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ESTUDIOS SOBRE EL CONTROL BIOLOGICO DE

Sclerotium Rolfsii (a)


CARLOS DAZ POLANCO * y JOS LUIS CASTRO *
(a) Se agradece la colaboracin del Ing. Francisco Freitez.
* CIARCO : Aptdo. 102, Acarigua, Edo. Portuguesa-Venezuela.

INTRODUCCION
El hongo Sclerotium rolfsii es patgeno de ms de 180 especies de plantas y posee una
distribucin mundial (2). Ataca diversas fases del desarrollo de sus hospederos, desde
la semilla hasta los productos agrcolas a nivel de postcosecha (16). Su estado sexual
ha sido reportado como Pellicularia rolfsii (Sacc). WEST (19).
La supervivencia del patgeno en el suelo es de extrema importancia epidemiolgica;
en relacin a esta actividad forma esclerocios esfricos compuestos de 2 tipos de
clulas: unas externas de paredes altamente pigmentadas y gruesas (corteza) y otras
internas, hialinas y ricas en glicgeno (mdula). Los esclerocios pierden viabilidad
rpidamente a temperaturas clidas y alto humedad (5). La inundacin del suelo por
72 hrs. induce una rpida prdida de sta (12), mientras que estos cuerpos
permanecen viables por ms de dos aos en condiciones secas y temperaturas
inferiores a los 10 C (2).
En lo relativo a la baja germinacin de esclerocios por efecto de inmersin, los
resultados son contradictorios, ya que experiencias venezolanas en esta materia
indican buena germinacin de estos cuerpos 3 mesas despus de ser mantenidos bajo
agua (11).
La actividad miceliar del patgeno es muy alto en subestratos vegetales enterrados en
proceso de descomposicin (7, 8), habiendo sido considerado por ello en la sucesin
ecolgica de suelos agrcolas, como un invasor primario de residuos enterrados de
maz. Debido a nuestras condiciones ambientales es muy posible que su supervivencia
ao tras :ao en el .suelo de los Llanos Centro Occidentales en donde causa problemas
de importancia considerable, dependa prioritariamente de su actividad saproftica sobre
residuos vegetales (4).
En el suelo, el aumento de humedad y la disminucin en la concentracin de oxgeno,
inhiben su crecimiento al aumentar la actividad de competidores y antagonistas (7,
14), por lo cual se ha reportado que los esclerocios no germinan si se encuentran a
profundidades mayores de 15 cm (12).
El patgeno crece bien en pH 5,6 a 7 (pH ptimo 5,6-6) y a temperaturas entre 9 y
38C (ptima 30-35C) (5, 10, 12).
Mayores niveles de infeccin se observan a temperaturas de 25-32C y a pH de 4,8-
7,3 (12).
Bajo condiciones naturales, se ha detectado una disminucin en germinacin de
esclerocios, mediante la adicin al suelo de 0,2 % de quitina o peptona; este fenmeno
est asociado con incrementos en la actividad poblaciones y fisiolgica de
microorganismos antagnicos (3, 13, 14).
En este aspecto, se ha notado un incremento en la actividad bitica alrededor de
esclorocios de S. rolfsii durante el proceso germinativo de estos cuerpos. El fenmeno
es conocido como "efecto de micosfera", habindose observado que las poblaciones de
bacterias aisladas de la micosfera contienen mayor nmero de especies inhibitorias de
S. rolfsii que las obtenidas en muestreos de otros nichos ecolgicos (9). Anteriormente,
se ha sealado a hongos de los gneros Penicillium y Trichodermacomo invasores de
esclerocios de S. Rolfsii (6).
Trabajos recientes indican que el uso de diversos hongos y bacterias pueden constituir
medidas efectivas de control biolgico de S. rolfsii en diversos hospederos (15, 18);
fenmenos similares han sido utilizados con cierto xito en el control de otros
patgenos, como por ejemplo Fusarium roseum F. sp. dianthi y F. moniliforme (1, 7).
En Venezuela, observaciones iniciales han demostrado que algunos componentes de la
microflora del suelo que intervienen conjuntamente con S. rolfsii como
descompositores de residuos de plantes de maz, ejercen una actividad antagnica
contra este patgeno, siendo algunas especies de accin antibitica, mientras otras
poseen actividad hiperparastica (4).
Teniendo como base todas estas experiencias, el presente trabajo ofrece resultados
parciales de un proyecto cuya finalidad es la de explorar el posible uso a nivel agrcola
de estos fenmenos, los cuales expresan relaciones antagnicas entre
microorganismos que ocupan nichos exclusivamente saprofticos, en el mismo habitat
del suelo compartido con ellos, por el fitopatgeno S. rolfsii.
MATERIALES Y METODOS
El trabajo se dividi en dos etapas: en la primera se enfrent al patgeno (S. rolfsii)
con el hiperparsito (Penicillium sp) ya comprobado en trabajos previos (4), en arena
esterilizada y en material vegetal seco, obtenido al secar al sol las partes areas
deAndropogon sp. En la segunda etapa, se utiliz el material vegetal seco ms glucosa
como subestrato para la germinacin y crecimiento inicial saproftica de S. rolfsii.
1 ) Enfrentamiento del patgeno con el hiperparsito bajo condiciones de laboratorio
A.-Se llenaron Cajas Petri con arena estril (pH 6,8), aadindose 5 c.c. de una
solucin esterilizada de glucosa al 5%; en este subestrato se colocaron por separado
los siguientes tratamientos:
I.-Esclerocios de S. rolfsii solos.
II.-Esclerocios de este patgeno ms una suspensin acuosa de conidias
de Penicilliumsp. (5 cc. /plato a conc. 1,5 x 106 conidias/ml).
III.-Suspensin acuosa de conidias de Penicillium sp. solas.
Se hicieron observaciones sobre germinacin de esclerocios, posterior desarrollo de S.
rolfsii y supervivencia de Penicillium sp. en la arena estril con glucosa.
B.-Se llenaron Cajas Petri con material vegetal seco (Andropogon sp.) y 5 cc. de
solucin de glucosa al 5% por plato. En este subestrato se colocaron tratamientos
iguales a los indicados anteriormente.
2) Inoculaciones bajo condiciones de invernadero (utilizando el patgeno slo y con
adicin del hiperparsito). (Temp. promedio 25).
En cajas llenas de tierra tratada con formalina se inocularon semillas de caraota
(Phaseolus vulgaris) Var. 'Tacarigua' utilizando cinco esclerocios del patgeno (S.
rolfsii) por semilla y colocando los esclerocios en el punto de siembra, con el material
vegetal seco (Andropogon sp) al cual se le aadi una solucin de glucosa al 5%.
En aquellos tratamientos que incluan al hiperparsito (Penicillium sp) ste se incub
previamente en condiciones de laboratorio en el material vegetal seco ms glucosa,
usndose luego este cultivo en el punto de siembra, al colocar all la semilla del
hospedero y los esclerocios del patgeno (S. rolfsii). Se utilizaron los siguientes
tratamientos:
I ) Penicillum sp
II ) S. rolfsii
III) S. rolfsii ms Penicillium sp
IV) Control (semillas del husped sin aadir los microorganismos mencionados).
Se tomaron observaciones sobre germinacin y patogenicidad de S. rolfsii en la semilla
y plntulas de caraota en los diferentes tratamientos.
RESULTADOS Y DISCUSION
El hongo Penicillium sp haba demostrado en trabajos previos un efecto hiperparastico
en diferentes medios de cultivo y en arena esterilizada ms 5% de glucosa (4). El
efecto hiperparastico est demostrado por una inhibicin en la germinacin de
esclerocios y maceracin de estas estructuras, al mismo tiempo Penicillum sp bajo
condiciones de laboratorio inhibe el crecimiento miceliar del patgeno S. rolfsii(Cuadro
1 y

Fig. 1. Crecimiento de Sclerotium rolfsii en residuos de
cosecha de maz.

CUADRO 1. Efecto de Penicillium sp. en la germinacin de esclerocios y
posterior crecimiento miceliar de Sclerotium rolfsii.
(a)



DIAS DE INCUBACION
(b)



1 4 7

Tratamiento % Germ. cm % Germ. cm % Germ. cm

S. rolfsii 56,3 - 60,0 2,5 57,5 2,10
S. rolfsii + Penicillium sp 48,8 - 53,8 1,7 37,5 0,98

(a) El subestrato de crecimiento en platos Petri consisti de arena esterilizada ms 5 cc
de glucosa (5%) a pH 6,8. El experimento se repiti 2 veces con un total de 80
esclerocios de S. rolfsii por tratamiento.
(b) las columnas se refieren a porcentaje de germinacin de esclerocios y dimetro en
cm del incremento en el crecimiento miceliar del hongo.


Fig. 2A.-Accin hiperparastica de Penicillium sp. sobre el micelio y
esclerocios de .............Sclerotium rolfsii.
Fig. 2.B.-Crecimiento de S. rolfsii en arena esterilizada.
Fig. 2 C.-Inhibicin del crecimiento de S. rolfsii por Penicillium sp. en arena
esterilizada.

Bajo condiciones experimentales el hongo Penicillium sp sobrevive bien y esporula
abundantemente.
En tratamientos en los cuales se incubaron conjuntamente patgeno e hiperparsito el
crecimiento miceliar de S. rolfsii es irregular y se inhibe la formacin de esclerocios,
mientras que en los platos donde se utiliz S. rolfsii por s solo, se comienza a observar
formacin de estas estructuras a los 7 das (Fig. 2).
El uso de material vegetal seco para las inoculaciones, permite proveer a los
esclerocios del patgeno con un subestrato para su crecimiento saproftica inicial,
durante el cual obtiene la energa suficiente para invadir las plntulas del hospedero.
En las inoculaciones bajo condiciones de invernadero, este sistema permiti un alto
nivel de infeccin.
En aquellos tratamientos en los cuales se confrontaba al patgeno con el hiperparsito,
se suprimi notablemente la actividad patognica de S. rolfsii. Penicillium sp. por s
solo demostr no causar daos ni a la germinacin de semilla, ni al desarrollo posterior
de plntulas de P. vulgaris (Fig. 3).


Fig. 3.-Comparacin de la patogenicidad de S. rolfsii por s slo vs. S.
rolfsii yPenicillium sp. en caraota (var. Tacarigua).
En el tratamiento de S. rolfsii solo, algunas plantas logran sobrevivir y an cuando no
demuestran mayores diferencias en su crecimiento inicial, a los 36 das se observa una
diferencia notable entre estas plantas y los dems tratamientos, lo cual parece indicar
que Penicillium sp. no suprime las poblaciones de bacterias en la rizsfera ni en los
diferentes nichos del rizoplano de P. vulgaris.
Estos resultados indican tambin que el efecto patognico de S. rolfsii es suprimido en
un alto grado por la accin del hiperparsito Penicillium sp; lo cual est tambin
relacionado con la baja supervivencia de plantas que se observa en el tratamiento S.
rolfsii versus todos los dems tratamientos (Cuadro 2).
CUADRO 2. Efecto de S. rolfsii sobre el desarrollo de plantas de Phaseolus
vulgaris (Var. 'Tacarigua').


N de Das
(a)
% de
Tratamiento 10 36 Supervivencia (b)

S. rolfsii + Penicillium sp. 13,9 43,5 80
S. rolfsii 12,6 20,5 30
Penicillium sp. 13,9 41,0 80
Control 13,0 51,0 96

(a) las cifras expresan la altura promedio (en cm.) de plantas sobrevivientes a los
diferentes das de observacin.
(b) El porcentaje de supervivencia representa el nmero de plantas que permanecan
vivas a los 36 das sobre el total de semillas utilizadas en la inoculacin (60
semillas/tratamiento).
La adicin e incubacin inicial de Penicillium sp. en el material vegetal seco, permiti a
este microorganismo incrementar su actividad hiperparastica y suprimir
eficientemente la patogenicidad de S. rolfsii.
Los resultados pudieran contribuir al desarrollo de una tecnologa para el control de S.
rolfsii a nivel comercial.
RESUMEN
Un microorganismo del gnero Penicillium an no identificado a especie, demostr
actividad hiperparastica sobre Sclerotium rolfsii en condiciones de laboratorio y de
invernadero. En el laboratorio, la accin del hiperparsito se expresa en inhibicin de la
germinacin de esclerocios, por invasin y maceracin de esos cuerpos de resistencia,
as como en supresin del crecimiento saproftica y en la produccin de esclerocios por
parte de S. rolfsii. En tierra tratada, bajo condiciones de invernadero, cuando se
inoculan semillas de Phaseolus vulgaris (Var. 'Tacarigua') con esclerocios deS. rolfsii, el
patgeno disminuye la densidad de siembra por invasin y maceracin de la semilla
durante el proceso germinativo, impidiendo el brote de plntulas y por pudricin de
stas, llegando a retardar el desarrollo normal de aquellas plantas que logran
sobrevivir. Cuando el inculo consiste en el patgeno (S. rolfsii) y el hiperparsito
(Penicillium sp.) aplicados conjuntamente, el nivel de infeccin durante el proceso de
germinacin y en el perodo de crecimiento del hospedero es significativamente menor,
que el de inoculaciones de S. rolfsii solo. El uso del hiperparsito (Penicillium sp) por s
slo no interfiere con la germinacin ni el desarrollo de plntulas de P. vulgaris (Var.
'Tacarigua') Los resultados dan indicaciones tiles para desarrollar una tcnica de
control biolgico a nivel de campos comerciales.
SUMMARY
A fungus belonging to the genus Penicillum still not clearly placed in any species, has
shown hiperparasitic activity on Sclerotium rolfsii under laboratory and greenhouse
conditions. When placed together on sterilized sand in pure cultures, Penicillium sp.
inhibits S. rolfsii sclerotial germination, invades those structures and causes total
maceration. The hiperparasite also inhibits mycelial and sclerotial production by the
plant pathogen. In fumigated sail under greenhouse conditions, the hiperparasite
reduced S. rolfsii bean infection when both were applied to bean seed simultaneously.
Penicillium by itself did not affect bean seed germination and had no effect en seeding
growth. These results give indications useful for developing a technique of biological
control in commercial fields.
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