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INTRODUCCION

El crecimiento de los microorganismos no se puede estudiar individualmente


debido a su tamao tan pequeo, por lo que es necesario recurrir a medios
nutritivos artificiales, donde se puedan desarrollar rpidamente y producir grandes
poblaciones.
En estas condiciones se pueden manipular y efectuar las investigaciones
deseadas. Muchas especies bacterianas son tan parecidas morfolgicamente que
es imposible diferenciarlas solo con el uso del microscopio; en este caso, para
identificar cada tipo de bacteria, se estudian sus caractersticas bioqumicas
sembrndolas en medios de cultivo especiales. As, algunos medios contienen un
producto

que

inhibe

el

crecimiento

de

la

mayora

de

las

especies

Los materiales nutritivos donde se desarrollan y multiplican los microorganismos


contienen los nutrientes necesarios para su crecimiento, y se denominan medios
de cultivo, cuyos componentes son muy variados.
La

eleccin

del

medio

se

basa

en

el

propsito

del

estudio.

Los medios de cultivo pueden ser sintticos, es decir de composicin qumica


conocida, o pueden ser complejos, en los cuales por lo menos hay un componente
de composicin desconocida.
En general, los medios son ricos en protenas no especficas, con el fin de
estimular el crecimiento de los microorganismos que se desean aislar. La mayor
parte de los microorganismos requieren un medio enriquecido o suplementado por
sustancias como sangre, suero, vitaminas, etc.

MARCO TEORICO
MEDIOS DE CULTIVO
Un medio de cultivo es un sustrato o una solucin de nutrientes que permite el
desarrollo de microorganismos. Los microorganismos son los seres ms
abundantes de la tierra, pueden vivir en condiciones extremas de pH, temperatura
y tensin de oxgeno, colonizando una amplia diversidad de nichos ecolgicos.
Entre los requerimientos ms importantes para su desarrollo estn el carbono, el
oxgeno, nitrgeno, dixido de carbono e hidrgeno. Muchas bacterias sin
embargo necesitan del aporte extra de factores de crecimiento especficos en
forma de suero, sangre y extracto de levadura entre otros.
CONDICIONES GENERALES PARA EL CULTIVO DE MICROORGANISMOS
DISPONIBILIDAD DE NUTRIENTES ADECUADOS
Un medio de cultivo adecuado para la investigacin microbiolgica ha de contener,
como mnimo, carbono, nitrgeno, azufre, fsforo y sales inorgnicas. En muchos
casos sern necesarias ciertas vitaminas y otras sustancias inductoras del
crecimiento.
Siempre han de estar presentes las sustancias adecuadas para ejercer de
donantes o captadores de electrones para las reacciones qumicas que tengan
lugar. Todas estas sustancias se suministraban originalmente en forma de
infusiones de carne, extractos de carne o extractos de levadura.
CONSISTENCIA ADECUADA DEL MEDIO
Partiendo de un medio lquido podemos modificar su consistencia aadiendo
productos como albmina, gelatina o agar, con lo que obtendramos medios en
estado semislido o slido. Los medios solidificados con gelatina tienen el gran
inconveniente de que muchos microorganismos no se desarrollan adecuadamente
a temperaturas inferiores al punto de fusin de este solidificante y de que otros
tienen la capacidad de licuarla.

ESTERILIDAD DEL MEDIO


Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estriles para evitar la
aparicin de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el
crecimiento microbiano normal del o de los especmenes inoculados en dichos
medios. El sistema clsico para esterilizar los medios de cultivo es el autoclave
CLASIFICACIN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
SEGN SU ORIGEN:
a) NATURALES: son los preparados a partir de sustancias naturales de origen
animal o vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones y cuya composicin
qumica no se conoce exactamente.
b) SINTTICOS: son los medios que contienen una composicin qumica definida
cualitativa y cuantitativamente. Se utilizan para obtener resultados reproducibles.
c) SEMISINTTICOS: son los sintticos a los que se les aaden factores de
crecimiento bajo una forma de un extracto orgnico complejo, como por ejemplo
extracto de levadura.
SEGN SU CONSISTENCIA
a) LQUIDOS: se denominan caldos y contienen los nutrientes en solucin acuosa.
b) SLIDOS: se preparan aadiendo un agar a un medio lquido (caldo) a razn
de 15g/litro. El agar es una sustancia inerte polisacrida (hidrato de carbono) que
se extrae de las algas. Como esta sustancia no es digerida por las bacterias no
constituye ningn elemento nutritivo. Este conjunto convenientemente esterilizado
puede ser vertido en placas de Petri o en tubos de ensayo y presentan la
posibilidad de aislar y diferenciar bacterias, "procesos que antes no eran posibles
en medio lquido".

c) SEMISLIDOS: contienen 7,5 g de agar /litro de caldo. Se utilizan para


determinar la motilidad de las especies en estudio. Actualmente se encuentran
disponibles comercialmente con el agregado de agar.
SEGN SU COMPOSICIN:
A causa de los requerimientos qumicos del mundo microbiano, a veces es
necesario agregar o eliminar componentes qumicos del medio.
a) COMUNES O UNIVERSALES: su finalidad es el crecimiento de la mayor parte
de los microorganismos poco existentes. Es el medio ms frecuentemente
utilizado para mantener colonias microbianas. Por ejemplo: agar comn o caldo
comn.
b) ENRIQUECIDOS: estn compuestos de un medio base como apoyo del
crecimiento al cual se le puede agregar un gran exceso de nutrientes como
suplementos nutritivos, por ejemplo: sangre, suero, lquido asctico, etc. Se utiliza
para microorganismos que tienen grandes exigencias nutricionales.
c) SELECTIVOS: son slidos en los que la selectividad se consigue alterando las
condiciones fsicas del medio o aadiendo o suprimiendo componentes qumicos
especficos con el fin de inhibir el crecimiento de especies qumicas cuyo
crecimiento no interesa. Este tipo de medio slo permite el crecimiento de un
grupo de microorganismos e inhibiendo el de otros. Se utiliza para seleccionar y
aislar microorganismos a partir de poblaciones mixtas. Por ejemplo Agar saladomanitol
Entre los factores selectivos que alteran las condiciones del medio tenemos:

Cambio de pH: por ejemplo agregando cido actico para favorecer el


crecimiento de Lactobacillus (pH final: 5,4 que es hostil para la mayora de
las especies que crecen entre 6,5 y 7,2). Los hongos crecen entre pH 4 y 6.

Cambio de temperatura: la mayora de las bacterias crece ptimamente


entre 20 C y 40 C. Los cultivos tpicos de S. Faecalis requieren 60 C de
temperatura y los de Listeria son capaces de desarrollarse y crecer a 4 C.

Alteraciones osmticas: se acrecientan las propiedades osmticas un


medio con el agregado de cloruro de sodio. Estos medios intensifican la
seleccin de bacterias halfilas como Staphylococcus spp. (7,5%).

Ajuste en la tensin de oxgeno: es importante en la seleccin de


aerobios y anaerobios.

Ajuste en la tensin de anhdrido carbnico: muchos patgenos


importantes pueden ser cultivados a menos que se eleve la tensin ms
all de la atmosfrica.

d) DIFERENCIALES: son medios de cultivos que nos permiten distinguir entre


varios gneros y especies de microorganismos. Por ejemplo si al medio se le ha
aadido un carbohidrato y un indicador y la bacteria que se cultiva es capaz de
fermentar dicho carbohidrato, se produce una acidificacin del medio con el
consiguiente viraje de color del indicador por el cambio de pH. El citrato de
Simmons es un medio cuya nica fuente de carbono es el citrato sdico, entonces
en l solo crecern las bacterias capaces de desarrollarse utilizando como nica
fuente de carbono ese componente. A menudo la separacin se basa en la
diferencia de color de las colonias aisladas, como en el agar con azul de metileno eosina que permite diferenciar E. coli (colonias oscuras y de brillo metlico) de
Enterobacter aerogenes (colonias rosadas de centro azul sin brillo). Estos dos
microorganismos en agar nutritivo producen colonias de color gris blancuzco.

PROCEDIMIENTO
Para el cultivo de la muestra (orina):

Procedemos a preparar el cultivo de las muestras, con los materiales


previamente esterilizados.

Con la ayuda de la propipeta vertemos 0.1 mm de la muestra en la placa de


petri.

Echar el agar a la muestra vertida en la placa petri.

Antes del cultivo, los frascos deben estar previamente rotulados.

Se le da un movimiento giratorio a la placa petri y se espera el


desenvolvimiento, luego transportar la muestra, para ser cultivado y obtener
los resultados.

Para siembras en superficies:

Se vierte con la propipeta 4 mm de la muestra en la placa de petri


conteniendo el agar.

Se disemina con el drigalsky, la orina y el agar, hasta que quede absorbida


por completo.

Se procede llevar la muestra, para el previo cultivo y obtener el resultado.

CONCLUSIONES

En esta prctica se aprendi la importancia de preparar medios de cultivo, de que


materiales pueden ser hechos, los distintos tipos de cultivos que pueden
desarrollarse en el laboratorio, as como su clasificacin, sus caractersticas
principales, los distintos tipos que pueden servir para identificar diferentes
bacterias,

as

como

las

condiciones

que

estos

deben

de

reunir.

Las tcnicas de aislamiento, permiten la obtencin de microorganismos a partir de


muestras complejas (suelo, agua, alimentos, etc.) en las que hay gran diversidad
microbiana, as como comprobar la pureza de los cultivos obtenidos.
Los cultivos puros esta formados por un solo tipo de microorganismo; y son
indispensables para conocer las caractersticas morfolgicas, propiedades de
tincin, actividad bioqumica e identificacin de las especies microbianas.