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VACUNACIONCONTRADictyocaulus vlviparus UTILIZANDOLARVAS

IRRADIADASCON 1000GRAYS. a
GerminalJ.CantoAlarconb,c
ColletteBrittonb
MalcolmW. Kennedyb
GeorgeM. Urquhartb
RESUMEN
EItrabajoserealiz6conobjetodeconocerelgradodeprotecci6nconferidoporlarvasdeDictyocaulus viviparus
irradiadoscon 1oooGy.Nueve bovinoslibresdeanticuerposcontrael parasitofueron divididosen tresgrupos
detresanimalescadauno.EI grupo1recibi6dosdosisdelavacunacomercial"Dictol"queconsistede1000
L:!irraOi,.>jasa4OOGy,con21 diasdediferencia.EI grupo2recibi6dosdosisde2500 larvasirradiadasa1000Gy
losmismosqueelgrupoanterioryelgrupo3permaneci6comotestigodeldesafio.Todoslosanimalesfueron
desafiados con 30 L:! por kilogramo de peso 21 dfas despues de la segunda vacunaci6n. Los resultados
mostraron una disminuci6n del 91% y del 77% en el numero de parasitos recuperados de los grupos 1 y 2
respectivamente, al ser oomparadosoon el grupotestigo, 10 queindicauna altaprotecci6ncontra la infecci6n;
asimismosugiere,quelas.larvaseneltercerestadioposeenlosprincipalesantigenosresponsablesdeprotecci6n.
EI estadio 0 estadiosdeDictyocaulus vivi-
parus requeridos para producirresistencia
contra la infeccion ha sido estudiado por
varios investigadores. Kendall 7 utilizando
dietilcarbamazinaparaterminarlainfeccion
tan prontocomo era posible (14 a 15 dras
postinfeccion), concluyo que los estadios
jovenestenian un fuerte efecto en el desa-
rrollo de resistencia, pero que noeran los
responsablesdeunaresistenciacompletay
que los estadios posteriores eran nec!sa-
rios para ello. Por otro lado, Cornwell en
unexperimentosimilarpostulaque"AItiem-
poenquelosparasitossehandesarrollado
aunestadlodondesonsusceptiblesengran
partealaacciondeladroga.el hospedero
hasidoestimuladopormaterialesantigeni-
aRecibidoparasupublicaci6nel 13deabrilde1992.
b Universidad de Glasgow. Departamento de
Parasitologia. Bearsden Rd. Bearsden. Glasgow,
escocia.
c Direcci6n actual. CENID-Fisiologfa. INIFAP-SARH.
Ajuchitlan, Queretaro, Mexico. ProgramaNacional de
Eoidemiologla.
24U
Tee.Pee. Mex.Vol.30No.3(1992)
coscapacesdeproducirleinmunidad".Pos-
teriormenteCanto2, utilizandocuyescomo
modelo experimental demostro quelarvas
deD.viviparus irradiadasa1OOOGyadminis-
tradas en dos ocasiones con 21 dras de
diferencia, produjeronun gradodeinmuni-
dadtanaltocomoel observadoconlarvas
normales,apesarqueestetipodelarvasno
se desarrollan mas alia del tercer estadio
larvario.
Conobjetodeconocersi losresultados
observadosen cuyespodrfan sersimilares
en el hospedero natural y de esta forma
conocerel 0 losestadiosresponsablesde
inmunidad, fue que se realizo el presente
estudio.
Nueve bovinos machos, libresdeanti-
cuerpos contra el parasito y con un peso
que fluctuaba entre los 137 y 172 kg se
dividieron al azar en tres grupos de tres
animalescadauno.Losbovinosse mantu-
vieronestabuladosenloscorralesdemane-
jodelaFacultaddeVeterinariadelaUniver-
sidaddeGlasgowyfueronalimentadoscon
numerodeembri
modo,podrfaevit
hembrasconresl
Losobjetivos(
terminar, bajotre:
laci6n,el patron(
rona en cabras s
epocareproducti
ciacionentrelas
dfadelacoleccio
decuerposlutere
recuperados.
MATERIALESYI
EI estudiosereali
Indaparapeo, MiJ
clima templado <
primerodemayo
Se utilizaron 26 (
cria.Durantetres
dio,enalgunosa
riacionesensus(
que se considen
ovarica, a pesar(
reproductiva. Por
zarelloteexperirr
de luprostiol ("Pr
Mexico) por via
todoslosanimale
experimental, inn
la aplicaciondelI
ponjas intravagin
mgdeacetatode'
Lab. Intervetde
cronizarel estro(
Lasesponjaspen
renta y ocho hor
aplicaronlossigl
rovularios:I) (n=
lar(1M) de1100U
deYegua Prenad
I ntervetdeMexio
teriormaslaaplic
deanticuerposm
laPMSG alassel
empleadadeACt
tervetdeMexico)
cionestandarizac
UI PMSG. III) (n=
..- ._--_.. -- .. _ ...... ------
concentrado comercial. paja de avena y
agua ad libitum. Losanimales del grupo1
recibieronporviaoral yen dosocasiones.
1000larvasen el tercerestadio (La) irradia-
dasa400Gy(Dictol.lntervet.England). Los
becerros del grupa 2'recibieron en forma
endovenosa. 2500 La irra9iadas a 1oo0Gy
enlosmismosdfasqueelgrupo1.Lavfade
inoculaci6nyladosismaselevadafuedebi-
doaquesepens6,porlosresultadosobte-
nidosen cuyes. quelaslarvasirradiadasa
1oo0Gy permanecerran parmenostiempo
en los pulmones; ademas. de que serran
incapaces deatravesar la pared intestinal.
Los animales del grupo 3 permanecieron
como testigos para el desaflo. T odos los
animalessedesafiaron21 drasdeSpuesde
la segunda vacunaci6n con 30 Lslkg de
pesoysesacrificaron25drasmastarde.
Durante el transcurso del experimento
losanimales se revisaron diariamenteyse
Respiraciones por minuto
les midi6 fa frecuencia respiratoria. Ademas,
todosfueronpesadosaIinlciodelexperirnerto.
eIdfadeldesaffoyundCaantesdelsacrlicio.
Semanalmente durante eI periodo pre-
patenteseobtuvieronmuestrasfecalespara
conocerlapresenciadelarvasdel
mediantelastecnicasdeMcMaster yBaer-
mann 6; posteriormenteel muestreo se re-
aliz6cadadCa.
Semanalmenteseexamlnaronmuestras
desueroparaladetecci6ndeantlcuerpas
especfficoscontraD.viviparus, utilizandola
tecnicadeELISA.
AIsacrificiolospulmonesylatraquease
abrieroncontijerasobteniendoseycontan-
dosetodoslosparasitosadultos.
Losresultadosmostraronquelafrecuen-
cia respiratoriadelosanimalesdelostres
grupossemantuvodentrodelrangonormal
durante ambos regimenes de vacunaci6n
(Figura1).Sietedrasdespuesdeldesafrose

70
80
50
40
30 *
o 7 14 21 28 35 42
oras
- 400Gy 1000Gy* Testigo
FIGURA 1. MEDIAS DE RESPIRACION POR MINUTO POR GRUPO DE
BOVINOS VACUNADOS CON LARVAS DE Dictyocaulus
viviparus IRRADIADAS A 400 Gy Y 1000 Gy LOS
DIAS 0 Y 21 Y DESAFIADOS CON 30L /kg DE PESO
3
EL DIA 42. .
241
present6unaumentoenlafrecuenciarespi-
ratoriayparaeldfadelsacrificiolasrespira-
cionesporminutoerande45,56Y76para
losgruposvacunadosconlarvasirradiadas
a400Gy,1OOOGyY testigorespectivamente.
Durante el periodo de vacunaci6n los
animalesganaronpesoenformaconstante.
Entreeldesaffoyel sacrificiolasmediasde
ganancia porgrupofueronde6kg Y19kg
paralosgruposvacunadoscon larvasirra-
diadasa400Gyy1000Gyrespectivamente.
Encontraste,losanimalesdelgrupotestigo
sufrieron una perdidade pesode17kg en
promedio.Estoultimoesdesumaimportan-
cia, yaqueauncuandolosanimalestestigo
no murieron, su producci6n fue negativa,
pudiendopensarsequeestoes10 queocu-
rreencondiciones naturales.
Los resultadosdelosexamenes copro-
parasitosc6picosdeMcMasteryBaermann
semuestranen el Cuadro1. Enel grupo1,
solamente un animal fue positivo en Baer-
mann en dosocasiones. En el grupo2, un
animalfue positivoenMcMasterylosotros
dosen Baermann yen el grupo3dosani-
malesfueronpositivosenMcMasteryelotro
en Baermann.
EI numero de parasitos presentes a la
necropsiaenlospulmonesdelosanimales
yel porcentaje de reducci6n de parasitos
recuperados de los grupos vacunados,
comparadosconelgrupotestigo,semues-
tranenel Cuadro2. Sepuedeobservarque
aunqueunanimaldelgrupotestigopresen-
t6un numero de parasitos muy bajo en la
necropsia,esclaralaaltaprotecci6nqueexis-
ti6encontradelainfecci6ni.e.91.0%y77.0%
dereducci6nenelnumerodeparasitosenlos
CUADRO 1. RESULTADOS DE LOSANALISIS DE McMASTERYBAERMAN DESPUS DELAVACUNACION DE
BOVINOSCON LARVAS DE Dictyocaulus viviparus IRRADIADASCON400GyY l000GyYDESA-
FIADOSCON30l..;)/kg DE PESO.
DIAS DESPUESDELDESAFIO
GRUPO 21 24 25 26
1 M'" B** M B M B M B
400Gy
A
N.........
N N N N N
B N N N N N N N N
C N N N N N N N N
2
l000Gy
A N N N N N N
B N N N N 2 100
C N N N N N N
3
Testigo
A N N N 4 100 100
B N N N N N
C N N N 3 100 50
... McMasterLarvasporgramodeheces
...... BaermannLarvasporgramodeheces
***Negativo
242
CUADRO 2. PORCENTAJE DE REDUCCION DE PARASITOS ADULTOS OBTENIDOS DE PULMONES DE
BOVINOSDESPUESDELADOBLEVACUNACIONCONLARVASIRRADIADASA400GyY l000Gy
Y ELDESAFIOCON30l:JIkg DEPESO.
GRUPO VACUNACION NUMERODE PARASITOSRECUPERADOS
A 400Gy
B 1000Gy
C TESTIGO
gruposvacunados con larvas irradiadas a
400Gyy1000Gyrespectivamente.
EnlapruebadeELISA,utilizandoantrge-
node 13, no se detectaronanticuerposen
losanimalesdelgrupo1hastaunasemana
despues de la segunda dosis de vacuna.
Posteriormente la media delos!ftulos por
grupo incremento hasta el momento del
sacrificio.Enlosanimalesdelgrupo2,como
era de esperarse por la dosis y la via de
inoculacion, seobservoun tftulo bajodes-
pues dela primera vacunacion que incre-
mentodespuesdelasegundadosis. Poste-
rioral desafio,lostltulosse mantuvieronen
el mismonivel hastalaultimasemanaen la
queseobservounmarcadoincremento.En
losanimalesdel grupotestigonose obser-
varon tltulos hasta dos semanas despues
deldesafio(Figura2). .
Los titulos bajos de anticuerpos de la
clase IgG especlficos contra D. viviparus
durantelosregrmenesdevacunacion,con-
cuerdanconlosresultadosobservadospor
otros investigadores 1,3,6 e indican que la
especificidad deestosanticuerposes mas
importantequelacantidad.
Por los resultados de este trabajo se
puedeconcluirquelareduccionenelnume-
rodeparasitosdel77.0%observadaal utili-
zarlarvasirradiadasa1 OOOGy,enlasquesu
desarrollo se detiene completamente, su-
gierequeen la L3 se presentan losanUge-
2, 12, 168
MEDIA60.66
REDUCCION91.29%
97,189,200
MEDIA162
REDUCCION76.74%
57,729, 1304
MEDIA696.66
nos mas importantes responsables de la
proteccion. Esto no excluye la posibilidad
dequeestosantrgenospudiesenestarpre-
sentesenotrosestadiosdelparasito; pero,
siendo el tercer estadio facil de obtener,
hace que la L3 sea considerada como la
mejorfuentedeantrgenoparaestudiosdirigi-
dosaldesarrollodeunavacunamolecular.
AGRADECIMIENTOS
EI presente estudiofue realizado graciasa
unaaportaciondeWellcomeTrust.EI primer
autorrecibio becasdel CONACYT, Mexico
y del Committee of Vice Chancellors and
PrinCipalsdel ReinoUnido.
SUMMARY
The purposeofthe studywastoshowthe degreeof
protection conferred byDyctyocaulus viviparus third
stage larvae irradiated to l000Gy. Nine calveswere
dividedintothreegroupsofthreeanimaleach.Group
1 was given in two occasions, 21 days apart, the
commercial vaccine "Dictol". Group 2 received two
dosesof2500 1000Gyirradiated larvae atthe same
timethatthe animals in group 1. Group3 remained
as achallengecontrol. All the animalswere challen-
ged with 30 kJ/kg of bodyweight 21 days after the
secondvaccination.Theresultsshowedreductionsof
91.0% and 77.0% ofrecovered parasitesofgroups1
and 2 respectively when compared with the control
group,whichindicatesahighprotectionagainstcha-
llenge. In addition, they also suggest that the third
stagelarvaepresentsthe majorantigensresponsible
forprotection.
243
Titulo (lnverea de ladilucion)
o 7 14 21 28 35 42 49 56 67
01as
_1000Gy _400Gy Testigo
FIGURA 2. TITULOS DE ANTICUERPOS IgG CONTRA Dictyocaulus viviparus
EN UNA MEZCLA DE SUEROS POR GRUPO DE BOVINOS VACUNADOS CON LARVAS
IRRADIADAS A400 Gy Y 1000 Gy LOS DIAS 0 Y 21 Y DESAFIADOS CON
30L
3
/kg DE PESO EL DIA 42.
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244