DETERMINACION DE HEMOGLOBINA EN

SANGRE TOTAL

LABORATORIO DE BIOQUIMICA
APLICADA

Integrante: Conde Guevara Shirley

Seccin: 5MF41

PRACTICA N1
DETERMINACION DE HEMOGLOBINA EN SANGRE TOTAL
1. Introduccin
Los eritrocitos son lisados por accin de un agente tensioactivo presente en el reactivo,
liberando su contenido de hemoglobina en la solucin.
La hemoglobina liberada es oxidada a metahemoglobina por el ferricianuro, siendo esta
ltima convertida en cianmetahemoglobina por la presencia de cianuro. La absorbancia
de la cianmetahemoglobina es medida a 540nm, siendo la intensidad del color obtenida,
directamente proporcional a la concentracin de hemoglobina en la muestra.
2. Objetivo:
Determinar los niveles de hemoglobina en sangre mediante un mtodo enzimtico.
3. Resultados:
A. Obtencin de la muestra por Puncin Venosa mediante Sistema al Vaco:

1.- Desinfectar con alcohol el rea donde se extraer

la muestra de sangre, secndola posteriormente con
algodn. Utilizar siempre guantes, agujas y jeringas
estriles.

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2.- Se coloca la aguja en direccin paralela a la vena,

se perfora la piel haciendo avanzar la aguja entre 0,5
cm y 1 cm en el tejido subcutneo, se inserta el tubo
al vaco por la parte posterior y no preocuparse por
la cantidad de sangre extrada ya que el mismo
sonido del vaco avisar que la extraccin termin.

3.- Se obtiene la sangre por extraccin intravenosa,

de la que se toman directamente 0,01 ml de
hemoglobina con una pipeta

B. Reaccin enzimtica

Prender el fotocolormetro o el espectofotmetro y

esperar a que alcance la temperatura adecuada para su
funcionamiento.

Llevar la pipeta hasta el fondo del tubo y depositar la

sangre, procurando lavar las paredes internas de la pipeta;
esto se logra mediante aspiraciones y expulsiones
consecutivas de reactivo dentro del tubo.

Evitar la formacin de burbujas.

Tapar el tubo y mezclar 5 veces por inversin.

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Colocar 3 tubos de ensayos en una gradilla y aadir los siguientes reactivos segn indica la
tabla a continuacin:

Incubar 3 minutos a temperatura ambiente (sobre 20 C), o 10 minutos si la temperatura

ambiental es muy baja.

Formatted Table

Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt

Los colores son de color marrn

oscuro cristalino para las 3
muestras recolectadas .

Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt, Itali

Dejar reposar por 10 minutos para que se produzca la

hemlisis total de las clulas rojas y se complete la
reaccin.

Realizar el mismo procedimiento para el patrn.

Transferir la solucin a las cubetas del fotocolormetro.
Formatted Table

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Leer las absorbancias en el espectrofotmetro a 540 nm llevando a cero el equipo, usar

como blanco el reactivo de Drabkin.
El color obtenido es estable por a lo menos 1 hora. Calcular la concentracin de
hemoglobina, utilizando la curva de calibracin o multiplicando por una constante que
resulta de la calibracin del mtodo.

(Hb)g/dL =

18g/dL
x Abs Muestra
Abs. Standard

Valor de Absorvancia Standard: 0.530

Valor de Absorvancia de Muestra:

Muestra 1 : 0.429
Muestra 2 : 0.560
Muestra 3 : 0.543

Muestra 1 : (Hb)g/dL =14.6 g/dL

Muestra 2 : (Hb)g/dL =19 g/dL
Muestra 3 : (Hb)g/dL =18.4 g/dL

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Conclusin
Como conclusin de esta prctica podemos aclarar que el resultado obtenido segn los
clculos realizados, se encuentra dentro de los valores de referencia. Los compaeros
ofrecidos para aportar la muestra de sangre eran: 2 de sexo masculino y 1 de sexo
femenino esto es importante a la hora de comparar los valores de referencia de la
cantidad de hemoglobina en la sangre.
El resultado obtenido fue el siguiente:
Muestra 1: 14,6g/dL muestra de Yordi (sexo masculino)
Muestra 2: 19g/dL muestra de Anghelo(sexo masculino)
Muestra 3.18,4g/dL muestra de Liz (sexo femenino)
luego podemos aclarar que el nivel de hemoglobina para las 3 muestras es correcto.

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CUESTIONARIO
1. Indique la composicin del estndar de hemoglobina
Composicin estndar de hemoglobina: 18g/dL
La Hemoglobina se compone de:
Ferricianuro de potasio 0,60 mmol/L
Cianuro de potasio 77 mmol/L
Dihidrogeno fosfato de potasio 2 mmol/L
2. Indique la composicin del reactivo de hemoglobina
El reactivo de Drabkin; se compone de:
Na+ Bicarbonato
Cianuro de K (Txico que mata por inhibicin de la respiracin celular)
Ferrocianuro de K (K=Potasio), tan txico como el anterior

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3. Cules son los valores normales de hemoglobina?

VALORES DE REFERENCIA
Hombres

14.0 18g/dL

Mujeres

12.0 16.0 g/dL

Los resultados normales para los adultos varan, pero en general son:

Hombre: de 13.8 a 17.2 gramos por decilitro (g/dL)

Mujer: de 12.1 a 15.1 g/dL

Los resultados normales para los nios varan, pero en general son:

Recin nacido de 14 a 24 g/dL

Beb de 9.5 a 13 g/dL

Los ejemplos de arriba son mediciones comunes correspondientes a los resultados de

estos exmenes. Los rangos de los valores normales pueden variar ligeramente entre
diferentes laboratorios.
4. Qu enfermedades
hemoglobina?

estn

relacionadas

con

valores

anormales

de

HEMOGLOBINA MS BAJA DE LO NORMAL

El nivel de hemoglobina baja puede deberse a:

Anemia debida a la destruccin de los glbulos rojos antes de lo normal (anemia

hemoltica).
Anemia (varios tipos).
Sangrado del tubo digestivo o la vejiga; periodos menstruales abundantes.
Enfermedad renal crnica.
Mdula sea que no puede producir nuevas clulas sanguneas. Esto puede
deberse a leucemia, otros cnceres, toxicidad por drogas, radioterapia, infeccin
o trastornos de la mdula sea.
Nutricin deficiente.
Bajo nivel de hierro, folato, vitamina B12 y vitamina B6.
Otras enfermedades crnicas, como la artritis reumatoidea.

HEMOGLOBINA MS ALTA DE LO NORMAL

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El nivel alto de la hemoglobina casi siempre se debe a bajos niveles de oxgeno en la

sangre (hipoxia), presentes durante un largo perodo de tiempo. Las razones comunes
abarcan:

Ciertos defectos congnitos del corazn, presente al nacer (cardiopata

congnita).
Insuficiencia del lado derecho del corazn (cor pulmonale).
EPOC grave.
Cicatrizacin o engrosamiento de los pulmones (fibrosis pulmonar) y otros
trastornos pulmonares graves.

Otras razones para el nivel alto de hemoglobina abarcan:

Una enfermedad rara de la mdula que conduce a un aumento anormal del

nmero de clulas sanguneas (policitemia vera).
El cuerpo no tiene tanta agua y lquidos como debera (deshidratacin).