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17 de septiembre del 2014

HIDRLISIS DE SACAROSA Y RECONOCIMIENTO DE POLISACRIDOS


Programa de ingeniera agroindustrial
Facultad de ingeniera/ Universidad de sucre, Sincelejo sucre
Sal buelvas, Rodrigo guerra, Amaury Salazar, keyner Gmez
Ingeniera agroindustrial semestre 2
RESUMEN
En esta prctica se pudo identificar La presencia de disacridos y polisacridos de
origen vegetal y animal a travs de la realizacin de diferentes pruebas para su
respectivo anlisis, en cada demostracin o procedimiento se obtuvieron resultado
positivo y negativo debido a las reacciones de los diferentes reactivo, por lo cual se
tuvieron en cuenta algunas coloraciones que fueron de suma importancia para
determinar la presencia de disacridos como la sacarosa y polisacridos como el
glucgeno y el almidn.
PALABRAS CLAVES: glucgeno, polisacridos, disacridos, almidn
OBJETIVO GENERAL
Identificar la presencia de carbohidratos de origen vegetal y animal.
OBJETIVOS ESPECIFICOS
Identificar polisacridos: identificacin de almidn mediante la prueba del
Lugol.
Reconocer los carbohidratos por medio de reacciones coloreadas de carcter
cualitativo.
INTRODUCCIN
Los glcidos y carbohidratos son una
clase de biomolcula. Son la forma
biolgica primaria de almacenamiento
y consumo de energa. Otras formas
son las grasas y, en menor medida, las
protenas.
Los glcidos son compuestos
formados en su mayor parte por
tomos de carbono e hidrgeno y en
Una menor cantidad de oxgeno. Los
glcidos tienen enlaces qumicos
difciles de romper llamados
covalentes, mismos que poseen gran
cantidad de energa, que es liberada al
romperse estos enlaces. Una parte de
esta energa es aprovechada por el
organismo consumidor, y otra parte es
almacenada en el organismo.
En la naturaleza se encuentran en los
seres vivos, formando parte de
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biomolculas aisladas o asociadas a
otras como las protenas y los lpidos.
MATERIALES Y REACTIVOS
Materiales:
Pipeta graduada.
Gradilla.
Pinzas.
Vidrio de reloj.
Mortero.
Becker.
4 placas de calentamiento o
baos de agua hirviendo para el
experimento.
Reactivos:
Solucin de sacarosa 1% p/v.
Reactivo de Fehling.
Reactivo de lugol.
Etanol al 95% v/v.
HCl concentrado.
Almidn 1% p/v.
Soluciones de Seliwanoff.
HCl 10% v/v y NaOH 10 %
p/v. cido tricloroacetico 10%.
PROCEDIMIENTO
1. HIDRLISIS DELA SACAROSA.
En tres tubos de ensayo adicionamos:
Tubo 1: 2 ml de sacarosa 1%
p/v ms 1 ml (20 gotas) de
agua.
Tubo 2: 2 ml de sacarosa 1%
p/v ms 1 ml (20 gotas) de HCl
10% v/v.
Tubo 3: 2 ml de sacarosa 1%
p/v ms 1 ml (20 gotas) de
NaOH 10% p/v.
Tubo 4: Igual al tubo 2 pero se
deja reposar y se agrega 1 ml
de NaOH 10% p/v
Calentamos hasta ebullicin
por un tiempo de 5-8 min.
Posteriormente, realice para
cada tubo la prueba Fehling
con una alcuota del volumen.
Para el tubo o los tubos que
dieron prueba positiva al
ensayo de Fehling, se le
realizo el ensayo de Seliwanoff
2. ENSAYO DE LUGOL PARA
POLISACRIDOS.
1. Colocamos en un tubo de
ensayo 1 ml de solucin de
almidn 1% p/v y agregamos
0.2 ml de lugol. Anotamos el
color de la solucin.
2. Calentamos la solucin anterior
y anotamos el cambio;
posteriormente, observamos lo
que sucedi a temperatura
ambiente.
3. HIDROLISI DEL ALMIDON.
1. En un tubo de ensayo
colocamos 2 ml de solucin de
almidn 1% p/v con 1 ml de
[HCl] concentrado.
Calentndose hasta ebullicin
durante 10 min.
Enfriamos el tubo de ensayo
hasta temperatura ambiente.
Aadimos 1 ml de NaOH
concentrado. Agregamos en un
tubo de ensayo un ml de la
solucin anterior para el ensayo
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de lugol. Para el ensayo de
Fehling tomamos 1 ml de
solucin de almidn tratado.
2. En un tubo de ensayo coloque
2ml de saliva ms 1ml de al
midon 1% p/v (temperatura
ambiente); a los 5 minutos tome
una alcuota (1ml ) y realice la
prueba de fehling y/o de
benidict
4. AISLAMIENTO DEL
GLUCGENO.
Maceramos 2 gr de hgado en
un mortero con 2 ml de TCA
10% (cido tricloroacetico) y
0,25 gr de arena lavada hasta
homogenizacin.
Colocamos el homogenizado
en un tubo y centrifugamos
durante 5 min a 3000 RPM;
se elimin el sedimento.
Por cada volumen del
sobrenadante agregamos 2
volmenes de etanol 95 %
v/v, mezclamos suavemente
y dejamos hasta observar un
sedimento en suspensin.
Aadimos un poco de NaCl y
calentamos en un bao de
mara durante tres a 5 min
hasta observar un sedimento
que centrifugamos por 5 min
a 3000 RPM.
Descartamos el
sobrenadante y el sedimento
observado es el glucgeno.
Disolvemos el sedimento en 2
ml de agua, posteriormente
agregamos 4 ml de etanol
95% luego centrifugamos por
5 min a 3000 revoluciones por
min; descartamos el
sobrenadante.
Lavamos el sedimento con
una pequea cantidad de
etanol 95%.
Al sedimento anterior le
identificamos la presencia de
glucgeno mediante el
ensayo de lugol.
RESULTADOS
HIDROLISIS DE LA SACAROSA
Tubo # 1 (Sacarosa + agua).
Prueba de Fehling
En el momento en que se le agrego
agua, no tuvo ningn cambio fsico.
Despus de haberlo calentado y
haberle realizado la prueba de
Fehling, se observ(Negativo)
Tubo # 2 (Sacarosa + HCl)
Prueba de Fehling.
En el momento en que se le agrego
HCl, no tuvo ningn cambio fsico.
Despus de haberlo calentado y
haberle realizado la prueba de
Fehling, se observ un color
transparente azuloso. (Negativo)
Tubo # 3 (Sacarosa + NaOH)
Prueba de Fehling
En el momento en que se le agrego
NaOH, no tuvo ningn cambio fsico.
Despus de haberlo calentado y
haberle realizado la prueba de
Fehling, se observ un color verde
fuerte. (Negativo)
ENSAYO DE LUGOL PARA
POLISACARIDOS
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Tubo # 1 (Solucin de almidn 1%
p/v + lugol).
En el momento en que calentamos la
solucin, se observ un color azul
intenso casi negro y el resto de la
solucin se volvi incolora. Mientras
que a temperatura ambiente adems
de presentar en poca proporcin el
precipitado, se observ que
reapareci el color azul. (Positiva)
HIDRLISIS DE ALMIDON
Tubo # 1
(Solucin de almidn 1% p/v + 1 ml de
[HCl] concentrado + 1 ml de NaOH
concentrado)
En al momento en que se le agrego
HCl concentrado se observ que todo
el conjunto tomo un color blanco
lechoso.
Ms tarde, cuando se someti a
calentamiento indirecto (bao de
mara) durante 10 min la solucin tomo
un color transparente, cuando se le
agrego el NaOH concentrado el color
de la solucin no cambio (se mantuvo
el color transparente).
Con la prueba de Fehling nos dio un
color azul propio de este (negativa)
Tubo # 2
(2 ml de Saliva + almidn 1% p/v)
Al adicionar el almidn no se observ
ningn cambio en la coloracin
despus de transcurridos 5 minutos se
tom 1 ml de esta y se realiz la
prueba de fehling y/o benedict. luego
se llev a bao de mara obteniendo
un resultado positivo al presentar
cambio en su coloracin a color
ladrillo.
AISLAMIENTO DE GLUCOGENO
Despus de haber macerado,
centrifugado y de haber realizado
todas las actividades necesarias para
realizar la prctica de aislamiento de
glucgeno, el resultado final fue:
Una coloracin naranja. (Positiva)
DISCUSIN DE RESULTADOS
HIDRLISIS DE LA SACAROSA
La sacarosa es un disacrido que no
posee carbonos anomricos libres por
lo que carece de poder reductor y la
reaccin con el reactivo de Fehling es
negativa, tal y como ha quedado
demostrado en la prueba. Como los
resultados obtenidos en los tres tubos
fueron negativos, indica que la
hidrlisis no se realiz correctamente.
Orden de los tubos: Tubo #
1(Sacarosa + agua), Tubo # 2 (sacarosa
+ HCl), Tubo # 3 (sacarosa + NaOH).
ENSAYO DE LUGOL PARA
POLISACRIDOS
El Lugol (solucin de yodo-yodurado)
colorea las micelas de almidn de
color azul intenso casi negro. El
almidn es una mezcla (en diferentes
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proporciones segn las especies) de
los polisacridos amilasa (10-20%) y
amilopectina (80-90%). El almidn es
Coloreado de azul en presencia de
Lugol, debido a una adsorcin o
fijacin del I
-
3 sobre las unidades de
glucosa de la amilasa, y ayuda a
mantener su estructura. Al calentar
hasta ebullicin, desaparece la
estructura ternaria (incoloro) y
reaparece al enfriar (azul-violeta) lo
que indica que hay presencia de
almidn (amilasa y amilopectina).
(Prueba positiva).
Solucin caliente
Solucin fra (temperatura ambiente)
HIDRLISIS DE ALMIDON
El almidn contiene generalmente un
20% de una fraccin soluble en agua
llamada amilasa y un 80% de otra
insoluble, llamada amilopectina.
Por tratamiento con cido o por accin
enzimtica, estas fracciones se
hidrolizan lentamente dando
sucesivamente: Dextrina (una mezcla
de polisacridos de bajo peso
molecular), (+)-maltosa y finalmente
D-(+)-glucosa
Tanto la amilasa como la
amilopectina, entonces, estn
formadas por unidades de D-(+)-
glucosa, pero difieren en su tamao y
forma molecular.
En la prueba de Fehling el resultado
fue positivo (coloracin amarilla-
naranja) lo que indica la presencia de
azcares reductores, la presencia de
glucosa y tambin derivados de la
glucosa como la sacarosa o la
fructosa.
Por otro lado el ensayo de lugol nos
arroj un resultado positivo (coloracin
azul intenso casi negro), presencia de
almidn.
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Coloracin Amarilla: prueba de de
Fehling, Coloracin Azul: prueba de
lugol
El precipitado que se form con la
disolucin que contena la amilasa,
almidn y el reactivo Benedict tom un
color rojo ladrillo porque se llevo a
cabo la hidrlisis del almidn y se
formaron azcares como la glucosa y
la maltosa.
AISLAMIENTO DE GLUCOGENO
El glucgeno es la forma de
almacenamiento de la glucosa en los
tejidos animales. Se encuentra
principalmente en el hgado y en el
msculo representando hasta un 10%
y un 1-2% de su peso hmedo,
respectivamente. Las propiedades
fsicas y qumicas de muchos
polisacridos neutros difieren lo
bastante de las de otras biomolculas,
para permitir su fcil aislamiento. El
glucgeno se puede liberar del hgado
por calentamiento con una base
fuerte, hasta la destruccin total del
tejido. Al aadir cido tricloroacetico al
homogeneizado, precipitan
numerosas sustancias de peso
molecular elevado, como las protenas
y los cidos nucledos, en tanto que el
glucgeno contina disuelto. El
glucgeno puede separarse de los
monosacridos y otros compuestos
hidrosolubles por precipitacin con
alcohol, porque los polisacridos son
mucho menos solubles en alcohol
acuoso que los monosacridos.
La coloracin amarilla obtenida
finalmente indica que se ha aislado el
glucgeno de las protenas, cidos
nucleicos, etc.
Glucgeno aislado
CONCLUSIONES
El glucgeno es la forma de
almacenamiento de la glucosa
en los tejidos animales.
El almidn y el glucgeno son
polisacridos que sirven de
almacenamiento energtico.
El Lugol vira al color morado en
presencia de polisacridos,
como el almidn, esto ocurre
porque el yodo se ubica en el
centro de la hlice que forma la
amilosa y esa disposicin es
responsable del color violeta
intenso de la reaccin de Lugol.
Los disacridos y los
polisacridos se pueden
hidrolizar para producir
monosacridos.
PREGUNTAS
Cul es el fundamento y reacciones
de cada uno de los ensayos?
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Hidrolisis de la sacarosa
La sacarosa est constituida por l
asociacin de una molcula de -D-
glucopiranosa y una molcula de -D-
fructofuranosa.
Su hidrolisis enzimtica, se hace al
nivel del puente de oxigeno del lado de
la glucosa por medio de una
glucosidasa o del lado de la fructosa
con la intervencin de una -
fructosidasa.
En cualquier caso sea cual sea la
enzimtica, que catalice el proceso, la
hidrolisis da siempre los mismos
productos. Estas enzimas se renen
bajo el nombre de invertasas.
La prctica se realiza en el laboratorio
con una -fructosidasa extrada de la
levadura.
Ensayo de lugol para polisacridos
Para identificar de forma cualitativa
polisacridos como el almidn, se
utiliza la reaccin del Lugol. El almidn
en contacto con unas gotas de
Reactivo de Lugol da positivo es decir
una coloracin azul-violeta.
El Lugol es una disolucin de yodo
molecular I2 y yoduro potsico KI en
agua destilada. Fue preparada por
primera vez en 1829 y nombrada
Lugol en honor de un mdico francs.
Se utiliza esta disolucin para
identificar polisacridos ya que forma
complejos de distintos colores segn
las ramificaciones que presente la
molcula.
La coloracin producida por el Lugol
se debe a que el yodo se introduce
entre las espiras de la molcula de
almidn. No es por tanto, una
verdadera reaccin qumica, sino que
se forma un compuesto de inclusin
que modifica las propiedades fsicas
de esta molcula, apareciendo la
coloracin azul-violeta.
Hidrolisis del almidn
las bacterias pueden usar alimentos
macromolculas; para ello, es
necesario una hidrolisis extracelular
preliminar, igual que sucede en los
animales superiores. Las distintas
bacterias elaboran para este fin una
cierta variedad de enzimas
extracelulares que segregan al medio.
El objetivo de esta prctica es
comprobar que bacterias producen
amilasa y son por tanto capases de
utilizar el almidn como nutriente
Aislamiento del glucgeno.
El glucgeno es un polisacrido de
cadenas ramificadas de glucosa con
enlaces (-1,4) y ramificaciones en
cada extremo de la cadena con
enlaces (-1,6), unidos por enlaces
glucosdicos. El glucgeno es un
polmero que se encuentra en los
animales principalmente de reserva
energtica, se encuentra
principalmente en hgado y en el
msculo esqueltico que est
disponible de manera ms inmediata
para la liberacin de energa. El
hgado contiene unas reservas de
glucgeno relativamente elevadas,
desde un 2% a un 8% del peso del
rgano, las velocidades de
degradacin y sntesis son
aproximadamente iguales. El
glucgeno se puede liberar del hgado
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por calentamiento con una base
fuerte, hasta la destruccin total del
tejido. Al aadir cido tricloroactico al
homogeneizado anterior, precipitan
numerosas sustancias de peso
molecular elevado, como las protenas
y los cidos nucleicos, en tanto que el
glucgeno contina disuelto. El
glucgeno puede separarse de los
monosacridos y otros compuestos
hidrosolubles por precipitacin con
alcohol, porque los polisacridos son
mucho menos solubles en alcohol
acuoso que los monosacridos. La
determinacin del grado de pureza de
la preparacin obtenida se puede
realizar mediante el tratamiento con
antrona y comparando con una
solucin estndar de glucgeno.
REFENCIAS BIBLIOGRAFICAS:
Carey Francis A. Qumica
Orgnica Mc Graw Hill, Tercera
Edicin. Espaa. 2000
Bioqumica estructural. Ruiz
Manuel. Editorial Alfaomega-
Tbar. Mxico DF. Ao 2000.
http://es.answers.yahoo.com/ques
tion/index?qid=20070709145732
AAbj2TL
http://www.joseacortes.com/practi
cas/glucidos.htm
http://www.zonadiet.com/nutricion
/hidratos.htm.
http://www.zonadiet.com/nutricion
/hidratos.htm
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