No incio do sculo passado, Gaspar Vianna, pesquisador pioneiro em doena de

Chagas e leishmaniose, relatou a eficcia do complexo de antimnio trivalente

(Sb(III)), trtaro emtico, no tratamento da leishmaniose muco-cutnea1. Da
mesma forma, o trtaro emtico foi o primeiro medicamento empregado com xito
no tratamento da esquistossomose2,3. Entretanto, o uso clnico deste composto foi
interrompido, por causa de seus severos efeitos colaterais e da descoberta de
novos frmacos menos txicos.
A partir da dcada de 1940, complexos de antimnio pentavalente (Sb(V))
comearam a ser utilizados na teraputica das leishmanioses 4. Os principais
antimoniais atualmente em uso so complexos de Sb(V) com o N-metil-glucamina
(antimoniato de meglumina) e com o gluconato de sdio (estibogluconato de
sdio). At hoje, nem a estrutura desses compostos, nem seu mecanismo de ao
foram completamente elucidados. Foi sugerido que o Sb(V) seria uma pr-droga,
sendo reduzido no organismo hospedeiro a Sb(III) que seria a forma ativa e
txica5. Recentemente, foi mostrado que os tiis podem estar envolvidos nesse
processo de reduo6. Embora os antimoniais pentavalentes continuem sendo os
medicamentos de primeira escolha no tratamento de todas as formas de
leishmanioses, o seu uso clnico apresenta vrias limitaes. Esses compostos
devem ser administrados por via parenteral (injeo intravenosa ou intramuscular),
diariamente, num perodo de 20-40 dias. Nesse contexto, efeitos colaterais so
freqentes4. O aparecimento de resistncia representa um outro problema srio no
tratamento das leishmanioses4 e um risco potencial na teraputica da
esquistossomose7. Em face dessas limitaes, a Organizao Mundial da Sade
recomenda, com incentivo inclusive a outras entidades afins como a TDR ("Special
Programme for Research and Training in Tropical Diseases"), a pesquisa de novos
medicamentos8.
Essencialmente duas estratgias diferentes esto atualmente disponveis para o
desenvolvimento de novos medicamentos. Uma estratgia envolve o
planejamento/sntese de novas substncias ativas ou de frmacos j conhecidos
com modificaes qumicas; a outra envolve a associao reversvel de frmacos j
em uso a um sistema transportador, visando direcionar o frmaco para a clula
alvo e evitar os locais indesejveis onde o frmaco exerce toxicidade. Esta ltima
estratgia, alm de prolongar a validade de proteo por patente no uso do
frmaco, oferece um ganho de tempo na fase de desenvolvimento do produto
porque usa um frmaco j caracterizado do ponto de vista farmacolgico. Entre os
sistemas transportadores de medicamentos atualmente disponveis, os lipossomas
ocupam uma posio de destaque, tanto para terapia das leishmanioses quanto da
esquistossomose.
Como ilustrado na Figura 1, os lipossomas so vesculas esfricas, constitudas de
uma ou vrias bicamadas concntricas de lipdeos, que isolam um ou vrios
compartimentos aquosos internos do meio externo9. Uma grande vantagem dos
lipossomas, com relao a outros sistemas transportadores de medicamento, a
sua elevada biocompatibilidade, especialmente quando estes so formados de
lipdeos pertencentes s famlias de lipdeos naturais9. Alm disso, so sistemas
altamente versteis, cujo tamanho, lamelaridade, superfcie, composio lipdica,
volume e composio do meio aquoso interno podem ser manipulados em funo
dos requisitos farmacuticos e farmacolgicos.

A capacidade dessas vesculas artificiais oferecerem barreiras para a difuso de

solutos foi demonstrada pela primeira vez por Bangham, em 1965 10. O primeiro
resultado espectacular na rea biomdica foi obtido, na dcada de 1970, com os
antimoniais. Um aumento de at 700 vezes na atividade leishmanicida desses
compostos foi relatado aps administrao na forma encapsulada em lipossomas 11.
Apesar da necessidade de aprimorar a quimioterapia antimonial atual e dos
resultados extremamente promissores obtidos com os lipossomas em modelos
experimentais de leishmaniose visceral, at hoje, nenhuma composio
farmacutica associando lipossomas e antimoniais chegou a ser comercializada.
Este fato pode ser atribudo, pelo menos em parte, s dificuldades tecnolgicas
inerentes obteno de formulao estvel de compostos hidrossolveis
encapsulado em lipossomas.
Nesse artigo, apresentaremos propriedades bsicas dos lipossomas, de interesse
para o desenvolvimento de frmaco na forma encapsulada em lipossomas.
Mostraremos os aspectos farmacolgicos mais relevantes no uso dos lipossomas
"convencionais" para a teraputica das leishmanioses. Apresentaremos os
progressos tecnolgicos alcanados, nos ltimos anos, na preparao dos
antimoniais pentavalentes na forma encapsulada em lipossomas. Por outro lado,
mostraremos que lipossomas "furtivos" contendo antimoniais trivalentes so
promissores para o tratamento da esquistossomose mansoni.

PROPRIEDADES BSICAS DOS LIPOSSOMAS

Composio e propriedades fsico-qumicas

Os lipossomas, classicamente, so preparados a partir do glicerofosfolipdeo,

fosfatidilcolina. De uma forma mais geral, lipossomas podem ser obtidos a partir de
qualquer substncia anfiflica formadora de fase lamelar9. A Tabela 1 apresenta
exemplos de lipdeos utilizados na preparao de lipossomas. Tipicamente, o
dimetro mdio dos lipossomas varia de 20 a 5000 nm. Quando formada de lipdeo
de temperatura de transio de fase (Tt) menor que a temperatura do meio
estudado, a membrana dos lipossomas se encontra na fase cristal-lquido ou
"fluida" e os lipdeos e suas cadeias de hidrocarboneto tm grande liberdade de
movimento (Figura 2). Exemplos desse comportamento podem ser vistos com
lipossomas formados de dimiristoilfosfatidilcolina (Tt= 23 C) ou de
dioleilfosfatidilcolina (Tt < 0 C). Quando formada de lipdeo de Tt maior que a
temperatura do meio estudado, a membrana dos lipossomas se encontra na fase
gel ou "rgida" e os lipdeos tm movimento restrito e suas cadeias de
hidrocarboneto apresentam conformao "toda-trans" (Figura 2). Vesculas
formadas de diestearoilfosfatidilcolina (Tt = 55 C) representam um exemplo deste
tipo de lipossomas. Um componente lipdico importante, que entra muitas vezes na
composio dos lipossomas, o colesterol. Este aumenta a rigidez das membranas
no estado "cristal-lquido" e reduz a rigidez e os defeitos estruturais das
membranas no estado "gel" (Figura 2). Lipdeos apresentando carga efetiva
negativa ou positiva podem tambm ser includos na composio da membrana o
que pode influenciar a taxa de incorporao de substncias, impedir a
agregao/fuso das vesculas lipdicas e modular o seu destino no organismo.

Capacidade de encapsulao de substncia

Substncias farmacologicamente ativas podem ser incorporadas seja no
compartimento aquoso interno (substncias hidrossolveis), seja nas membranas
dos lipossomas (substncias lipoflicas ou anfiflicas).
A taxa de encapsulao de uma substncia em lipossomas e a relao substncia
encapsulada/lipdeo so dois parmetros importantes que devem ser considerados

na escolha do mtodo de preparao, sobretudo quando se procura desenvolver

uma composio farmacutica. Esses parmetros podem ser otimizados atravs da
escolha do mtodo de encapsulao e da manipulao da composio lipdica da
membrana. A taxa de encapsulao dever ser maximizada, pois inversamente
relacionada quantidade de substncia no encapsulada que perdida na maioria
das vezes. A relao frmaco/lipdeo dever tambm ser maximizada, visto que
determina a quantidade de lipdeo a ser administrada ao paciente. Assim, quanto
menor for a quantidade de lipdeo veiculada, menor sero os riscos de efeitos
colaterais associados aos mesmos.
Teoricamente, taxas de encapsulao prximas de 100% podem ser obtidas com
substncias lipoflicas incorporadas na membrana dos lipossomas. o caso da
anfotericina B que, no produto farmacutico AmBisome, associada a lipossomas
pequenos (45-80 nm de dimetro) formados de fosfatidilcolina hidrogenada,
colesterol e de diestearoilfosfatidilglicerol (relao molar 2:1:0,8 e relao
frmaco/lipdeo = 1/10). Vale ressaltar que a capacidade de substncias lipoflicas
serem incorporadas na membrana de lipossomas no uma regra geral; no
processo de encapsulao, deve ser verificado se a substncia est efetivamente
incorporada na membrana e no simplesmente adsorvida na sua superfcie ou autoassociada na forma de microcristais em suspenso com os lipossomas. No caso das
substncias hidrossolveis, como os antimoniais pentavalentes, teoricamente
impossvel atingir nveis de encapsulao de 100%, por causa da necessria coexistncia dos compartimentos aquosos interno e externo.
Fatores determinantes na cintica de liberao da substncia encapsulada
Lipossomas, contendo uma substncia encapsulada no seu compartimento aquoso
interno, no se encontram em equilbrio termodinmico, quando so resuspendidos
em meio aquoso sem a substncia. A evoluo do estado desse sistema levar
necessariamente liberao da substncia para o meio externo at que se atinja
um novo equilbrio.
No caso das substncias incorporadas nas membranas dos lipossomas, a
quantidade de substncia liberada depender do coeficiente de partio da
substncia entre a membrana e a fase aquosa, assim como dos componentes desta
fase.
No caso das substncias incorporadas no compartimento aquoso, a criao de um
gradiente de concentrao da substncia atravs da membrana faz com que esta
atue como barreira, limitando a velocidade de difuso das substncias para o meio
externo. Este sistema evoluir espontaneamente para o equilbrio termodinmico,
ou seja, para a igualdade das concentraes interna e externa de substncia.
Nesse contexto, torna-se importante poder prever a cintica de liberao da
substncia encapsulada e conhecer os parmetros fsico-qumicos que vo
influenci-la. Descreveremos abaixo um modelo simples que nos permite ter acesso
a essas informaes.
O fluxo de substncia atravs da membrana (JS = nmero de mols de substncia
que atravessa a membrana por unidade de tempo e unidade de rea da membrana)
depender da concentrao da substncia no compartimento aquoso interno (Ci) e
do coeficiente de permeabilidade da substncia atravs da membrana (PS), de
acordo com a lei de difuso simples:

No caso de lipossomas unilamelares de distribuio de tamanho homogneo, de

volume e de rea internas Vi eSi, respectivamente, o fluxo JS tem a seguinte
expresso:

onde n o nmero de mols de substncia no compartimento interno.

Podemos deduzir:

onde Ci a concentrao de substncia no compartimento interno.

Podemos tambm escrever:

onde Ri o raio interno mdio dos lipossomas.

A partir das Equaes 1 e 4, podemos deduzir a seguinte relao:

que, aps integrao, leva seguinte relao:

onde Cio a concentrao interna de substncia no tempo zero.

A Equao 6 mostra que a cintica de liberao da substncia, por mecanismo de
difuso simples, a partir de lipossomas de distribuio de tamanho homogneo,
monoexponencial e determinada pelo coeficiente de permeabilidade da substncia e
pelo tamanho dos lipossomas. Quanto menor for o coeficiente de permeabilidade da
substncia ou quanto maior for o tamanho dos lipossomas, mais lenta ser a
liberao da substncia dos lipossomas.
Vale ressaltar que o coeficiente de permeabilidade, PS, depende do coeficiente de
partio da substncia entre a membrana e a fase aquosa (k = concentrao na
membrana/concentrao na fase aquosa), da constante de difuso da substncia na
membrana (DS) e da espessura da membrana (x), de acordo com a expresso:

No caso das molculas esfricas, DS depender do raio molecular (rm) e da

viscosidade da membrana (), de acordo com a relao de Stockes-Einstein:

onde N o nmero de Avogadro, R a constante dos gases perfeitos e T a

temperatura absoluta.

Podemos deduzir que substncias de grande tamanho (DS pequeno) e elevada

polaridade (k pequeno) sero retidas com maior eficincia no compartimento
aquoso interno dos lipossomas que as substncias de pequeno tamanho e de baixa
polaridade, respectivamente. Alm disso, como a constante de difuso da
substncia inversamente proporcional viscosidade da membrana, podemos
prever que membranas na fase gel retero a substncia encapsulada com maior
eficincia que membranas na fase cristal-lquido. Por exemplo, membranas
constitudas de diestearoilfosfatidilcolina mostraram-se, a 37 C, aproximadamente
6 vezes menos permeveis carboxifluorescena que membranas constitudas de
dimiristoilfosfatidilcolina12.
A presso osmtica do meio interno dos lipossomas um outro fator importante
que vai influenciar a liberao do princpio ativo encapsulado. Como as bicamadas
lipdicas so muito permeveis gua, a existncia de uma diferena de presso
osmtica entre os meios interno e externo induzir um movimento de gua por
osmose atravs da membrana. Portanto, deve-se evitar preparar lipossomas com
presso osmtica interna superior externa, pois isto provoca a entrada de gua
nos lipossomas, podendo induzir um choque osmtico com conseqente liberao
da substncia encapsulada.
O armazenamento dos lipossomas na forma de suspenso aquosa muitas vezes
incompatvel com a estabilidade requerida para os produtos farmacuticos (de pelo
menos um ano), mesmo se a substncia encapsulada apresenta um baixo
coeficiente de permeabilidade ou se a preparao mantida na forma de sedimento
com pequeno volume externo. Assim, outras formas de armazenamento devem ser
procuradas para os produtos farmacuticos base de lipossomas. O
armazenamento na forma liofilizada representa uma alternativa vivel, entretanto,
deve ser includo na formulao um agente crioprotetor para evitar a fuso das
membranas desidratadas e o conseqente vazamento da substncia encapsulada
no momento da reidratao13.
Quando administrados em organismos vivos, os lipossomas interagem, no primeiro
momento, com os componentes dos fluidos biolgicos, o que pode alterar a
permeabilidade de sua membrana e a velocidade de liberao da substncia
encapsulada. A Figura 3 ilustra as interaes dos lipossomas com dois fluidos
biolgicos importantes: os sais biliares e o soro. Aps administrao dos lipossomas
por via oral, os sais biliares se incorporam na sua membrana, tendendo induzir a
transio da fase lamelar para a fase micelar. Nestas condies, os lipossomas
"fluidos", que apresentam membrana na fase cristal-lquido, sero desestabilizados.
Apenas lipossomas com membrana na fase gel parecem resistir parcialmente
ao dos sais biliares14. Aps administrao dos lipossomas por via endovenosa,
estes interagem com as lipoprotenas plasmticas. Lipdeos podem ser transferidos
dos lipossomas para as lipoprotenas, enquanto componentes das lipoprotenas
(como a apolipoprotena) podem ser incorporados na membrana dos lipossomas.
Nessas condies, lipossomas "fluidos" mantero sua integridade apenas se estes
contiverem colesterol na proporo de pelo menos 30% do total de lipdeos. Por
outro lado, lipossomas com membrana na fase gel ficam mais refratrios s trocas
com as lipoprotenas e, portanto, mantm sua elevada capacidade de reteno.

Interao lipossomas/clulas:
substncia encapsulada

influncia

na

biodisponibilidade

da

Como visto anteriormente, os lipossomas so capazes de reterem princpios ativos

encapsulados e, portanto, de proteg-los in vivo de uma eliminao ou degradao
rpida. Suas propriedades de liberao lenta levam reduo da concentrao de
princpio ativo na forma livre, e prolongao de sua presena no organismo. Esse
aumento na biodisponibilidade do princpio ativo pode levar potenciao da sua
ao biolgica, assim como reduo dos seus efeitos colaterais.
Enquanto a liberao da substncia encapsulada em condio de armazenamento
passiva e espontnea, sua liberao in vivo a partir de lipossomas estveis ser
mediada essencialmente por clulas com atividade endocitria. Nesse contexto, a
manipulao das caractersticas de superfcie dos lipossomas representa um dos
meios atualmente disponveis para controlar sua interao com as clulas e a
velocidade de liberao da substncia nos organismos vivos.
Como ilustrado na Figura 4, os lipossomas convencionais (formados de
fosfatidilcolina ou de surfactantes no-inicos e de colesterol), quando
administrados por via endovenosa, so naturalmente capturados pelos macrfagos
do sistema mononuclear fagocitrio, principalmente do fgado, do bao e da medula
ssea. Portanto, a administrao de frmacos na forma encapsulada nesses
lipossomas resulta no aumento de sua concentrao nesses rgos, assim como na
reduo da concentrao em rgos apresentando capilares contnuos. A captura
celular dos lipossomas favorecida pelo processo de opsonizao, que ocorre assim
que os lipossomas entram em contato com os componentes do sangue. Depois da
fagocitose, os lipossomas so degradados pelas fosfolipases lisossomais e a

substncia liberada nos fagolisossomas, podendo se difundir para o citossol ou ser

excretada para o meio extracelular. A velocidade de liberao do princpio ativo
pode ser controlada pela manipulao tanto da composio da membrana
(influenciando a velocidade de degradao dos lipossomas), quanto do tamanho
dos lipossomas (influenciando a eficincia de captura pelos macrfagos). Assim,
lipossomas pequenos sero capturados com menor eficincia que lipossomas
grandes, permanecero mais tempo na circulao sangunea e apresentaro uma
liberao mais prolongada.

A descoberta de que o destino in vivo dos lipossomas poderia ser controlado

atravs da manipulao de suas caractersticas de superfcie constituiu um dos
principais avanos da dcada de 199015. Foi observado que a incorporao na
membrana dos lipossomas de lipdeos acoplados a polmeros de etilenoglicol altera
suas interaes com o ambiente, sendo o efeito mais importante o impedimento da
captura pelos macrfagos e a prolongao de sua presena no organismo. Em
conseqncia, este tipo de lipossomas, chamado de "lipossomas furtivos", promove
uma presena prolongada da substncia no organismo, alm de distribu-la para
outros rgos, alm daqueles do sistema mononuclear fagocitrio. Esses
lipossomas podem ainda ser direcionados para determinados tipos celulares, via
receptores ou ligantes especficos, atravs do acoplamento de anticorpo ou ligante
na extremidade do polmero.
Uma das maiores desvantagens da terapia tpica a baixa velocidade de
penetrao dos frmacos atravs da pele. A barreira difusional da maioria das
substncias o estrato crneo, que consiste de cornecitos embebidos em uma
matriz lipdica. A matriz lipdica do estrato crneo formada de uma bicamada
lipdica composta de colesterol, cidos graxos e ceramidas. O uso de lipossomas
como promotor de absoro cutnea tem sido estudado intensivamente16.
Numerosos estudos realizados com uma grande variedade de frmacos e
lipossomas de diferentes composies mostraram que a aplicao do frmaco na
forma encapsulada em lipossomas permite modular sua absoro na epiderme e na
derme, assim como sua absoro sistmica.

APLICAES
ANTIMONIAL

DOS

LIPOSSOMAS

NA

QUIMIOTERAPIA

As doenas alvos
A esquistossomose uma doena parasitria crnica causada por espcies do
gnero Schistosoma. Estima-se que no Brasil, 8 a 10 milhes de indivduos estejam
infectados e que 30 milhes corram o risco de contrair a doena 17. A infeco
causada pelas cercrias, liberadas pelo hospedeiro intermedirio (molusco), que
penetram atravs da pele do homem quando este entra em contato com a gua
contaminada17. Os parasitas so encontrados nos pulmes, na forma de
esquistossmulos, um dia aps a penetrao das cercrias. Em nove dias, os
esquistossmulos vo para o fgado, onde se alimentam e se desenvolvem,
alcanando a vida adulta. Os vermes adultos atingem as veias mesentricas,
principalmente a inferior, no caso do S. mansoni.
As leishmanioses so doenas parasitrias causadas por protozorios flagelados
pertencentes Ordem Kinetoplastida, Famlia Trypanosomatidae e ao
Gnero Leishmania. Estas atingem cerca de 12 milhes de pessoas no mundo18. No
Brasil, dados recentes relatam a ocorrncia de cerca de 30.000 novos casos anuais
da doena19. As leishmanioses so transmitidas aos hospedeiros vertebrados pela
picada de um inseto que regurgita o parasita na forma promastigota. Esses
parasitas so fagocitados por macrfagos, no interior dos quais estes se
transformam em amastigotas. Os amastigotas multiplicam-se livremente no
compartimento cido dos fagolisossomas e escapam dos sistemas de defesa do
hospedeiro. A Leishmania corresponde a um complexo de vrias espcies diferentes
que causam vrios tipos de manifestaes clnicas, que incluem formas cutnea,
mucocutnea e visceral. O co aparece como hospedeiro vertebrado nas formas
cutnea e visceral e, particularmente no caso da leishmaniose visceral, tem papel
importante como reservatrio e fonte de infeco da doena em rea endmica. A
leishmaniose visceral apresenta ndice de letalidade de 100% nos casos no
tratados clinicamente4.
Conhecimentos sobre as caractersticas da doena alvo e, principalmente, a
localizao do parasita, so essenciais na escolha do tipo de lipossoma a ser
empregado. Como mostraremos em seguida, a localizao daLeishmania nos
rgos do sistema mononuclear fagocitrio torna os lipossomas "convencionais"
sistemas ideais para concentrar o frmaco especificamente no local de infeco. Por
outro lado, a localizao do Schistosoma mansoni no sistema porta e seu modo de
alimentao com os componentes do sangue sugere que os lipossomas "furtivos"
so mais adequados para direcionar o frmaco para o parasita.
Aspectos farmacolgicos no uso dos lipossomas no tratamento das
leishmanioses
Em 1977-78, grupos de pesquisa ingls e americano propuseram o uso de
lipossomas convencionais contendo drogas leishmanicidas como uma nova
abordagem para o tratamento da leishmaniose visceral 11,20. Esta proposta foi
baseada na observao de que antimoniais pentavalentes encapsulados em
lipossomas foram 200-700 vezes mais eficazes que na forma livre, em modelo
experimental de leishmaniose visceral (hamsters ou camundongos infectados
por Leishmania donovani). O aumento espectacular de eficcia dessas drogas foi
atribudo ao destino natural dos lipossomas quando administrados por via
endovenosa: o fato de eles serem captados pelos mesmos rgos (o fgado, o bao

e a medula ssea) e pelas mesmas clulas (os macrfagos teciduais) nas quais se
localiza o parasita. Assim, os lipossomas convencionais apresentam-se como
sistema ideal para direcionar drogas leishmanicidas para o local de infeco.
Estudos de biodistribuio/farmacocintica do antimnio em camundongos e ces
mostraram que a forma lipossomal promove nveis de antimnio muito mais
elevados e prolongados no fgado e no bao dos animais quando comparado
forma livre21,22. Essa diferena de biodistribuio entre as formas livre e
encapsulada ilustrada, na Tabela 2, a partir de dados obtidos em ces.

Vale ressaltar que o tamanho dos lipossomas um parmetro importante, pois tem
influncia tanto na taxa de eliminao do parasita 23, quanto na concentrao de
antimnio ao nvel da medula ssea22. Portanto, lipossomas pequenos (dimetro <
200 nm) parecem ter acesso facilitado medula ssea, o que de interesse pois
devem possibilitar a eliminao do parasita que se encontra nesse tecido.
Uma formulao da anfotericina B base de lipossomas (AmBisome ), depois de
testes clnicos bem sucedidos, chegou a ser aprovada pela FDA ("Food and Drug
Administration") para o tratamento do calazar24. Os principais impactos da
encapsulao desse frmaco em lipossomas foram o aumento do seu ndice
teraputico e o prolongamento de sua ao. Os benefcios clnicos da terapia
baseada em lipossomas, quando comparada quimioterapia convencional, so a
reduo do nmero de injees, da durao da terapia e dos efeitos colaterais.
Entretanto, at hoje, o elevado custo comercial do AmBisome limitou o seu uso no
Brasil.
O desenvolvimento de formulaes tpicas seria altamente desejvel para o
tratamento da leishmaniose cutnea. Diversos fatores apontam para o
desenvolvimento de formulaes baseadas em antimoniais encapsulados em
lipossomas: a capacidade comprovada dos lipossomas de promoverem a absoro
cutnea de frmacos e a eficcia do antimoniato de meglumina intralesional na
leishmaniose cutnea25.
Aspectos tecnolgicos na preparao dos antimoniais pentavalentes na
forma encapsulada em lipossomas
O primeiro mtodo proposto para a encapsulao dos antimoniais pentavalentes em
lipossomas foi o mtodo de "hidratao do filme"26. Como ilustrado na Figura 5,
este consiste na hidratao de um filme lipdico com uma soluo aquosa do
antimonial, levando formao de lipossomas multilamelares chamados de MLVs

("multilamellar vesicles"). As maiores taxas de encapsulao e de reteno foram

obtidas com lipossomas constitudos de fosfolipdeo de alta temperatura de
transio de fase (dipalmitoilfosfatidilcolina, Tt = 42 C), de colesterol e de
fosfolipdeo carregado negativamente.

Um outro mtodo avaliado foi o mtodo de "evaporao em fase reversa" 27 que,

como descrito na Figura 6, leva formao de lipossomas oligolamelares de tipo
REVs ("reverse phase evaporation vesicles"). Esse mtodo permite alcanar
maiores taxas de encapsulao que o mtodo de hidratao do filme (Tabela 3).
Entretanto, lipossomas de tipo REVs se mostraram menos estveis que aqueles do
tipo MLVs, sendo que 25-50% de antimnio foi liberado da preparao aps uma
semana de incubao em 25 C. Por outro lado, o uso de solvente orgnico na
preparao desses lipossomas representa um inconveniente, considerando que
sempre permanecem resduos potencialmente txicos na formulao final.

Um outro inconveniente dos dois mtodos apresentados anteriormente que as

preparaes resultantes s podem ser armazenadas na forma de suspenso
aquosa, o que limita consideravelmente o seu potencial como produto
farmacutico.
Recentemente, nosso grupo avaliou o mtodo de "desidratao-reidratao"
desenvolvido por Kirby e Gregoriadis28 para a encapsulao do antimoniato de
meglumina em lipossomas formados de diestearoilfosfatidilcolina, colesterol e
dicetilfosfato29. Como mostrado na Figura 7, esse mtodo consiste em misturar
uma suspenso de lipossomas pequenos vazios (preparados em gua) com uma
soluo de antimoniato de meglumina e em liofilizar a mistura. A reidratao dessa
preparao em condies especficas de temperatura (>Tt) e de concentrao
lipdica leva obteno de lipossomas com elevada taxa de encapsulao (Tabela
3), chamados de DRVs ("dehydration rehydration vesicles"). Uma alternativa a esse
mtodo proposta por nosso grupo29 consiste em liofilizar os lipossomas pequenos
vazios sem o antimonial e em reidratar o liofilizado, chamado de FDELs ("freezedried empty liposomes"), com a soluo de antimonial. Esse mtodo apresenta a
vantagem de no submeter o antimonial liofilizao, alm de permitir uma
elevada taxa de encapsulao (Tabela 3). Uma grande vantagem desses dois
ltimos mtodos com relao aos primeiros que a preparao pode ser
armazenada por tempo prolongado na forma liofilizada intermediria e reidratada
um pouco antes do uso. Vale ressaltar que a presena do lipdeo carregado
negativamente, dicetilfosfato, importante para a obteno de taxa de
encapsulao elevada do antimoniato de meglumina. Na sua ausncia, taxas de
encapsulao inferiores a 15% so obtidos30.

Os diversos tipos de lipossomas obtidos por esses diferentes mtodos apresentam

dimetro mdio elevado (400 - 5000 nm) e distribuio de tamanho heterognea.
Essa caracterstica representa um problema potencial, pois a administrao
endovenosa de lipossomas de tamanho grande (>1000 nm) pode levar obstruo
dos capilares pulmonares. Segundo Zadi e Gregoriadis, possvel obter suspenso
de lipossomas de tamanho reduzido e mais homogneo utilizando o mtodo de
desidratao-reidratao, mediante ao uso de um acar como agente
crioprotetor31. Como mostrado na Tabela 4, a utilizao de sacarose no processo de
preparao de lipossomas DRVs e FDELs permite a obteno de lipossomas de
tamanho reduzido. A presena desse acar resulta em reduo da taxa de
encapsulao do antimoniato de meglumina no caso dos lipossomas DRVs, mas no
dos lipossomas FDELs. Alm disso, como mostrado na Tabela 4, um aumento da
velocidade de liberao do antimonial observado nos lipossomas preparados com
sacarose. Esse aumento na velocidade de liberao poderia ser explicado pelo
aumento da presso osmtica do meio interno dos lipossomas, devido coencapsulao da sacarose.
Potencial dos lipossomas no tratamento da esquistossomose
Os primeiros estudos realizados com lipossomas convencionais administrados por
via subcutnea evidenciaram a capacidade dos lipossomas de potenciar e prolongar
o efeito profiltico das drogas esquistossomicidas, oxamniquine32, praziquantel33 e
trtaro emtico34. O efeito benfico dos lipossomas foi atribudo s suas
propriedades de liberao prolongada, resultando no aumento da biodisponibilidade
do princpio ativo. Foi tambm proposto que os lipossomas promoveriam, atravs
do direcionamento passivo para o fgado, uma maior concentrao do frmaco no
parasita durante o seu estgio final de diferenciao nesse mesmo tecido.

Recentemente, nosso grupo relatou a preparao de lipossomas de tamanho

calibrado (dimetro mdio = 110 nm), contendo trtaro emtico encapsulado na
relao antimnio/lipdeo 0,015 (m/m). Esses lipossomas foram obtidos por
filtrao de MLVs atravs de membranas de policarbonato de poro de 100 nm de
dimetro. Dois tipos diferentes de lipossomas foram avaliados: lipossomas
convencionais (LC) formados de diesteraroilfosfatidilcolina e de colesterol e
lipossomas
furtivos
(LF)
contendo,
alm
destes
lipdeos,
o
lipdeo
diestearoilfosfatidiletanolamina acoplado ao polietilenoglicol 2000. Estes lipossomas
mostraram uma elevada estabilidade no soro, com cintica de liberao
monoexponencial, de acordo com a lei de difuso simples, e uma meia-vida de
liberao de 9 dias.
Estes lipossomas foram avaliados em modelo experimental de esquistossomose
mansoni, em estgio tardio da doena 35. Camundongos SWISS com 35 dias de
infeco
pelo Schistosoma
mansoni receberam
trtaro
emtico
por
via
intraperitoneal em dose nica (10 mg Sb/kg), seja na forma livre ou na forma
encapsulada em lipossomas LC ou LF. Apenas o grupo tratado com LF mostrou
reduo significativa (55%) no nmero de vermes, quando comparado aos grupos
controles (grupo no tratado e grupo tratado com lipossomas vazios). A maior
eficcia dos LF, quando comparados aos LC, pode ser atribuda ao aumento da
biodisponibilidade do princpio ativo quando encapsulado em lipossomas furtivos,
assim como captura dos lipossomas de circulao prolongada pelos parasitas.
Quando submetidos a uma dose maior de antimnio (25 mg Sb/kg), todos
camundongos (12/12) que receberam o trtaro emtico na forma livre morreram,
enquanto aqueles que receberam a forma encapsulada em lipossomas
sobreviveram.
Conclui-se que os lipossomas furtivos reduzem a toxicidade aguda do trtaro
emtico e direcionam com eficcia a droga ao S. mansoni durante o curso da
infeco. Esse estudo estabeleceu, pela primeira vez, o efeito benfico dos vetores
furtivos no tratamento da esquistossomose mansoni. Em uma outra abordagem,
espera-se que a captura dos lipossomas pelo parasita possa ser aumentada atravs
do acoplamento na superfcie das vesculas de anticorpo ou ligante especifico para
receptor/ligante do parasita.

CONCLUSES
A quimioterapia antimonial convencional sofre vrias limitaes, as mais srias
sendo a necessidade de injees dirias, os seus efeitos colaterais e o aparecimento
de resistncia. As propriedades farmacolgicas dos lipossomas "convencionais"
fazem deste sistema um transportador ideal para direcionar medicamentos
leishmanicidas para os stios de infeco e aumentar sua eficcia no tratamento da
leishmaniose visceral. No caso dos antimoniais pentavalentes, nveis de atividade
espetaculares foram alcanados em modelo experimental de leishmaniose visceral,
aps sua administrao na forma encapsulada em lipossomas. Entretanto, a
obteno de composio aceitvel, do ponto de vista farmacolgico e farmacutico,
continua sendo investigada. A literatura mostra que a taxa de encapsulao do
antimonial pentavalente em lipossomas pode ser otimizada atravs da seleo do
mtodo de preparao e da composio lipdica da membrana. Por outro lado, a
composio lipdica, o mtodo de preparao e a presso osmtica do
compartimento interno so fatores determinantes para a obteno de uma
composio de lipossomas estvel. Alm disso, o tamanho das vesculas parece ser
importante para atingir os locais de infeco menos acessveis.

Recentemente, foi mostrado que a encapsulao de um antimonial trivalente em

lipossomas reduz sua toxicidade aguda. Alm disso, lipossomas "furtivos", ao
contrrio dos lipossomas "convencionais", mostraram-se capazes de aumentar a
eficcia do antimonial trivalente em modelo experimental de esquistossomose
mansoni. Esses resultados mostram que os lipossomas representam tambm
sistemas de transporte promissores para os antimoniais trivalentes no tratamento
das leishmanioses e da esquistossomose.

AGRADECIMENTOS
Fundao de Amparo Pesquisa do Estado de Minas Gerais (FAPEMIG) e ao
Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico (CNPq) pela
concesso de auxlios e bolsas.

REFERNCIAS
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