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Campus Juriquilla
Centro de Fsica Aplicada y Tecnologa Avanzada
Licenciatura en Tecnologa
Laboratorio de Bioqumica
Practica 2
Aislamiento de protenas: precipitacin isoelctrica de
casena de la leche.
Noel Matas Zapote
Equipo: Rodolfo Mora Gutirrez, Arturo Olivares Castillo
Laboratorio de Bioqumica:
Dra. Luz Mara Lpez
Karen Castao Gonzlez
Jueves 4 de septiembre de 2014
Laboratorio de Bioqumica Practica 2: Aislamiento de protenas
Introduccin
Es posible aislar protenas del medio en el que se encuentran para extraerlas y realizar su
estudio por separado. Un mtodo utilizado es modificar el pH de la mezcla en la que est
presente la protena a estudiar hasta alcanzar el punto isoelctrico para que se precipite y las
otras protenas queden flotando en el medio.
Objetivo
Conocer de manera prctica el concepto de punto isoelctrico, adems de observar las
propiedades de las molculas anfotricas en el agua mediante el aislamiento de casena de
leche.
Hiptesis
La casena al ser una molcula anfotrica puede ser neutralizada en sus carga modificando
el pH de la mezcla en la que se encuentra, hasta alcanzar el punto isoelctrico de dicha
protena, as perder su capacidad de disolverse en el agua y se ver precipitada, las dems
protenas quedaran en suspensin y podr ser aislada fcilmente mediante mtodos
mecnicos.
Materiales
o Potencimetro con electrodo de
calomel
o Parrilla con agitacin magntica
o Pipetas Pasteur de plstico
o 1 vaso de precipitados de 100 ml
o 1 varilla de vidrio para agitacin
manual
o 1 probeta de vidrio de 200 ml
o Pizeta de agua destilada
o Pipetas graduadas de 10 ml (2x)
o Tubos de centrfuga de 50 ml, de
plstico, con tapn de rosca (6x)
o Pipeteadores sencillos y/o
mecnicos
o Centrfuga para tubos de 50 ml
o Balanza granataria
o Toallas desechables
o Etanol 96 (200 ml de solucin de
etanol al 75% para todo el grupo)
o cido clorhdrico concentrado
(100 ml de
o HCl al 2% para todo el grupo)
o NaOH (100 ml de NaOH 1M para
todo el grupo)
Laboratorio de Bioqumica Practica 2: Aislamiento de protenas
Mtodo
De 250 ml leche previamente diluida en relacin 1:4 con agua se separaron 5 ml para
reservarlo, etiquetado como agua leche 1:4. Se tuvo que bajar el pH de la mezcla de 7.20
a 4.8 con ayuda de 8 ml de HCl agregados poco a poco y monitoreando con el pHmetro.
Despus de decantar por algunos minutos reservamos 20 ml del sobrenadante como leche
descaseinada. Para la completa separacin de la casena se utiliz la centrifuga, primero
para un precipitado con 45 ml de agua y despus con dos lavados a base de agua y uno
ultimo con etanol al 75%. El precipitado resultante se dej para almacenar.
Discusin
En general la prctica se llev acabo al pie de la letra, salvo al diluir la leche en relacin 1:4
donde al tener los 50 ml de leche pusimos 200 ml de agua, o sea 4 partes de agua por 1 de
leche, cuando la prctica indica indicaba indirectamente que eran solo 150 ml de agua.
Aunque esto no debera de afectar los resultados, es posible que se haya obtenido menos
casena al estar ms diluida en el agua. Adems es muy probable que no hayamos obtenido
el total de casena de la leche ya que el pHmetro variaba demasiado en la medida al paso
del tiempo.
Conclusin
Fue posible aislar la casena al bajar el pH de la leche y dejar decantar y centrifugar la
mezcla resultante, porque al neutralizar la molcula con carga neta igual a cero pierde sus
propiedades polares tornndose insoluble en agua; el punto isoelctrico de la casena est
en un pH por debajo del de la leche normal, por lo que fue necesario agregar cido para
alcanzarlo, lo que explica por ejemplo el efecto de la leche cortada al agregar limn o
alguna otra sustancia cida.