SEMANA 1: CONCEPTO E H!TOR" #E $" MCROBO$OG" n%rod&cci'n al es%&dio de la microbiologa: E(ol&ci'n )is%'rica* desc&brimien%o de los microorganismos. Con%ro(ersia sobre la generaci'n es+on%,nea. Primeros es%&dios sobre -ermen%aciones* Pas%e&r . s&s con%em+or,neos. $as esc&elas de Pas%e&r . /oc)* +a+el de los microorganismos en las %rans-ormaciones de la ma%eria org,nica .* en la +rod&cci'n de en-ermedades. CONCEPTO E HISTORIA DE LA MICROBIOLOGA
INTRODUCCIN La Microbiologa se puede defnir, sobre la base de su etimologa, como la ciencia que trata de los seres vivos muy pequeos, concretamente de aquellos cuyo tamao se encuentra por debajo del poder resolutivo del ojo humano. Esto hace que el objeto de esta disciplina venga determinado por la metodologa apropiada para poner en evidencia, y poder estudiar, a los microorganismos. Precisamente, el origen tardo de la Microbiologa con relacin a otras ciencias biolgicas, y el reconocimiento de las m!ltiples actividades desplegadas por los microorganismos, hay que atribuirlos a la carencia, durante mucho tiempo, de los instrumentos y t"cnicas pertinentes. #on la invencin del microscopio en el siglo $%&& comien'a el lento despegue de una nueva rama del conocimiento, ine(istente hasta entonces. )urante los siguientes *+, aos su progreso se limit casi a una mera descripcin de tipos mor-olgicos microbianos, y a los primeros intentos ta(onmicos, que buscaron su encuadramiento en el marco de los .sistemas naturales. de los /einos 0nimal y %egetal. La Microbiologa es la ciencia que se ocupa del estudio de los microorganismos, es decir, de aquellos organismos demasiado pequeos para poder ser observados a simple vista, y cuya visuali'acin requiere el empleo del microscopio. Esta defnicin implica que el objeto material de la Microbiologa viene delimitado por el tamao de los seres que investiga, lo que supone que abarca una enorme heterogeneidad de tipos estructurales, -uncionales y ta(onmicos1 desde partculas no celulares como los virus, viroides y priones, hasta organismos celulares tan di-erentes como las bacterias, los proto'oos y parte de las algas y de los hongos. )e esta manera la Microbiologa se distingue de otras disciplinas como la 2oologa y la 3ot4nica que se centran en grupos de seres vivos defnidos por conceptos biolgicos homog"neos. 5odos los aspectos y en-oques desde los que se pueden estudiar los microorganismos con-orman lo que denominamos objeto -ormal de la Microbiologa1 caractersticas estructurales, fsiolgicas, bioqumicas, gen"ticas, ta(onmicas, ecolgicas, etc., que comprende el n!cleo general o cuerpo b4sico de conocimientos de esta ciencia. Por otro lado, la Microbiologa tambi"n se ocupa de las distintas actividades microbianas en relacin con los intereses humanos, tanto las que pueden acarrear consecuencias perjudiciales 6y en este caso estudia los nichos ecolgicos de los correspondientes agentes, sus modos de transmisin, los diversos aspectos de la microbiota patgena en sus interacciones con el hospedador, los mecanismos de de-ensa de "ste, as como los m"todos desarrollados para combatirlos y controlarlos7, como de las que reportan benefcios 6ocup4dose del estudio de los procesos microbianos que suponen la obtencin de materias primas o elaboradas, y de su modifcacin y mejora racional con vistas a su aplicacin en los 8ujos productivos de las sociedades7. Microbiologa General Ms.C. Blg Mara Teresa Valderrama Rojas La Microbiologa permanece como una disciplina per-ectamente asentada y di-erenciada, que deriva su coherencia interna del tipo de metodologas ajustadas al estudio de los organismos cuyo tamao se sit!a por debajo del lmite de resolucin del ojo humano, aportando un conjunto especfco de conceptos que han enriquecido la 3iologa. El asentamiento de la Microbiologa como ciencia est4 estrechamente ligado a una serie de controversias seculares 6con sus numerosas fltraciones de la floso-a e incluso de la religin de la "poca7, que se prolongaron hasta fnales del siglo $&$. La resolucin de estas pol"micas dependi del desarrollo de una serie de estrategias e(perimentales fables 6esterili'acin, cultivos puros, per-eccionamiento de las t"cnicas microscpicas, etc.7, que a su ve' dieron nacimiento a un cuerpo coherente de conocimientos que constituy el n!cleo aglutinador de la ciencia microbiolgica. El reconocimiento del origen microbiano de las -ermentaciones, el defnitivo abandono de la idea de la generacin espont4nea, y el triun-o de la teora germinal de la en-ermedad, representan las conquistas defnitivas que dan carta de naturale'a a la joven Microbiologa en el cambio de siglo. Podemos defnir, a los microorganismos como seres de tamao microscpico dotados de individualidad, con una organi'acin biolgica sencilla, bien sea a celular o celular, y en este !ltimo caso pudiendo presentarse como unicelulares, cenocticos, coloniales o pluricelulares, pero sin di-erenciacin en tejidos u rganos, y que necesitan para su estudio una metodologa propia y adecuada a sus pequeas dimensiones. 3ajo esta denominacin se engloban tanto microorganismos celulares como las entidades subcelulares. 5ras la Edad de 9ro de la 3acteriologa, representada por Pasteur y :och, la Microbiologa qued durante cierto tiempo como una disciplina descriptiva y aplicada, estrechamente unida con la Medicina, y con un desarrollo paralelo al de la ;umica, que le aportara varios avances metodolgicos -undamentales. <in embargo, una corriente, en principio minoritaria, dedicada a los estudios b4sicos centrados con ciertas bacterias del suelo poseedoras de capacidades metablicas especiales, incluyendo el descubrimiento de las que a-ectan a la nutricin de las plantas, logr hacer ver la ubicuidad ecolgica y la e(trema diversidad fsiolgica de los microorganismos. )e esta -orma, se estableca una cabe'a de puente entre la Microbiologa y otras ciencias biolgicas, que lleg a su momento decisivo cuando se comprob la unidad qumica de todo el mundo vivo, y se demostr, con material y t"cnicas microbiolgicas que la mol"cula de la herencia era el 0)=. Ello conduce a un intercambio entre la Microbiologa, la >en"tica y la 3ioqumica, que se plasma en el nacimiento de la 3iologa Molecular, base del auge de la 3iologa desde mediados del siglo pasado. 0s mismo la b!squeda de agentes in-ectivos, desentraamiento y aprovechamiento de los mecanismos de de-ensa del hospedador de la Microbiologa condujeron a la creacin de ciencias subsidiarias1 %irologa, &nmunologa. Por tanto, la Microbiologa ha de ocuparse de todas las t"cnicas y metodologas destinadas al estudio e(perimental, manejo y control de los microorganismos, es decir, de todos los aspectos relacionados con el modo de trabajo de una ciencia emprica. ?inalmente la corriente aplicada que estuvo en la base de la creacin de la Microbiologa, mantuvo su vigencia, enriquecida por continuos aportes de la investigacin b4sica, y muestra una impresionante avance y perspectiva de e(pansin a m!ltiples campos de la actividad humana, desde el control de en-ermedades in-ecciosas1 higiene, vacunacin, quimioterapia, antibioterapia, hasta el aprovechamiento econmico racional de los m!ltiples procesos en los que se hallan implicados los microorganismos1 biotecnologas. Microbiologa General Ms.C. Blg Mara Teresa Valderrama Rojas DESARROLLO HISTRICO DE LA MICROBIOLOGA. La Microbiologa, considerada como una ciencia especiali'ada, no aparece hasta fnales del siglo $&$, como consecuencia de la con8uencia de una serie de progresos metodolgicos que se haban empe'ado a incubar lentamente en los siglos anteriores, y que obligaron a una revisin de ideas y prejuicios seculares sobre la din4mica del mundo vivo. <i bien el descubrimiento e-ectivo de seres vivos no visibles a simple vista debi aguardar hasta el !ltimo tercio del siglo $%&&, sus actividades son conocidas por la humanidad desde tiempos muy antiguos , tanto las benefciosas, representadas por las -ermentaciones implicadas en la produccin de bebidas alcohlicas, pan y productos l4cteos, como las perjudiciales, en -orma de en-ermedades in-ecciosas. )iversas -uentes escritas de la antig@edad griega y romana hablan de g"rmenes invisibles que transmiten en-ermedades contagiosas. Lucrecio 6ABC++ a.#.7, en su .#e rer&m na%&ra. hace varias alusiones a .semillas de en-ermedad.. En el /enacimiento europeo, >irolamo ?rascatorius, en su libro .#e con%agione e% con%agionis. 6*+DB7 dice que las en-ermedades contagiosas se deben a .g"rmenes vivos. que pasan de diversas maneras de un individuo a otro. Estos inicios de e(plicacin que renunciaban a invocar causas sobrenaturales -ueron probablemente catali'ados por la introduccin en Europa de la sflis, una en-ermedad en la que estaba clara la necesidad de contacto para su contagio. Pero lo que se transmite en la en-ermedad sigui siendo objeto de conjeturas durante mucho tiempo. <iguiendo el esquema de #ollard 6lAEB7, podemos distinguir cuatro etapas o periodos en el desarrollo de la Microbiologa1 *. Primer periodo, eminentemente especulativo, que se e(tiende desde la antig@edad hasta llegar a los primeros microscopistas. F. <egundo periodo, de lenta acumulacin de observaciones 6desde lBE+ apro(imadamente hasta la mitad del siglo $&$7, que arranca con el descubrimiento de los microorganismos por LeeuGenhoeH 6lBE+7. I. 5ercer periodo, de cultivo de microorganismos, que llega hasta fnales del siglo $&$, donde las fguras de Pasteur y :och encabe'an el logro de cristali'ar a la Microbiologa como ciencia e(perimental bien asentada. D. #uarto periodo 6desde principios del siglo $$ hasta nuestros das7, en el que los microorganismos se estudian en toda su complejidad fsiolgica, bioqumica, gen"tica, ecolgica, etc., y que supone un e(traordinario crecimiento de la Microbiologa, el surgimiento de disciplinas microbiolgicas especiali'adas 6%irologa, &nmunologa, etc7, y la estrecha imbricacin de las ciencias microbiolgicas en el marco general de las #iencias 3iolgicas. 0 continuacin se reali'a un breve recorrido histrico de la disciplina microbiolgica, desglosando los perodos IJ y DJ en varios apartados tem4ticos. PRIMEROS MICROSCOPISTAS. En el siglo $&%, con la invencin de las primeras lentes para corregir la visin, surgi una cierta curiosidad sobre su capacidad de aumentar el tamao aparente de los objetos. En el siglo $%& surgieron algunas ideas sobre aspectos de la -sica ptica de las lentes de Microbiologa General Ms.C. Blg Mara Teresa Valderrama Rojas aumento, pero no encontraron una aplicacin inmediata. <e dice que >alileo hi'o algunas observaciones .microscpicas. invirtiendo su telescopio a partir de lentes montadas en un tubo, pero en cualquier caso est4 claro que no tuvieron ninguna repercusin. La primera re-erencia segura sobre el microscopio 6*BF*7 se debe a #onstantijn Kuygens, quien relata que el ingl"s #ornelis )rebbel tena en su taller un instrumento magnifcador, que recibi el nombre de microsco+i&m en lBF+, en la 0ccademia dei Lincei, de /oma. El descubrimiento de los microorganismos -ue obra de un comerciante holand"s de tejidos, 0ntonie van LeeuGenhoeH 6*BIFC*EFI7, quien en su pasin por pulir y montar lentes casi es-"ricas sobre placas de oro, plata o cobre, casi lleg a descuidar sus negocios. ?abric unos cuatrocientos microscopios simples, con los que lleg a obtener aumentos de casi I,, di4metros. En *BE+ descubri que en una gota de agua de estanque pululaba una asombrosa variedad de pequeas criaturas a las que denomin .anim4lculos.. En *BLI descubre las bacterias, por lo que se considera el .padre de la Microbiologa.. )urante varias d"cadas LeeuGenhoeH -ue comunicando sus descubrimientos a la /oyal <ociety de Londres a trav"s de una serie de cartas que se di-undieron, en traduccin inglesa, en las .Philosophical 5ransactions.. <us magnfcas dotes de observador le llevaron asimismo a describir proto'oos 6como Giardia, que encontr en sus propias heces7, la estructura estriada del m!sculo, la circulacin capilar, a descubrir los espermato'oides y los glbulos rojos 6por lo que tambi"n se le considera el -undador de la Kistologa animal7, as como a detallar diversos aspectos estructurales de las semillas y embriones de plantas. LeeuGenhoeH se percat de la abundancia y ubicuidad de sus anim4lculos, observ4ndolos en vinagre, placa dental, etc. 0unque los descubrimientos de LeeuGenhoeH despertaron inter"s al ser comunicados, pocos intentaron o pudieron reproducirlos seriamente. 0dem4s, la -abricacin de lentes sencillas de gran aumento era di-cil y el manejo de los microscopios simples, bastante engorroso. <imult4neamente el ingl"s /obert KooHe 6*BI+C*E,I7 usando microscopios compuestos, describi los hongos flamentosos 6*BBE7, y descubri la estructura celular de las plantas 6Microgra+)ia, *BB+7, acuando el t"rmino c"lula. Pero el trabajo con microscopios compuestos aplicados al estudio de los .anim4lculos. languideci durante casi F,, aos, debido a sus imper-ecciones pticas, hasta que hacia *LI, se desarrollaron las lentes acrom4ticas. DEBATE SOBRE LA GENERACIN ESPONTNEA. La autoridad intelectual de 0ristteles por un lado, y la autoridad moral representada por la 3iblia, por otro, junto con las opiniones de escritores cl4sicos como >aleno, Plinio y Lucrecio, a los que se citaba como re-erencias incontrovertibles en la literatura m"dica en la Edad Media y /enacimiento, dieron carta de naturale'a a la idea de que algunos seres vivos podan originarse a partir de materia inanimada, o bien a partir del aire o de materiales en putre-accin. Esta doctrina de la .genera%io s+on%anea. o abiog"nesis, -ue puesta en entredicho por los e(perimentos de ?rancesco /edi 6*BF*C*BAE7, quien haba acuado la e(presin .Omne (i(&m e0 o(o. 6*BBL7, tras comprobar que los insectos y nematodos procedan de huevos puestos por animales adultos de su misma especie. )emostr que si un tro'o de carne era cubierto con gasa de -orma que las moscas no podan depositar all sus huevos, no aparecan .gusanos., que "l correctamente identifc como -ases larvarias del insecto. Los descubrimientos de /edi tuvieron el e-ecto de desacreditar la teora de la generacin espont4nea para los animales y plantas, pero la Microbiologa General Ms.C. Blg Mara Teresa Valderrama Rojas reavivaron respecto de los reci"n descubiertos .anim4lculos., de modo que aunque se acept la continuidad de la vida en cuanto a sus -ormas superiores, no todos estaban dispuestos a admitir el m4s amplio .Omne (i(&m e0 (i(o. aplicado a los microorganismos. Kubo que esperar un siglo m4s hasta que una serie de naturalistas recomen'aran el ataque a la teora pre-ormacionista. La''aro <pallan'ani 6*EFAC*EAA7 sostuvo una disputa con M.5. =eedham 6*E*IC*EL*7 en la que el primero demostr que los .in-usorios. no aparecan en muestras de maceraciones animales o vegetales sometidas durante tiempo sufciente a ebullicin en -rascos herm"ticamente cerrados, pero volvan a aparecer si se practicaban agujeros en el recipiente. <in embargo los pre-ormacionistas no se daban por vencidosN el mismo =eedham, recogiendo una idea ya e(presada por Kuygens, amigo de LeeuGenhoeH, replic Ccon argumentos vitalistas muy propios de la "pocaC que el calor haba destruido la .-uer'a vegetativa. de las in-usiones y haba cambiado la .cualidad. del aire dentro de los -rascos. )urante el primer tercio del siglo $&$ la doctrina de la arqueg"nesis o generacin espont4nea recibi un !ltimo re-uer'o antes de morir, debido por un lado a ra'ones e(tracientfcas 6el auge del concepto de transmutacin producido por la escuela de la floso-a de la naturale'a7, y por otro al descubrimiento del o(geno y de su importancia para la vida, de modo que los e(perimentos de <pallan'ani se interpretaron como que al calentarse las in-usiones, el o(geno del aire se destrua, y por lo tanto desapareca la .-uer'a vegetativa. que originaba la aparicin de microorganismos. 5heodor <chGann 6*L*,C*LLF7 present en *LIB un m"todo seguro para re-utar la teora abiog"nica1 calent maceraciones en -rascos a los que se haba eliminado previamente el aire, pero no continu trabajando en esta lnea. Para complicar m4s las cosas, la publicacin de .!obre el origen de las es+ecies. por )arGin en *L+A, -ue utili'ada por algunos pre-ormacionistas para apoyar sus argumentos. El mismo KaecHel, en una -echa tan tarda como *LBB, se mostraba esc"ptico ante las pruebas aportadas por Pasteur. ?ue, e-ectivamente Louis Pasteur 6*LFFC*LA+7 el que asest el golpe defnitivo y 'anj la cuestin a -avor de la teora biog"nica. En un in-orme a la 0cad"mie des <ciences de Pars, en *LB, 6.E0+1riences r1la%i(es a&0 g1n1ra%ions di%es s+on%an1es.7 y en escritos posteriores comunica sus sencillos y elegantes e(perimentos1 calent in-usiones en matraces de vidrio a los que estiraba lateralmente el cuello, haci"ndolo largo, estrecho y sinuoso, y dej4ndolo sin cerrar, de modo que el contenido estuviera en contacto con el aireN tras esta operacin demostr que el lquido no desarrollaba microorganismos, con lo que elimin la posibilidad de que un .aire alterado. -uera la causa de la no aparicin de g"rmenes. 0ntes bien, comprob que los g"rmenes del aire quedaban retenidos a su paso por el largo cuello sinuoso, en las paredes del tubo, y no alcan'aban el interior del recipiente donde se encontraba la in-usin, quedando "sta est"ril indefnidamente. <lo si se rompa el cuello lateral o si se inclinaba el -rasco de modo que pasara parte de lquido a la porcin de cuello, los g"rmenes podan contaminar la in-usin y originar un r4pido crecimiento. En *LB* publica otro in-orme en el que e(plica cmo se pueden capturar los .cuerpos organi'ados. del aire con ayuda de un tubo provisto de un tapn de algodn como fltro, y la manera de recuperarlos para su observacin microscpica. )e esta -orma quedaba defnitivamente aclarado el origen de los microorganismos, y se abra la Edad de 9ro del estudio cientfco de las -ormas de vida no observables a simple vista. Microbiologa General Ms.C. Blg Mara Teresa Valderrama Rojas Los !ltimos esc"pticos quedaron silenciados cuando en *LEE Mohn 5yndall 6*LF,C*LAI7 aplic su sistema de esterili'acin por calentamiento discontinuo 6hoy conocida precisamente como tindali'acin7, que evidenci la e(istencia de -ormas microbianas de reposo muy resistentes al calor, lo cual -ue confrmado poco m4s tarde por ?erdinand #ohn al descubrir las esporas bacterianas. DEBATE SOBRE LOS FERMENTOS 9tro -actor que contribuye al nacimiento de la ciencia microbiolgica -ue el establecimiento de la relacin que une ciertas trans-ormaciones qumicas que se dan en las in-usiones con el crecimiento de los g"rmenes en ellas e(istentes. #agniardCLatour en *LIB, y <chGann y :@t'ing en *LIE haban sugerido que las levaduras eran las causantes de la -ermentacin alcohlica por la que el a'!car pasa a alcohol etlico y di(ido de carbono, pero se encontraron con la crtica adversa de los grandes qumicos de la "poca 63er'elius, Oohler y Liebig7. Liebig, hacia *LD,, haba reali'ado importantes confrmaciones a la .teora mineral. sobre la nutricin de las plantas, en-rent4ndose a la .teora del humus. sostenida por 5haer, asestando un golpe a las ideas vitalistas heredadas de Leibni'. Puesto que se consideraba a las levaduras como plantas microscpicas, se supona que los procesos de -ermentacin y putre-accin se deban a -enmenos qumicos de descomposicin y muerte encuadrables en el marco de la teora mineral de la fsiologa vegetal. <u convencimiento de que toda actividad vital se poda e(plicar en t"rminos de qumica y -sica retras por alg!n tiempo la adscripcin de estos -enmenos a c"lulas vivas. ?ue Pasteur 6que, desde sus primeros estudios sobre las propiedades pticas de los cristales de tartrato, vena suponiendo que estos compuestos tenan un origen org4nico7 quien de nuevo intervino en el debate de -orma decisiva. En *L+E demostr que los agentes de la -ermentacin l4ctica eran microorganismos, trabajando sobre un problema que haba surgido entre los destiladores de Lille cuando en sus cubas la -ermentacin alcohlica se vio sustituida por una indeseable -ermentacin l4ctica. Este -ue el inicio de una larga serie de estudios que habra de durar hasta *LEB, en los que Pasteur identifc distintos microorganismos responsables de di-erentes clases de procesos -ermentativos. 0s, en *LB, adscribe inequvocamente la -ermentacin alcohlica a ciertos tipos de levaduras, y en *LBB, en sus 2%&des s&r le (in resume sus halla'gos al respecto, inaugurando la Microbiologa 0plicada, una de las primeras derivaciones pr4cticas no empricas emanadas de la 3iologa. 0 fnales del siglo $&$ eminentes bilogos como Kansen, en #openhague, y 3eijerinH, en )el-t, desarrollaban su actividad en industrias y destileras. 5rabajando sobre los agentes de la -ermentacin butrica, Pasteur descubri la presencia de microorganismos que se desarrollaban en ausencia de o(geno, lo cual desmenta la creencia de que todas las -ormas de vida necesitan aire para crecer. 0cu los t"rminos aerobiosis y anaerobiosis para denominar, respectivamente, a la vida en presencia y en ausencia de o(geno, comprendiendo las distintas implicaciones energ"ticas subyacentes a la utili'acin de sustratos org4nicos en presencia y en ausencia de o(geno, demostrando que, en el segundo caso el rendimiento 6medido como crecimiento microbiano7 era siempre menor, al no poder reali'arse la degradacin total de las correspondientes sustancias. Pna pro-undi'acin en los -enmenos de -ermentacin lleg cuando en *LAE 3uchner obtuvo, a partir de levaduras, una preparacin en'im4tica 6'imasa7 que era capa' de reali'ar la misma trans-ormacin de .-ermentacin. que las c"lulas vivas. Este descubrimiento, que evocaba las propuestas de 3er'elius y Liebig, supuso en realidad la Microbiologa General Ms.C. Blg Mara Teresa Valderrama Rojas con8uencia de los en-oques qumico y biolgico1 las -ermentaciones eran procesos qumicos catali'ados por en'imas presentes dentro de c"lulas vivas, que podan ser estudiados e(tracelularmente. )e esta -orma, la 3ioqumica, nacida como una rama de la qumica fsiolgica, que se vena especiali'ando en la en'imologa, encontr una alian'a -ruct-era y duradera con la Microbiologa. LOS AVANCES TCNICOS La doctrina del pleomorfsmo, vigente durante buena parte del siglo $&$, mantena que los microorganismos adoptaban -ormas y -unciones cambiantes dependiendo de las condiciones ambientales. 0 estas ideas se oponan -rontalmente investigadores como :och, Pasteur y #ohn, que estaban convencidos de la especifcidad y constancia mor-olgica y fsiolgica de cada tipo de microorganismo 6monomorfsmo7. El pleomorfsmo haba surgido como una e(plicacin a la gran variedad de -ormas y actividades que aparecan en un simple -rasco de in-usin, pero ya Pasteur, en sus estudios sobre la -ermentacin, se haba percatado de que los cultivos que aparecan podan considerarse como una sucesin de distintas poblaciones de microorganismos predominantes, que, a resultas de sus actividades, condicionaban la posterior composicin de la comunidad microbiana. La solucin defnitiva a esto, dependa de un desarrollo t"cnico, que a su ve' iba a suministrar una de las herramientas caractersticas de la nueva ciencia1 los m"todos de cultivo puro. Los primeros cultivos puros -ueron obtenidos por el miclogo 3re-eld, quien logr aislar esporas de hongos y cultivarlas sobre medios slidos a base de gelatina. Por su menor tamao, este m"todo se haca inviable para las bacterias, por lo que se recurri a un m"todo basado en diluciones1 Lister, en *LEL reali' diluciones secuenciales de cultivos mi(tos, hasta lograr muestras en las que e(ista una sola c"lula. Pero la t"cnica era larga y tediosa y, adem4s, normalmente slo se lograban aislar c"lulas del tipo bacteriano m4s abundante en el cultivo originalN sin embargo, el e(perimento sirvi para confrmar la naturale'a .particulada. de los agentes de las -ermentaciones. Por aquella "poca :och buscaba con ahnco m"todos m4s sencillos de cultivo puro, indispensables para proseguir sus investigaciones sobre bacterias patgenas. Primero 6y qui'4 de -orma un tanto casual7 emple rodajas de papa como sustrato slido nutritivo sobre el que se podan desarrollar colonias macroscpicas de bacterias que presentaban mor-ologa caracterstica, que :och interpret como resultantes del crecimiento a partir de c"lulas individuales. Pero enseguida recurri a compactar el tpico caldo de cultivo a partir de carne 6diseado por LoeQer7 aadi"ndole gelatina 6*LL*7. El medio slido as logrado era transparente, lo que permita visuali'ar -4cilmente los rasgos coloniales, y contena los nutrientes adecuados para el crecimiento de una amplia gama de bacterias. Rstas eran inoculadas en la superfcie del medio con un hilo de platino pasado previamente por la llama, por la t"cnica de siembra en estra. <in embargo, la gelatina presentaba los inconvenientes de ser atacada por determinados microorganismos, y de tener un bajo punto de -usinN ambos problemas se solventaron cuando en *LLF el m"dico alem4n Oalter Kesse, siguiendo una sugerencia de su mujer ?anny, introdujo el agarCagar 6polisac4rido e(trado de algas rojas7 como nuevo agente solidifcante. El trabajo de :och ya citado tuvo la trascendental consecuencia de derribar las ideas pleomorfstas, y supuso la primera propuesta del concepto de especie dentro del mundo bacteriano. En *LLE Petri, un ayudante de :och, sustituy las engorrosas bandejas de vidrio cubiertas con campanas, usadas hasta entonces para los cultivos slidos, por un sistema manejable de placas de cristal planas, que se conoce como cajas de Petri. Microbiologa General Ms.C. Blg Mara Teresa Valderrama Rojas El desarrollo de los medios selectivos y de enriquecimiento -ue una consecuencia de las investigaciones llevadas a cabo por 3eijerincH y OinogradsHy entre *LLL y los primeros aos del siglo $$, sobre bacterias implicadas en procesos biogeoqumicos y poseedoras de caractersticas fsiolgicas distintivas 6quimioauttro-as, fjadoras de nitrgeno, etc.7. Estos medios, donde se aplica a pequea escala el principio de seleccin natural, se disean de -orma que su composicin qumica defnida -avore'ca slo el crecimiento de ciertos tipos fsiolgicos de microorganismos, !nicos capaces de usar ciertos nutrientes del medio. 9tra importante aportacin surgi del uso de medios di-erenciales, en los que se manifesta alg!n rasgo bioqumico o metablico, lo que contribuye a la identifcacin microbiana. ?ue O@rt' quien, en *LAF, introdujo el uso de indicadores de pK, incorporados en los medios, lo cual permita revelar la produccin de acidifcaciones por -ermentacin en ciertas bacterias. En la ciudad de Mena se haba creado una atms-era de progreso donde con8uan grandes naturalistas como KaecHel, <trassburger o 0bb" interaccionando con una pujante editorial especiali'ada en 3iologa y Medicina 6>ustav ?ischer7 y con una poderosa industria ptica y qumica. Estas in8uencias recprocas se plasmaron en numerosos proyectos que re8ejaban la e-ervescencia de las ciencias naturales, la industria ptica de 0bb" y 2eiss, que se mantena en cone(in con la compaa vidriera <chott, pudo satis-acer la necesidad de :och de per-eccionar el microscopio compuesto, introduciendo lentes acrom4ticas y una iluminacin in-erior provista de condensador. El mismo 0bb" desarroll en *LEL el objetivo de inmersin en aceite. La industria qumica 30<?, que por aquella "poca se encontraba en pleno auge de patentes de nuevos colorantes, suministr al laboratorio de :och una serie de derivados de anilina que tean las bacterias permitiendo su -4cil visuali'acin al microscopio en -rotis de tejidos in-ectados. En *LE+ #arl Oeigert ti bacterias con pirocarmn, un colorante que ya vena siendo usado desde haca unos aos en estudios 'oolgicos. En aos sucesivos se -ueron introduciendo el a'ul de metileno 6:och, *LEE7, la -uchsina, y el violeta cristal. En *LLFC*LLI 2iehl y =eelsen desarrollan su m"todo de 4cidoCalcohol resistencia para teir M.cobac%eri&m %&berc&losis. En *LLD el patlogo dan"s #hristian >ram establece una tincin de contraste que permite distinguir dos tipos bacterianos en -uncin de sus reaccin di-erencial de tincin y que, como se vera mucho m4s tarde, re8ejaba la e(istencia de dos grupos de bacterias con rasgos estructurales distintivos. En *LA, LoeQer logra visuali'ar 8agelos bacterianos por medio de su t"cnica de impregnacin arg"ntica. #omo veremos m4s adelante, la misma industria de colorantes alemana previa a la primera guerra mundial -ue decisiva tambi"n para los comien'os de la quimioterapia. Estas innovaciones t"cnicas1 m"todos de cultivo, microscopa y tinciones, -ueron -undamentales junto con los sistemas de esterili'acin para la consolidacin de la Microbiologa como ciencia, permitiendo eliminar las grandes dosis de especulacin que hasta entonces haban predominado. ROL DE LOS MICROORGANISMOS EN LAS ENFERMEDADES. )urante el siglo $&$ la atencin de muchos naturalistas se haba dirigido hacia las diversas -ormas de animales y plantas que vivan como par4sitos de otros organismos. Este inter"s se redobl tras la publicacin de los libros de )arGin, estudi4ndose las numerosas adaptaciones evolutivas que los distintos par4sitos haban adquirido en su Microbiologa General Ms.C. Blg Mara Teresa Valderrama Rojas peculiar estilo de vida. <in embargo, la adjudicacin de propiedades de par4sitos a los microorganismos vino del campo m"dico y veterinario, al revalori'arse las ideas sobre el origen germinal de las en-ermedades in-ecciosas. En *LI+ 0gostino 3assi 6*EEIC*L+B7 demostr que cierta en-ermedad del gusano de seda 6mal di segno7, que haba hecho su aparicin en Lombarda, se deba a un hongo 6Bo%r.%is bassiana7. #uatro aos m4s tarde M.L. <chSnlein descubri la asociacin de un hongo con una en-ermedad humana de la piel. En *LD, Kenle, de la escuela fsiolgica de Mohannes M@ller, plante la teora de que las en-ermedades in-ecciosas est4n causadas por seres vivos invisibles, pero de nuevo la confrmacin de estas ideas tuvo que esperar a que la intervencin de Pasteur demostrara la e(istencia de microorganismos especfcos responsables de en-ermedades. Kacia mediados del siglo $&$ otra en-ermedad in-ecciosa 6pebrina7 comen' a diseminarse por los criaderos de gusano de seda de toda Europa, alcan'ando fnalmente a #hina y Mapn. 0 instancias de su maestro Mean 3aptiste )umas, Pasteur acept el reto de viajar a la Proven'a para investigar esta en-ermedad que estaba dejando en la ruina a los industriales sederos, a pesar de que nunca hasta entonces se haba en-rentado con un problema de patologa. Es probable que Pasteur viera aqu la oportunidad de confrmar si sus estudios previos sobre las -ermentaciones podan tener una e(tensin hacia los procesos fsiolgicos del hombre y de los animales. 0l principio no se mostrara dispuesto a aceptar la idea de que la pebrina -uera una en-ermedad ocasionada por un agente e(trao, creyendo durante los dos primeros aos que se trataba de alteraciones meramente fsiolgicas. 5ras una serie de tanteos, y en medio de una intensa actividad intelectual que le obligaba a repasar continuamente los e(perimentos y las conclusiones e(tradas llega fnalmente, en *LBA, a identifcar al proto'oo Nosema bomb.cis como el responsable de la epidemia, y por medio de una serie de medidas de control, "sta comien'a a remitir de modo espectacular. La intervencin de bacterias como agentes especfcos en la produccin de en-ermedades -ue descubierta a ra' de una serie de investigaciones sobre el carbunco o 4ntra(, en-ermedad que a-ecta a ganado y que puede transmitirse al hombre. #. )avaine, entre *LBI y *LBL, encontr que en la sangre de vacas a-ectadas aparecan grandes cantidades de microorganismos a los que llam bac%eridiosN adem4s, logr inducir la en-ermedad e(perimentalmente en vacas sanas, inocul4ndoles muestras de sangre in-ectada. En *LEF el m"dico alem4n #.M. Eberth consigui aislar los bacilos fltrando sangre de animales carbuncosos. Pero -ue /obert :och 6*LDIC*A*,7, que haba sido alumno de Kenle, quien con su reciente t"cnica de cultivo puro logr, en *LEB, el primer aislamiento y propagacin in (i%ro del bacilo del 4ntra( 6Bacill&s an%)racis7, consiguiendo las primeras micro-otogra-as sobre preparaciones secas, fjadas y teidas con a'ul de metileno. En *LL*, :och y sus colaboradores confrmaron que las esporas son -ormas di-erenciadas a partir de los bacilos, y m4s resistentes que "stos a una variedad de agentes. Pero m4s -undamental -ue su demostracin de que la en-ermedad se poda transmitir sucesivamente a ratones sanos inocul4ndoles bacilos en cultivo puro, obtenidos tras varias trans-erencias en medios lquidos. Este tipo de estrategias para demostrar el origen bacteriano de una en-ermedad -ue llevado luego a per-eccin en *LLF, con la publicacin de 3#ie 4%)iologie der T&ber5&lose3, donde se comunica por primera ve' la aplicacin de los criterios que Kenle haba postulado en *LD,. Estos criterios, que hoy van asociados al nombre de :och, y se conoce como los postulados de :och son los siguientes1 Microbiologa General Ms.C. Blg Mara Teresa Valderrama Rojas *. El microorganismo debe de estar presente en todos los individuos en-ermos. F. El microorganismo debe poder aislarse del hospedador y ser crecido en cultivo puro. I. La inoculacin del microorganismo crecido en cultivo puro a animales sanos debe provocar la aparicin de sntomas especfcos de la en-ermedad en cuestin. D. El microorganismo debe poder ser reaislado del hospedador in-ectado de -orma e(perimental. ?ue asimismo :och quien demostr el principio de especifcidad biolgica del agente in-eccioso1 cada en-ermedad in-ecciosa especfca est4 causada por un tipo de bacteria di-erente. Estos trabajos de :och abren defnitivamente el campo de la Microbiologa M"dica sobre frmes bases cientfcas. )urante las dos d"cadas siguientes la Microbiologa e(periment una aut"ntica edad de oro, en la que se aislaron y caracteri'aron muchas bacterias patgenas. La 0lemania del /eich, que a la sa'n se haba convertido en una potencia poltica y militar, se decidi a apoyar la continuidad de los trabajos del equipo de :och, dada su enorme importancia social y econmica, creando un &nstituto de investigacin, siendo :och su director en el )epartamento de <alud. )e esta -orma, en la Escuela 0lemana se aislaron los agentes productores del clera asi4tico 6:och, *LLI7, de la di-teria 6LoeQer, *LLD7, del t"tanos 6=icolaier, *LL+ y :itasato, *LLA7, de la neumona 6?raenHel, *LLB7, de la meningitis 6Oeichselbaun, *LLE7, de la peste 6Tersin, *LAD7, de la sflis 6<chaudinn y KoUman, *A,+7, etc. &gualmente se pudieron desentraar los ciclos in-ectivos de agentes de en-ermedades tropicales no bacterianas que la potencia colonial se encontr en ultramar1 malaria 6<chaudinn, *A,*C*A,I7, en-ermedad del sueo 6:och, *A,B7, peste vacuna a-ricana 6debida al ingl"s 3ruce, *LA+C*LAE7, etc. La Escuela ?rancesa, representada por el &nstituto Pasteur, se concentr en los estudios sobre los procesos in-ectivos, la inmunidad del hospedador, y la obtencin de vacunas, sobre todo a ra' de la vacuna antirr4bica ensayada por Pasteur 6*LL+7, contribuyendo al nacimiento de la &nmunologa. DESARROLLO DE LA INMUNOLOGA La inmunologa es, en la actualidad, una ciencia autnoma y madura, pero sus orgenes han estado estrechamente ligados a la Microbiologa. <u objeto consiste en el estudio de las respuestas de de-ensa que han desarrollado los animales -rente a la invasin por microorganismos o partculas e(traos, aunque su inter"s se ha volcado especialmente sobre aquellos mecanismos altamente evolucionados e integrados, dotados de especifcidad y de memoria, -rente a agentes reconocidos por el cuerpo como noCpropios, as como de su neutrali'acin y degradacin. #omo tantas otras ciencias, la &nmumologa presenta un prolongado perodo preC cientfco, de observaciones y apro(imaciones meramente empricas. La resistencia a ulteriores ataques de una en-ermedad in-ecciosa -ue ya recogida en escritos de la antig@edadN el historiador griego 5ucdides 6DBDCD,D a.#.7 narra que en una epidemia acaecida durante la guerra del Peloponeso, los en-ermos eran atendidos solo por aquellos que haban sobrevivido previamente a la en-ermedad, en la seguridad de que "stos no volveran a ser contagiados. &gualmente, en la antigua #hina se haba observado que las personas que en su nie' haban padecido la viruela no la adquiran m4s adelante en su vida. Los mismos chinos, en el siglo $& a. #., -ueron los primeros en intentar una aplicacin de estas observaciones que indicaban la induccin de un estado protector por medio de una -orma suave de la en-ermedad1 la inhalacin de polvo de escaras de viruela provocaba un ataque suave que con-era resistencia ante in-ecciones Microbiologa General Ms.C. Blg Mara Teresa Valderrama Rojas posteriores. Pna modifcacin -ue introducida en 9ccidente en el siglo $%&&& por Pylarini y 5imoni, y -ue populari'ada en >ran 3retaa por Lady Mary Oortley Montagu, esposa del embajador ingl"s en #onstantinopla, tras una serie inicicial de pruebas sobre .voluntarios. 6prisioneros7. <in embargo, este tipo de pr4cticas no llegaron a arraigar ampliamente, ya que no estaban e(entas de riesgos, entre los cuales fguraba la posibilidad de transmisin de otras en-ermedades. El primer acercamiento a la inmuni'acin con criterios racionales -ue reali'ado por el m"dico ingl"s EdGard Menner 6*EDAC*LFI7, tras su constatacin de que los vaqueros que haban adquirido la viruela vacunal 6una -orma benigna de en-ermedad que slo produca p!stulas en las manos7 no eran atacados por la grave y de-ormante viruela humana. En mayo de *EAB inocul a un nio 8uido procedente de las p!stulas vacunales de <arah =elmesN semanas despu"s el nio -ue inyectado con pus de una p!stula de un en-ermo de viruela, comprobando que no quedaba a-ectado por la en-ermedad, public sus resultados pronosticando que la aplicacin de su m"todo podra llegar a erradicar la viruela, -ue el primero en recalcar la importancia de reali'ar estudios clnicos de seguimiento de los pacientes inmuni'ados, consciente de la necesidad de contar con controles fables. La -alta de conocimiento, en aquella "poca, de las bases microbiolgicas de las en-ermedades in-ecciosas retras en casi un siglo la continuacin de los estudios de Menner, aunque ciertos autores, como 5urenne, lograron articular propuestas tericas de cierto inter"s. Pasteur, estudiando la bacteria responsable del clera aviar 6 Pas%e&rella a(ise+%ica7, observ 6*LL,7 que la inoculacin en gallinas de cultivos viejos, poco virulentos, las protega de contraer la en-ermedad cuando posteriormente eran inyectadas con cultivos normales virulentos. )e esta -orma se obtuvo la primera vacuna a base de microorganismos atenuados. En los aos siguientes abord la inmuni'acin artifcial para otras en-ermedadesN estableci de -orma clara que cultivos de Bacill&s an%)racis atenuados por incubacin a D+V# con-eran inmunidad a ovejas e(puestas a contagio por carbunco. Pna -amosa demostracin p!blica del m"todo de Pasteur tuvo lugar en Pouilly le ?ort, el dos de junio de *LL*, cuando ante un gento e(pectante se pudo comprobar la muerte del grupo control de ovejas y vacas no inoculadas, -rente a la supervivencia de los animales vacunados. 0os despu"s, abordara la inmuni'acin contra la rabia, en-ermedad de la que se desconoca el agente causal, observ que "ste perda virulencia cuando se mantenan al aire durante cierto tiempo e(tractos medulares de animales in-ectados, por lo que dichos e(tractos se podan emplear efca'mente como vacunas. /eali' la primera vacunacin antirr4bica en humanos sobre un nio, quien haba sido mordido gravemente por un perro rabioso, a este caso siguieron otros , lo que vali a Pasteur reconocimiento universal y supuso el apoyo defnitivo a su m"todo de inmuni'acin, que abra perspectivas prometedoras de profla(is ante muchas en-ermedades. Estos logros determinaron, la creacin del &nstituto Pasteur, que reuni a un selecto grupo de cientfcos, que en-ocaran sus es-uer'os en diversos aspectos de las inmuni'aciones y de sus bases biolgicas. 0 su ve', los norteamericanos <almon y <mith 6*LLB7 per-eccionaron los m"todos serolgicos de Pasteur, lo que les permiti producir y conservar m4s -4cilmente sueros tipifcados contra la peste porcina. 0 fnales del siglo $&$ e(istan dos teoras opuestas sobre los -undamentos biolgicos de las respuestas inmunes. Por un lado, el 'ologo ruso &lya &lich MechniHov 6*LD+C*A*B7, que haba reali'ado observaciones sobre la -agocitosis en estrellas de mar y pulgas de agua, estableci, a partir de *LLI, su .5eora de los -agocitos., tras estudiar -enmenos de englobamiento de partculas e(traas por los leucocitos de conejo y de humanos. &n-orm que e(istan -enmenos de eliminacin de agentes patgenos por medio de Microbiologa General Ms.C. Blg Mara Teresa Valderrama Rojas .c"lulas devoradoras. 6-agocitos7 que actuaban en animales vacunados contra el carbunco, y e(plic la inmuni'acin como una .habituacin. del hospedador a la -agocitosis. M4s tarde, ya integrado en el &nstituto Pasteur, propugn la idea de que los -agocitos segregan en'imas especfcos, an4logos a los .-ermentos. digestivos 6*A,,7. Esta teora de los -agocitos constituy el n!cleo de la teora de la inmunidad celular, de modo que la -agocitosis se consideraba como la base principal del sistema de de-ensa inmune del organismo. Por otro lado, la escuela alemana de :och haca hincapi" en la importancia de los mecanisnos humorales. Emil von 3ehring 6*L+DC*A*E7 y <hibasaburo :itasato 6*L+BC *AI*7, a resultas de sus trabajos sobre las to(inas del t"tanos y de la di-teria, observaron que el cuerpo produce .antito(inas. 6m4s tarde conocidas como anticuerpos7 que tendan a neutrali'ar las to(inas de -orma especfca, y evidenciaron que el suero que contiene antito(inas es capa' de proteger a animales e(puestos a una dosis letal de la to(ina correspondiente 6*LA,7. La intervencin de Ehrlich permiti obtener sueros de caballo con niveles de anticuerpos sufcientemente altos como para con-erir una proteccin efca', e igualmente se pudo disponer de un ensayo para cuantifcar la .antito(ina. presente en suero. Ehrlich dirigi desde *LAB el &nstituto Estatal para la &nvestigacin y #omprobacin de <ueros, en <teglit', cerca de 3erln, y, a partir de *LAA, estuvo al -rente del mejor equipado &nstituto de 5erapia E(perimental, en ?ranH-urt. )urante este !ltimo periodo de su vida, Ehrlich produce una impresionante obra cientfca, en la que va ahondando en la comprensin de la inmunidad humoral. En *A,, da a lu' su .5eora de las cadenas laterales., en la que -ormula una e(plicacin de la -ormacin y especifcidad de los anticuerpos, estableciendo una base qumica para la interaccin de "stos con los antgenos. Por su lado, /. :raus visuali'a por primera ve', en *LAE, una reaccin antgenoCanticuerpo, al observar el enturbiamento de un fltrado bacteriano al me'clarlo con un suero inmune especfco 6antisuero7. En *LAL Mules 3ordet 6*LE,C*AB*7 descubre otro componente s"rico relacionado con la respuesta inmunitaria, al que bauti'a como .ale(ina., caracteri'ado, -rente al anticuerpo, por su termolabilidad e inespecifcidad. 6M4s tarde se impondra el nombre de complemento, propuesto por Ehrlich7. El mismo 3ordet desarroll, en *A,*, el primer sistema diagnstico para la deteccin de anticuerpos, basado en la fjacin del complemento, y que inici una larga andadura, que llega a nuestros das. La conciliacin de las dos teoras se debi a 0lmorth Origth y <teGart /. )ouglas, quienes en *A,D descubren las opsoninas, anticuerpos presentes en los sueros de animales inmuni'ados y que, tras unirse a la superfcie bacteriana, incrementan la capacidad -agoctica de los leucocitos. La inmunopatologa se inicia con la descripcin del -enmeno de anafla(ia producido por introduccin en un animal de un suero de una especie distinta 6Portier y /ichet, *A,FN 0rthus, *A,I7, lo que abrira la posibilidad de m"todos de serodiagnstico, con aplicaciones en Medicina, 2oologa, y otras ciencias biolgicas. En *A,+ Pirquet sugiere que la en-ermedad del suero 6 -enmemo de hipersensibilidad7 tiene relacin directa con la produccin de anticuerpos contra el suero inyectado, introduciendo el t"rmino de alergia para re-erirse a la reactividad inmunolgica alterada. La inmunoqumica cobra un gran impulso en las primeras d"cadas del siglo $$ con los trabajos de :arl Landsteiner 6*LBLC*ADI7. <u primera contribucin haba sido la descripcin, mediante reacciones de aglutinacin, del sistema de antgenos naturales 603#,7 de los eritrocitos humanos 6*A,*C*A,F7, completada 6en colaboracin con %on )ungern y Kir'-eld7, con las subdivisiones del grupo 0 y el estudio de su transmsin hereditaria. Microbiologa General Ms.C. Blg Mara Teresa Valderrama Rojas Estos trabajos sirvieron de estmulo para avan'ar en el desentraamiento de la especifcidad qumica de los antgenos que determinan la -ormacin de anticuerpos. Landsteiner estudi sistem4ticamente las caractersticas de inmunogenicidad y especifcidad de reaccin de antgenos con anticuerpos, vali"ndose de la modifcacin qumica de antgenos, denominando haptenos a aquellos grupos qumicos que por s mismos no desencadenan -ormacin de anticuerpos, pero s lo hacen tras ser conjugados a protenas portadoras. La cuestin de las reacciones antgenoCanticuerpo se convirti en otra pol"mica entre escuelas hasta fnales de los aos F,. Mientras Ehrlich y sus seguidores mantenan que estas reacciones tienen una base puramente qumica, 3ordet y sus discpulos las e(plicaban como -enmenos -sicos de reacciones entre coloides. La resolucin del debate debi aguardar hasta fnales de los aos I,, al incorporarse avances t"cnicos como la electro-oresis, la cromatogra-a en papel, la ultracentri-ugacin y el microscopio electrnico. Keidelberg y :endall 6*AIB7 purifcaron anticuerpos a partir de sueros por disociacin de precipitados. 5iselius 6*AIA7 demostr que los anticuerpos constituyen la -raccin gammaCglobulnica del suero. %einte aos despu"s /./. Porter y >.M. Edelman establecen la estructura de las inmunoglobulinas. )urante este lapso de tiempo se descubre que la sntesis de anticuerpos ocurre en las c"lulas plasm4ticas, aunque "stas no son puestas en relacin a!n con los lin-ocitosN durante muchos aos se sigui creyendo que los lin-ocitos eran c"lulas pasivas, sin -uncin inmune. Por aquella "poca se describe, tambi"n, la diversidad de inmunoglobulinas, lleg4ndose al establecimiento de una nomenclatura. Enseguida comien'a la era de los m!ltiples e(perimentos sobre timectoma en ratones neonatos y sobre bursectoma en aves, as como los de reconstitucin de animales irradiados, con timocitos y c"lulas de la medula sea, y que permiten afrmar el papel esencial de los lin-ocitos, encuadrarlos en tipos -uncionales 5 y 3, y relacionarlos con las respuestas inmunes celular y humoral, respectivamente. Pna importante -aceta de la inmunologa de la primera mitad del siglo $$ -ue la obtencin de vacunas. <e lograron to(oides inmunog"nicos a partir de to(inas bacterianas, en muchos casos por tratamiento con -ormol1 to(oide tet4nico 6Eisler y LoGenstein, *A*+7 y to(oide di-t"rico 6>lenny, *AF*7. En *AFF se desarrolla la vacuna 3#> contra la tuberculosis, haciendo uso de una cepa atenuada de M.cobac%eri&m %&berc&losis, el bacilo de #almetteC>u"rin. La utili'acin de coadyuvantes se inicia en *A*B, por LeMoignic y Piroy. La inmunogen"tica nace cuando 3ernstein describe en *AF* el modelo de transmisin hereditaria de los cuatro grupos sanguneos principales, bas4ndose en el an4lisis estadstico de sus proporciones relativas, y con el descubrimiento por Landsteiner y LevWne 6*AFE7 de los nuevos sistemas M= y P. Los e(perimentos de trans-usiones sanguneas interespecfcas permitieron distinguir la gran complejidad de los antgenos sanguneos, e(plicables seg!n unos I,, alelos m!ltiples. Pna contribucin esencial a las ideas sobre el mecanismo de -ormacin de los anticuerpos la reali' el australiano Mac-arlane 3urnet 6*LAAC*AL+7, al establecer su teora de la seleccin clonalN "sta argumenta que cada lin-ocito 3 sinteti'a un !nico tipo de anticuerpo, especfco para cada antgeno 6determinante antig"nico7, de modo que la unin del antgeno causa la proli-eracin clonal del lin-ocito 3, con la consecuente sntesis incrementada de anticuerpos especfcos. &gualmente, 3urnet lan' una hiptesis sobre el mecanismo subyacente a la autoCtolerancia inmunolgica, que -ue confrmada e(perimentalmente por Peter MedaGar. M4s recientemente =iels Merne ha reali'ado nuevas aportaciones y refnamientos a la teora de la seleccin clonal, proponiendo un modelo de regulacin inmune conocido como teora de las redes idiotpicas. Microbiologa General Ms.C. Blg Mara Teresa Valderrama Rojas Los avances en &nmunologa durante los !ltimos aos han consolidando a "sta como ciencia independiente, con su conjunto propio de paradigmas, ya relativamente escindida de su tronco originario microbiolgico. Entre los hitos recientes hay que citar la t"cnica de produccin de anticuerpos monoclonales a partir de hibridomas, desarrollada originalmente por #"sar Milstein y >eorges :ohler en *AE+, y que presenta una enorme gama de aplicaciones en biomedicina, o el desentraamiento de los -enmenos de reorgani'acin gen"tica responsables de la e(presin de los genes de inmunoglobulinas, por <usumu 5onegaGa. BIBLIOGRAFA 30L)/T, P. 6*AL*71 La batalla contra las bacterias. /evert", 3arcelona. 3/9#:, 5.). 6*AB*71 Milestones in Microbiology 6reedicin de *AE+7. 0merican <ociety -or Microbiology, Oashington, ).#. #9LL0/), P. 6*AEB71 5he development o- Microbiology. #ambridge Pniversity Press, #ambridge. 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