Medios complejos,

se clasifican as porque
contienen compuestos
orgnicos complejos o
bien extractos vegetales
animales o de
levaduras, por lo que no
se conoce con exactitud
la estructura de todos
los componentes del
medio;

Medios sintticos
cuando se conoce la
estructura qumica de
cada uno de los
componentes
Extracto de carne
Extracto acuoso de carne magra de res concentrado en pasta.Contiene
las sustancias solubles de tejidos animales entre ellas carbohidratos,
aminocidos, vitaminas, solubles en agua y sales.

Peptona de Casena
Carne GelatinaEs un hidrolizado con enzimas y/o cidos que da por
resultado peptonas y aminocidos. Se comercializa en polvo.Fuente
rica de nitrgeno orgnico, en algunos casos contiene vitaminas y
carbohidratos, depende del origen de la peptona.

Melaza de caa o de Remolacha.
Es un residuo lquido, de color caf, con consistencia de almbar que
contiene 50% de sacarosa, y otros elementos, la textura y composicin
est determinada por la tecnologa de extraccin de los azucares.Es
rica en azucares como, sacarosa, glucosa, fructosa, rafinosa; adems de
contener biotina, pantotenato de calcio, tiamina y algunos minerales.

Extracto de levadura
Es un extracto en solucin acuosa de levaduras, se obtiene
comercialmente en polvoEs una fuente rica en vitamina B, tambin
contiene nitrgeno orgnico y compuestos de carbono.
SOLUCION DE
MACROELEMENTOS en g/l
NaHCO3 25
Ca Cl2. 2 H2O 25
Mg SO4 7 H20 25
Na2CO3 5
Na2EDTA. H2O 1.1
KNO3. 7H2O 200
K2HPO4 25
FeSO4.7H2O 1

SOLUCION DE
MICROELEMENTOS en g/l
H3BO3 2.85
MnCl2.4H2O 1.81
ZnSO4.7 H2O 0.222
CuSO4.5 H2O 0.080
MoO3Na 0.015
.
Glucosa
K2HPO4
MgSO4.7H2O
FeSO4.7H2O
CaCl2
NH4Cl
Elementos traza : Mn, Mo, Cu, Co, Zn.
Nota: Los elementos traza se adicionan en
pequeas cantidades (0.02-0.5 mg en 1l de
solucin).
El aislamiento de bacterias especificas
entre una poblacin microbiana mixta, se
le conoce como Tcnica de
enriquecimiento,.

Para seleccionar bacterias patgenas
como Salmonella y Shigella. Se utilizan
medios de enriquecimiento, ya que estas
bacterias se encuentran en una poblacin
mixta.
Los medios ms usados para incrementar
el crecimiento de estos microorganismos
es caldo selenito y caldo para gram
negativos (GN). El caldo selenito es
inhibidor del crecimiento de Escherichia
coli y otros bacilos entricos que
contienen los medios mencionados.
Medio de cultivo.
Agar Salmonella y
Shigella (SS)

Extracto de carne
Peptona
Lactosa
Salesbiliares
Citrato de sodio
Tiosulfato de sodio
Citrato frrico
Agar
Rojo neutro
Verde brillante
Agua destilada
Las especies de Salmonella y Shigella son no
fermentadoras de la lactosa y forman colonias
incoloras .

Las especies de Salmonella que son
productoras de sulfuro de hidrgeno desarrollan
colonias con centro obscuro.

Los colIformes son parcialmente inhibidos. E.
coli produce colonias de color rosa a rojo y
pueden presentar una zona de precipitado.

Las colonias de Enterobacter aerogenes son
cremosas de color rosa.

Citrobacter y Proteus spp. Pueden crecer
produciendo colonias con centros de color gris o
negro debido a la produccin de H2 S.
Enterobacter faecalis es parcialmente inhibido
presentando colonias incoloras
Morfologia de los microrganismos que se
desarrollan en este medios de cultivo
Forma
Tamao
Apariencia
Bordes
Color del medio

El Agar XLD (por sus siglas Xilosa, Lisina,
Desoxicolato) es utilizado para el aislamiento y
diferenciacin de bacilos entricos Gram negativos,
especialmente del gnero Shigella y Providencia


En este medio el extracto de
levadura provee la fuente de
nitrgeno, carbono, vitaminas y
cofactores.
La xilosa, lactosa y sacarosa son
los carbohidratos fermentables.
El tiosulfato de sodio y el citrato
frrico son adicionados para ver
la produccin de H2S.
El rojo de fenol acta como
indicador.
El cloruro de sodio mantiene el
balance osmtico y el agar es
adicionado como agente
solidificante.
El inhibidor de bacterias gram
positivas es desoxicolato de
sodio
Extracto de Levadura 3.0
Xilosa 3.5
Lactosa 7.5
Sacarosa 7.5
L- Lisina 5.0
Rojo de Fenol 0.08
Desoxicolato de Sodio 2.5
Tiosulfato de Sodio 6.8
Citrato Frrico de Amonio 0.8
Cloruro de Sodio 5.0
Agar Bacteriolgico 13.5

pH 7.4 0.2
La degradacin de la xilosa, lactosa y sacarosa genera la produccin de
cido cambiando el color del
medio de rojo a amarillo.
Cepa de Salmonella spp en agar
XLD tras 24 horas de
incubacin a 37C.

Las colonias presentan color
negro en su interior debido a la
produccin de H2S.
La produccin de H2S bajo
condiciones alcalinas, da
colonias con el centro negro.
Esta reaccin es inhibida en
condiciones cidas.

La descarboxilacin de la
lisina en ausencia de
fermentacin de lactosa o
sacarosa, ocasiona la reversin
del medio a alcalino y el color
del medio regresa a rojo.
Digerido Pptico de
Tejido Animal 5.0
Cloruro de Sodio 75.0
Digerido Pancretico de
Casena 5.0
D-Manitol 10.0
Extracto de Carne 1.0
Rojo de Fenol 0.025
Agar Bacteriolgico
15.0
pH 7.4 0.2
El Agar Sal y Manitol fue formulado
para obtener el aislamiento de
Staphylococcus , inhibiendo el
crecimiento de otras bacterias al
soportar una alta concentracin de
sal.

En este medio las peptonas y el
extracto de carne proporcionan la
fuente de carbono, nitrgeno,
vitaminas y minerales.

El D.manitol es el carbohidrato
fermentable.

El rojo de fenol acta como
indicador de pH.
El agar es adicionado como agente
solidificante.
Colonias y halos
amarillos a diferencia
de las cepas no
patgenas que dan
colonias pequeas de
color rojo y sin cambio
en el color del medio.


Selectivo y diferenecial para
enterobacterias y
fermentadoras de lactosa,
debido a los indicadores de pH
que contiene el medio.
Se utiliza en el aislamiento de
enterobacterias a partir de
heces , orina, y alimentos
contaminados.

Agar MacConkey contiene
cristal violeta y sales biliares
como inhibidores de
organismos Gram positivos.


Contenido del medio
preparado, por litro agua
destilada:
Agar > 13,5 g
Cloruro de sodio > 5,0 g
Cristal violeta > 0,001 g
Lactosa > 10,0 g
Peptona de gelatina1 > 17,0 g
Peptona de caseina2 > 1,5 g
Peptona de carne3 > 1,5 g
Rojo neutro > 0,03 g
Sales biliares > 1,5 g

Las colonias aisladas de
bacterias que fermentan
la lactosa son rosadas y
pueden estar rodeadas de
una zona de precipitado
de sales biliares el cual es
debido a una cada en el
pH por la fermentacin de
la Lactosa. Las colonias
que no fermentan la
lactosa (como las de S.
typhi, S. paratyphi y S.
disentery)
permanecen incoloras.

Las colonias aisladas de
bacterias que fermentan
la lactosa son rosadas y
pueden estar rodeadas
de una zona de
precipitado de sales
biliares el cual es debido
a una cada en el pH por
la fermentacin de la
Lactosa. Las colonias que
no fermentan la lactosa
(como las de S. typhi, S.
paratyphi y S. disentery)
permanecen incoloras
Permite la diferenciacin de las colonias fermentadoras de lactosa de las no
fermentadoras.

La sacarosa est incluida en el medio para detectar a los miembros del
grupo coliforme que fermentan ms rpidamente la sacarosa que la
lactosa. y permite una diferenciacin mas temprana entre las colonias
fermentadoras y no fermentadoras de lactosa. .

Este medio permite diferenciar al grupo Salmonella y otros organismos
lactosa negativos de organismos coliformes. , la eosina y el azul de
metileno son colorantes que se combinan para formar un precipitado a
pH cido.

Los colorantes actan como inhibidores e indicadores.

Las carbohidratos proporcionan la fuente de energa, las fosfatos actan
como buffer y el agar como agente solidificante
Digerido Pancretico de Gelatina 10.0
Lactosa 5.0
Sacarosa 5.0
Fosfato Dipotsico 2.0
EosinaY 0.4
Azul de Metileno 0.065
Agar Bacteriolgico 15.0
pH 7.2 0.2
Superficies de placas de agar EBM que ilustran el
cultivo mixto de E. coli (colonias con brillo verde) y
especies de Shigella, estas no fermentan lactosa y
por ende producen colonias semitranslucidas y no
pigmentadas
Placas de agar EMB que ilustra el brillo verde producido
por la fermentacin de lactosa

En este medio se pueden
evaluar varias
caractersticas de las
bacterias, como son:
Produccin de H2S, La
produccin de gas de
glucosa y produccin de
cido de lactosa y sacarosa.



Extracto de carne 3,0 g
Extracto de levadura 3,0 g
Peptona 15,0 g
Proteosa-peptona 5,0 g
Lactosa 10,0 g
Sacarosa 10,0 g
Glucosa 1,0 g
Sulfato ferroso 0,2 g
Cloruro de sodio 5,0 g
Tiosulfato de sodio 0,3 g
Agar 12,0 g
Rojo fenol 0,024 g
Agua destilada 1000,000

En el medio de cultivo, el extracto de carne y la
pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados
para el desarrollo bacteriano.
La lactosa, sacarosa y glucosa son los hidratos de
carbono fermentables.
El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para
la produccin de cido sulfhdrico, el sulfato de
hierro y amonio, es la fuente de iones Fe3+ , los
cuales se combinan con el cido sulfhdrico y
producen sulfuro de hierro, de color negro.
El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro
de sodio mantiene el balance osmtico.

Gracias a su composicin es uno de los medios de
cultivo ms empleados para la diferenciacin de
enterobacterias segn:
Fermenten o no glucosa.
Fermenten o no lactosa y/o sacarosa.
Produzcan o no cido sulfhdrico.
Produzcan o no gas.

AGAR TRIPLE-AZUCAR-
HIERRO
Inoculacion : picadura y estria.

Shigella da la siguiente
reaccin sobre TSI:

- Alcalina (rojo) en la
superficie inclinada.
No fermenta lactosa.
-.

- Sin produccin de SH2 (sin
ennegrecimiento del fondo del
tubo).













cida (amarillo) en el fondo
Los microorganismos que descarboxilan la lisina
provocan una fuerte alcalinizacin del medio, que
se traduce en un viraje a azul-prpura.
Los que no, hacen virar el fondo a amarillo, por
acidificacin. E. coli, Shigella, Salmonella,
provocan viraje del pico a azul.
. Shigella, Salmonella paratyphi viran el fondo a
amarillo.
Salmonella typhi viran el fondo a azul.


Inoculacion: doble
picadura y estria.

Shigella da la siguiente
reaccin sobre LIA:
- Alcalina (color prpura)
en la superficie inclinada.
- cida (amarillo) en el
fondo.

- Sin Produccin de SH2
(ennegrecimiento del
fondo del tubo).
Estas dos pruebas permiten la diferenciacin
dentro de las enterobacterias del grupo coli y
aergenes.
Las enterobacterias son anaerobios facultativos
que utilizarn la glucosa en dos fases: primero la
metabolizarn aerobiamente consumiendo
rpidamente el oxgeno del medio, para, en
segundo lugar, continuar metabolizndola por va
anaerobia (fermentacin).
Fermentacin cido
mixta: La realizan las
bacterias del grupo de
E.coli y los productos
finales son cidos
orgnicos (cidos
frmico, actico, lctico y
succnico) que provocan
un fuerte descenso del pH
inicial del medio. Puede
detectarse por el viraje
del indicador de rojo de
metilo que permanece
amarillo por encima de
pH 5,1 y rojo por debajo
de 4,4.
Fermentacin butiln gliclica: La realizan
las bacterias del grupo Klebsiella-Enterobacter
La produccin de acetona como
intermediario que podr ser detectada
aadiendo al medio KOH (reactivo A de Voges-
Proskauer) y alfa-naftol (reactivo B de Voges-
Proskauer) que reaccionarn con este
compuesto produciendo un color rojo
caracterstico.
Es un medio semislido destinado a verificar
la movilidad, produccin de indol y de sulfuro
de hidrgeno en un mismo tubo.
Es til para diferenciar miembros de la familia
Enterobacteriaceae.


El triptfano es un aminocido constituyente
de muchas peptonas, que puede ser oxidado
por algunas bacterias para formar indol.
En el proceso interviene un conjunto de
enzimas llamadas triptofanasa. El indol
producido se combina con el aldehido del
reactivo de Kovacs o de Erlich, para originar
un compuesto de color rojo.
Las cepas mviles pueden
apreciarse en este medio,
por la turbidez que
producen alrededor de la
puncin de siembra,
mientras que aquellas
cepas productoras de
sulfhdrico se distinguen
por la formacin de un
precipitado negro de
sulfuro de hierro a partir
del tiosulfato siempre que
el medio se mantenga a
un pH mayor a 7.2.

Introduccin
La utilizacin de citrato como nica fuente de
carbono es una prueba til en la identificacin de
enterobacterias.
Principio
La utilizacin de citrato como nica fuente de
carbono se detecta en un medio de cultivo con
citrato como nica fuente de carbono mediante el
crecimiento y la alcalinizacin del medio. Este
aumento de pH se visualiza con el indicador azul
de bromotimol que vira al alcalino a pH 7,6.


Interpretacin
El ensayo es positivo cuando se observa
crecimiento a lo largo de la estra, acompaado
o no de un viraje del indicador al azul.

Controles
Positivo: Klebsiella spp.
Negativo: E.coli

.
Medio usado para la identificacin de
Enterobacteriaceae en base a su movilidad,
actividad de ornitina decarboxilasa y produccin
de indol.


Por su composicin, es posible detectar 3
reacciones en un mismo tubo: movilidad,
presencia de ornitina decarboxilasa e indol
Medio de cultivo semislido, altamente nutritivo
debido a la presencia de extracto de levadura,
peptona y triptena.
La triptena aporta grandes cantidades de
triptofano, sustrato de la enzima triptofanasa,
para la realizacin de la prueba del indol.
La dextrosa es el hidrato de carbono fermentable,
La ornitina es el sustrato para la deteccin de la
enzima ornitina decarboxilasa, el prpura de
bromocresol es el indicador de pH, que en medio
alcalino es de color prpura y en medio cido es
amarillo.
La reaccin positiva a la ornitina est dada por un
color prpura del medio. La presencia de acidez,
otorga condiciones ptimas para la actividad de la
enzima ornitina decarboxilasa, la cual decarboxila la
ornitina presente.

Por decarboxilacin, se alcaliniza el medio, con el
consecuente viraje del indicador hacia el color
prpura.

El indol, es producido a partir del triptofano por los
microorganismos que contienen la enzima
triptofanasa. El desarrollo de un color rojo luego de
agregar unas gotas de reactivo de Kovacs o de Erlich,
indica un resultado positivo


http://www.salud.gob.mx/unidades/cdi/nom/089ssa14.html
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