1

UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

Universidad del Per, DECANA DE AMRICA

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA
ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUIMICA
Departamento Acadmico de Qumica Bsica y Aplicada



QUMICA ANALITICA INSTRUMENTAL

Cuantificacin de una muestra por curva de
calibracin y por comparacin con un estndar










APELLIDOS NOMBRES GRUPO PROFESOR
Cueva Flores Leonardo Gabriel


viernes de
2 pm a 6 pm


Quispe
Jacobo Fredy
Huayta Crdova Stefany Bianca
Julca Alcntara Katerin Milagros
Villar Calero Kaysser Alberto

2

INTRODUCCIN


Entramos al anlisis cuantitativo usando la espectrofotometra.
En prcticas anteriores hallamos logramos hallar la longitud de
onda ptima para la sustancia que se est estudiando, para ello
medimos esta sustancia con una concentracin constante a
diferentes longitudes de onda, este dato es identificado cuando
durante el anlisis el valor de la absorbancia se hace mximo.
La curva de calibracin o de Beer tiene el propsito de que una
vez graficada, al realizar un nuevo anlisis con la misma sustancia
podamos saber en qu concentracin se encuentra en la solucin.
Las aplicaciones prcticas que se le pueden dar a esta grafica son
especialmente tiles en ciertos aspectos de la profesin
farmacutica. Desde la determinacin de un principio activo en
una especie vegetal, hasta saber que concentracin en la que una
molcula dentro de una formula acta ms eficazmente o a que
concentracin esta misma podra llegar a ser daina.


3

1. OBJETIVOS
o Realizar una representacin grfica de la curva de calibracin.
o Cuantificar una muestra utilizando la curva de calibracin.


2. PARTE EXPERIMENTAL

2.1. Materiales y Reactivos
o Azosulfamida
o Celdas de vidrio y cuarzo
o Espectrofotmetro UV-visible:
- Thermo scientific genesys 10s uv-vis
- Unic soo uv-2100 spect
o Agua
o Aseptil Rojo

2.2. Metodologa
Para realizar esta prctica fue necesario preparar cinco soluciones
diluidas de azosulfamida tomando alcuotas de (0,4:0,8:1,6:2,0:3,2)ml
de la solucin madre en diferentes matraces, y aforando cada una a
50ml con agua destilada, despus calculamos las nuevas
concentraciones de azosulfamida de cada una de las diluciones
utilizando la ecuacin:C1V1=C2V2 (con concentraciones de : 4ug, 8ug,
16ug, 20ug y 32ug), luego ya encendido el espectrofotmetro lo
ajustamos a una longitud de onda de 525nm y con lectura para
absorbancia; primeramente establecimos el matraz cero como la
solucin blanco que contena solo agua. Llenamos la celda para luz
visible con el blanco y calibramos a cero de absorbancia, luego
tomamos en otra celda las soluciones diluidas de los matraces 1-5(cada
una por separado) y tomamos 2 lecturas de absorbancia de cada una

4

calibrando con el blanco entre cada lectura ,obtenemos el promedio de
estas dos lecturas y lo utilizamos para hacer la curva de calibracin
donde estos datos sern los puntos de las ordenadas mientras que los
datos de concentracin(de la azosulfamida) ocuparan el lugar de las
abscisas; ahora utilizando la calculadora hacemos la regresin lineal
para obtener los datos de la pendiente que ser el coeficiente de
absortividad(), la ordenada al origen(B) y el coeficiente de regresin
lineal(R
2
).
Posteriormente se nos proporcion Aseptil rojo de concentracin de 5%
le realizamos diluciones de 10, 20 y 30 microgramos por mililitro
llenamos la celda con un poco de solucin de la muestra diluida y
tomamos dos lecturas calibrando con el blanco entre cada una. Ahora
utilizando la ecuacin de la ley de Beer despejamos para concentracin
C=A-B/b y como previamente obtuvimos el valor de a y de la ordenada
al origen calculamos con ella la concentracin de las soluciones
problema, por ultimo comparamos con la informacin que se nos
proporcion sobre la muestra. Ya terminado lo experimental realizamos
los clculos estadsticos necesarios para verificar la confiabilidad de
nuestros resultados.


3. RESULTADOS
A continuacin se presentan los resultados obtenidos de los clculos para las
concentraciones y los datos de las lecturas de absorbancia obtenidas en el
espectrofotmetro para las soluciones diluidas de Azosulfamida y el Aseptil
rojo




5

3.1 Azosulfamida
Tabla 1: Soluciones para realizar una curva de calibracin
Concentracin
en ug/mL
Azosulfamida
en el matraz

Absorbancias
Lectura1 Lectura2
Absorbancia
Promedio
4 0.137 0.134 0.1355
8 0.264 0.265 0.2645
16 0.408 0.397 0.4025
20 0.869 0.875 0.872
32 1.3 1.308 1.304


La siguiente grfica muestra la curva de calibracin que construimos a partir
de los datos de absorbancia en las ordenadas y la concentracin en las
abscisas para las concentraciones de Azosulfamida.


En la siguiente tabla se muestran los resultados que obtuvimos al hallar la ecuacin de la
recta el valor del intercepto y la regresin lineal.

0.1355
0.2645
0.4025
0.872
1.304
y = 0.0429x - 0.0913
R = 0.9446
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
1.4
0 5 10 15 20 25 30 35
A
b
s
o
r
b
a
n
c
i
a Concentracion/ ug/mL
Curva de Calibracion de la Azosulfamida
IMAGEN 1

6

Tabla 2: Parmetros de valor
PARAMETROS VALOR
Ecuacin de la recta y = 0.0429x - 0.0913
Valor del intercepto 0.0913
La regresin lineal

3.2 Aseptil Rojo
Tabla 3: Soluciones para realizar una curva de calibracin
Concentracin en ug/mL
Azosulfamida en el matraz
Absorbancias
Lectura1 Lectura2
Absorbancia
10 0.283 0.282 0.2825
10 0.283 0.282 0.2825
20 0.383 0.385 0.384
30 0.885 0.883 0.884

Hallando la concentracin de azosulfamida en el aseptil rojo.
Factor de disolucin= 100mL/0.006mL
Ecuacin de la recta:
y=0.0429X + 0.0913
i) Reemplazando la absorbancia encontrada
A=0.884
0.884=0.0429X + 0.0913


ii) Multiplicando el factor de disolucin con la concentracin hallada
F.D x C=100mL/0.006mL x 22.73426573
F.D x C= 37890.44288ug/mL
Concentracin de la azosulfamida analizada

X=22.73426573

3.789 g/mL


7


4. DISCUSION

Interpretando los resultados de las tablas y los datos de la curva de la
Azosulfamida nos dimos cuenta que efectivamente con un coeficiente de
regresin lineal de 0.94 se cumple la ley de beer que es una lnea recta,
calculando la pendiente de esta lnea recta pudimos obtener el coeficiente de
absortibidad molar () del Aseptil rojo (0.0429) con el cual nos permiti
sustituirlo en la ecuacin de la ley de beer y despejando para la concentracin c
x calculamos las concentraciones de la muestra problema de Aseptil Rojo
obteniendo que la muestra problema contena 3.789 g/mL

5. CONCLUSION

Luego de usar concentraciones entre los rangos de 20ug/mL - 40ug/mL por
ser esta nuestra rea de trabajo; obtuvimos la ecuacin de la recta relacionada
a la concentracin de azosulfamida a una longitud de onda constante que es
la ms ptima para esta sustancia.
y = 0.0429x - 0.0913
El valor 0.0913 es cercano a cero, esta recta pasa muy cerca al origen de
coordenadas lo que indica que la curva de calibracin es adecuada.
Podremos usar esta grafica para predecir sustancias con diferentes
concentraciones de analito en muestras problema, contando con que los
instrumentos utilizados estn debidamente calibrados y se hayan empleado
adecuadamente segn se vio en prcticas anteriores.






8



6. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
Daniel C. Harris. Quantitative chemical analysis. Sixth edition. W. H. Freeman
and company, New York and Basintong, 2007, pag 462.
Douglas A. Skoog, F. James Holler, Stanley R. Crouch. Principios de anlisis
instrumental. Cengage Learning. Sexta edicion, 2008
Skoog D, Principios de anlisis instrumental, 6ta Edicin, Thomson, Mxico,
2007,96-97pag
Skoog D, Principios de anlisis instrumental, 6ta Edicin, Thomson, Mxico,
2007,138pag





















9


7. ANEXO
a. Cuestionario
Investigue Qu tipo de estandarizacin de mtodos es la curva de calibracin?
Es un tipo de calibracin con un estndar externo, la muestra se prepara
por separado del estndar. La calibracin se lleva a cabo al obtener la seal
de respuesta (absorbancia, altura mxima, rea de un pico) como funcin
de la concentracin conocida del analito.

En qu consiste un error aleatorio y un error sistemtico y como se les
identifica?
Error sistemtico: Hace que la media de un conjunto de datos difiera del
valor aceptado.
Error aleatorio: Hace que los datos se dispersen ms o menos en forma
simtrica con respeto a un valor medio.

Cul es el objetivo de la regresin lineal en las curvas de calibracin rectilneas?
A que se llama error residual?
Validar la recta es el objetivo de la regresin lineal porque esta nos da un
valor aproximadamente de 1 (cuando los procedimientos se han realizado
de la manera correcta)
Error residual: Es la estimacin observable del error estadstico en funcin
de la muestra.