transcripcin

Debern quedar bien claros los siguientes puntos:

El dogma central del flujo de la informacin gentica ->
el RNA como intermediario
Propiedades del RNA
Clases de RNA
El mRNA, el mensajero
La transcripcin: iniciacin, elongacin y terminacin
La transcripcin en eucariotas: modificaciones
(procesamiento) transcripcionales, intensificadores
Transcripcin inversa y todas las posibles direcciones del
transferencia de informacin gentica
Actividad enzimtica del RNA
RNA de interferencia (RNAi)

El dogma central del flujo de la
informacin gentica

Propiedades del RNA

Una cadena, no doble hlice.
Apareamiento intramolecular -> RNA
contorsionista molecular
Azcar ribosa (OH en el carbono 2)
Esqueleto azcar-fosfato en posiciones
5-3 del azcar como DNA
Uracilo en vez de Timina, se empareja
con Adenina, y tambin con Guanina
cuando se pliega (no en la transcripcin).
Catalizador biolgico -> Ribozima
RNA: contorsionista molecular
El emparejamiento intramolecular de nucletidos produce un
plegamiento de la molcula de RNA
Tipos de RNA

RNA mensajero (mRNA)

RNA funcional

RNA de transferencia (tRNA)
RNA ribosmico (rRNA)
RNA nuclear pequeo (snRNA)
MicroRNA (miRNA)
RNA de interferencia pequeo (siRNA)

Definicin molecular de gen
Definicin molecular de gen
Estructura del gen y el mensajero
procariota
TRANSCRIPCIN
Funcin: la formacin del transcrito de RNA
mediante la catlisis de la unin de
nucletidos libres a la cadena molde del
DNA formando una monohebra de RNA.

Propiedades que hacen posible la sntesis del transcrito de RNA

1. COMPLEMENTARIEDAD ENTRE BASES
A-U, C-G, G-C, T-A

2. UNIN DE PROTENAS ESPECIFICAS AL DNA (RNA
Polimerasa y otras protenas que actan como factores de
transcripcin).
Nomenclatura de las
cadenas en relacin
a la transcripcin
(5) CGCTATAGCG (3) cadena codificadora del DNA
(3) GCGATATCGC (5) cadena molde del DNA


(5) CGCUAUAGCG (3) transcrito de RNA
Orientacin y nomenclatura de las cadenas en
relacin a la transcripcin
Depende de cada gen, no es un
propiedad del cromosoma.
Qu cadena de la doble hlice es la
codificadora?
Orientacin de la transcripcin
Orientacin de la transcripcin
RNA polimerasa
Enzima compleja, no requiere primer
(cebador), no funciona la correccin de
errores

Procariotas: slo un tipo. Con mltiples
subunidades.
E. Coli :

factor sigma iniciacin + CORE
(holoenzima)

Eucariotas: 3 tipos
I -> rRNA
II -> mRNA
III -> tRNA, snRNA, rRNA 5S
La ARN polimerasa III transcribe genes ARNt, genes
ARNr 5S, y los restantes genes ARNnp.

La ARN polimerasa II transcribe los genes
codificadores de protenas y algunos genes para
ARNnp.

La ARN polimerasa I transcribe los genes para los
ARNr 18S, 5.8S y 28S.

ARN polimerasas en eucariotas
PROCARIOTAS
En procariotas una sola polimerasa (RNA Polimerasa) se encarga de
transcribir el DNA en las diferentes clases de RNA

ESTRUCTURA (E. coli)
Se compone de 5 subunidades: 2 subunidades idnticas, ,
, , ms el cofactor .
El cofactor tiene la propiedad de disociarse del resto de
subunidades durante el proceso dejando el ncleo central de
la enzima al descubierto.
HOLOENZIMA = 5 subunidades (con cofactor )
ACTIVA
APOENZIMA = 4 subunidades ( el cofactor disociado)
INACTIVA
RNA polimerasa
Etapas de la transcripcin
Iniciacin:
Secuencias promotoras (se une la RNA polimerasa)
Procariotas: Secuencias consenso Pribnow (-10
pb) y regin -35 pb
Eucariotas: Caja TATA (-25 pb) y CAAT (-70
pb)

Elongacin:
5->3
Enrollamiento aguas arriba (5) y desenrollamiento
aguas abajo (3) del DNA

Terminacin:
Dependiente del factor Rho
Independiente de Rho
PROCARIOTAS
RNA polimerasa
APOENZIMA = 4 subunidades
2 subunidades = ensamblan el enzima
y promueven interacciones
= actividad cataltica
= se une al DNA
= ensamblaje y regulacin expresin
= Se une a las regiones promotoras
y posicional a la holoenzima en el sitio
de inicio
Etapas de la transcripcin
Iniciacin:
Secuencias promotoras (se une la RNA polimerasa)
Procariotas: Secuencias consenso Pribnow (-10
pb upstream) y regin -35 pb








Terminacin: DNA Palndrome
estructura secundaria
Terminacin:
mecanismo intrnseco ->
DNA Palndrome,
estructura tallo-bucle
Transcripcin Eucariotas
Terminacion en eucariotas
Transcripcin ribosomal
CONTROL TRANSCRIPCIONAL
Control pretranscripcional
Modelo para explicar el desplazamiento de los nucleosomas
durante la transcripcin
La RNA polimerasa avanza

El DNA es desplazado del octmero


El avance de la polimerasa genera torsiones en el DNA
que desplazan el octmero el cual se reinserta por detrs
de la polimerasa
Proceso de transcripcin en eucariotas: desplazamiento
de nucleosomas
REGULACIN GENTICA DE LA TRANSCRIPCIN
Regulacin gentica
Regulacin epigentica
Regulacin al inicio: TFs
Elementos reguladores: Cis y Trans
R. promotora= f. cis
TF= f. trans


1- Existen tres tipos de RNA polimerasa

La I, la II y la III






RNA polimerasa I, 13 subunidades. Se localiza en el
ncleo y en el nucleolo. -> Sntesis de rARN 45S.
RNA polimerasa II, 12 subunidades. Se localiza en el
nucleoplasma. -> Sntesis de los hnRNA (transcrito
primario), los precursores de los mRNA.
RNA polimerasa III, 17 subunidades. Se localiza en el
nucleoplasma. -> Sntesis rRNA 5S y tRNA.
Promotores de los genes clase II
Promotor basal





Secuencias proximales



Elementos distales

FT clase II
FT generales
elementos basales

TFIID: TBP, TAFs
TFIIH:
RNApolI
Regulacin de la transcripcin
genes I y III
RNA pol I: un transcrito
grande
Promotores en
direccin 5-3
UBF
UBF
3
5
Promotor basal
Promotor proximal
TBP
TAFs
SL1
RNApolIII
TFIIIB
TBP
TAF
TFIIIC
RNA pol III: pocos genes
(tRNAs, pre rRNA 5S y
snRNA)
Promotores 3 region
estructural (ICR)

TFIII
TFIIIC
5
Secuencia Promotora (ICR)
Caja C
3
REGULACIN EPEGENTICA
Componente epigentico

Secuencia ADN

Metilacin


Metilalcin del ADN: control de expresin gnica
Isoltes CpG no metilados
RNApol
DNA
TFs

Isoltes CpG metilados
DNA
X


Isoltes CpG metilados
DNA
X
MeCP1, MeCP2
Isoltes CpG metilados
DNA
X
MeCP1, MeCP2
Patrones de metilacin
Desmetilacin global
(desmetilasa)
Metilacin de novo (meilasa)
Metilacin de mantenimiento
(meilasa)
DNA con patrn de metilacin de los padres
DNA hipometilado
DNA con patrn de metilacin propio del embrin
Transcriptos en procariotas versus eucariotas
procariotas
eucariotas
MADURACIN DEL RNA
1. Modificacin del extremo 5
P-P-P- A-N
FOSFATASA
P-P- A-N
H2O
P
mRNA
GUANILTRANSFERASA
G-P-P-P- A-N
P-P

Metilacin de la caperuza 5
Modificacin del extremo 5
Modificacin del extremo 3
Corte 10- 30 nt x endonucleasa
RNA no funcional
Splicing
Empalmosoma
(Spliceosome)
Estructura del mRNA eucariota
Maduracionde tRNA y rRNA
Maduracin RNA mitocondrial
Splicing alternativo
Transcripcin inversa
El dogma central revisado

TRADUCCIN
Sntesis de Protenas
Caractersticas

Procariotes Vs. Eucariotes
2. Caracter policistronico y monoscistrnico
3. Fases de la Traduccin

Carga del ARNt
1. Iniciacin
Punto de inicio especfico
Formacin tRNAi (aminoacilacin)
a) Inicio: Factores de iniciacin, unn del tRNAi-
met a AUG en el mRNA

2. Elongacin
1. Ubicacin del aminoacil-tRNA en el punto A

2. Transpeptidacin: Formacin del enlace
peptdico
3. Translocacin
3. Terminacin


http://www.johnkyrk.com/DNAtranslation.esp.html


El sistema de endomembrana esta formado por el
ncleo, el RER y el aparato de Golgi
Traduccin
Modificaciones post-traduccionales de las protenas
En el sistema de
endomembranas las
protenas son
modificadas y enviadas
a sus destinos finales.
tresgrandes grupos

Plegamiento de la protena
Procesamiento proteoltico
Modificaciones qumicas
Modificaciones post-traduccionales
Procesamiento enzimtico
Formacin de puentes disulfuro
MPT Funcin
Fosforilacin Sealizacin, activacin
Acetilacin
Estabilidad, interaccin
DNA-prots
Metilacin Regulacin gnica
Acilacin, modif. por cidos
grasos
Localizacin y sealizacin
celular
Glicosilacin
Protenas excretadas,
reconocimiento y
sealizacin celular
Anclas GPI
Fijacin de enzimas y
receptores a membrana
Puentes S-S Estabilidad de protenas
Ubiquitinacin Seal de destruccin
Sulfatacin Modulador de interacciones
http://www.youtube.com/watch?v=5iS4CRPPDus
http://www.youtube.com/watch?v=NSvAfwMEo7o
http://www.youtube.com/watch?v=OtyhPEyLhvA
Plegamiento

Tipos de Proteinas involucradas

Tipos de Proteinas involucradas

http://www.youtube.com/watch?v=yZ2aY5lxEGE
Cdigo gentico
Cmo se traduce la secuencia de
mRNA en la secuencia de
aminocidos de una protena?
Los aminocidos no estn relacionados
estructuralmente con los cidos nuclicos.

Cmo pueden alinearse las protenas a
una molcula de mRNA durante la sntesis
proteica?
Cdigo gentico
Cada aminocido esta codificado por un
pequeo nmero de nucletidos
consecutivos.
Los vocablos del cdigo deben ser
capaces de codificar para 20
aminocidos. Por lo tanto:
4
2
= 16 aa
4
3
= 64 aa
Nirenberg y Matthaei (1961)
Adicionaron a ribosomas aislados unos
polirribonucletidos sintticos y de
composicin de bases conocida para
determinar la relacin entre el RNA y el
polipptido formado en respuesta.


Obtuvieron fracciones proteicas marcadas
solamente en las que eran formadas por
Phe.


Ulteriores estudios develaron que el
polipptido obtenido solamente contena
restos de Phe.
Experimento que descifr el cdigo
gentico

UUU = Phe
AAA = Lis
CCC = Pro


El resto de el cdigo fue descifrado usando
RNA polimerasas que contenan mezclas de
nucletidos.

Interpretacin del cdigo de las 64 codones,
61 de los cuales codifican aa. Los tres
sobrantes (UAA,UAG,UGA) son codones de
terminacin.
tRNAs
Adaptador entre aminocidos y mRNA
durante la traduccin.

Cada aminocido es unido por una
enzima especifica a su tRNAs.

El cdigo gentico
Aspectos Importantes del Cdigo Gentico
Es universal.
Formado por 64 codones y 20 a.
Un codn = un a.
En el ARNm los codones son contiguos.
Es degenerado.
Minimiza los efectos de la mutacin.

Degenerado
1. Hay mas de un vocablo de cdigo para la
mayora de los aminocidos.
2. No es uniforme
Hay 4 tripletes que cumplen funciones
especficas:
AUG codifica para metionina.

UAG, UAA y UGA son seales de
trmino.

Codones de lectura

Tercera base
1. Menos especfica
2. Si dos aa. Tienen las primeras dos bases
iguales, uno tendr purinas (A ,G) y otro
pirimidinas (U,C) en la tercera posicin.
3. Dos primeras letras son determinantes de la
especificidad.
4. Vacilacin de la tercera base = velocidad
Codones de terminacin
La cadena polipeptdica se hidroliza de
tRNA en estado natural.

En estado sinttico (polyU) permanece
unida a tRNA, debido a la falta de un
codn de terminacin.


UAG, UAA, UGA (codones de terminacin)


Mutaciones en codones que los transforman
a UAG,UAA o UGA detenan la sntesis de
protenas en el codn anterior a estos.


Universalidad del cdigo
Los vocablos del cdigo gentico estn
considerados como universales.
mRNA para la sntesis de hemoglobina
(conejo) + aminoacil-tRNAs de E. coli =
hemoglobina
La multiplicidad de vocablos esta
implicada en el desarrollo o
diferenciacin evolutiva.
Aminocidos no codificados
Algunas protenas contienen
aminocidos que no tienen un vocablo
en el cdigo.

Estos aa. Son sintetizados
enzimticamente a partir de aa
esenciales.

Prolina Hidroxiprolina
Prolinamonooxigenas
a