UNIVERSIDAD CENTRAL DE NICARAGUA

RECINTO PORTEZUELO
FACULTAD DE CIENCIAS MDICAS
MEDICINA Y CIRUGA



Asignatura: Bioqumica.

Tema:
Diagnostico de infecciones microbianas e importancia de los medios auxiliares
de laboratorio en la seleccin del tratamiento en el hospital la mascota de enero
a marzo del 2014.
Autores:
Br. Carlos Brandon Morales Morales.
Br. Oscar Emmanuel Vega Castillo.
Br. Bryant Daniel Balladares

Docente:
LIC: Miriam Cerda

Managua, Nicaragua 17 de Julio del ao 2014


INDICE
I. Dedicatoria
II. Agradecimiento

Introduccin.
Antecedentes..
Justificacin.
Objetivos..
Marco terico..
Diseo metodolgico.
Discusin de resultados
Conclusin...
Recomendaciones.

Anexos










Dedicatoria

Dedicamos este trabajo a Dios que me ha dado la vida y fortaleza para
terminar este proyecto de investigacin. A mi docente por su gran apoyo
ofrecido en este trabajo, por haberme transmitido los conocimientos obtenidos
y haberme llevado paso a paso en el aprendizaje. Y a nosotros que invertimos
nuestro tiempo para poder realizar un trabajo de calidad que pudiera ser
defendido de una manera idnea para nuestra evaluacin.


















Agradecimiento

A la Lic. Miriam Cerda por sus orientaciones tcnicas.

A los trabajadores del hospital la mascota por su colaboracin en la
recoleccin de la informacin.

A nuestra compaera Lissete del Ftima Morales que nos facilito el
ingreso y ayuda por parte del hospital.


















Introduccin

El diagnstico microbiolgico es el conjunto de procedimientos y tcnicas
complementarias empleadas para establecer la etiologa del agente
responsable de una enfermedad infecciosa.
La coloracin de Gram es la ms utilizada en bacteriologa ya que, adems de
precisar la morfologa y agrupacin de las bacterias, permite su clasificacin en
Gram positivos o Gram negativos en funcin de la estructura de pared.
Pocas tcnicas asocian su sencillez, rapidez y riqueza de informacin; es por
ello que a pesar del desarrollo de mtodos sofisticados para el diagnstico
rpido de enfermedades infecciosas, no se ha podido reemplazar la utilidad de
la tincin de Gram.
El Laboratorio de Microbiologa presta apoyo al clnico a travs de: informacin
adecuada y actualizada para la toma de muestras, deteccin e identificacin de
los patgenos aislados y determinacin de la sensibilidad de estos
microorganismos.
Permite aportar datos preliminares o definitivos de agentes etiolgicos sobre la
base de los siguientes mtodos de diagnostico:
Directos; implica la demostracin del agente, sus metabolitos o componentes
antignicos en los fluidos orgnicos.
Indirectos; implica la demostracin de la huella que el agente ha dejado en su
contacto con el sistema inmunocompetente.





Antecedentes

Los nuevos hallazgos de los cientficos de laboratorio y los investigadores
clnicos en reumatologa de la Escuela de Medicina de (NYU) se suman a la
creciente evidencia de que los miles de millones de microbios en nuestro
cuerpo juegan un papel importante en la regulacin de nuestra salud
En el cuerpo humano hay aproximadamente diez veces tantas clulas
bacterianas como clulas humanas, con una gran cantidad de bacterias en
la piel y en el tracto digestivo.6 Aunque el efecto protector del sistema
inmunolgico hace que la gran mayora de estas bacterias sea inofensiva o
beneficiosa, algunas bacterias patgenas pueden causar enfermedades
infecciosas, incluyendo clera, difteria, escarlatina, lepra, sfilis, tifus, etc.
El experimento de Griffith, llevado a cabo en 1928, fue uno de los primeros
experimentos que demostr que las bacterias eran capaces de transferir
informacin gentica mediante un proceso llamado transformacin.
En 1928, el microbilogo Frederick Griffith, que investigaba varias cepas
de neumococo (Estreptococos pneumoniae), inyect en ratones la cepa S y
la cepa R de la bacteria.
La Asociacin Dental Veterinaria Britnica (British Veterinary Dental
Association, BVDA) ha presentado en Londres los resultados de dos
importantes estudios que han arrojado luz sobre las bacterias asociadas a la
salud bucodental canina. Los estudios, realizados por el Centro WALTHAM
para la Nutricin de las Mascotas con la ayuda del catedrtico Floyd Dewhirst
del reconocido Forsyth Institute de Boston (Estados Unidos), ayudan a explicar
por qu los perros apenas sufren caries, a pesar de que sta sea una patologa
habitual en los seres humanos.



Justificacin

Realizamos esta investigacin con el objetivo de aprender a cerca de los
diferentes medios auxiliares de laboratorio que se utilizan para identificar
enfermedades provocadas por diferentes bacterias.
Conocer la importancia del diagnostico en el diagnostico de infecciones
microbianas y enriquecer nuestro conocimiento en esta materia.
















Objetivos

Objetivo general.
Aplicar los conceptos tericos de la investigacin en diversas situaciones
que se nos puedan presentar en nuestra carrera.
Objetivo especifico
Identificar las bacterias mas comunes, las mas difciles de erradicar que
causan enfermedad

Describir la importancia de los diferentes cultivos y sus componentes.
















MARCO TEORICO
La evolucin de los medios de cultivo
Podemos decir que la microbiologa empieza su verdadero desarrollo como
ciencia en el momento en que se descubre el microscopio y comienza la
observacin de los primeros microorganismos, pero es indudable que la puesta
a punto de los medios de cultivo y la utilizacin del agar como solidificante,
marcan dos importantes puntos de inflexin en su evolucin.
La primera noticia de la utilizacin de medios de cultivo nos llega del miclogo
Brefeld, que consigui aislar y cultivar esporas de hongos en medios slidos
realizados a base de gelatina.
Sin embargo este sistema no era adecuado para las bacterias (por su menor
tamao) y no fue hasta el ao 1878 cuando Lister populariz un mtodo
enfocado al cultivo puro basado en diluciones seriadas en un medio lquido.
Koch realiz sus investigaciones utilizando en un primer momento rodajas de
patata como soporte nutritivo slido, pero no tard en recurrir al caldo de carne
lquido, diseado por Loeffler, al que, en 1881, aadi gelatina, logrando un
medio slido transparente ideal para la observacin de la morfologa
macroscpica de las colonias microbianas.
En el ao 1882 tiene lugar uno de los grandes avances de la microbiologa en
relacin con los medios de cultivo: el mdico alemn Walter Hesse introduce el
agar-agar (polisacrido extrado de algas rojas) como solidificante.
En 1887 un ayudante de Koch llamado Petri, comienza a utilizar placas de
cristal planas, que se llaman desde entonces placas de Petri, para sustituir a
las clsicas bandejas de vidrio cubiertas con campanas que se usaban hasta
entonces.
Beijerinck y Winogradsky, que desde de 1888 realizaron sus investigaciones
sobre las bacterias quimioauttrofas (utilizacin de nitrgeno y azufre sobre
todo) tuvieron gran importancia en el desarrollo de los medios selectivos y de
enriquecimiento. Disearon este tipo de medios de tal forma que su especial
composicin qumica favoreca el crecimiento de ciertos tipos de
microorganismos que, en funcin de sus procesos metablicos, eran los nicos
capaces de utilizar para su desarrollo ciertos nutrientes del medio.
En 1892 Wrtz impuls el uso de los medios diferenciales, incorporando
indicadores de pH a la composicin de ciertos medios con lo cual se poda
observar la produccin de cidos en la fermentacin en ciertos
microorganismos.
Condiciones generales para el cultivo de microorganismos
El desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio de cultivo se ve
afectado por una serie de factores de gran importancia y que, en algunos
casos, son ajenos por completo al propio medio.
1- disponibilidad de nutrientes adecuados
Un medio de cultivo adecuado para la investigacin microbiolgica ha de
contener, como mnimo, carbono, nitrgeno, azufre, fsforo y sales inorgnicas.
En muchos casos sern necesarias ciertas vitaminas y otras sustancias
inductoras del crecimiento. Siempre han de estar presentes las sustancias
adecuadas para ejercer de donantes o captadores de electrones para las
reacciones qumicas que tengan lugar.
Todas estas sustancias se suministraban originalmente en forma de infusiones
de carne, extractos de carne o extractos de levadura. Sin embargo, la
preparacin de estas sustancias para su aplicacin a los medios de cultivo
provocaba la prdida de los factores nutritivos lbiles.
Ciertas bacterias tienen necesidades nutritivas especficas por lo que se aade
a muchos medios sustancias como suero, sangre, lquido asctico, etc.
Igualmente pueden ser necesarios ciertos carbohidratos y sales minerales
como las de calcio, magnesio, manganeso, sodio o potasio y sustancias
promotoras del crecimiento, generalmente de naturaleza vitamnica.
Muy a menudo se aaden al medio de cultivo ciertos colorantes, bien como
indicadores de ciertas actividades metablicas o bien por sus capacidades de
ejercer de inhibidores selectivos de ciertos microorganismos.
2- consistencia adecuada del medio
Partiendo de un medio lquido podemos modificar su consistencia aadiendo
productos como albmina, gelatina o agar, con lo que obtendramos medios en
estado semislido o slido.
Los medios solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente de que
muchos microorganismos no se desarrollan adecuadamente a temperaturas
inferiores al punto de fusin de este solidificante y de que otros tienen la
capacidad de licuarla.
Actualmente los medios slidos son de uso universal, por su versatilidad y
comodidad, pero hay tambin gran cantidad de medios lquidos cuyo uso est
ampliamente extendido en el laboratorio.



3- presencia (o ausencia) de oxgeno y otros gases
Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmsfera con tensin de
oxgeno normal. Algunas pueden obtener el oxgeno directamente de variados
sustratos. Pero los microorganismos anaerobios estrictos slo se desarrollarn
adecuadamente en una atmsfera sin oxgeno ambiental. En un punto
intermedio, los microorganismos microaerfilos crecen mejor en condiciones
atmosfricas parcialmente anaerobias (tensin de oxgeno muy reducida),
mientras los anaerobios facultativos tienen un metabolismo capaz de adaptarse
a cualquiera de las citadas condiciones.
4- condiciones adecuadas de humedad
Un nivel mnimo de humedad, tanto en el medio como en la atmsfera, es
imprescindible para un buen desarrollo de las clulas vegetativas microbianas
en los cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones mnimas
en las estufas de cultivo a 35-37C proporcionando una fuente adecuada de
agua que mantenga la humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y
evitar as que se deseque el medio.
5- Luz ambiental
La mayora de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que
en presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sera el caso de
los microorganismos fotosintticos.
6- pH
La concentracin de iones hidrgeno es muy importante para el crecimiento de
los microorganismos. La mayora de ellos se desarrollan mejor en medios con
un pH neutro, aunque los hay que requieren medios ms o menos cidos. No
se debe olvidar que la presencia de cidos o bases en cantidades que no
impiden el crecimiento bacteriano pueden sin embargo inhibirlo o incluso alterar
sus procesos metablicos normales.
7- Temperatura
Los microorganismos mesfilos crecen de forma ptima a temperaturas entre
15 y 43C. Otros como los psicrfilos crecen a 0C y los temfilos a 80C o
incluso a temperaturas superiores (hipertemfilos). En lneas generales, los
patgenos humanos crecen en rangos de temperatura mucho ms cortos,
alrededor de 37C, y los saprfitos tienen rangos ms amplios.
8- Esterilidad del medio
Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estriles para evitar la
aparicin de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir
el crecimiento microbiano normal del o de los especmenes inoculados en
dichos medios. El sistema clsico para esterilizar los medios de cultivo es el
autoclave (que utiliza vapor de agua a presin como agente esterilizante)
Crecimiento microbiano
Entendemos por crecimiento microbiano el aumento del nmero de
microorganismos a lo largo del tiempo. Por tanto, no nos referimos al
crecimiento de un nico microorganismo que denominaremos ciclo celular, sino
al demogrfico de una poblacin. En este tema nos centraremos en el
crecimiento de bacterias, el estudio que se hace puede servir tambin para
entender el crecimiento de levaduras y de otros hongos.
Denominamos ciclo celular al proceso de desarrollo de una bacteria aislada. A
lo largo del ciclo celular tiene lugar la replicacin del material gentico, la
sntesis de componentes celulares, la elongacin de la bacteria para alcanzar
un tamao doble del inicial y su divisin por biparticin para dar lugar a dos
clulas hijas. La duracin del ciclo celular coincide con el tiempo de generacin
y depende, en general, de los mismos factores de los que depende este.
El crecimiento de una poblacin resulta de la suma de los ciclos celulares de
todos los individuos de dicha poblacin. Los cultivos de microorganismos de los
que hemos hablado son asincrnicos puesto que en ellos cada microorganismo
se encuentra en un punto diferente del ciclo celular. Por consiguiente, en un
momento determinado en un cultivo se encuentran clulas que acaban de
dividirse, otras que estn replicando su ADN, otras que estn creciendo, otras
que estn iniciando la divisin celular, etc.
En un cultivo sincrnico todas las clulas se encuentran simultneamente en la
misma fase del crecimiento celular. Los cultivos sincrnicos son muy difciles
de mantener por lo que su importancia est principalmente ligada a los estudios
bsicos de biologa microbiana. Sin embargo, en la naturaleza, las bacterias del
suelo se encuentran en condiciones de crecimiento prximas a la fase
estacionaria (en la que se produce una cierta sincronizacin del cultivo) y, por
consiguiente, durante cierto tiempo las poblaciones naturales probablemente se
comporten como relativamente sincrnicas.
Las poblaciones de bacterias crecen de forma explosiva acumulando grandes
nmeros en un periodo de tiempo muy reducido. Puesto que el efecto de los
microorganismos es en la mayora de los casos depende de su nmero,
entender cmo se produce el crecimiento microbiano es importante para poder
evitar o reducir sus efectos nocivos y potenciar los beneficiosos o aplicados.



Agar MacConkey
El estado nutricional de gran parte de jvenes sanos, presenta cada da
cambios fsicos y significativos, de los cuales se reflejan diversos estudios en
donde se muestra que un gran porcentaje de este sector se encuentran en un
peso superior al saludable, este dato no deja desapercibido a la poblacin
universitaria, que esta propensa a sufrir dicha afectacin y por lo tanto diversas
patologas en un futuro.
En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el
desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la
mezcla de sales biliares y el cristal violeta son los agentes selectivos que
inhiben el desarrollo de gran parte de la flora Gram positiva. El agar es el
agente solidificante. Por fermentacin de la lactosa, disminuye el pH alrededor
de la colonia.
Esto produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro), la absorcin
en las colonias, y la precipitacin de las sales biliares. Los microorganismos no
fermentadores de lactosa producen colonias incoloras.
Agar Sangre
Medio de cultivo utilizado para el aislamiento de numerosos microorganismos.
Al ser suplementado con sangre ovina, permite el crecimiento de
microorganismos nutricionalmente exigentes y la clara visualizacin de
reacciones de hemlisis.
La infusin de msculo de corazn y la peptona, otorgan al medio un alto valor
nutritivo, que permite el crecimiento de una gran variedad de microorganismos,
an de aquellos nutricionalmente exigentes.
El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico y el agar es el agente
solidificante. El agregado de 5-10 % sangre ovina desfibrinada estril promueve
el desarrollo de bacterias exigentes en sus requerimientos nutricionales y la
adecuada observacin de las reacciones de hemlisis.
Para prepararlo se debe colocar los frascos cerrados en bao mara y llevar a
ebullicin para fundir el medio de cultivo slido contenido en los mismos. Una
vez que se ha fundido el medio de cultivo, retirar cuidadosamente los frascos
del bao mara y dejar enfriar.
Cuando alcanzan temperatura 45-50 C, abrirlos y distribuir
aproximadamente15 ml en placas de Petri estriles. Preparacin de Agar
Sangre: agregar 5-10 % de sangre ovina desfibrinada estril al medio
esterilizado, fundido y enfriado a 45-50 C. Homogeneizar y distribuir en placas
de Petri estriles.
Agar Chocolate
Este medio permite el crecimiento de microorganismos exigentes en sus
requerimientos nutricionales, por ejemplo especies de Streptococcus
Haemophilus y Neisserias patgenas.
El medio de cultivo es ampliamente nutritivo por la presencia de peptona,
triptena, extracto de levadura, extracto de corazn y almidn. El agregado de
sangre y suplemento Britalex con solvente aporta nutrientes, vitaminas y
minerales adicionales. El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico y el
agar es el agente solidificante.
Tincin de Gram
La tincin de Gram o coloracin de Gram es un tipo de tincin diferencial
empleado en Bacteriologa para la visualizacin de bacterias, sobre todo en
muestras clnicas. Debe su nombre al bacterilogo dans Christian Gram, que
desarroll la tcnica en 1884. Se utiliza tanto para poder referirse a la
morfologa celular bacteriana, como para poder realizar una primera
aproximacin a la diferenciacin bacteriana, considerndose Bacteria Gram
positiva a las bacterias que se visualizan de color morado, y Bacteria Gram
negativa a las que se visualizan de color rosa o rojo o grosella.
Procedimientos para hacer la tincin de gram
Recoger muestras.
Hacer el extendido con un palillo de madera.
Dejar secar a temperatura ambiente o fijarlas utilizando un mechero.
Fijar la muestra con metanol durante un minuto o al calor (flameado 3
veces aprox.)
Agregar azul violeta (cristal violeta o violeta de genciana) y esperar 1
minuto. Todas las clulas gram positivas se tien de color azul-prpura.
Enjuagar con agua.
Agregar lugol y esperar entre 1 minuto.
Enjuagar con agua.
Agregar alcohol acetona y esperar 30 segundos o 5 segn la
concentracin del reactivo (parte crtica de la coloracin).
Enjuagar con agua.
Tincin de contraste agregando safranina o fucsina bsica y esperar 1
minuto. Este tinte dejar de color rosado-rojizo las bacterias Gram
negativas.
Para observar al microscopio ptico es conveniente hacerlo a 100x con aceite
de inmersin.























DISEO METODOLGICO

Nuestro estudio es descriptivo por la forma de anlisis, de naturaleza
retrospectiva por el tiempo de recoleccin de informacin, es de corte
transversal por el periodo comprendido entre enero a marzo del 2014, nuestro
universo abarca agentes microbianos, la muestra fue tomada en el hospital
Infantil Manuel de Jesus Rivera (la Mascota) y utilizamos las Bacterias como
campo de estudio. En el buscbamos encontrar las bacterias mas comunes en
el hospital la Mascota y los medios diagnsticos para poder determinar la
presencia de alguna bacteria y la manera en la cual podra el medico tratarla.
Omitimos hablar de hongos, virus y paracitos, porque hablar de infecciones
microbianas implica abarcar un tema muy extenso y por las caractersticas de
nuestra presente investigacin no era posible.
Realizamos la visita al hospital Infantil Manuel de Jesus Rivera donde
obtuvimos la informacin por medio una entrevista, que fue aplicada a 2
trabajadoras del laboratorio de bacteriologa de la Mascota, la cual brindo
conocimiento muy importante para la realizacin de nuestros resultados.










Discusin de resultados
Las Enterobacterias, son un grupo de bacterias que afectan el aparato
intestinal y a nivel hospitalario el 30% de las septicemia se debe a las
Enterobacterias y es la causa en un 70% de las infecciones de vas urinarias,
crecen en el medio de cultivo rutinario agar sangre, agar Macconkey y muchas
fermentan los nitratos en nitritos y son catalasa (+) y oxidasa (-)
Las bacterias ms comunes que causan enfermedad son: klebsiella
pneumoniae, pseudomonas aeruginosa, acinetobacter baumannii escherichia
coli, serratia marcenscens y staphylococcus aureus
Klebsiella pneumoniae es Gram (-), el agente causal de infecciones del
tracto urinario, neumonas, sepsis, infecciones de tejidos blandos, e
infecciones de herida quirrgica. Es la especie de mayor relevancia clnica
dentro del gnero bacteriano, como causa de las enfermedades infecciosas
oportunistas.

Pseudomonas aeruginosa es un bacilo Gram-negativo, aerbica, es un
patgeno oportunista que infecta el tracto pulmonar, urinario, tejidos,
heridas, y tambin causa otras infecciones de sangre. El diagnostico es a
travs de cultivo de agar Macconkey, agar sangre

Acinetobacter baumannii es Gram (-) una especie de bacteria patgena que
es resistente a la mayora de los antibiticos. Puede ser hallado en mltiples
medios animados e inanimados; puede ser aislado en material hospitalario,
como aparatos de ventilacin mecnica, catteres, lquido de dilisis
peritoneal y una amplia variedad de instrumentos.

A. Baumannii puede formar parte de la flora normal de la piel de los adultos
sanos (especialmente las manos) y puede colonizar la cavidad oral, faringe
e intestino, constituyendo stos unos reservorios epidemiolgicos muy
importantes en brotes nosocomiales. Puede causar neumona severa e
infecciones del tracto urinario

Escherichia coli es la mas frecuente de Enterobacterias es Gram (-) puede
causar infecciones intestinales y extra intestinales generalmente graves,
tales como infecciones del aparato excretor, vas urinarias, cistitis,
meningitis, peritonitis, mastitis, septicemia y neumona.

Serratia marcenscens es un bacilo gramnegativo de la familia
Enterobacteriaceae. Puede provocar conjuntivitis, queratitis e infecciones en
heridas, riones y vas urinarias, as como infecciones respiratorias,
meningitis y endocarditis. Esta bacteria afecta especialmente a pacientes
hospitalizados y a pacientes que tienen la inmunidad disminuida por
enfermedades sistmicas o tratamientos mdicos inmunosupresores.

Staphylococcus aureus es una bacteria anaerobia facultativa, Gram
positiva, productora de coagulasa, catalasa, inmvil y no esporulada. Puede
producir una amplia gama de enfermedades, que van desde infecciones
cutneas y de las mucosas relativamente benignas, tales como foliculitis,
forunculosis o conjuntivitis, hasta enfermedades de riesgo vital, como
celulitis, abscesos profundos, osteomielitis, meningitis, sepsis, endocarditis
o neumona.













CONCLUSIONES
Durante nuestra etapa investigativa en el hospital Infantil Manuel de Jesus
Rivera (la mascota) encontramos que el apoyo en medios auxiliares para
realizar un diagnostico exacto por medio de los mdicos era un instrumento
muy utilizado, se basaba en medios de cultivo, en tincin de gran, agar sangre
de carnero, agar MacConkey y agar chocolate, que eran la base principal para
realizar la diferenciacin de bacterias, y hacer una prueba de susceptibilidad
para conocer su el tratamiento indicado.
Encontramos que hay grupo de bacterias que son las ms frecuentes en la
mascota que se caracterizan son agresivas para el ser humano y muy difciles
de erradicar.
Se usan principalmente para la identificacin 3 mecanismos, el manual, el
automtico con el VITEC 2 compact y el semiautomtico API.
Para realizar un diagnostico y una prueba de susceptibilidad ms rpida se
utiliza el sistema automatizado, que brinda un diagnostico en un da, el sistema
semiautomtico lo hace en 3 das, y el sistema manual lo hace en 5 para
producir datos ms seguros y confiables que el de los sistemas
semiautomticos ya que estos siempre tienen un margen de erros.












RECOMENDACIONES
A los mdicos: no basarse meramente en la clnica que presentan los
pacientes a la hora de realizar un diagnostico, sino, apoyarse en medios
auxiliares para hacer ms eficiente la confirmacin del diagnostico, ya
que la clnica que presenta el paciente equivale a un 75% del
diagnostico diferencial y el 25% restante equivale a exmenes de
laboratorio para confirmar sospechas.
A estudiantes de medicina: profundizar y enfatizar el ampliar sus
conocimientos para poder diferenciar la clnica que presenta el paciente
para poder evaluar su caso, saber que debe de hacer y que no.




















Anexos
Agar sangre de carnero (Enriquecido)

Agar Chocolate (Enriquecido y no selectivo)



Agar Macconkey (selectivo)