FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUIMICA Departamento Acadmico de Qumica Bsica y Aplicada
QUMICA ANALITICA INSTRUMENTAL
Cuantificacin de una muestra por curva de calibracin y por comparacin con un estndar
APELLIDOS NOMBRES GRUPO PROFESOR Cueva Flores Leonardo Gabriel
viernes de 2 pm a 6 pm
Quispe Jacobo Fredy Huayta Crdova Stefany Bianca Julca Alcntara Katerin Milagros Villar Calero Kaysser Alberto
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INTRODUCCIN
Entramos al anlisis cuantitativo usando la espectrofotometra. En prcticas anteriores hallamos logramos hallar la longitud de onda ptima para la sustancia que se est estudiando, para ello medimos esta sustancia con una concentracin constante a diferentes longitudes de onda, este dato es identificado cuando durante el anlisis el valor de la absorbancia se hace mximo. La curva de calibracin o de Beer tiene el propsito de que una vez graficada, al realizar un nuevo anlisis con la misma sustancia podamos saber en qu concentracin se encuentra en la solucin. Las aplicaciones prcticas que se le pueden dar a esta grafica son especialmente tiles en ciertos aspectos de la profesin farmacutica. Desde la determinacin de un principio activo en una especie vegetal, hasta saber que concentracin en la que una molcula dentro de una formula acta ms eficazmente o a que concentracin esta misma podra llegar a ser daina.
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1. OBJETIVOS o Realizar una representacin grfica de la curva de calibracin. o Cuantificar una muestra utilizando la curva de calibracin.
2. PARTE EXPERIMENTAL
2.1. Materiales y Reactivos o Azosulfamida o Celdas de vidrio y cuarzo o Espectrofotmetro UV-visible: - Thermo scientific genesys 10s uv-vis - Unic soo uv-2100 spect o Agua o Aseptil Rojo
2.2. Metodologa Para realizar esta prctica fue necesario preparar cinco soluciones diluidas de azosulfamida tomando alcuotas de (0,4:0,8:1,6:2,0:3,2)ml de la solucin madre en diferentes matraces, y aforando cada una a 50ml con agua destilada, despus calculamos las nuevas concentraciones de azosulfamida de cada una de las diluciones utilizando la ecuacin:C1V1=C2V2 (con concentraciones de : 4ug, 8ug, 16ug, 20ug y 32ug), luego ya encendido el espectrofotmetro lo ajustamos a una longitud de onda de 525nm y con lectura para absorbancia; primeramente establecimos el matraz cero como la solucin blanco que contena solo agua. Llenamos la celda para luz visible con el blanco y calibramos a cero de absorbancia, luego tomamos en otra celda las soluciones diluidas de los matraces 1-5(cada una por separado) y tomamos 2 lecturas de absorbancia de cada una
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calibrando con el blanco entre cada lectura ,obtenemos el promedio de estas dos lecturas y lo utilizamos para hacer la curva de calibracin donde estos datos sern los puntos de las ordenadas mientras que los datos de concentracin(de la azosulfamida) ocuparan el lugar de las abscisas; ahora utilizando la calculadora hacemos la regresin lineal para obtener los datos de la pendiente que ser el coeficiente de absortividad(), la ordenada al origen(B) y el coeficiente de regresin lineal(R 2 ). Posteriormente se nos proporcion Aseptil rojo de concentracin de 5% le realizamos diluciones de 10, 20 y 30 microgramos por mililitro llenamos la celda con un poco de solucin de la muestra diluida y tomamos dos lecturas calibrando con el blanco entre cada una. Ahora utilizando la ecuacin de la ley de Beer despejamos para concentracin C=A-B/b y como previamente obtuvimos el valor de a y de la ordenada al origen calculamos con ella la concentracin de las soluciones problema, por ultimo comparamos con la informacin que se nos proporcion sobre la muestra. Ya terminado lo experimental realizamos los clculos estadsticos necesarios para verificar la confiabilidad de nuestros resultados.
3. RESULTADOS A continuacin se presentan los resultados obtenidos de los clculos para las concentraciones y los datos de las lecturas de absorbancia obtenidas en el espectrofotmetro para las soluciones diluidas de Azosulfamida y el Aseptil rojo
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3.1 Azosulfamida Tabla 1: Soluciones para realizar una curva de calibracin Concentracin en ug/mL Azosulfamida en el matraz
La siguiente grfica muestra la curva de calibracin que construimos a partir de los datos de absorbancia en las ordenadas y la concentracin en las abscisas para las concentraciones de Azosulfamida.
En la siguiente tabla se muestran los resultados que obtuvimos al hallar la ecuacin de la recta el valor del intercepto y la regresin lineal.
0.1355 0.2645 0.4025 0.872 1.304 y = 0.0429x - 0.0913 R = 0.9446 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 0 5 10 15 20 25 30 35 A b s o r b a n c i a Concentracion/ ug/mL Curva de Calibracion de la Azosulfamida IMAGEN 1
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Tabla 2: Parmetros de valor PARAMETROS VALOR Ecuacin de la recta y = 0.0429x - 0.0913 Valor del intercepto 0.0913 La regresin lineal
3.2 Aseptil Rojo Tabla 3: Soluciones para realizar una curva de calibracin Concentracin en ug/mL Azosulfamida en el matraz Absorbancias Lectura1 Lectura2 Absorbancia 10 0.283 0.282 0.2825 10 0.283 0.282 0.2825 20 0.383 0.385 0.384 30 0.885 0.883 0.884
Hallando la concentracin de azosulfamida en el aseptil rojo. Factor de disolucin= 100mL/0.006mL Ecuacin de la recta: y=0.0429X + 0.0913 i) Reemplazando la absorbancia encontrada A=0.884 0.884=0.0429X + 0.0913
ii) Multiplicando el factor de disolucin con la concentracin hallada F.D x C=100mL/0.006mL x 22.73426573 F.D x C= 37890.44288ug/mL Concentracin de la azosulfamida analizada
X=22.73426573
3.789 g/mL
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4. DISCUSION
Interpretando los resultados de las tablas y los datos de la curva de la Azosulfamida nos dimos cuenta que efectivamente con un coeficiente de regresin lineal de 0.94 se cumple la ley de beer que es una lnea recta, calculando la pendiente de esta lnea recta pudimos obtener el coeficiente de absortibidad molar () del Aseptil rojo (0.0429) con el cual nos permiti sustituirlo en la ecuacin de la ley de beer y despejando para la concentracin c x calculamos las concentraciones de la muestra problema de Aseptil Rojo obteniendo que la muestra problema contena 3.789 g/mL
5. CONCLUSION
Luego de usar concentraciones entre los rangos de 20ug/mL - 40ug/mL por ser esta nuestra rea de trabajo; obtuvimos la ecuacin de la recta relacionada a la concentracin de azosulfamida a una longitud de onda constante que es la ms ptima para esta sustancia. y = 0.0429x - 0.0913 El valor 0.0913 es cercano a cero, esta recta pasa muy cerca al origen de coordenadas lo que indica que la curva de calibracin es adecuada. Podremos usar esta grafica para predecir sustancias con diferentes concentraciones de analito en muestras problema, contando con que los instrumentos utilizados estn debidamente calibrados y se hayan empleado adecuadamente segn se vio en prcticas anteriores.
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6. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS Daniel C. Harris. Quantitative chemical analysis. Sixth edition. W. H. Freeman and company, New York and Basintong, 2007, pag 462. Douglas A. Skoog, F. James Holler, Stanley R. Crouch. Principios de anlisis instrumental. Cengage Learning. Sexta edicion, 2008 Skoog D, Principios de anlisis instrumental, 6ta Edicin, Thomson, Mxico, 2007,96-97pag Skoog D, Principios de anlisis instrumental, 6ta Edicin, Thomson, Mxico, 2007,138pag
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7. ANEXO a. Cuestionario Investigue Qu tipo de estandarizacin de mtodos es la curva de calibracin? Es un tipo de calibracin con un estndar externo, la muestra se prepara por separado del estndar. La calibracin se lleva a cabo al obtener la seal de respuesta (absorbancia, altura mxima, rea de un pico) como funcin de la concentracin conocida del analito.
En qu consiste un error aleatorio y un error sistemtico y como se les identifica? Error sistemtico: Hace que la media de un conjunto de datos difiera del valor aceptado. Error aleatorio: Hace que los datos se dispersen ms o menos en forma simtrica con respeto a un valor medio.
Cul es el objetivo de la regresin lineal en las curvas de calibracin rectilneas? A que se llama error residual? Validar la recta es el objetivo de la regresin lineal porque esta nos da un valor aproximadamente de 1 (cuando los procedimientos se han realizado de la manera correcta) Error residual: Es la estimacin observable del error estadstico en funcin de la muestra.