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Induccin fngica de la biorremediacin de suelos contaminados con combustibles

Mary Lopretti, Fabiana Rey, M. Piaggio



Resumen

La biorremediacin de suelos ha sido en los ltimos aos una de las aplicaciones de los
procesos de la biotecnologa industrial que se ha desarrollado en busca de soluciones naturales
y eficientes al problema de la contaminacin. Varios son los microorganismos que viven en
condiciones extremas, desarrollando estrategias metablicas que les permiten tener sus vas
metablicas aptas para vivir y reproducirse. Dentro de estas estrategias se encuentra la accin
de enzimas hidrolticas, oxidativas y depolimerizantes que permiten modificar sustratos
complejos como lo son los derivados del petrleo y entre ellos los combustibles. En el presente
trabajo se estudi la accin de dos hongos Gloeophylum trabeum y Phanerochaetes
chrysosporium actuando en forma consorcial sobre sustratos contaminados con gasoil y nafta.
Se prepararon 4 reactores de fermentacin slida: dos de ellos blanco, contaminados sin
induccin, y de los otros dos uno con nafta y el otro con gasoil inoculados ambos con 100cc de
medio de propagacin con micelios de P.chrysosporium y 50cc de medio de crecimiento con
pellets de G. trabeum. Se extrajeron muestras cada 15 das y se evalu en el material de cada
reactor caractersticas fisicoqumicas como %C, humedad y pH. Tambin se realiz la
evaluacin microbiolgica por siembra en placa y dilucin en placa con agar malta al 1,25%. En
todos los casos se obtuvieron micelios. Por ltimo se determin la actividad de enzimas
lacasa y peroxidasa. La actividad lacasa se determin por espectrometra usando 0.5mM de
ABTS como sustrato en 0,1M de buffer acetato de sodio pH5 y 1 ml de extracto obtenido por
extraccin salina. La determinacin de actividad Mn peroxidasa se realiz con 0.01% de rojo
fenol como sustrato en buffer succinato de sodio 0.1M en presencia de 1 ml de extracto
enzimtico, MnSO4 0.1M y H2O2 0.1M. Las actividad de stas enzimas permiti obtener
molculas mas pequeas producto de la degradacin de los derivados de petrleo presentes en
los sustratos. La evaluacin se realiz por espectrometra UV a longitudes de onda entre 250 y
310 nm donde se detectan molculas aromticas sustituidas. De los resultados obtenidos
podemos ver que desde el punto de vista fisicoqumico, las condiciones se mantuvieron iguales
durante todo el ensayo de 4 meses, excepto el pH que baj levemente. En cuanto a los
microorganismos presentes Phanerochaetes chrysosporium es el nico que se mantiene hasta el
final del ensayo. Aparecen otros nativos como Thrichoderma y Paecylomyces. La actividad de
estos hongos se manifiesta por la actividad enzimtica presente. En el caso de los ensayos con
nafta tanto en el blanco como en el inducido aparecen actividades Mn peroxidasa y Lacasa,
siendo aproximadamente el doble en los ensayos de induccin. En cuanto a los ensayos con
gasoil aparecen las dos actividades enzimticas pero siendo el triple en los ensayos
inducidos considerando el mismo tiempo. Los productos de degradacin aparecen desde el
segundo mes de remediacin siendo productos mas oxidados y de pequeo peso molecular.
Creemos que estos sistemas fngicos adaptados a vivir en condiciones extremas de
contaminacin son una fuerte herramienta para la biorremediacin y recuperacin de suelos.
En el futuro se estudiarn algunos de los metabolismos adaptativos con el fin de manejar
exitosamente su crecimiento como herramienta de decontaminacin.

BIORREMEDIACIN CON ENZIMAS DE HONGOS
La biorremediacin comenz a emplearse desde la segunda mitad del siglo XX como una
opcin para eliminar los contaminantes generados por las actividades industriales. En la
actualidad se ha convertido en una tecnologa imprescindible para contrarrestar los resultados
adversos de nuestra dependencia a componentes como el petrleo, sus derivados y todos los
desechos que provocan los productos que empleamos en la vida diaria.
La biorremediacin emplea plantas, bacterias u hongos que de forma natural degradan
compuestos que afectan el medio ambiente; sin embargo, la manipulacin gentica permite
acelerar procesos que normalmente les llevaran varios de aos.
Entre este tipo de biotecnologas es conocida de manera general la que utiliza diversos tipos de
bacterias. No obstante, cada una de ellas ofrece ventajas particulares, por lo que ahora
cientficos de la UNAM analizan la manera de sacar el mayor provecho de aquellas de origen
fngico (de hongos).
Mediante enzimas de origen fngico buscamos remediar ambientes contaminados con
petrleo, eliminando uno de los compuestos ms txicos y que mayor impacto tiene en el
ambiente, los llamados hidrocarburos aromtico policclicos (HAP), que son cancergenos,
mencion Rafael Vzquez Duhalt, del Instituto de Biotecnologa de la UNAM, quien encabeza las
investigaciones.
Estas enzimas, explic, permiten oxidar estos hidrocarburos para que pierdan su capacidad
txica y eliminar as su mutagenesidad --la capacidad de alterar el ADN y metabolismo de los
organismos, lo que provoca cncer--.
Los HAP, por ejemplo, tambin se producen en el humo del cigarro as como el que se genera
en la coccin de comida a la parrilla. En el petrleo, estos hidrocarburos representan
aproximadamente un tercio sus componentes. Cuando el contaminante se dispersa en el
ambiente, llega a suelos y cuerpos de agua daando los ecosistemas y a los seres vivos.
Por ello, el objetivo sera aplicar sistemas de remocin de sustancias txicas en los efluentes
de las industrias que dispersan contaminantes en sus procesos: podra utilizar un reactor
enzimtico antes de expulsar los desechos de la fbrica eliminando los txicos.
El coordinador del Laboratorio de Biotecnologa Ambiental del instituto universitario detall
adems las ventajas de las enzimas fngicas en comparacin con el uso de microorganismos.
Apunt que las bacterias son susceptibles a agentes txicos para su reproduccin y no
funcionan muy bien para remediar sitios contaminados con grandes cantidades de petrleo, por
lo que hay que diluir el suelo para que la concentracin de ste sea baja.
Por su parte, las enzimas fngicas trabajan mejor en presencia de compuestos txicos y en
concentraciones altas de contaminante. Tambin son ms efectivos cuando se trata de
descontaminar efluentes txicos.
Lo ideal sera que los efluentes de las industrias tengan un tratamiento enzimtico previo, para
posteriormente llevarlos a plantas convencionales de tratamiento de aguas residuales donde los
contaminantes sean metabolizados finalmente con el empleo de bacterias.
Hongos de pudricin de la madera
La madera est compuesta principalmente de celulosa, hemicelulosa y lignina. La degradacin
de la madera en los ecosistemas est a cargo, principalmente, de hongos ligninocelulsicos.
Este conjunto de hongos son los responsables de reciclar el carbn que se encuentra en la
lignina, que es un polmero natural de estructura aromtica. Dicha estructura qumica es similar
a las de muchos contaminantes actuales, razn por la cual las enzimas son buenas candidatas
biorremediadoras.
Debido a la similitud entre la lignina de la madera y los HAP, los cientficos de la UNAM
estudiaron las enzimas de los hongos de pudricin de la madera en la oxidacin de compuestos
del petrleo.
Ahora estamos mejorando la actividad y estabilidad de las enzimas con modificaciones
qumicas y genticas. En este sentido hemos logrado mejorar su actividad transformadora
mediante la modificacin qumica con un polmero que las hace solubles en el petrleo, lo que
de forma natural no es posible. Sin embargo, el cientfico aclar que an necesitan estabilizar
ms las enzimas en condiciones de operacin para que los futuros tratamientos sean
econmicamente viables.
En tanto, junto con el Instituto Mexicano del Petrleo obtuvieron una patente internacional que
consiste en el empleo de las enzimas fngicas, pero en un proceso de desulfurizacin de
gasolinas y diesel. Aunque para la viabilidad de ambos casos necesitan de igual forma una
mayor estabilizacin.