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Cromatografa

Principios de cromatografa
La cromatografa es uno de los principales mtodos para la separacin de especies qumicas
estrechamente relacionadas en mezclas complejas. La cromatografa es un mtodo fsico de
separacin basado en la distribucin de los componentes de una mezcla entre dos fases
inmiscibles, una fija o estacionaria y otra mvil.
En todas las separaciones cromatogrficas la muestra se disuelve en una fase mvil, que puede
ser un gas un lquido o un fluido supercrtico. Esta fase mvil se hace pasar a travs de una fase
estacionaria inmiscible, la cual se mantienen fija en una columna o sobre una superficie slida.
Las fases se eligen de tal forma que los componentes de la muestra se distribuyen de modo
distinto entre la fase mvil y la fase estacionaria. Aquellos componentes que son retenidos con
ms fuerza por la fase estacionaria se mueven lentamente con el flujo; por el contrario los
componentes que unen dbilmente a la fase estacionaria, se mueven con rapidez. Como
consecuencia de la distinta movilidad, los componentes de la muestra se separan en bandas
discriminadas que pueden analizarse cualitativa y/o cuantitativamente.
En el laboratorio de tcnicas instrumentales de la Universidad de Valladolid disponemos de las
siguientes tcnicas cromatogrficas:
Cromatografa de lquidos HPLC

Principios de la tcnica
En la cromatografa lquida, la fase mvil es un lquido que fluye a travs de una
columna que contiene a la fase fija. La separacin cromatogrfica en HPLC es el
resultado de las interacciones especficas entre las molculas de la muestra en ambas
fases, mvil y estacionaria
A diferencia de la cromatografa de gases, la cromatografa de lquidos de alto
rendimiento (HPLC, de high-performance liquid chromatography) no est limitada por la
volatilidad o la estabilidad trmica de la muestra.
La HPLC es capaz de separar macromolculas y especies inicas, productos naturales
lbiles, materiales polimricos y una gran variedad de otros grupos polifuncionales de
alto peso molecular. Con una fase mvil lquida interactiva, otro parmetro se
encuentra disponible para la selectividad, en adicin a una fase estacionaria activa.
La HPLC ofrece una mayor variedad de fases estacionarias, lo que permite una mayor
gama de estas interacciones selectivas y ms posibilidades para la separacin.
HPLC preparativa
Es la tcnica escogida para aislamiento y purificacin de productos de valor en las
industrias qumicas y farmacuticas as como en la biotecnologa y la bioqumica. La
cromatografa preparativa comprende un amplio rango de aplicaciones, desde el
aislamiento de 1g de muestra para identificacin espectroscpica hasta el aislamiento
de un compuesto puro de una mezcla de 100 g.

Aplicaciones
Campos de Aplicacin de HPLC

Frmacos: Antibiticos, sedantes esteroides, analgsicos


Bioqumica: Aminocidos, protenas, carbohidratos, lpidos
Productos de alimentacin: Edulcorantes artificiales, antioxidantes, aflatoxinas,
aditivos
Productos de la industria qumica: Aromticos condensados, tensoactivos, propulsores,
colorantes
Contaminantes: fenoles, Pesticidas, herbicidas, PCB
Qumica forense: Drogas, venenos, alcohol en sangre, narcticos
Medicina clnica: cidos biliares, metabolitos de drogas, extractos de orina,
estrgenos.
Algunas aplicaciones importantes de la HPLC preparativa
Separacin y purificacin de metabolitos
Separacin y purificacin de los metabolitos de las drogas procedentes de muestras de
orina
Purificacin y separacin de enantimeros
Purificacin de compuestos naturales
Purificacin y caracterizacin de enzimas y protenas

Funcionamiento del servicio


Las muestras deben ir acompaadas de la hoja de solicitud de servicios generada en esta
pgina web una vez realizado el registro en la misma. El ususario debe rellenar todos los
campos de la solicitud de servicios que conozca, con el fin de obtener el mejor
resultado posible.

Equipos
HPLC analtico 1200 Series de Agilent Technologies
Bomba cuaternaria G1311
Detector de longitud de onda variable G1314B
Detector de diodo y de longitud de onda variable G1315D
Detector de ndice de refraccin G1362A
Detector de fluorescencia G1321A
HPLC preparativo 1200 Series de Agilent Technologies
Dos Bombas preparativas G1361A
Detector de diodo y de longitud de onda variable G1315D
Muestreador automtico G1329A
Colector de fracciones G1364B

Cromatografa de gases
Principios de la tcnica
En cromatografa de gases la muestra se volatiliza y se inyecta en la cabeza de una
columna cromatogrfica. La elucin se produce por el flujo de una fase mvil que es un
gas inerte, y a diferencia de la mayora de los tipos de cromatografa, la fase mvil no
interacciona con las molculas del analito; su nica funcin es la de transportar el
analito a travs de la columna.
Respecto a la cromatografa lquida, la cromatografa de gases tiene la ventaja de
disponer de detectores mucho ms universales (por ejemplo, el de ionizacin de llama).
Adems, para numerosas aplicaciones, los mtodos son ms simples, ms rpidos y ms
sensibles que los correspondientes a la cromatografa lquida de alta resolucin. La
instrumentacin requerida para cromatografa de gases tambin es mucho ms sencilla y
econmica que la empleada en HPLC. Sin embargo, en cromatografa de gases, la
influencia de la temperatura sobre la distribucin del equilibrio es considerable, a
diferencia de la cromatografa lquida. Por ello, la cromatografa de gases presenta
limitaciones en tres casos:

compuestos poco voltiles, generalmente los de peso molecular superior a 300 u.m.a.
compuestos sensibles a una elevacin de la temperatura incluso moderada
(determinados compuestos de inters biolgico)
compuestos que se encuentran en forma inica (puesto que son e n general poco
voltiles)
Por esta razn, la cromatografa de gases se emplea cuando los componentes de la
mezcla problema son voltiles o semivoltiles y trmicamente estables a temperaturas
de hasta 350-400C. En cambio, cuando los compuestos a analizar son poco voltiles y/o
termolbiles, la tcnica separativa adecuada suele ser la cromatografa lquida de alta
resolucin (HPLC).
A menudo la cromatografa de gases se emplea para confirmar de la presencia o
ausencia de un compuesto en una muestra determinada.

Aplicaciones
Medioambientales: Anlisis de pesticidas y herbicidas, anlisis de hidrocarburos,
semivoltiles y voltiles, anlisis del aire...
Alimentos y aromas: fragancias y aromas, aceites, bebidas, cidos orgnicos, azcares,
FAMES, steres metlicos, triglicridos, alcoholes...
Qumica Industrial: alcoholes, cidos orgnicos, aminas,aldehdos y cetonas, steres y
glicoles, hidrocarburos, disolventes, anilinas, gases inorgnicos...
Biociencia: drogas, frmacos, alcoholes y contaminantes en sangre, disolventes
residuales...
Derivadas del petrleo: gas natural, gases permanentes, gas derefinera, gasolinas,
gasleos, parafinas...

Funcionamiento del servicio

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Equipos

Cromatgrafos de gases Agilent Technologies 7890A


Detector de captura electrnica (ECD)
Detector de ionizacin de llama (FID)

Cromatografa inica
Principios de la tcnica
En las ltimas dcadas, la cromatografa inica se ha convertido en uno de los mtodos
ms importantes para el anlisis de trazas de aniones y cationes. Tcnica absolutamente
imprescindible en el anlisis de aguas y medio ambiente
Se basa en el uso de resinas de intercambio inico. Cuando una muestra inica atraviesa
estas columnas, los iones presentes se separan debido a las diferentes retenciones que
sufren al interactuar con la fase fija de las columnas analticas. Una vez separada, la
muestra pasa a travs de un detector (conductimtrico, amperomtrico, UV...) donde se
registra la seal obtenida respecto al tiempo de retencin. El resultado son unos
cromatogrmas donde la posicin de los mximos nos indica el in presente (carcter
cualitativo) y su rea nos indica que cantidad existente de dicho in (carcter
cuantitativo).
Potencial analtico de la cromatografa inica

- Aniones inorgnicos y orgnicos: Fluoruros, cloruros, nitritos, bromuros, nitratos,


fosfatos, sulfatos, bromatos, cloritos, cloratos, actico, ctrico, tartrico, lctico,
srbico, benzoico
- Azcares y polialcoholes: Monosacridos, disacridos, oligosacridos, polisacridos.
- Cationes: Sodio, amonio, potasio, calcio, magnesio

Aplicaciones

Aguas de consumo
Aguas minerales
Bebidas
Productos crnicos
Productos vegetales
Alimentacin infantil

Funcionamiento del servicio


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Equipo

Cromatgrafo Inico IC Professional 850 de Metrohm con sistema de utrafiltracin


Detector de conductividad. Supresin qumica secuencial
Detector amperomtrico de pulsos (PAD

http://laboratoriotecnicasinstrumentales.es/cromatografa
http://biomodel.uah.es/tecnicas/crom/inicio.htm
ANALISIS DE GRASA METODO GERBER

El mtodo Gerber consiste en separar la grasa dentro de un recipiente medidor, llamado


butirmetro, y medir el volumen expresando el resultado en tanto por ciento en masa.

Para ello, es necesario disponer de butirmetros y una centrfuga especfica para los mismos.
Tambin sera deseable disponer de una pipeta de 11 mL, de doble aforo, para tomar la muestra
de leche con exactitud.
Como reactivos, se emplean cido sulfrico Gerber y alcohol amlico (2-metilbutanol).

Centrifuga: se encarga de separar la


grasa de la materia
organica que se ha desintegrado por accion del acido sulfurico

PROCEDIMIENTO:

Medir, en una probeta, 10 mL de cido sulfrico Gerber y


aadirlos dentro del butirmetro.
La grasa est en la leche en forma de pequeos glbulos rodeados por una capa protectora. La
separacin completa de la grasa precisa la destruccin de esta envoltura protectora. Este proceso
se lleva a cabo por medio del cido sulfrico concentrado, de entre el 90 y el 91 % de masa (cido
sulfrico Gerber).
Una vez preparada la muestra, tomar 11 mL de leche e introducirlos en el butirmetro

En este paso, el butirmetro se calienta considerablemente y los


productos que se forman tien la disolucin de color marrn. La grasa liberada en este proceso
ser separada posteriormente por centrifugacin.

Aadir 1 mL de alcohol amlico al butirmetro y cerrarlo. Agitar bien la mezcla.

Centrifugar los butirmetros


Los butirmetros se introducen en la centrifugadora y se centrifugan durante unos cinco minutos.

Lectura del resultado

En la escala del butirmetro se puede leer el contenido en grasa de la leche como contenido de
masa en tanto por ciento (en la imagen 1,9%).
PUBLICADO POR LABORATORISTA QUIMICO EN 8:34

1 COMMENT:
Vanesa valdez aliaga said...
que defectos podemos encontrar en la columna
27 DE NOVIEMBRE DE 2013, 18:15

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