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ALUMNOS

SOLS OLIVAS KRISTEL


VALLADARES LEN JONET
RUIZ ALVA ROSMERY
MARTEL ROMN LESLY

FACTORES QUE ALTERAN LA


ACTIVIDAD CATALTICA DE
LAS ENZIMAS
LABORATORIO DE BIOQUMICA

DOCENTE
SOLEDAD LLAEZ BUSTAMANTE

INTRODUCCIN
Las enzimas son protenas biocatalizadoras, sensibles de modificar su actividad por la alteracin
de las condiciones de su medio de accin ya que actan solo bajo condiciones definidas de pH,
temperatura, concentracin de sustratos, cofactores, etc. Sobre los cofactores hay que recordar
que las enzimas para su actividad requieren de sustancias no proteicas que pueden ser de
naturaleza orgnica (coenzimas) o inorgnicas (minerales) los que cumplen funciones especficas
como la de coordinar entre el centro activo de la enzima con el sustrato antes de la
transformacin de este a producto. Hay medicamentos que actan como competidores de las
vitaminas las que son coenzimas y por tanto bloquean la accin de las enzimas a lo que es ms
inhiben la sntesis de las enzimas especficos, por ejemplo el Metrotexato (MTX), empleado para
el tratamiento de la leucemia y artritis reumatoide que libera al folato de la enzima hidrofolato
reductasa.

OBJETIVOS
Demostrar el efecto de los factores: Concentracin de sustrato, concentracin de enzima, pH y
temperatura sobre la actividad enzimtica de la Amilasa salival sobre el almidn.

MATERIALES Y REACTIVOS

PIPETA

BALANZA

GRADILLA
MATERIALES:

REACTIVOS:
-

Solucin de almidn al 1%
Enzima: Solucin de alfa amilasa salival dializada 1%
Solucin buffer fosfato 0.1M a pH 4.6, 6.8 y 9.0
Solucin Yodo yodurada (Lugol)
Solucin cloruro de sodio 0.2%

TERMMETRO

VARILLA

COCINA

PISETA

FIOLA

POTENCIMETRO DE pH

VASO PRECIPITADO

TUBO DE
ENSAYO

PROCEDIMIENTO

COLECCIN DE SALIVA: El alumno donante no debe haber ingerido alimento unas 2


horas antes como mnimo. Previamente se tiene que enjuagar la boca con agua, luego
manteniendo la boca cerrada por 5-7 minutos esperar que su boca se llene de saliva.
Luego en un vaso dejara fluir por gravedad la saliva para evitar que se forme espuma.

PREPARACIN DE LA SOLUCIN DE AMILASA SALIVAL AL 1%: Previamente la saliva


recolectada se debe de filtrar y luego medir 1ml y diluirlo con agua destilada en una fiola
de 100ml.

Seguir las indicaciones de las siguientes tablas:


A. BATERA N 1
TUBO

REACTIVO
SOL. ALMIDN 1%
BUFFER pH 4.6

1
-

1
-

1
-

1
5

1
-

1.5
-

1
-

1
-

1
-

BUFFER pH 6.8
BUFFER pH 9.0
SOL. NaCl
AGUA DESTILADA

5
1.4
2.6

5
1.4
2.0

5
1.4
2.0

1.4
2.0

5
1.4
2.4

5
1.4
1.5

5
3.4

5
1.4
2.0

5
1.4
2.0

HOMOGENIZAR CADA TUBO:


o
o
o

Colocar en bao mara a 37C los tubos del 1 al 7 por 5 minutos.


El tubo 8 llevar a 0C por 5 minutos.
Llevar el tubo 9 a bao mara de 100C por 5 minutos.

Cumplidos los 5 minutos, agregar la solucin enzimtica, como se indica en el siguiente


cuadro:
TUBO
SOL. ENZIMTICA

1
0.0

2
0.6

3
0.6

4
0.6

5
0.2

6
0.6

7
0.6

8
0.6

9
0.6

MEZCLAR BIEN CADA TUBO SIN RETIRARLO DEL MEDIO EN QUE SE ENCUENTRAN
Continuar la incubacin, considerando un control de 20 minutos, desde el momento que
el preparado enzimtico fue agregado a cada tubo.
Cumplido el tiempo exacto de 20 minutos, medir 0.5ml de cada tubo y aadir a la
BATERA N2 tal como se indica en la siguiente tabla.
B. BATERA N2
TUBO
REACTIVO
SOL. HCl 0.5N (ml)
SOL. LUGOL (ml)
INCUBADO (ml)

2.5
5.0
0.5

2.5
5.0
0.5

2.5
5.0
0.5

2.5
5.0
0.5

2.5
5.0
0.5

2.5
5.0
0.5

2.5
5.0
0.5

2.5
5.0
0.5

2.5
5.0
0.5

MEZCLAR Y OBSERVAR

RESULTADOS E INTERPRETACION:

1. Influencia de la T sobre la actividad de la amilasa salival.


Tubo 8:
En el bao de hielo la coloracin que tiene la -amilasa demuestra que no ha
sido hidrolizada por la -amilasa a una velocidad adecuada ya que al formar
micelas hidratadas y con la presencia del reactivo de lugol la solucin tiene una
coloracin azul, con la amilopectina sucede algo similar, lo anterior indica que la
enzima -amilasa acta de forma lenta sobre la -amilosa porque los lmites de
actividad para la mayor parte de las enzimas tiene lugar a temperaturas mayores
a 10 C.
Tubo 2:
Se observa que a una temperatura de 37C es evidente la hidrlisis de la amilasa sobre la - amilosa y de la -amilasa sobre la amilopectina la coloracin
indica formacin de azucares ms sencillos porque la temperatura ptima para
las enzimas en el cuerpo se hallan alrededor de 37-40C.
Tubo 9:
Cuando se somete la amilasa a ebullicin, esta se desnaturaliza, es decir que
se destruyen las fuerzas de unin de la enzima y ya no puede actuar sobre el
almidn, porque ha sobrepasado el lmite superior de la temperatura que es de
50C por esta razn hay una coloracin azul que indica que la -amilosa est
formando micelas hidratadas y que la amilopectina est formando una solucin
coloidal con el agua.

2. Influencia del pH en la actividad enzimtica.

Se deduce que el pH ptimo es 7 (Tubo 2), porque la hidrlisis es ms rpida


cuando el pH del medio es cercano al del agua ya que la concentracin de H
permite que ocurra la catlisis a una velocidad adecuada. Cuando el pH del
medio es acido (Tubo 4) la -amilasa no acta de forma eficaz sobre el almidn,
al haber un exceso de iones de hidrogeno, las enzimas los unen a sus molculas
modificando sus centros activos. Cuando el medio es bsico (Tubo 3) la enzima
acta sobre el sustrato pero la velocidad no es la mxima en el caso del pH 9,
esto se debe a que la diferencia del pH con respecto al del tubo 2 no es muy
grande.
3. Efecto de la concentracin de sustrato.
La prueba dio positiva en todas las muestras pero lo nico que vario fue el
tiempo que tomo la amilasa salival en reaccionar con el almidn a medida que
aumenta la concentracin del almidn aumenta el tiempo de la reaccin o
disminuye la velocidad de reaccin de la enzima.
4. Especificidad de la enzima
En este caso (Tubo 1) se comprueba que la -amilasa ( (1-4)-glucan-4glucanohidrolasa) acta sobre la -amilosa en donde hidroliza al azar los
enlaces (1-4) formando una mescla de de glucosa y maltosa libres. Tambin
ocurre que la -amilasa ( (1-4)-glucan-maltohidrolasa) libera unidades
sucesivas de de maltosa comenzando por el extremo no reductor para rendir
maltosa cuantitativamente. Por su parte la amilopectina es atacada por la y
amilasa formando dextrinas.
En los tubos 1 y la coloracin azul indican que hay actividad enzimtica porque
la amilasa es una enzima que interviene en la desnaturalizacin de los
almidones, por lo tanto no acta cuando est ausente, o se encuentra inactiva.

CONCLUSIN

CUESTIONARIO