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DETERMINACIN DE LA CALIDAD DEL AGUA POR SU CONTENIDO

BACTERIAL

I. OBJETIVOS

Contabilizar el nmero de colonias incubadas con ayuda del agar nutritivo.
Determinar el grado de contaminacin del agua tomada de diferentes
fuentes dentro de la Universidad Nacional de Ingeniera.
Conocer mtodos indirectos para saber si el agua es potable o no.
Comparar la calidad del agua en diferentes ambientes, analizando las
caractersticas y cantidad de las colonias formadas en cada placa.

II. FUNDAMENTO TERICO
Medicin del crecimiento Microbiano
Determinacin del nmero de microorganismos en una muestra.
CONTEO DE CLULAS VIABLES
La clula viable es aquella capaz de dividirse y formar una colonia en el
medio de cultivo.
Se basa en que cada colonia surge de una simple clula.
Cada colonia contiene una sola especie bacteriana.
El nmero de bacterias viables por muestra se expresa en:
UNIDADES FORMADORAS DE COLONIAS (UFC)
Representa cada colonia contada y su nmero total representa el nmero total
de bacterias viables en la muestra.
DETERMINACIN No. UFC
Mtodo de vertido en placa
Mtodo de extensin en placa

MTODO DE EXTENDIDO EN PLACA
Es el mtodo de eleccin para anaerobios facultativos y cultivo de microaerfilos.

MTODO DE VERTIDO EN PLACA.
Esta tcnica se usa generalmente para bacterias aerobias obligatorias

TCNICAS DE RECUENTO
til para la tcnica de vertido en placa o extensin en placa.
Se siembran volmenes conocidos de cada dilucin
Finalizado el tiempo de incubacin, se realiza el recuento.
Se toman en cuenta nicamente aquellas cajas Petri que tengan entre 30
y 300 colonias.
Este nmero de colonias es estadsticamente representativo.
Aquellas placas que tengan ms de 300 colonias se reportan como
INCONTABLES.

. .



CALIDAD DEL AGUA
Qu factores determinan calidad del agua?

La calidad del agua est determinada por la presencia y la cantidad de
contaminantes, factores fsico-qumicos tales como pH y conductividad, cantidad
de sales y de la presencia de fertilizantes. Los seres humanos tienen una gran
influencia en todos estos factores, pues ellos depositan residuos en el agua y
aaden toda clase de sustancias y de contaminantes que no estn presentes de
forma natural.

Cmo se determina la calidad del agua?

Para determinar la calidad del agua agencias certificadas toman muestras;
toman cantidades pequeas de agua en un medio que a posteriori se puede
analizar en un laboratorio. Los laboratorios analizan estas muestras segn varios
factores, y ven si est dentro de los estndares de la calidad para el agua.
Uno de estos factores es el nmero de colonias de bacterias coliformes; stas son
un indicador para la calidad del agua para beber o nadar. Otro factor es la
concentracin de ciertos contaminantes y de otras sustancias, tales como
agentes de la eutrofizacin.
Para qu sirve la determinacin de la calidad del agua?
Para decidir si una agua es de una calidad deseable para un propsito particular,
su calidad debe ser especificada en trminos de uso (Agua para consumo
humano y animal, Agua de riego, Agua de recreacin y curativa, Agua de uso
industrial y laboratorio, Acuicultura, Hidroelctricas)
El agua para consumo humano debe cumplir con los siguientes valores admisibles
desde el punto de vista microbiolgico

TECNICAS UTILIZADAS COLIFORMES TOTALES ESCHERICHIA COLI
Filtracin por membrana 0 UFC/100 cm3 0 UFC/100 cm3
Enzima sustrato < de 1 microorganismo en 100 cm3 < de 1 microorganismo en 100 cm3
Sustrato definido 0 microorganismos en 100 cm3 0 microorganismos en 100 cm3
Presencia-Ausencia Ausencia en 100 cm3 Ausencia en 100 cm3
Valor mximo permisible de 100 UFC/100 cm3
MICROBIOLOGIA DEL AGUA
A veces se pueden encontrar en el agua potable microorganismos causantes de
enfermedades. Sin embargo, como hoy en da el agua potable es
meticulosamente desinfectada, las enfermedades provocadas por
microorganismos son raramente causadas por beber agua.
Las personas que nadan en las piscinas encontrarn que el agua en el que nadan
est desinfectada con cloro, ozono, UV o dixido de cloro. Pero hay personas que
nadan en el exterior en aguas superficiales todos los aos. Estas son las personas
ms susceptibles de contraer infecciones bacterianas e infecciones causadas por
otros microorganismos, porque los microorganismos a menudo acaban en las
aguas superficiales a travs de vertidos industriales y excrementos animales. Los
nadadores de espacios exteriores deben ser cuidadosos y leer los carteles
situados en las orillas, porque el agua en la que pretenden nadar puede estar
infectada, por ejemplo con el botulismo.
Hay varias bacterias y protozoos que pueden provocar enfermedades cuando
estn presentes en aguas superficiales.
Las bacterias no solo pueden provocar enfermedades cuando entran en el
cuerpo humano a travs de los alimentos, las aguas superficiales tambin pueden
ser una fuente importante de infecciones bacterianas. En la siguiente tabla puede
ver varias bacterias que se pueden encontrar en aguas superficiales, y las
enfermedades que causan cuando son ingeridas en grandes cantidades, junto
con los sntomas.

Bacteria Enfermedad/infeccin Sntomas
Aeromonas Enteritis Diarrea muy lquida, con
sangre y moco
Campylobacter jejuni Campilobacteriosis Gripe, diarres, dolor de
cabeza y estmago,
fiebre, calambres y
nuseas
Escherichia coli Infecciones del tracto
urinario, meningitis
neonatal, enfermedades
intestinales
Diarrea acuosa, dolores de
cabeza, fiebre, uremia
homiltica, daos
hepticos
Plesiomonas shigelloides Plesiomonas-infeccin Nuseas, dolores de
estmago y diarrea
acuosa, a veces fiebre,
dolores de cabeza y
vmitos
Salmonella typhi Fiebre tifoidea Fiebre
Salmonella sp. Salmonelosis Mareos, calambres
intestinales, vmitos,
diarrea y a veces fiebre
leve
Streptococcus Enfermedad (gastro)
intestinal
Dolores de estmago,
diarrea y fiebre, a veces
vmitos
Vibrio El Tor (agua dulce) Clera (forma leve) Fuerte diarrea
Los protozoos se pueden acumular en ciertas partes del cuerpo, despus de
haber penetrado en el cuerpo humano. Las acumulaciones se llaman cistos.
debido a su naturaleza parasitaria, los protozoos pueden provocar diferentes
enfermedades.
En esta tabla puede ver diversos protozoos que se pueden encontrar en aguas
superficiales, y las enfermedades que causan cuando son ingeridos en grandes
cantidades, junto con los sntomas.
Microorganismo Enfermedad Sntomas
Amoeba Disenteria ameboide Fuerte diarrea, dolor de
cabeza, dolor abdominal,
escalofros, fiebre; si no se trata
puede causar abscesos en el
hgado, perforacin intestinal y
muerte
Cryptosporidium parvum Criptosporidiosis Sensacin de mareo, diarrea
acuosa, vmitos, falta de
apetito
Giardia Giardiasis Diarrea, calambres
abdominales, flatulencia,
eruptos, fatiga
Toxoplasm gondii Toxoplasmosis Gripe, inflamacin de las
glndulas linfticas
En mujeres embarazadas
aborto e infecciones
cerebrales


Factores fsicos y qumicos que influyen en los microorganismos de las aguas:
Luz
Temperatura
Presin
Enturbiamiento
PH y potencial Redox
Concentracin salina
Sustancias Inorgnicas
Sustancias orgnicas
Gases disueltos

Cmo eliminamos del agua los microorganismos dainos?
Para eliminar del agua los microorganismos dainos solemos usar desinfectantes.
Algunos ejemplos de desinfectantes son cloro, UV, ozono (O3) y dixido de cloro
(ClO2). Existen unas cuantas ventajas y desventajas diferentes entre las diversas
tcnicas de desinfeccin, como se muestra en nuestra pgina de desinfeccin.
Los compuestos qumicos que son dainos para cierto tipo de microorganismos se
utilizan a menudo para eliminarlos. Estos compuestos qumicos son conocidos
como biocidas, porque son mortales para los microorganismos.
Cmo se pueden utilizar los microorganismos durante el tratamiento del agua?
Los microorganismos se pueden utilizar para descomponer contaminantes en
aguas residuales. Este tipo de tratamiento de agua se denomina tratamiento
biolgico del agua. Durante el tratamiento biolgico del agua los
microorganismos descomponen la materia orgnica del agua, nitratos y fosfatos.
Esta es una breve explicacin de cmo funcionan esos procesos de tratamiento
biolgico del agua.
Eliminacin de materia orgnica
La purificacin biolgica del agua se lleva a cabo para disminuir la carga de
compuestos orgnicos disueltos. Los microorganismos, principalmente las
bacterias, realizan la descomposicin de estos compuestos. Hay dos categoras
principales de tratamiento biolgico: tratamiento aerbico y tratamiento
anaerbico. El tratamiento aerbico del agua significa la descomposicin de
materia orgnica que necesita oxgeno durante su proceso de descomposicin.
El tratamiento anaerbico del agua significa descomposicin de materia
orgnica por medio de microorganismos que no utilizan oxgeno.
En los sistemas aerbicos el agua es aireada con aire comprimido (en algunos
casos con solamente oxgeno), mientras que los sistemas anaerbicos funcionan
bajo condiciones libres de oxgeno.
Eliminacin de amoniaco y nitratos
La eliminacin de amonio y nitratos es bastante compleja. Es un proceso de
tratamiento del agua que necesita conversin tanto aerbica como anaerbica
para eliminar los contaminantes.
En la fase de conversin aerbica hay dos especies bacterianas implicadas.
Primero, las bacterias Nitrosomonas convierten el amoniaco en nitrito. Segundo,
las bacterias Nitrobacter convierten los nitritos en nitratos. Estos dos procesos juntos
son comnmente conocidos como el proceso de nitrificacin.
Despus de eso, las bacterias anaerbicas entran a actuar. Estas bacterias
convierten los nitratos en nitrgeno gaseoso atmosfrico. Este proceso se llama
desnitrificacin. La desnitrificacin es realizada por con muchas bacterias
anaerbicas, tales como Achromobacter, Bacillus y Pseudomonas. La primera
fase de la desnitrificacin es el proceso inverso a la nitrificacin, vuelve a
transformar el nitrato en nitrito. La segunda fase de la desnitrificacin transforma el
nitrito en nitrgeno gas. Este gas puede ser liberado a la atmsfera sin causar
daos ambientales.
Eliminacin de fosfatos
Los fosfatos pueden ser eliminados de las aguas residuales por una bacteria
aerbica (oxgeno-dependiente), llamada Acinetobacter. Esta bacteria acumula
polifosfatos en los tejidos celulares.
Acinetobacter puede absorber una mayor cantidad de fosfatos de la que
necesita para su sntesis celular. La cantidad extra de fosfatos es almacenada en
las clulas en forma de polifosfatos.
El almacenamiento de polifosfatos hace que las Acinetobacter sean capaces de
sobrevivir temporalmente en circunstancias anaerbicas. Cuando
las Acinetobacter residen en una zona anaerbica en las aguas residuales,
absorbe cidos grasos y los almacena como sustancias de reserva. Durante este
proceso, los polifosfatos se descomponen para obtencin de energsa, haciendo
que se liberen fosfatos en la zona aerbica. Cuando las Acinetobacter entran en
la zona aerbica absorven fosfatos y los almacenan en forma de polifosfatos en
los tejidos celulares. Esto hace que el contenido en fosfatos del agua residual
disminuya.

III. PROCEDIMIENTO
Se recolectaron muestras de:
Lavadero de platos del teatro.
Bao FIA.
Estanque de la facultad de arquitectura (FAUA).
Preparar el agar nutritivo estril:
Disolver el agar, calentar si es necesario.
Verter 15mL el agar disuelto en tubos de ensayo.
Llevar los tubos de ensayo al autoclave.

Enumerar cada placa Petri estril y escribir su respectiva concentracin: 1ml, 10
-1
ml, 10
-2
ml

1. Tomar con una pipeta 1.1ml de la muestra de agua, previamente se
flamea la punta de la pipeta con el mechero; as con cada pipeta usada.
2. Verter 0.1ml a la placa de concentracin 10
-1
ml y el 1ml restante a la placa
de 1ml.

3. Tomar con otra pipeta 1ml de la muestra de agua y verter al frasco de
disolucin (99ml de agua disolucin estril).

4. Agitar el frasco de la disolucin por 30seg.

5. Con otra pipeta tomar 1ml de esta disolucin.

6. Verter el contenido de la pipeta a la placa de concentracin 10
-2
ml.

7. Sacar 3 tubos de agar nutritivo del autoclave.

8. Se adiciona el agar nutritivo a cada placa, previamente se flamea la
boquilla del tubo.

9. Para que se homogenice, se mueve mediante agitacin rotatoria cada
una de las placas, mezclando la muestra y el medio.

10. Esperar unos minutos hasta que el medio solidifique.

11. Las placas se colocan en posicin invertida en la incubadora.
Al retirar de la incubadora, se selecciona una placa que contenga de 30 a
300 colonias, se procede al conteo y a los respectivos clculos.











IV. TABLA DE RESULTADOS




. .





GRUPO MUESTRA FECHA HORA TEMPERATURA
N1 Bao FIA 16/09/14 11:00 am 19C
N3 Lavadero de platos del
teatro
16/09/14 11:22 am 21C
N5 Estanque de Arquitectura 16/09/14 12:00 am 18.5C

GRUPO

MUESTRA
DILUCIN
U.F.C/ml

OBSERVACIONES
1ml 10
-1
ml

10
-2
ml



1



Bao FIA


287


118


-


287

Tiempo de incubacin: 52h
Tamao:
Color: crema



3


Lavadero de
platos del
teatro



46


11


3


46

Tiempo de incubacin: 52h
Tamao:0.5mm-3mm
Color: crema



5




Estanque de
Arquitectura



8



42



5



420

Tiempo de incubacin: 52h
Tamao:
1ml > 1mm
10
-1
ml > 1mm
10
-2
ml > 0.5mm
Color: blanco
V. DISCUSIONES Y OBSERVACIONES

Para obtener una mayor precisin en el conteo de bacterias (UFC) se
debe realizar el procedimiento con dos muestras diferentes para as estar
seguros del resultado.

La incubacin se dio a una temperatura de 35 a 37C.

En este laboratorio se compararon los resultados en ambientes en donde
hay agua potable (bao FIA y lavadero del teatro), el grupo 5 recolect
una muestra del estanque de arquitectura, un ambiente muy distinto
(donde hay plantas y algas).

Para el anlisis de contenido de microorganismos se necesita que el lugar
de crecimiento sean uniforme (placas Petri) pero se vio que el grupo 5
trabajo con una placa Petri ms grande que del resto, impidiendo su
comparacin con las dems muestras.

Las placas Petri que se eligen para el conteo son las que presentan entre
30 300 colonias, intervalo estadsticamente ms representativo.

Se debe tener en cuenta que la solucin que us el grupo 1 se vio
contaminada, la tapa del envase se encontraba sucia; lo que le dio un
color amarillento.