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Ana M Camen Fernndez.

Area de Toxicologa. Universidad de Sevilla.


Cianobacteriasycianotoxinas,problemticayaspectosgenerales.
Fuentesdeexposicinyefectossobrelasalud.
INTRODUCCIN
CIANOBACTERIAS
(>2000sp.)
Procariotas Eubacterias
AlgasVerdeAzuladas
BacteriasGramnegativas
Clorofila
Anabaena sp.
Cylindrospermopsis sp.
Microcystis sp.
Aphanizomenon spp.
Nodularia
Floracionesoblooms
INTRODUCCIN
Condiciones
Ambientales
Nutrientes
Eutrofizacin
Luz
pH
Temperatura
Fsforo
Nitrgeno
Cianotoxinas
50%
CLASIFICACIN
CLASIFICACINDELAS
CIANOTOXINASEfectos
Microcistinas
(MC)
Nodularinas
Anatoxinas
Saxitoxinas
Cilindrospermopsina
(CYN)
Lyngbyatoxina
Aplisiatoxinas
LPS
(Irritantes)
Hepatotoxinas Neurotoxinas Citotoxinas Dermatotoxinas Endotoxinas
H
COOH
O
COOH
H
O
H
CH
3
H
N
H
3
C
H
NH
O
CH
2
N
CH
3
O
H
O
H
OCH
3
H H
H
H
H
3
C
CH
3
H
H
3
C
HN
NH
NH
O
NH
NH
2
HN
O
NH
CH
3
H
3
C
2
4
PRINCIPALES MC ENCONTRADAS EN LA NATURALEZA PRINCIPALES MC ENCONTRADAS EN LA NATURALEZA
4 2 4 2
MC MC- -LR ARGININA LEUCINA LR ARGININA LEUCINA
MC MC- -RR ARGININA RR ARGININA ARGININA ARGININA
MC MC- -YR ARGININA YR ARGININA TIROSINA TIROSINA
PPTIDO CCLICO CON 7 AMINOCIDOS
Microcystis
Anabaenopsis
Nostoc
Hapalosiphon
Planktothrix
Synechocystis
Woronichinia
MICROCISTINAS
H
COOH
O
COOH
H
O
H
CH
3
H
N
H
3
C
H
NH
O
CH
2
N
CH
3
O
H
O
H
OCH
3
H H
H
H
H
3
C
CH
3
H
H
3
C
HN
NH
NH
O
NH
NH
2
HN
O
NH
NH
2
HN
NH
4
2
PPTIDO CCLICO CON 7 AMINOCIDOS
PRINCIPALES MC ENCONTRADAS EN LA NATURALEZA PRINCIPALES MC ENCONTRADAS EN LA NATURALEZA
4 2 4 2
MC MC- -LR ARGININA LEUCINA LR ARGININA LEUCINA
MC MC- -RR ARGININA RR ARGININA ARGININA ARGININA
MC MC- -YR ARGININA YR ARGININA TIROSINA TIROSINA
Microcystis
Anabaenospis
Nostoc
Hapalosiphon
Planktothrix
Synechocystis
Woronichinia
MICROCISTINAS
H
COOH
O
COOH
H
O
H
CH
3
H
N
H
3
C
H
NH
O
CH
2
N
CH
3
O
H
O
H
OCH
3
H H
H
H
H
3
C
CH
3
H
H
3
C
HN
NH
NH
O
NH
NH
2
HN
O
NH
NH
2
HN
NH
H
COOH
O
COOH
H
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CH
3
H
N
H
3
C
H
NH
O
CH
2
N
CH
3
O
H
O
H
OCH
3
H H
H
H
H
3
C
CH
3
H
H
3
C
HN
NH
NH
O
NH
NH
2
HN
O
NH
OH
PPTIDO CCLICO CON 7 AMINOCIDOS
PRINCIPALES MC ENCONTRADAS EN LA NATURALEZA PRINCIPALES MC ENCONTRADAS EN LA NATURALEZA
4 2 4 2
MC MC- -LR ARGININA LEUCINA LR ARGININA LEUCINA
MC MC- -RR ARGININA RR ARGININA ARGININA ARGININA
MC MC- -YR ARGININA YR ARGININA TIROSINA TIROSINA
4
2
Microcystis
Anabaenospis
Nostoc
Hapalosiphon
Planktothrix
Synechocystis
Woronichinia
H
COOH
O
COOH
H
O
H
CH
3
H
N
H
3
C
H
NH
O
CH
2
N
CH
3
O
H
O
H
OCH
3
H H
H
H
H
3
C
CH
3
H
H
3
C
HN
NH
NH
O
NH
NH
2
HN
O
NH
NH
2
HN
NH
MICROCISTINAS
CILINDROSPERMOPSINA
CILINDROSPERMOPSINA
(CYN)
DescubiertatrasincidenteenPalmIsland,Queensland,Australia(1979)
PresenciadeCylindrospermopsis raciborskii enelaguadebebida
Brotedehepatoenteritis
148personasafectadas
AislamientodelaCYN
Establebajodiferentescondiciones
Altasolubilidadenagua
Pm =415Da
Umezakia natans
Lyngbya wollei
Anabaenabergii
Aphanizomenon ovalisporum
Cylindrospermopsis raciborskii
Anabaenalapponica
Aphanizomenon flosaquae
Raphidiopsis curvata
CILINDROSPERMOPSINA
VA DE
EXPOSICIN
EXPOSICIN/
ACTIVIDAD
EFECTOS



ORAL

AGUA DE BEBIDA:
Ingestin accidental
floraciones o MC

ALIMENTOS
CONTAMINADOS:
Pescados, moluscos ,
plantas, suplementos
dietticos


Hepatotoxicosis
(agudas/crnicas)


Transferencia a
travs de la
cadena alimentaria

PIEL Y MUCOSAS
Contacto directo,
floraciones o MC
Reacciones
alrgicas,
irritaciones

INHALATORIA

Duchas, baos y
deportes acuticos

Ruta minoritaria,
Neumona atpica

HEMODILISIS

Contacto con MC en
la hemodilisis

Nuseas, vmitos,
fallo heptico
agudo, muerte

FUENTESyVASDEEXPOSICIN
VasdeExposicinaCYN
Inhalacin Contactodrmico
Aguadeconsumo
contaminada
90%CYNextracelular
Alimentos
contaminados
FUENTESyVASDEEXPOSICIN
CYN
AGUAS
MC
1g/LMCLRenaguas
debebida (OMS)
RD140/2003:1g/LMC
[MC] IDT
IDT=0,04g/kg/daMCLR
TRANSFERENCIA EN LA CADENA ALIMENTARIA
Gasterpodos>Bivalvos>Crustceos>Anfibios>Peces
Bioacumulacin
Susceptibilidad
IDTprovisional=0,03g/kg/daCYN
FUENTESEXPOSICIN
Estudio de los efectos t
Estudio de los efectos t

xicos producidos por


xicos producidos por
MCs
MCs
y
y
CYNenmodelosexperimentalesinvivo
CYNenmodelosexperimentalesinvivo
Estudio de los efectos t
Estudio de los efectos t

xicos producidos por


xicos producidos por
MCs
MCs
y
y
CYN
CYN
in
in
vitro
vitro
Desarrollo de m
Desarrollo de m

todos para el control anal


todos para el control anal

tico
tico

toxicol
toxicol

gico de
gico de
Cianotoxinas
Cianotoxinas
(
(
MCs
MCs
, CYN) en aguas,
, CYN) en aguas,
alimentos:Evaluarexposici
alimentos:Evaluarexposici

n
n
INVESTIGACIONESREATOXICOLOGIA
UNIVERSIDADDESEVILLA
Potencial aplicaci
Potencial aplicaci

n de agentes
n de agentes
quimioprotectores
quimioprotectores
para contrarrestar da
para contrarrestar da

os inducidos por
os inducidos por
cianotoxinas
cianotoxinas
:
:
Antioxidantes
Antioxidantes
Desarrollo de m Desarrollo de m todos para el control anal todos para el control anal tico tico toxicol toxicol gico gico
de deCianotoxinas Cianotoxinas ( (MCs MCs,CYN)enaguas,alimentos ,CYN)enaguas,alimentos
Welker etal.,(2002)
Wormer etal.,(2009),Dr.Quesada
FUENTESEXPOSICIN
MCs
CYN
Escasezdeestudios
Bioacumulacin,Biomagnificacin????
80%seingierenporconsumodeaguadeaguacontaminada
20%Consumodealimentos,inhalacin
Gasteropodso..
Hepatopncreas>intestino>agallas>pies>resto
Estmago>intestinos>gnadas>branquias>msculo
> >
Intestino>Hgado>Rin>Msculo>Gnadas
[MCs]msculo>TDI
EfectosprocesosdepuracinenMCs
Alimentarsedirectamentedelfitoplancton
Absorcindelastoxinasdisueltasatravsdelosepitelios
Via lacadenaalimentaria
MuyescasosestudiosCYN:[CYN]<TDI
>
MCLR:2.318.1g MCLR/gp.c.
MCRR:1.47.8g MCRR/gp.c
EvaluacindeRiesgo:Digestin,Efectosdelcocinado
DIGESTINGSTRICA
Fluidogstricosimulado:Pepsina,pH1,2
DIGESTINIntestinal
Fluidointestinalsimulado:Pancreatina, pH 7,5
MC-RR (49-64% > MC-YR = MC-LR (30%)
Ninguna MC se degrad en medio intestinal
COCINADO
5-30 min: no degradacin
1 y 5 min: disminucin
significativa
Morais et al., (2008)
EvaluacindeRiesgo:Digestin,Efectosdelcocinado
DIGESTINGSTRICA
Fluidogstricosimulado:Pepsina,pH1,2
DIGESTINIntestinal
Fluidointestinalsimulado:Pancreatina, pH 7,5
MC-RR (49-64% > MC-YR = MC-LR (30%)
Ninguna MC se degrad en medio intestinal
COCINADO
5-30 min: no degradacin
1 y 5 min: disminucin
significativa
Morais et al., (2008)
COCINADO
5 min: Disminucin 36% MC-LR
24,6% MC-YR
1 y 5 min.
Hervido continuo: Disminucin
59,3% MC-LR
56,4% MC-YR
45,0% MC-RR
Asado
Fritura
Plancha
COCINADO
5 min: Disminucin 36% MC-LR
24,6% MC-YR
1 y 5 min.
Hervido continuo: Disminucin
59,3% MC-LR
56,4% MC-YR
45,0% MC-RR
Asado
Fritura
Plancha
FUENTESEXPOSICIN
CYN
MC
AcumulacinentejidosdePLANTAS,partescomestibles:hojas,races,
frutos,etc.
Mostaza,lechuga,arroz,colza,rbano,trbol,etc.
Variabilidadacumulacinenbrotesdependiendodelaespecie
Plantasconhojasmsgrandesretienenmsaguacontaminada
quelasdehojaspequeas
Engeneral,lasracesacumulanmayores[MCs]quelashojas
Segnloscontenidosencontradosendiferentesvegetales,su
consumopuedesersuperioralaIDT.
Menorn deestudios.Arroz,tomate
N
2
Lquido
+
DiseoExperimental
500mL/da
3veces/semana
2semanas
Control
ExtractoCYN
CYNPura
H
O
M
O
G
E
N
E
I
Z
A
C
I

N
N
2
Lquido
Races
Hojas
+
E
N
S
A
Y
O
S
HojasyRaces
100g/L
CYN
FUENTESEXPOSICIN
FUENTESEXPOSICIN
MC
+
CYN
EFECTOSSINRGICOS
0,0
5,0
10,0
15,0
RAZ HOJA
E
L
I
S
A

(

g

C
Y
L
/

g

p
e
s
o

s
e
c
o
)
CONTROL CYN
*
0,0
1,0
2,0
3,0
4,0
5,0
6,0
7,0
RAZ HOJA
E
L
I
S
A

(

g

M
C
/

g

p
e
s
o

s
e
c
o
)
CONTROL MC
*
FUENTESEXPOSICIN
Spirulina sp: China,India
ContaminacinconMicrocystis,Anabaena,Nostoc,Oscillatoria.
Microcistinas yanatoxinaa
MCs:0,152,02g/g,contenidos seguros para unconsumo responsable de
estos supplementos.
Aphanizomenon flosaquae
ContaminacinconMicrocystis aeruginosa,Aphanizomenon ovalisporum
MCs:0.14.72g/g
MCLR,MCYR,MCLA,MCRR,MCsdesmetiladas enItalia(1,44,5g/g)
PSP,CYN
SegnIDTdelaOMS,EEUUestableci unvalorguaparalos
suplementos: 1g MCLR/gsuplemento.
CONTAMINACINconespeciesproductorasdecianotoxinas.
LosvaloresdetectadosdeMCs sonmuyvariablesdependiendodelasmarcasyde
lastcnicasempleadasparasuanlisis.
Vas de
exposicin
Exposicin/
actividad
Efectos MCs Efectos CYN
ORAL
Aguadebebida
PalmIsland
Hepatotoxicidad,
Hepatomegalia ydolor
abdominal
Nivelesenzimas
hepticosensuero
Hepatoenteritis
Estreimiento
Vmitos
Alimentoscontaminados
Suplementos
alimentarios
DRMICA
(Piel y
mucosas)
Contactodirecto Alergias,irritaciones Alergias,irritaciones
INHALATORIA
Duchas,baosydeportes
acuticos
Neumonaatpica,
necrosisepitelio
Noest suficientemente
estudiado
HEMODILISIS
Contactocon
cianotoxinas enla
hemodilisis
(Caruaru,Brasil)
Nuseas,vmitos,fallo
hepticoagudoy
muerte
Nuseas,vmitos,fallo
hepticoagudoymuerte
EFECTOSTXICOSENHUMANOSDEMCs yCYN
Piel, ojos, odos y boca
Irritacin,
descamacin,
erupciones y ampollas
en piel y boca.
Hgado
Hepatitis,
hepatomegalia y
dolor abdominal.
niveles sricos
enzimas hepticas.
Rin
Dao, prdida de
electrolitos, glucosa,
cetonas y eritrocitos en
orina. Deshidratacin.
Tracto digestivo
Gastroenteritis,
dolor abdominal,
diarrea, vmitos
y nuseas.
Tracto respiratorio
Dolor de garganta, tos
seca, neumona atpica.
Cncer
MC-LR, promotor tumores
animales. Factor etiolgico en
Cancer primario Hepatocelular
y colorrectal
EFECTOSTXICOSENHUMANOSDEMCs
NOCLASIFICABLEPORSUCARCINOGENICIDAD
ENHUMANOS
CLASIFICACIN POR LA AGENCIA INTERNACIONAL DE
INVESTIGACIONES SOBRE EL CNCER (IARC):
Grupo2B POSIBLECARCINGENOHUMANO
Grupo3
CYN
Extractosde
Microcystis
MCLR
NOCLASIFICADAPORLAIARC
EFECTOSTXICOSENHUMANOS
PROTENAS
FOSFATASAS
DE PROTENAS
Pi
ADP ATP
P
PROTENA
Ser
Thr
Tyr
PROTENA
Ser
Thr
Tyr
QUINASAS
EFECTOSTXICOS:MECANISMOSDEACCINDEMCs
MECANISMOSDETOXICIDADDELACYN
CYN Entradaenelorganismo
Distribucin
Dosis
VadeAbsorcin
Concentracinenelrganodiana
Inhibicindesntesisdeprotenas Genotoxicidad Inhibicindesntesisdeglutatin
ToxicidaddeCYN
MECANISMOSACCINCIANOTOXINAS
ESTRSOXIDATIVO
Estudio de los efectos t
Estudio de los efectos t

xicos producidos por


xicos producidos por
MCs
MCs
y
y
CYNenmodelosexperimentalesinvivo
CYNenmodelosexperimentalesinvivo
Estudio de los efectos t
Estudio de los efectos t

xicos producidos por


xicos producidos por
MCs
MCs
y
y
CYN
CYN
in
in
vitro
vitro
Desarrollo de m
Desarrollo de m

todos para el control anal


todos para el control anal

tico
tico

toxicol
toxicol

gico de
gico de
Cianotoxinas
Cianotoxinas
(
(
MCs
MCs
, CYN) en aguas,
, CYN) en aguas,
alimentos:Evaluarexposici
alimentos:Evaluarexposici

n
n
INVESTIGACIONESREATOXICOLOGIA
UNIVERSIDADDESEVILLA
Potencial aplicaci
Potencial aplicaci

n de agentes
n de agentes
quimioprotectores
quimioprotectores
para contrarrestar da
para contrarrestar da

os inducidos por
os inducidos por
cianotoxinas
cianotoxinas
:
:
Antioxidantes
Antioxidantes
ESTRSOXIDATIVO
PROTENAS
ERO
ADN
LPIDOS
Inactivacin
enzimtica
Alteracin
permeabilidad
demembranas
Mutaciones
genticas
ParmetrosBioqumicos
(LPO,carbonilos,GSH,
GCS)
ParmetrosMorfolgicos
ParmetrosMoleculares
(RTPCR,WB)
INVIVO:rata,peces
INVITRO
Lneashumanasy
pisccolas
EVALUACIONTOXICIDADMCs yCYN
ESTUDIOSINVIVO:CYN
INFLUENCIADELAVADEEXPOSICIN
>
Sonda
Gstrica
Mezcladacon
Comida

Inyeccin
Intraperitoneal
AfectacinParmetrosBioqumicos
INFLUENCIADELTIEMPODESACRIFICIO
ParmetrosBioqumicos
(LPO,carbonilos,GSH,
GCS)
Parmetros
Histopatolgicos
ParmetrosMoleculares
(RTPCR,WB)
24
horas
5
das
24
horas
5
das
24
horas
5
das

<
<
Afectacin
Similar
Estimulacin
Mecanismos
Toxicidad
Retardada
ESTUDIOSINVIVO:CYN
INFLUENCIADELTIPODECYN
ADMINISTRADA
>
CYN
Pura
CYNprocedentedeliofilizadode
Aphanizomenon ovalisporum
AfectacinBiomarcadores Estrs
Oxidativo
ESTUDIOSINVIVO:CYN
TOXICIDADINVITRO MCs yCYN
EstudiosdeCitotoxicidad Basal
EnsayosdeEstrsOxidativo
EstudiosMorfolgicos
ContenidoProteicoTotal(PT)
EnsayodeReduccindeMTS(MTS)
EnsayodeCaptacindeRojoNeutro(RN)
CuantificacinnivelesEspeciesReactivasdeOxgeno(ERO)
CuantificacinnivelesGlutatinReducido(GSH)
DeterminacindelaActividadglutamilcistein sintetasa
(GCS)
Microscopaptica
MicroscopaElectrnica
ESTUDIOSINVITRO:CYN
SENSIBILIDADMODELOS
EXPERIMENTALES
Caco2
HUVEC
PLHC1 PT (CE
50
24h:8 2,1g/mL)
RN (CE
50
24h:1,5 0,9g/mL)
MTS (CE
50
24h:2,5 0,4g/mL)
SensibilidadaCYN
HUVEC
Caco2 PLHC1
> >
NOnicoIndicador
PLHC1
SENSIBILIDADMODELOS
EXPERIMENTALES
SensibilidadaCYN
HUVEC
Caco2
>
Caco2
HUVEC
PLHC1
GCS ERO GSH
GCS ERO GSH
GCS ERO GSH
ERO
ERO
ERO
ERO
ERO
ERO
ESTUDIOSINVITRO:CYN
PLHC1
SENSIBILIDADMODELOS
EXPERIMENTALES
SensibilidadaCYN
HUVEC
Caco2
>
Caco2
HUVEC
PLHC1
GCS ERO GSH
GCS ERO GSH
GCS ERO GSH
ERO
ERO
ERO
ERO
ERO
ERO
ESTUDIOSINVITRO:CYN
Estudio de los efectos t
Estudio de los efectos t

xicos producidos por


xicos producidos por
MCs
MCs
y
y
CYNenmodelosexperimentalesinvivo
CYNenmodelosexperimentalesinvivo
Estudio de los efectos t
Estudio de los efectos t

xicos producidos por


xicos producidos por
MCs
MCs
y
y
CYN
CYN
in
in
vitro
vitro
Desarrollo de m
Desarrollo de m

todos para el control anal


todos para el control anal

tico
tico

toxicol
toxicol

gico de
gico de
Cianotoxinas
Cianotoxinas
(
(
MCs
MCs
, CYN) en aguas,
, CYN) en aguas,
alimentos:Evaluarexposici
alimentos:Evaluarexposici

n
n
INVESTIGACIONESREATOXICOLOGIA
UNIVERSIDADDESEVILLA
Potencial aplicaci
Potencial aplicaci

n de agentes
n de agentes
quimioprotectores
quimioprotectores
para contrarrestar da
para contrarrestar da

os inducidos por
os inducidos por
cianotoxinas
cianotoxinas
:
:
Antioxidantes
Antioxidantes
ANTIOXIDANTESCIANOTOXINASenPeces
VitaminaEparaprotegeralospeces
delaintoxicacinporMCs
UsodelSelenioparaprotegeralospeces
delaintoxicacinporMCs
UsodeNACparaprotegeralospeces
delaintoxicacinporMCs
UsodeNACparaprotegeralospeces
delaintoxicacinporCYN
UsodeLcarnitina paraprotegeralospeces
delaintoxicacinporCYN
MC CYN
Extraccin
derganos
Hgado
Hgado
Intestino
Intestino
Corazn
Corazn
Branquia
s
Branquia
s
Rin
Rin
DiseoExperimental
InvivoefectosNACCYN
1.Pretratamiento(7das)
NAC1:22mg NAC/pez/da
NAC2:45mg NAC/pez/da 2.Intoxicacin
Dosisnicade200g/Kg CYN
3.Sacrificio
(24horas)
0mg NAC/pez/da 22mg NAC/pez/da 45mg NAC/pez/da
< <
EfectoProtectorNAC
NAC
ERO
ERO
ERO
ERO
ERO
ERO
GSH
InvivoefectosNACCYN
EstudiosHistopatolgicos
rgano DaosProducidos Recuperacin
Intestino
Necrosisdelosenterocitos
2245mg NAC/pez/da
Necrosisyprdidademicrovellosidades
Corazn
Miofibrolisis
45mg NAC/pez/da
Edemaintersticialyhemorragias
Branquias
Hiperemia
2245mg NAC/pez/da
Prdidadeprolongacioneslamelares
InvivoefectosNACCYN
AGRADECIMIENTOS
UniversidaddeSevilla
IVPlanPropio
MinisteriodeCienciaeInnovacin
ProyectosCICYTAGL200202622
AGL200606523/ALI
AGL200910026
JuntadeAndaluca
(ProyectoP09AGR04672)
Ana M Camen Fernndez.
Area de Toxicologa. Universidad de Sevilla.