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UNIVERSIDAD DE SONORA
DEPARTAMENTO DE INVESTIGACIN Y DESARROLLO EN ALIMENTOS




CIENCIA Y TECNOLOGA DE ALIMENTOS

CONSERVACIN Y PROCESAMIENTO DE PRODUCTOS MARINOS





BIOQUMICA DE ALIMENTOS

Mecanismos de Regulacin de la Enzima Proteoltica Tripsina en
Mamferos





ROSA LINDA LPEZ ENRQUEZ













HERMOSILLO, SONORA DICIEMBRE, 2012
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CONTENIDO













Pgina
CONTENIDO 2
INTRODUCCIN 3
REVISIN BIBLIOGRFICA 4
Enzimas Involucradas en el Proceso General de la Digestin de
Protenas
4
Caractersticas Generales de las Serina Proteasas 4
Estructura y Funcin Metablica de la Tripsina 5
Regulacin de la Actividad Proteoltica de la Tripsina 7
Activacin por Modificacin Covalente (Protelisis) 7
Inhibicin por Unin No Covalente 9
Inhibidor Pancretico Bovino de Tripsina (BPTI) 9
Inhibicin por Unin Covalente 9
Serina Proteasas Inhibitorias (Serpinas) 9
Inhibidores de Tripsina en la Industria Farmacutica y Alimentaria 10
CONCLUSIONES 11
REFERENCIAS 12
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INTRODUCCIN
Las protenas son macromolculas formadas por cadenas lineales de aminocidos
unidos por enlaces peptdicos. Se consideran indispensables para la vida pues
tienen un sinnmero de funciones de gran importancia para mantener la
homeostasis del organismo humano (estructural, contrctil, regulacin, inmunidad,
catlisis, sealizacin, transporte y protectora) (Mathews et al., 2002).
Las protenas una vez consumidas tienen que ser digeridas en el estmago e
intestino delgado para poderse absorber. La tripsina es una de las enzimas
proteolticas ms importantes secretadas en el jugo pancretico en el intestino
delgado. Esta enzima es una endopeptidasa pues cataliza la hidrolisis de enlaces
peptdicos con especificidad del lado carboxilo de los aminocidos arginina y
lisina.
La tripsina se produce en pncreas por estimulacin por colecistoquinina y se
secreta en el duodeno como el zimgeno tripsingeno (forma inactiva). Una vez en
el intestino, la enzima enteropeptidasa hidroliza al tripsingeno en un punto de su
cadena aminoacdica para activar la enzima tripsina. ste mecanismo de
activacin es necesario, pues de esa manera se evita la degradacin de los tejidos
del pncreas de accin de la proteasa. En este sentido, es conocido que una mala
regulacin de la activacin del zimgeno de tripsina conduce a la enfermedad
denominada pancreatitis.
Existen otros mecanismos de regulacin de la enzima tripsina que se basan en la
unin de un compuesto anlogo al sitio activo de la enzima ya sea por unin
covalente o no covalente. Ejemplos de estos compuestos son los inhibidores de
serina proteasas (serpinas) los cuales se unen por un enlace covalente a la
proteasa diana, y el inhibidor pancretico de tripsina, el cual se une de manera no
covalente al sitio activo.
En este trabajo se pretende revisar las caractersticas generales de la tripsina
como su estructura, funcin metablica y regulacin (activacin e inhibicin). As
tambin este trabajo tuvo inters en revisar ms detalladamente aspectos
relacionados con la inhibicin de de la tripsina y los compuestos que ocasionan
dicha inhibicin.




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REVISIN BIBLIOGRFICA
Enzimas Involucradas en el Proceso General de la Digestin de Protenas
Para lograr el aprovechamiento de las protenas en el organismo humano, stas
tienen que ser digeridas para producir compuestos de un bajo peso molecular que
puedan ser absorbidos en el tracto gastrointestinal. La digestin de las protenas
se lleva a cabo en el tubo digestivo, mediante la accin de varias enzimas
proteolticas (proteasas), que hidrolizan las uniones peptdicas (Pea-Diaz et al,
1988)
En general se pueden distinguir las enzimas endopeptidasas y las exopeptidasas.
Las primeras hidrolizan uniones peptdicas del interior de la cadena polipetidica.
En cambio, las exopeptidasas (aminopeptidasas y carboxipeptidasas) hidrolizan
especficamente uniones peptdicas de los aminocidos terminales. Las
endopeptidasas ms importantes son la pepsina, la tripsina y la quimiotripsina. Las
tres enzimas se sintetizan en forma de precursores inactivos (zimgenos); el
pepsingeno se convierte en pepsina por accin de la extrema acidez del jugo
gstrico en el estmago, y por un proceso autocataltico de la propia molcula
(Pea-Daz, 1988). La activacin de pepsina; se realizar por protelisis de la
misma; y el fragmento aminoacdico liberado por su activacin, acta como
pptido de sealizacin para la liberacin de la hormona colecistoquinina, la cual,
a su vez libera tripsinogeno y quimiotripsinogeno al intestino delgado. La enzima
enteroquinasa, sintetizada en las clulas de la pared intestinal, cataliza la
conversin de tripsingeno en tripsina, y sta la de quimotripsingeno en
quimotripsina. Estas endopeptidasas producen oligopeptidos, por lo que stos son
hidrolizados por otro grupo de enzimas (aminopeptidasas, carboxipeptidasas,
dipeptidasas y tripeptidasas). Los productos de la digestin de las protenas son
aminocidos libres y/o pptidos (dipeptidos o tripeptidos), los cuales son
fcilmente absorbidos por las paredes del tracto gastrointestinal (Rodrguez-
Rivera, 2008).

Caractersticas Generales de las Serina Proteasas
Casi una tercera parte de todas las proteasas se pueden clasificar como serina
proteasas, su nombre se lo deben a un residuo nucleoflico de serina en su sitio
activo (Hedstrom, 2002). Las enzimas ms comunes dentro de este grupo de
proteasas son la tripsina, quimiotripsina, la acetilcolinesterasa y la elastasa
(Whitfor, 2005). stas proteasas catalizan la hidrolisis de los enlaces peptdicos de
las protenas con cierta especificidad. Entran en la clasificacin de
endopeptidasas, pues hidrolizan uniones internas de los pptidos, es decir no
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liberan aminocidos terminales (Pea-Daz et al., 1988). Las uniones que
hidrolizan no son al azar, pues muestran una especificidad de sustrato que difiere
ampliamente de una enzima a otra.
Las serina proteasas manifiestan estructuras similares con un sitio activo que
contiene tres residuos invariantes dispuestos en estrecha proximidad. Los
residuos son His57, Asp102 y Ser195 y juntos forman una trada cataltica unidos
por una red de enlaces de hidrgeno (Polgar, 2005). Adems de dichos residuos
invariantes, las serina proteasas tienen un hueco localizado cerca de la serina del
sitio activo, el cual influye fuertemente en la especificidad de sustrato. A pesar de
la adaptacin de especificidad de sustrato a travs de las propiedades del hueco,
todas las proteasas de serina manifiestan un mecanismo cataltico similar basado
en el residuo de serina altamente reactive (Hedstrom, 2002). Las secuencias de
tripsina, quimiotripsina y elastasa exhiben una homologa de aproximadamente
40%. Se sabe que la estructura tridimensional de todas estas enzimas comparte
similares conformaciones plegadas. La similitud en la secuencia y la estructura
entre quimotripsina, elastasa y tripsina indica que estas protenas surgieron de la
duplicacin gnica de un gen de la proteasa ancestral con la contabilidad de la
evolucin posterior de las diferencias individuales (Whitford, 2005).

Estructura y Funcin Metablica de la Tripsina
La tripsina es una serina proteasa que hidroliza a los polipptidos de las protenas
preferentemente despus de cadenas laterales cargadas positivamente, tales
como arginina o lisina (Whitford, 2005). Se encuentra en el sistema digestivo de
vertebrados, donde hidroliza las cadenas peptdicas de las protenas (Rawlings y
Barret, 1994).








Figura 1. Estructura molecular de la tripsina
Fuente: PDB, 2003
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En general, la tripsina presenta un sitio activo similar a las dems serina
proteasas, una triada cataltica que consiste en His57, Asp102 y Ser 195 (Polgar,
2005). Como se describi anteriormente, la estructura de las serina proteasas se
caracteriza por tener un hueco en donde resguardan el sitio activo. En el caso de
la tripsina, el hueco es relativamente largo y estrecho con un carboxilato de una
cadena lateral estratgicamente situada en la parte inferior del hueco. En vista de
la especificidad preferida de la tripsina para la segmentacin cadenas laterales
despus de lisina o arginina, este hueco parece haber sido adaptado para capturar
el sustrato de manera muy eficaz (Whitford, 2005)




Figura 2. Sitio activo de la tripsina. Aqu se presenta la
triada cataltica conformada por histidina 57, Aspartato
102 y Serina 195.
Fuente: PDB, 2003

La tripsina rompe las cadenas de pptidos principalmente en el lado carboxilo de
los aminocidos lisina o arginina, excepto si estn seguidas por prolina (Evnin et
al., 1990). En este sentido, Olsen et al. (2004), utilizando espectroscopia de
masas, identificaron que en los pptidos obtenidos por hidrolisis de tripsina fueron
cortados nicamente del lado carboxilo terminal de la arginina y lisina,
corroborando la especificidad de esta enzima.
La tripsina se activa a partir de la protelisis de su zimgeno (tripsingeno) en el
intestino delgado por enteropeptidasa. La tripsina cataliza la hidrolisis de enlaces
peptdicos en el duodeno, rompiendo a las protenas en pptidos de bajo peso
molecular. A su vez, estos pptidos se pueden seguirse hidrolizando en
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aminocidos por otras proteasas (exopeptidasas) antes de entrar en el torrente
sanguneo (Rodrguez-Rivera, 2008).
Regulacin de la Actividad Proteoltica de la Tripsina
Activacin por Modificacin Covalente (Protelisis)
La proteolisis regula la actividad enzimtica por la sntesis de enzimas precursoras
inactivas que contienen secuencias de precursores en el terminal N. La
eliminacin de estas regiones por proteasas conduce a la activacin de la enzima.
La tripsina se sintetiza inicialmente como una molcula precursora ms grande e
inactiva llamada tripsingeno o zimgeno de tripsina.
La tripsina se produce en pncreas por estimulacin por colecistoquinina y se
secreta en el duodeno como el zimgeno tripsingeno (forma inactiva). Una vez en
el intestino, la enzima enteropeptidasa se secreta por la membrana mucosa y
corta un hexapptido del N terminal del tripsingeno para formar tripsina (Pea-
Daz et al., 1988; Whitford, 2005). La forma inactiva de sta proteinasa evita el
ataque proteoltico al pncreas y a la propia pared del tracto gastrointestinal
(Rodrguez-Rivera, 2008). La enteropeptidasa est bajo control hormonal, el
producto es la tripsina con una especificidad natural para el corte de residuos de
Lys o Arg y una pequea cantidad de tripsina producida es capaz de catalizar la
produccin adicional de tripsina a partir del zimgeno. Como resultado este
proceso describe a menudo autoltico (Whitford, 2005).
Los zimgenos son comunes para las enzimas proteolticas, tales como las que se
encuentran en el tracto digestivo de mamferos, donde la produccin de la enzima
activa podra conducir a la degradacin de clulas inmediatamente despus de la
traduccin. La activacin de la tripsina por hidrolisis proteoltica del tripsingeno en
el pncreas puede conllevar a una serie de situaciones que provoquen la auto-
digestin pancretica, lo que resulta en la enfermedad denominada pancreatitis.
La pancreatitis aguda es una enfermedad que se da por el dao al pncreas, y
ste resulta de la activacin prematura de las enzimas digestivas (Voet y Voet,
2004).

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Figura 3. Activacin del tripsingeno a tripsina. Protelisis limitada
del tripsinogeno por una enteropeptidasa y donde se remueve una
hexapptido corto del N-terminal.
Fuente: Whitford, 2005

La tripsina juega un papel importante en la activacin de otras enzimas
proteolticas pancreticas (Figura 4). La tripsina activa a la quimotripsina y a la
elastasa mediante la ruptura proteoltica del quimotripsingeno y de la proelastasa,
respectivamente (Mathews, 2002; Whitford, 2005).











Figura 4. Activacin de zimgenos mediante ruptura proteoltica. En
este esquema se muestra la activacin de los zimgenos que pasan a
ser catalticamente activos cuando sufren ruptura.
Fuente: Mathews et al., 2002
Tripsingeno
Tripsina
Quimotripsingeno
Proelastasa
Quimiotripsina
Elastina
Enteropeptidasa
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Inhibicin por Unin No Covalente
Los procesos de inhibicin y regulacin de las enzimas estn interrelacionados
con el procesamiento de las protenas en las clulas que inhiben enzimas como
parte de la funcin celular normal (Whitford, 2005). La inhibicin reversible de la
tripsina involucra la unin no covalente de un inhibidor de la enzima. Se da por
inhibidores simples se unen como "llave-cerradura" y bloquean el acceso al sitio
activo de la proteasas (Yamasaki et al., 2008).
Inhibidor Pancretico Bovino de Tripsina (BPTI)
El modo de inhibicin tipo unin no covalente, se manifiesta por el inhibidor de
tripsina pancretica bovina (BPTI), que es una protena que acta como inhibidor
natural de tripsina, previniendo su actividad proteoltica. La alta estabilidad de la
molcula es debido a los 3 enlaces disulfuro que unen las 6 miembros de cistena
de la cadena (Cys5-Cys55, Cys14-Cys38 y Cys30 Cys51. La cadena larga y
bsica de la lisina 15 se une muy fuertemente en el hueco de especificidad en el
sitio activo de la tripsina e inhibe su accin enzimtica (Kasell y Laskowski, 1965).

Inhibicin por Unin Covalente
Serina Proteasas Inhibitorias (Serpinas)
Las serpinas son una superfamilia de protenas clasicadas dentro de 16
secciones. El genoma humano contiene aproximadamente 36 serpinas implicadas
en la regulacin de numerosos sistemas que incluyen la hemostasia y brinlisis,
angiognesis, la cascada del complemento y la inamacin. (Rau et al, 2007). El
nombre serpina se deriva de la combinacin de serina proteasa inhibitoria, en
virtud de sus propiedades funcionales (Carrell y Travis, 1985).
Los inhibidores de serina proteasas (serpinas) pueden formar un enlace covalente
con la proteasa de serina, inhibiendo su funcin. Ejemplos de este tipo de
inhibidores de tripsina son por ejemplo 1-antitripsin y antitrombina. Estos
inhibidores son parte de la defensa contra su activacin inapropiada de tripsina
(Voet y Voet, 2004).
Todas ellas presentan un alto grado de homologa estructural. Estn tpicamente
compuestas por aproximadamente 400 aminocidos que se organizan en 9 hlices
y tres hojas (A, B, C). Las serpinas tambin poseen una regin expuesta
denomina el bucle centro reactivo (RCL) que, en molculas inhibidoras, incluye la
regin determinada especfica y forma la interaccin inicial con la proteasa diana
(Whisstock et al., 2006).
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Un esquema minimalista de la cintica de inhibicin de las serpinas consta de dos
pasos: 1) la formacin de un complejo michaeliano, donde la secuencia el bucle
reactivo (RCL) es reconocida por la proteasa como un sustrato; y 2) la formacin
de un complejo covalente donde la proteasa es atrapada en un estado inactivo
(Burghaus et al., 2006)
Las serpinas son de particular inters para la biologa estructural, debido a que
sufren un cambio nico y dramtico en la forma (o cambio conformacional) cuando
inhiben las proteasas diana (Huntington et al., 2000). Aunque el mecanismo de
inhibicin de la proteasa confiere ciertas ventajas, tambin tiene desventajas, y las
serpinas son vulnerables a mutaciones que resultan en mal plegamiento de
protenas y la formacin de inactivos polmeros de cadena larga.



Figura 5. Estructura de la serpina 1-antitripsina humana.
Fuente: PDB

Inhibidores de Tripsina en la Industria Farmacutica y Alimentaria
En la industria farmacutica, el estudio de los inhibidores naturales as como el
desarrollo de inhibidores sintticos de tripsina puede ayudar de manera importante
al control de enfermedades relacionadas con la actividad proteoltica de sta
enzima, como es el caso de la pancreatitis. La investigacin los perfiles cinticos
de reacciones catalizadas de la enzima en presencia de un inhibidor puede
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identificar los mecanismos de inhibicin y proporcionar pistas importantes en
ausencia de datos estructurales de la geometra del sitio activo y la composicin.
Armados con el conocimiento estructural, la industria farmacutica ha producido
nuevos inhibidores con accin mejorada que desempean papeles cruciales en la
lucha contra la enfermedad.
Existen fuentes naturales de inhibidores de tripsina: jugo pancretico bovino,
serpina, ovomucoide, soya, y frijol lima. Cada inhibidor acta como un substrato
anlogo y se une con las serina proteasas para formar complejos inactivos, porque
las proteasas se inactivan. Sin embargo, la presencia de inhibidores de tripsina en
alimentos de consumo habitual puede ser un problema, pues comprometen la
nutricin del organismo que los consume. Lo anterior sucede debido a que, al
inhibir la enzima tripsina, no se lleva a cabo la degradacin de las protenas y se
evita la absorcin de stas por el organismo.

CONCLUSIONES
Las serina proteasas tienen una estructura similar, por lo que se considera que
tienen una actividad similar. Pero la importancia de tripsina radica en que una vez
activada en el intestino delgado, promueve la activacin de las otras serinas
proteasas (quimotripsina y elastasa).
La activacin de estas enzimas tiene que estar regulada, especialmente de la
tripsina. Para esto, los inhibidores naturales de tripsina evitan que sta se active
inapropiadamente y que degrade los tejidos del pncreas. El estudio de
inhibidores de tripsina fisiolgicos o el desarrollo de inhibidores sintticos ha sido
una alternativa para prevenir la activacin inadecuada de esta enzima y evitar o
aliviar enfermedades como la pancreatitis.
En relacin a la presencia de inhibidores de tripsina en alimentos, estos sin duda
causan una reduccin de la disponibilidad biolgica de aminocidos para su
absorcin en el organismo, por lo que es necesario controlar la presencia de
inhibidores en productos alimentarios para no comprometer la salud nutricional de
los consumidores.




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REFERENCIAS
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