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Laboratorio n2: ecosistemas

bucales
Alumno: Lorena Mellado

Docente: Dra. Emilia Carrasco

Fecha: 09/10/2012

Introduccin
En el campo odontolgico es de gran
importancia
tener
amplios
conocimientos sobre la cavidad oral,
ya que esta es un rea anatmica y
morfolgicamente favorable para la
produccin de variados ambientes,
los cuales son propicios
para
distintos tipos de microrganismos. En
esta cavidad podemos encontrar un
promedio de alrededor de 150
especies distintas de bacterias, las
cuales crecen y se desarrollan
gracias a diversos factores del
husped como la dieta, edad, higiene
personal, estado hormonal y salud,
pero en condiciones normales se
mantienen en un estado de equilibrio
(simbiosis) con el husped. Cuando
este estado de equilibrio se rompe, se
produce una disbiosis, que deberse a
causas variadas, como por ejemplo,
cambios en el pH bucal, cambios de
dieta,
alteraciones
hormonales,
alteracin en la produccin de saliva,
entre otros. Esta disbiosis producir
situaciones patolgicas por sobre
crecimientos bacterianos o por la
aparicin de un patgeno que no es
habitual en la cavidad oral.

Estos microrganismos los podemos


encontrar ampliamente distribuidos
en diferentes sectores de la cavidad
bucal, como por ejemplo el dorso de
la lengua, mucosa interna de la
mejilla y la superficie de las piezas
dentarias,
esta ultima zona se
destaca debido a que el diente no se
renueva
de
forma
peridica,
entonces, le da una superficie de
adherencia donde se pueden fijar y
colonizar de forma ms prolongada a
las bacterias.
Objetivos

Determinar
la
diversidad
bacteriana en la cavidad oral
Determinar los principales
grupos bacterianos presentes
en la cavidad oral
Comparar el crecimiento en los
distintos medios de cultivo de
la muestra de superficie
dentaria.

Materiales y mtodos
Los materiales que fueron utilizados
en el laboratorio fueron: Mechero,
placas de cultivo, trula, suero estril,
asa curva, jarra de anaerobiosis,
catalizadores, materiales de tincin

Gram (cristal violeta, alcohol acetona,


lugol,
safranina),
microscopio,
portaobjetos, aceite de inmersin,
tarro de microaerofilia, velas, agua
destilada y los medios de cultivo
(agar sangre, agar rogosa y agar
mitis-salivarius).
Primero, se dividieron los agares en
tres partes y se rotularon con el
nombre de l zona anatmica de
donde ser extrada la muestra.
Posteriormente,
se
prendi
el
mechero para poder esterilizar el
ambiente, luego se sacaron 3 trulas
esteriles teniendo cuidado de no
contaminarlas, 1 trula se frotara
sobre el dorso de la lengua y se
sembrara en los 3 tipos de agares, al
igual que como se har con las
muestras de la mucosa interna de la
mejilla y de las superficies de las
piezas dentarias. Para realizar las
siembras se debi colocar una gota
de gota de suero estril contenida en
una ampolla, sobre la gota que se
encuentra en cada agar se pone la
trula con la muestra que se tomo, se
comienza a diseminar en un tercio de
la placa, todo esto realizado al lado
del mechero.
Luego de realizada la siembra se
incubaron en anaerobiosis las placas
de agar sangre a 37 C por 48 horas
y el agar rogosa con el Mitissalivarius en microaerofilia a 37 C
por 48 a 72 horas. Para poder
sembrar en anaerobiosis se utilizo
una jarra de gas pack en la cual se
coloco un catalizador de anaerobiosis

pipeteado con 35 ml de agua, este


catalizador genera las condiciones de
anaerobiosis ya que fija el O2 y forma
H2O. Por otro lado, en el tarro de
microaerofilia (tarro de aluminio) se
utiliz una vela prendida para que
redujera el O2 y aumentara el CO2.
Luego de la incubacin se estudiaron
las caractersticas macroscpicas de
las muestras.
Se
estudiaron
tambin
las
caractersticas microscpicas luego
que se incubaron las muestras
utilizando la tincin gram, en la cual
se prepar un frotis con una gota de
suero fisiolgico extrada con una
jeringa. Posteriormente, se esteriliz
un asa curva con la que se tom una
pequea muestra de un cultivo
bacteriano anteriormente preparado y
se dispers ampliamente en la gota,
de manera que quedara extendido
sobre un rea grande del portaobjeto;
posteriormente
se
esteriliz
nuevamente el asa curva. Para la
fijacin de las bacterias se pasa el
portaobjetos 3 veces sobre el
mechero a una distancia moderada,
sin que se quemen las bacterias.
Luego se agreg sobre el frotis cristal
violeta durante 1 minuto, se elimin el
exceso de colorante lavndolo
rpidamente con agua manteniendo
la lmina inclinada. Luego se agreg
lugol durante 1 minuto y se repiti el
proceso de lavado con agua, despus
se decolor con alcohol-acetona
durante 30 segundos y se elimino los
excesos lavando. Finalmente, se
cubri con safranina por 30 segundos

y se volvi a lavar, se sec el frotis de


forma
inclinada
con
papel
absorbente, se le agreg un gota se
lquido de inmersin y se observ en
el microscopio con objetivo de

inmersin. Este procedimiento se


realiz tres veces para obtener el
frotis de la muestra de la superficie
dentaria en los distintos medios de
cultivo.

Resultados
Observacin macroscpica en agar sangre

Observacin macroscpica en agar rogosa

Observacin macroscpica en agar mitis-salivarius

A partir de los resultados, se puede


determinar que la flora oral no es
similar en las diferentes zonas que
conforman la cavidad oral, ya que al
observar los agares se pueden

observar
colonias de
tamaos, forma y color.

distintos

Las zonas con mayor diversidad


fueron el dorso lingual y las
superficies dentarias, en contraste

con la mucosa de la cara interna de la


mejilla

A la observacin microscpica de las


muestras de las piezas dentarias, se
obtiene que:

En relacin a esto, se puede


determinar que la flora predominante
es gram + y en forma de cocos.

Conclusin
La flora oral no es similar en las
distintas zonas de la cavidad bucal,
debido
a
los
requerimientos
energticos, metablicos y nutricios,
adems de la anatoma de cada
sector, junto con el flujo salivad de
ese lugar, es por esto que se puede
observar distintas colonias en los
lugares de donde se obtuvieron las
muestras.
Las zonas del dorso lingual, junto con
la superficie de las piezas dentarias
tienen una diversidad mayor de
colonias debido a su anatoma, el
dorso lingual presenta criptas y
papilas gustativas las cuales permiten
grandes cantidades de acumulacin
de microrganismos y de nutrientes;
Las superficies dentarias son tejidos
no renovables por lo cual presentan
un medio apto para la acumulacin
de nutrientes la cual da paso a la
proliferacin y crecimiento de estos
microrganismos. En contraste, la
mucosa de la cara interna de la

mejilla no presenta gran diversidad


debido a que este es un tejido
epitelial que est en constante
renovacin.
La gran presencia de gram + en
forma de cocos se debe a que los
colonizadores
primarios
son
mayoritariamente gram +
como
Streptococcus con este tipo de
morfologa,
estos
son
de
predominancia aerobia, ya que al ser
colonizadores primarios requieren de
oxigeno para su metabolismo,
transformando el sitio de aerobio a
anaerobio, otorgando as dinamismo
ambiental a la cavidad oral.
El resultado de la observacin
microscpica arroj que hay diversos
tipos de microrganismos en una
misma zona anatmica, que en este
caso fue la superficie dentaria. Esto
se puede determinar gracias a los
diferentes
medios
de
cultivos
utilizados. En agar sangre, que no es
un medio selectivo, habr un
crecimiento variado. En agar rogosa,
crecern bacterias acidofilas, como
los Lactobacillus, debido a que este
medio de cultivo es selectivo cido,

con alto contenido de acetato, por lo


cual sirve para determinar la flora
acidofila; el agar mitis salivarius, nos
permite identificar a Streptococcus.
Por lo tanto estos microrganismos
conviven
entre
si
ya
sea
comensalmente o mutualmente tanto
como entre ellos como con el
husped.
Las colonias de bacterias que se
encontraron son en gran parte de
nuestra flora normal, las cuales se
mantienen en una relacin simbitica
con el husped y que por diversos
factores se puede alterar este
equilibrio, tales como la higiene, el
pH, flujo salivar, dieta, etc., los cuales
generaran una disbiosis y otorgando
asi las condiciones para la formacin
de caries o una enfermedad

periodontal. Es por ello que el estudio


de los ecosistemas bucales es
importante
porque
podemos
encontrar los distintos tipos de
colonias
bacterianas
que
se
encuentran como flora normal en los
distintos lugares de la cavidad bucal y
otorga un mejor diagnostico y
tratamiento.
Bibliografa

Negroni,
Microbiologa
estomatolgica: fundamentos y gua
prctica, 1ra Ed. 3ra. Reimpresin.
Buenos Aires: Mdica Panamericana,
2004.

Murray,
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(2007).
Microbiologa Mdica. 5 edicin.
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