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UNIVERSIDAD AUTNOMA DE CHIAPAS

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Prctica 1. TCNICA HISTOLGICA

OBJETIVO
El alumno conocer la importancia de la preservacin de los tejidos para su estudio
histolgico.

INTRODUCCIN
Las clulas cuando son extradas de los organismos mueren por falta de nutrientes y de
factores de su micro-ambiente y sufren procesos de descomposicin debido a la accin
de enzimas como proteasas, lipasas, DNAasas, RNAasas que comienzan a destruir el
tejido. Los tejidos deben ser tratados para su preservacin, por lo que se utilizan diversas
tcnicas de preservacin para mantener las estructuras conservadas de la clula. La
tcnica a utilizar depende del tipo de estudio y del tipo de tejido a utilizar. Si desean
realizar un estudio rpido del tejido se utiliza la tcnica por congelacin la cual permite
detener la actividad de las enzimas. Si desea realizar un estudio ms completo de la
estructura celular y requiere mayor tiempo de realizacin se puede utilizar la preservacin
por fijacin del tejido. Los estudios ms finos de la clula como la observacin de su ultra
estructura el tejido pasa por fijacin ms rigurosa para poder obsrvalo por microscopio
electrnico.

Mtodos histolgicos

La clula es la estructura bsica vital del organismo y est compuesta principalmente de


protenas, hidratos de carbono, lpidos y sales inorgnicas, por lo que el objetivo principal
de la fijacin es la preservacin de los componentes celulares para as evitar la autolisis y
la proliferacin que altera los componentes celulares, conservando la arquitectura y
composicin tisular lo ms semejante a como se encuentra en el organismo vivo, as
como tambin el de seleccionar el agente fijador.

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Fijacin

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Los tipos de fijacin son variados y depende del tejido. Algunos funcionan deshidratando
los tejidos como son los alcoholes (etanol, metanol), o combinados con cidos (cido
actico, pcricos), cidos crmicos. Otros fijadores polimerizan para formar un red entre la
clula y de esa formar conservar la estructura celular, tales como formaldehdo, formol y
paraformaldehdo, glutaraldehdo. Otros ms son compuestos ms

fuertes como

cacodilato o sales de osmio, platino y mercurio.

Las desventajas del uso de los fijadores es que son txicos para las clulas vivas de
nuestro cuerpo, pueden ser irritantes, fijan las clulas y algunos son cancergenos, por lo
que se deben utilizar con las medidas adecuadas (guantes, gafas protectoras,
mascarillas). El tiempo de fijacin oscila entre 30 minutos a 12 horas dependiendo del
grosor del tejido, las clulas libres requieren solo de 30 minutos, tejido delgado de 2 horas
y ms grueso hasta de 12 horas, entre ms delgado sea el tejido mejor se fijar.

Una imagen igual ha de observarse en todos los tejidos idnticos obtenidos de diferentes
individuos de una misma especie. Su reproducibilidad en todas las preparaciones
histolgicas obtenidas de los tejidos, independientemente del proceso de fijacin.
Principios generales de la fijacin.

No existe un mtodo universal de fijacin. No todos

los fijadores conservan indefinidamente el tejido. Un defecto de fijacin jams puede ser
corregido.

Es imposible realizar un estudio histolgico sobre un material con graves

defectos de fijacin.

Cantidad de fijador. Por lo menos de 10 a 15 volmenes de fijador deben de ser


utilizados por cada volumen de tejido. Penetracin: ningn fijador penetrar ms de 2 a 5
mm, en tejido dolido, y 0.5 cm en tejido poroso, en un periodo de 24 horas. Tiempo: la
mayora de los tejidos deben de permanecer en fijacin por lo menos 12 horas.
Temperatura: la mayora de los fijadores se realizan a temperatura ambiente. Calor: el
calor coagular las protenas, pero no se recomienda para la fijacin.

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Corte

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Una vez fijado el tejido se procede a realizar cortes del tejido para su observacin al
microscopio. El grosor de las rebanas oscilan entre 300 micras a 100 Armstrong. Para
cortar el tejido se utilizan micrtomos, existen diferentes tipos: tenemos el criostato
(congelacin), vibrtomo (vibracin), micrtomos de deslizamientos simples o por
congelamiento y los ultramicrotomos. Las cuchillas que se utilizan para cortar el tejido
tenemos de acero inoxidable (micrtomos) y de vidrio o de diamante (ultra micrtomos). El
filo de las cuchillas tienen un lado con un ngulo y otro recto, la parte recta del filo se
coloca hacia abajo y la parte con ngulo se coloca hacia arriba.

El procesamiento de corte del tejido depende del micrtomo a utilizar, si el corte se realiza
con un vibratomo este no requiere la fijacin del tejido, puesto que se realiza cortes de un
grosor entre 100 a 300 micras, este tipo de estudio se utiliza para el estudio del tejido en
rebanas donde la clula se requiere que este viva, la clula se mantiene viva por un
tiempo determinado mantenindola en una solucin fisiolgica y oxigenada. Por
congelacin el tejido es fijado y posteriormente se pasa a una solucin de sacarosa al
10% en solucin isotnica por 12 horas, este procedimiento proteger el tejido de la
congelacin. Posteriormente, se congela el tejido con CO (-15 a 20 C) y se prosigue a
realizar cortes entre 6 micras a 50 micras. Si se utiliza un micrtomo de deslizamiento
simple, el tejido debe ser protegido con un polmero extra como es la parafina y lograr
rebanas de grosor de 8 micras. El tejido una vez fijado, se procede a deshidratarlo con
alcoholes al 70%, 80%, 96% y 100%. Posteriormente, se pasa a xilol 100% y despus a la
parafina, se realizan bloques de parafina y estos son cortados en fro. Las rebanas son
colocadas en portaobjetos y desparafinadas.

Tcnica de tincin
La tcnicas de tincin varia de la estructura a observar, tenemos colorantes bsicos y
cidos que van a teir macromolculas cidas o alcalinas (hematoxilina, eosina, wright).
Tenemos otros colorantes con afinidad a ciertas grupos qumicos como son los colorantes
proteicos que se unen a grupos aminos libres, sulfhdricos libres o hidroxilo libres,
ejemplos de estos tenemos Coomassie, cristal violeta, nitrato de plata, azul de metileno).
O tenemos otros especficos a estructuras como dicromatos para teir protenas de la
matriz extracelular.

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Existen otro tipo de colorantes fluorescentes que solo son visibles con una lmpara de
tungsteno, donde emite longitudes de onda de ultravioleta, existen las tcnicas de
inmunofluorescencia donde se utiliza anticuerpos que reconocen un antgeno especifico, y
posteriormente se utiliza un segundo anticuerpo conjugado con un fluormetro (FICT,
rhodamina), o con una enzima y se visualiza con el sustrato colorimtrico (peroxidasa,
fosfatasa alcalina, etc.) Las rebanas una vez teidas pueden ser conservadas por muchos
aos una vez que son protegidas del medio exterior utilizando resinas sintticas o
blsamo de Canad.

CUESTIONARIO
1. Con sus palabras defina: qu es un fijador y un colorante
2. Mencione el fundamento de hematoxilina y eosina
3. Con sus palabras diga cul es el objetivo de la manipulacin de tejidos orgnicos

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Prctica 2. DISECCIN DE ANIMALES DE LABORATORIO

OBJETIVO
El alumno conocer los diferentes rganos y aparatos que componen un ser vivo.

INTRODUCCIN
Un ser vivo cuenta con una serie de rganos y aparatos para su sobrevivencia, todos ellos
funcionan como un todo para el procesamiento de alimentos, obtencin de nutrientes y
oxigeno y la coordinacin del movimiento, proteccin del medio exterior. El aparato
digestivo funciona como un proveedor de nutrientes obtenidos del medio exterior, lo
procesa desde su degradacin mecnica y qumica hasta su absorcin al organismo. As
tenemos en la degradacin mecnica y qumica el alimento pasa por boca, esfago,
estomago e intestino. Su absorcin se lleva a cabo en el intestino delgado y grueso. El
aparato circulatorio transportar los diferentes nutrientes a todo el organismo, la fuerza
motriz de la circulacin de los nutrientes por la sangre la realiza el corazn. Uno de los
nutrientes esenciales para la vida es el oxigeno que es capturado por el aparato
respiratorio. Los nutrientes son metabolizados y eliminados por rin, pulmn y piel. El
sistema nervioso se encarga de la planeacin, control y regulacin de las funciones del
organismo, por lo que, aparte del corazn es primeramente nutrido que otros rganos o
sistemas.

METODOLOGA
Para realizar esta prctica se necesitar una rata por equipo.
Procedimiento
El animal ser anestesiado con ter en el frasco de 2 litros. Una vez dormido el animal, se
coloca en la tabla de diseccin y se sujetar a esta. Realice una incisin en la parte media
del abdomen y corte la piel hacia los lados. Despus se corta el msculo y se exponen los
rganos que se encuentra en el abdomen. Identifique y extraiga el estmago, intestinos,
hgado, pncreas, bazo, rin y aparatos reproductores.

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Ahora prosiga a extraer el corazn abriendo el trax del animal, los pulmones, timo,
tiroides, paratiroides. Los rganos extrados sern depositados en solucin salina para
lavar la sangre y pasarlos a frascos de plsticos con formol al 10%.

Cuestionario
1. Para qu los rganos extrados se conservan en formol al 10%?
2. Con sus palabras expliqu qu es un tejido, un rgano, un aparato y un sistema.
3. Diga qu rganos integran y cul es componente principal de los siguientes aparatos:
a)

Digestivo, Respiratorio, Cardiovascular, Urinario y Reproductor

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Prctica 3. OBSERVACIN DE TEJIDO EPITELIAL

OBJETIVO
Observar las caractersticas morfolgicas de las clulas del tejido epitelial que cumple con
diferentes funciones en el organismo humano.

INTRODUCCIN
El tejido epitelial es un conjunto de clulas que cumple con funciones de revestimiento,
secrecin o absorcin. De acuerdo a la funcin que desempea, la forma de las clulas se
adapta a las necesidades de dicha funcin. As por ejemplo, si se trata de la funcin de
revestimiento o proteccin, la clula adquiere en su citoplasma, sustancias que la hagan
resistente (queratina). Si la funcin es de secrecin o bien de absorcin, la clula sufre
modificaciones en su borde libre (cilias, microvellosidades, flagelos) que le permiten
aumentar la superficie de absorcin o secrecin.

Las clulas del tejido epitelial carecen de sustancia intersticial y se apoyan en una
estructura llamada membrana basal. Debido a la existencia de esta membrana, la clula
epitelial adquiere polaridad, es decir,

la orientacin de sus organelos, que hacen

distinguir en ella una regin basal y otra apical.

El tejido epitelial tiene su origen en su mayor parte en el ectodermo, aunque tambin


procede del mesodermo y del endodermo. El tejido epitelial de revestimiento lo
encontramos en la piel; el de secrecin en las glndulas y mucosas y el de absorcin en
la mucosa intestinal, que cumple tanto con funciones de absorcin como de secrecin. El
tejido epitelial de secrecin o Glandular, puede ser de secrecin interna (glndulas
endocrinas) o de secrecin externa (glndulas exocrinas). Ejemplo de las primeras lo
encontramos en el ovario, cuyo producto de secrecin (estrgenos) pasan a la circulacin;
y ejemplo de secrecin externa, las glndulas salivales que vierten su contenido en la
cavidad bucal.

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METODOLOGA
El profesor a cargo del laboratorio proporcionar al grupo las siguientes preparaciones:

Preparacin histolgica de piel

Preparacin histolgica de vejiga

Preparacin histolgica de pncreas o tiroides

Procedimiento
Para tener un primer acercamiento, la preparacin deber analizarse a simple vista, luego
se colocar sobre la platina del microscopio y se observar con el objetivo de 10 X.
Finalmente para observar los detalles del tejido problema se usar el objetivo de 40X. El
objetivo de 100 X se utilizar por instruccin y supervisin del profesor.
Una vez que las preparaciones hayan sido examinadas, en el apartado de las
observaciones se describirn las caractersticas organizacionales y estructurales de cada
tejido problema. Adems se elaborar un esquema (dibujo o fotografa) de cada uno de
los tejidos examinados al microscopio indicando el nombre de cada uno de los
componentes del tejido. Tambin se debern discutir las diferencias o similitudes de la
observacin prctica con la terica.

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Prctica 4. OBSERVACIN DE TEJIDO CONECTIVO

OBJETIVO
Identificar las caractersticas diferenciales de cada uno de los diferentes tipos de tejido
conectivo

INTRODUCCIN
El tejido conectivo tiene como funcin principal, unir los otros tres tejidos del cuerpo
(epitelial, muscular y nervioso). El tejido conectivo se desarrolla a partir de la capa media
del embrin, o sea del mesodermo. Este tejido se caracteriza por poseer diversos tipos de
clulas y fibras, todo contenido en una matriz de sustancia amorfa. Las variedades
celulares, las diferentes fibras y la composicin qumica de la sustancia amorfa son muy
variadas dependiendo de la funcin que cada tejido conectivo tenga asignada.
Habitualmente la clasificacin del tejido conectivo se basa en el tipo de clulas, fibras y
sustancia amorfa que posee y en la proporcin entre ellas. Por esta razn se le clasifica
en dos grandes grupos, tejido conectivo propiamente dicho y tejido conectivo especial. El
primero se subdivide segn la proporcin de los elementos que lo componen, en tejido
conectivo laxo y denso. El tejido conectivo laxo forma la capa de refuerzo de los epitelios,
como en el tejido subcutneo de la piel, o forma endotelios que protegen y sujetan los
rganos como la pleura y la membrana mesentrica. Tambin forma parte de otros tejidos
como el perimisio de los msculos, que forman los tendones (conectivo fibroso).

METODOLOGA
El profesor a cargo del laboratorio proporcionar al grupo las siguientes preparaciones:

Preparacin de piel, cartlago hialino y hueso.

Procedimiento
Para tener un primer acercamiento, la preparacin deber analizarse a simple vista, luego
se colocar sobre la platina del microscopio y se observar con el objetivo de 10 X.

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Finalmente para observar los detalles del tejido problema se usar el objetivo de 40X. El
objetivo de 100 X se utilizar por instruccin y supervisin del profesor.
Una vez que las preparaciones hayan sido examinadas, en el apartado de observaciones
se describirn las caractersticas organizacionales y estructurales de cada tejido
problema. Adems se elaborar un esquema (dibujo o fotografa) de cada uno de los
tejidos examinados indicando el nombre de cada uno de los componentes del tejido.
Tambin se debern discutir las diferencias o similitudes de la observacin prctica con la
terica.

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Prctica 5. OBSERVACIN DE TEJIDO MUSCULAR


El objetivo de la presente prctica es observar las caractersticas del tejido muscular y
destacar las diferencias entre el msculo estriado y liso.

INTRODUCCIN
El tejido muscular est formado por clulas fusiformes llamadas fibras musculares, que
poseen la caracterstica de acortarse, siguiendo su eje mayor al ser estimuladas; esta
propiedad se conoce como CONTRACTILIDAD muscular. El tejido muscular se clasifica
segn su morfologa en estriado y liso, es decir, si las fibras musculares estn
atravesadas transversalmente por estras, o no lo estn, respectivamente. Se hace otra
clasificacin desde el punto de vista fisiolgico en voluntario e involuntario, si depende su
contraccin de la voluntad o no. El msculo estriado puede ser esqueltico o cardiaco
siendo este ltimo de tipo involuntario. Las fibras musculares estn rodeadas por una
membrana citoplasmtica o sarcolema. El citoplasma o sarcoplasma contiene a los
componentes fundamentales de la clula como sarcosomas (mitocondrias) y retculo
sarcoplsmico (REL).

METODOLOGA
El profesor a cargo del laboratorio proporcionar al grupo las siguientes preparaciones:

Preparacin de msculo liso, msculo estriado y msculo cardiaco.

Procedimiento
Para tener un primer acercamiento, la preparacin deber analizarse a simple vista, luego
se colocar sobre la platina del microscopio y se observar con el objetivo de 10 X.
Finalmente para observar los detalles del tejido problema se usar el objetivo de 40X. El
objetivo de 100 X se utilizar por instruccin y supervisin del profesor.
Una vez que las preparaciones hayan sido examinadas, en el apartado de observaciones
se describirn las caractersticas organizacionales y estructurales de cada tejido
problema. Adems se elaborar un esquema (dibujo o fotografa) de cada uno de los
tejidos examinados indicando el nombre de cada uno de los componentes del tejido.

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Practica 6. OBSERVACIN DE TEJIDO NERVIOSO

OBJETIVO
Identificar y describir las clulas nerviosas (neuronas) y las clulas de sostn del sistema
nervioso.

INTRODUCCIN
En el tejido nervioso, las clulas se han especializado especficamente para transmitir
impulsos de una parte del cuerpo a otra. . Este proceso es rpido y prosigue por tractos
circunscritos, compuestos de clulas nerviosas en serie. El impulso pasa de una clula a
otra a travs de brechas submicroscpicas conocidas como sinapsis. Cada clula
nerviosa posee por lo menos una prolongacin citoplsmica muy larga, de manera que el
nmero de unidades requeridas para transmitir el impulso se mantenga al mnimo. La
unidad bsica del tejido nervioso es la neurona una clula nerviosa y todas sus
prolongaciones citoplsmicas. La gran mayora de las clulas nerviosas tienen muchas
prolongaciones citoplsmicas y se denominan por lo tanto, neuronas multipolares,; en
estas clulas nerviosas, solo una de las prolongaciones, el axn, conduce el impulso del
cuerpo celular hacia fuera. Las dems prolongaciones, llamadas dendritas, conducen el
impulso hacia el cuerpo celular.

Los cuerpos neuronales del sistema nervioso central yacen en la materia gris, o en
acumulos localizados en la materia blanca. La materia gris comprende vastas reas de
clulas nerviosas y sus neuroglias de sostn, que se encuentran en las cortezas del
cerebro y del cerebelo y en la regin central de la mdula espinal. La materia blanca est
compuesta de las prolongaciones citoplasmticas de las clulas nerviosas y sus
neuroglias de sostn.

Los acumulos de neuronas que se encuentran en la materia

blanca, son, usualmente aunque no siempre, llamados ncleos, se encuentran en todas


las partes del sistema nervioso central.

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El profesor a cargo del laboratorio proporcionar al grupo las siguientes preparaciones:

Preparacin de msculo liso, msculo estriado y msculo cardiaco.

Procedimiento
Para tener un primer acercamiento, la preparacin deber analizarse a simple vista, luego
se colocar sobre la platina del microscopio y se observar con el objetivo de 10 X.
Finalmente para observar los detalles del tejido problema se usar el objetivo de 40X. El
objetivo de 100 X se utilizar por instruccin y supervisin del profesor.
Una vez que las preparaciones hayan sido examinadas, en el apartado de observaciones
se describirn las caractersticas organizacionales y estructurales de cada tejido
problema. Adems se elaborar un esquema (dibujo o fotografa) de cada uno de los
tejidos examinados indicando el nombre de cada uno de los componentes del tejido.
Tambin se debern discutir las diferencias o similitudes de la observacin prctica con la
terica.

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