclas.
En el presente informe se desarrolla la tcnica
de DNS para la determinacin de las azucares
reductoras totales (cantidad aproximada)
presentes en diferentes soluciones de glucosa
a diferentes concentraciones.

Materiales y mtodo:

Agregar a cada muestra 5mL de agua


destilada y se realiza la lectura
usando un espectrmetro a 540 nm.

Anlisis y resultados:
La tabla nmero 1 (tabla No.1) muestra las
diferentes
disoluciones
a
diferentes
concentraciones de glucosa y sus respectivos
volmenes agregados de agua destilada, con
la absorbancia arrojada por el espectrmetro.
Curva de calibracin:
Para la construccin de esta curva es
necesario saber la concentracin de azcar en
cada solucin despus de haber agregado el
agua destilada, mediante la ecuacin 1.

solucin de glucosa (2 )

cido 3,5 dinitro saliclico


espectrmetro
balanza
tubos de ensayo
vaso de precipitado
mechero

As despejamos de la ecuacin 1 la
concentracin 2 que es la que nos interesa
conocer, obteniendo la ecuacin 2:

a partir de la disoluciones de 2 g/L se


preparan diferentes soluciones a
distintas concentraciones de 0.5g/L ,
0.7g/L, 1g/L, 1.5g/L, 1.7g/L y 2g/L
todas con un volumen final de 10
mL.

Donde
es la concentracin inicial de la
disolucin de glucosa, y
es el volumen de
solucin despus de agregada el agua
destilada (10 mL)

Tomar cada una de estas disoluciones


y llevarlas a tubos de ensayos en
cantidades de 0.5 mL.

De esta ecuacin reemplazamos los datos


respectivos de cada disolucin y obtenemos
su concentracin despus de agregado el
volumen de agua. Para la muestra nmero 1:
de forma que se obtienen los datos en la tabla
nmero 2

Alimentar cada tubo de ensayo con


disolucin de muestras con 0.5 mL de
reactivo DNS.

Se calientan los tubos de ensayo


durante 5 minutos y refrigerar por
otros 5 minutos hasta alcanzar la
temperatura ambiente.
Al finalizar el refrigerado envolver
los tubos con papel aluminio.

)(

El mismo proceso se repite para las dems


concentraciones y los resultados se tabulan en
la tabla nmero 2.
De la tabla 2 se construye la figura 1
(figura.1) la cual presentan la curva patrn y

su coeficiente de correlacin utilizando el


mtodo DNS.

Concentracin
Solucin de glucosa
(g/L)
1
2
3
4
5
6
blanco
Tabla.1

0.5
0.7
1.0
1.5
1.7
2.0
0

Volumen
de la
solucin
de
glucosa
(mL)
2.5
3.5
5.0
7.5
8.5
1.0
0

solucin
blanco
1
2
3
4
5
6

Volumen de agua destilada


(mL)

Absorbancia
(540 nm)

7.5
6.5
5.0
1.5
0.5
0
10

0.105
0.136
0.228
0.350
0.485
0.551
0
Absorbancia (450 nm)
0
0,105
0,136
0,228
0,350
0,485
0,551

Concentracin ( )(g/L)
0
0,125
0,245
0,5
1,125
1,145
0,2

Tabla.2

Curva patrn
0.6

absorbancia 450 nm

0.5

y = 0.2833x - 0.0345
R = 0.9768

0.4
0.3

Series1

0.2

Linear (Series1)

0.1
0
-0.1

figura.1

0.5

1.5

conentracin de glucos (g/mL)

2.5

de la grfica se obtiene un R de 0,9768 lo


cual al ser mayor que 0,95 refleja que hay una
alta correlacin entre la absorbancia y la
concentracin de azucares, esto significa que
al aumentar la concentracin de azucares
tambin lo har la absorbancia.

Conclusin:
Se desarroll el mtodo 3,5 dinitro saliclico
DNS para la determinacin de azucares
presentes en disoluciones de glucosa el
mtodo en presencia de calor demostr
resultados factibles en la medida que mostr
una alta correlacin entre absorbancia y
concentracin de glucosa, lo cual confirma la
importancia de este mtodo en la
determinacin de azucares presentes en
soluciones glucosas. l mtodo en particular
resulta de mucha utilidad, pero debe
considerarse tambin aquellos casos en los
que no suele ser de utilidad, resaltando
aquellos en los cuales las intensos colores no
permiten una buena visualizacin de la
coloracin la cual describe la transformacin
del cido 3,5 dinitro saliclico en 3 dinitrilo,
5- saliclico.

Bibliografa:

Biart J. R, Manual de Tcnicas


analticas
de las plantas de Levadura, ICIDCA ,1976.

Manual de tcnicas analticas,


ICIDCA,1974.