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Universidad de Boyac

FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD


BACTERIOLOGA Y LABORATORIO CLNICO
BACTERIOLOGA III


GUIA DE LABORATORIO No 3
AGENTES ANTIMICROBIANOS

Introduccin
Los agentes antimicrobianos son medicamentos que inhiben el crecimiento o desarrollo de un
microorganismo, estos pueden controlar procesos infecciosos de etiologa bacteriana entre otras.
Son substancias qumicas naturales, (sintetizadas por hongos o bacterias) sintticas o
semisintticas que son capaces de inhibir el desarrollo o de destruir los microorganismos
patgenos infectantes.
Los antibiticos son agentes antimicrobianos de uso sistmico que pueden reducir y controlar la
presencia de microorganismos contaminantes del husped y son administrados por ingestin oral,
uso tpico: absorbidos por la piel o inyectados.
Su efecto sobre el agente infeccioso puede ser como:
Bacteriosttico: impide el desarrollo del germen sin causar su destruccin, pueden multiplicarse
nuevamente al desaparecer el agente.
Bactericida: producen la destruccin de los microorganismos mediante cuatro mecanismos:
Inhibicin de la pared celular (peniclinas, aminopenicilinas, carboxipenicilinas,
cefalosporinas, B-lactmicos, carbapenemes.)
Alteracin de la permeabilidad celular (Polimixinas, Imidazoles, y polienos.)
Inhibicin de la sntesis de protenas ( Tetraciclinas, macrlidos, aminoglucsidos,
anfenicoles, lincosamidas, )
Inhibicin de la sntesis de los cidos nucleicos (sulfonamidas, quinolonas,
diaminopirimidinas, ansamicinas).
PRUEBAS DE SUCEPTIBILIDAD MICROBIANA
Es llamado antibiograma el ensayo In Vitro realizado a una bacteria ya identificada frente a una
serie de antibiticos o quimioteraputicos para observar la sensibilidad o resistencia que presenta
a dichos agentes. La prctica del antibiograma tiene como fin, ayudar al clnico en el control del
control del proceso infeccioso del paciente mediante la utilizacin racional de los antimicrobianos.
El uso de esta tcnica se hace mas necesario cada da debido a la mayor resistencia que estn
presentando las bacterias, especialmente los bacilos gram negativos, a los diferentes antibiticos y
a la aparicin en el mercado de nuevos agentes quimioteraputicos. Los resultados pueden variar
ampliamente segn las tcnicas empleadas razn por la cual es necesario aplicar tcnicas
estandarizadas y suficientemente ensayadas que permiten garantizar resultados reproducibles.
La susceptibilidad a los antimicrobianos de las bacterias anaerobias se estudia por el mtodo de
susceptibilidad por categoras de Thornsberry. Los principales mtodos usados hoy en da por el
laboratorio para determinar la sensibilidad de un microorganismo a un antibitico incluyen los
mtodos de dilucin en caldo, dilucin en placa de agar y mtodos de difusin en agar utilizando
discos de papel impregnados de antibiticos.

METODO DE DIFUSION EN AGAR (KIRBY BAUER)
Es un mtodo fcil, econmico y reproducible bajo condiciones estandarizadas. Consiste en
sembrar en forma masiva el inoculo en un medio solido en caja. Colocarle discos de papel
impregnados con antibiticos de concentraciones conocidas, incubar y medir las zonas de
inhibicin del crecimiento alrededor del disco.
Discos antimicrobianos: para la seleccin adecuada de los antibiticos se debe tener en cuenta: el
microorganismo a probar, localizacin de la infeccin y de ser posible las condiciones de salud del
paciente.
Los sensidiscos se conservan en frascos pequeos bien tapados y con desecante, guardados a
refrigeracin a 4 C. los discos para ser usados se sacaran 1-2 horas antes para que alcance la
temperatura ambiente.
Microorganismos Grampositivos

Microorganismos Gramnegativos

Penicilina G
Clindamicina
Tetraciclina
Eritromicina
Vancomicina
Ampicilina
Cefalospirina

Gentamicina
Cloranfenicol
Cefotaxime
Tetraciclina
Netilmicina
Trimetropin Sulfametoxasol
Amikacina


Objetivos
Realizar la tcnica de antibiograma propuesta por Kirby Bauer.
Conocer el concepto de microorganismos resistentes, intermedios o sensibles.
Identificar los principales grupos de antimicrobianos disponibles y su mecanismo de
accin.
Entender el fundamento del antibiograma, el modo en que se debe realizar y las
principales fuentes de error.
Materiales
Asas de argolla. Estudiante
Sensidiscos de antimicrobianos para gran negativos y gran positivos
Escobillones estriles
Solucin salina fisiolgica estril
Cultivo de bacterias
Mechero
Laminas y laminillas. Estudiante
Agar Mller Hinton
Escala de Mac Farland (TUBO 0.5)
Pinzas
Incubadora
Regleta. Estudiante
PROCEDIMIENTO
METODO DE DIFUSION EN AGAR
Seleccin del medio de cultivo: El medio considerado como ideal es agar de Muller Hinton,
porque ofrece buen crecimiento uniforme y es bajo en inhibidores para tetraciclinas y
sulfonamidas. Para organismos ms exigentes puede agregrsele sangre de cordero.
PREPARACION DEL INOCULO
Con un asa de argolla se toman algunas colonias de un cultivo puro y se inoculan 5 ml de solucin
salina estril. La cantidad de colonias a tomar son las necesarias para conseguir una turbidez
equivalente al tubo 0,5 de la escala de Mac Farland.
INOCULACION DE LAS CAJAS
Debe realizarse dentro de los 15 min siguientes a la preparacin del inoculo, utilizando un
aplicador (escobilln) estril.
Sumerja el aplicador en la suspensin bacteriana y homogenice.
Presione el aplicador firmemente contra las paredes del tubo, para eliminar el exceso
suspensin.
Esparza el inoculo de forma masiva sobre la superficie del agar en tres direcciones
(siembra en rejilla) y al final pase el aplicador alrededor del borde del borde del medio de
cultivo para asegurar que la bacteria utilizada crezca masivamente en toda la superficie
del medio.

APLICACIN DE LOS SENSIDISCOS
Permita que el inoculo se seque por 3 5 min, antes de colocar los sensidiscos.
Coloque los sensidiscos con ayuda de una pinza estril haciendo presin para asegurar el
completo contacto con el agar. La distancia del disco al borde de la caja debe ser de
mnimo 12 mm y la distancia entre discos de 24mm, una vez colocados los sensidiscos no
se deben remover, debido que una vez el sensidisco toca el agar difunde el antibitico.
Incubar inmediatamente a 35 C por 24 a 48 horas en la atmosfera apropiada.

LECTURA DE RESULTADOS
Hacer la lectura de los halos de inhibicin del microorganismo alrededor de cada disco midiendo
este con una reglilla.
Anote los resultados en mm e interprete la sensibilidad o resistencia de acuerdo a la tabla (Anexo
1).
El tamao de la zona de inhibicin depende de la capacidad de difusin del antibitico, de las
condiciones de la prueba y la sensibilidad propia de la cepa.

PRELABORATORIO
1. Cul es la importancia clnica de realizar un antibiograma.
2. Cul es el mecanismo de resistencia ms frecuente frente a betalactmicos. Explique cmo
hara para determinar la resistencia los betalactmicos en el laboratorio.
3. Cuales antibitico son bactericidas y cuales bacteriostticos, que diferencia existe entre
ello?
4. Que otras tcnicas o mtodos existen para la determinacin de sensibilidad
antimicrobiana?
5. Que son las normas CLSI?
6. Investigue que es la prueba o test D para Gram positivos y cmo se realiza.
7. Cmo se realiza la deteccin de resistencia a oxacilina en Staphylococos?

POSLABORATORIO
1. Reporte los resultados del antibiograma, compare los antibiticos de mayor sensibilidad y
resistencia microbiana, segn el microorganismo estudiado.

BIBLIOGRAFIA
SANCHEZ, Mara Piedad; GUZMAN, Miguel A. Manual de procedimientos en Bacteriologa
Clnica, 5 Edicin, Santaf de Bogot 1998.
JAWETZ, E. Microbiologa medica. Editorial manual moderno. 17 edicin. Mxico 2002.
DELGADO, Alberto; manual de laboratorio Clnico bsico. Editorial MacGraw Hill. Santaf
de Bogot, Mxico 2000
LABLINSAN. disponible online en: http://www.lablinsan.cl/index_files/Page886.htm