Metabolismo y Crecimiento Bacteriano I

Nutricin y Energa
Facultad de Ciencias Biolgicas
Departamento de Ciencias Biolgicas
Campus Via del Mar
BIO050 Microbiologa
Profesora:
Andrea Tapia Alarcn.
Biodegradacin
Biosntesis
Metabolismo Bacteriano
Reacciones degradativas: Proporcionan energa (Rx. Catablicas)
Reacciones sintticas: Proporcionan componentes estructurales (Rx. Anablicas)
Conjunto de reacciones bioqumicas que se realizan
al interior del organismo
Metabolismo Bacteriano: ENZIMAS
H
2
O
2
H
2
O + O
2
> aos
E
H
2
O
2
H
2
O + O
2
< seg.
Las enzimas son protenas catalticas (biocatalizadores) que disminuyen
la energa de activacin requerida para que ocurra una reaccin qumica.
Energa de activacin: energa necesaria para juntar las molculas
reactantes (sustratos) de la manera adecuada de modo que alcancen el
estado de transicin.
Macronutrientes:
Son requeridos en gran cantidad.
(Ej.: Carbono, Nitrgeno, Hidrgeno, Oxgeno, Fsforo,
Azufre, Potasio, Magnesio, Calcio, Sodio y Fierro)
Micronutrientes:
Son requeridos en pequea cantidad.
(Ej.: Cromo, Cobalto, Cobre, Manganeso, Molibdeno, Nquel,
Selenio, Tungsteno, Vanadio y Zinc.)
Nutrientes Bacterianos:
Metabolismo : Catabolismo
Catabolismo: Obtencin de Energa
Metabolismo. Catabolismo: Obtencin de Energa
Gliclisis o gluclisis
Ciclo de Krebs o cidos tricarboxlicos (ATC).
Sistema de transporte de electrones.
Gliclisis
Vas de
Fermentacin
Glucosa
Piruvato
2 ATP
2 NADH = 6 ATP
8 ATP
Gliclisis. Fermentacin del c. pirvico
Ciclo de Krebs

Ciclo de los c.
tricarboxlicos
Piruvato Acetil- CoA
2 NADH = 6 ATP
GTP = 2 ATP
6 NADH = 18 ATP
2 FADH2 = 4 ATP
30 ATP
Cadena transportadora
de electrones
Fosforilacin Oxidativa
1 Glucosa = 38 ATP
Gliclisis = 8 ATP
Ciclo de Krebs = 30 ATP
ANAEROBIOS OBLIGADOS
El aceptor final de electrones es El aceptor final de electrones es
una mol una mol cula inorg cula inorg nica, como nica, como
NO NO
3 3
- -
o SO o SO
4 4
2 2- -
. .
El O El O
2 2
les resulta altamente t les resulta altamente t xico xico
Ej.: Ej.: Clostridium Clostridium botulinum botulinum
AEROBIOS OBLIGADOS
El aceptor final de electrones es El aceptor final de electrones es
siempre el O siempre el O
2 2
Ej.: Ej.: Mycobacterium Mycobacterium tuberculosis tuberculosis
ANAEROBIOS FACULTATIVOS
El mejor aceptor final de electrones es el O El mejor aceptor final de electrones es el O
2 2
, pero en su , pero en su
ausencia pueden usar otras mol ausencia pueden usar otras mol culas org culas org nicas nicas
(fermentaci (fermentaci n) n) o inorg o inorg nicas nicas (respiraci (respiraci n anaer n anaer bica) bica)
Ej.: Ej.: Escherichia Escherichia coli coli, , Salmonella Salmonella typhi typhi, ,
Staphylococcus Staphylococcus, , Streptococcus Streptococcus
Clasificacin Bacteriana. Segn aceptor final de electrones
Anaerobias estrictas: Carecen de SOD, catalasa y peroxidasa por lo que
el O
2
es muy txico para ellas. No soportan presiones de O
2
> al 0,5%. Ej.
Clostridium haemolyticum
Anaerobias moderadas: Soportan presiones de O
2
de 2 - 8%. Pueden
estar expuestas al aire por 60-90 minutos sin perder viabilidad.
Ej. Bacteroides fragilis
Anaerobias aerotolerantes: Poseen algn nivel de enzimas detoxificantes.
Ej. Lactobacillus spp., Leuconostoc spp.
Microaerfilas: Sobreviven a presiones de O
2
menores a la atmosfrica
(<21%). Son capnoflicas (requieren CO
2
). Ej. Campylobacter spp.
Anaerobias facultativas: Pueden realizar metabolismo anaerobio o aerobio
dependiendo del ambiente. Ej. Escherichia coli y otras enterobacterias.
Aerobias estrictas: Slo crecen en presencia de O
2
. Ej. Pseudomonas sp.
Clasificacin Bacteriana. Tolerancia al Oxgeno (O
2
)
Quimiotrficas o
Quimiosintticas:
Son aqullas que obtienen
su energa a partir de
reacciones qumicas
Fototrficas o
Fotosintticas:
Son aqullas que obtienen
su energa captndola de
la luz solar
E. coli (Enterobacteria) Ocillatoria (Cianobacteria)
Clasificacin Bacteriana. Segn fuente de energa
Quimioorgano...Sustancia qumica orgnica
(trophos: alimento)
Obtienen su energa a travs de la utilizacin
de sustancias qumicas orgnicas
Quimiotrficas o Quimiosintticas:
a) Quimioorganotrficas
Clasificacin Bacteriana. Segn fuente de energa
Quimiolito...Sustancia qumica inorgnica
(lithos: piedra; trophos: alimento)
Obtienen su energa a travs de la utilizacin
de sustancias qumicas inorgnicas
Quimiotrficas o Quimiosintticas:
b) Quimiolitotrficas
Clasificacin Bacteriana. Segn fuente de energa
Membrana plasmtica de una cianobacteria fotosinttica
La luz solar aporta la energa requerida para el proceso de transferencia de electrones en
la membrana, generndose un gradiente de protones que se acopla a la sntesis de ATP
Fotosintticas o Fototrficas:
Clasificacin Bacteriana. Segn fuente de energa
Resumen Catabolismo
Obtencin de Energa
Aerobios Obligados
Anaerobios Obligados
Anaerobios Facultativos
Gliclisis
Ciclo de Krebs
Sistema de transporte de electrones.
Tolerancia al O
2
Anaerobios estrictas
Anaerobios moderadas
Anaerobios aerotolerantes
Microaerfilos
Anaerobios facultativas
Aerobios estrictas
Fermentaciones:
lctica
alcohlica
Fuente de Energa
Quimiotrficos
Fototrficos
Quimiotrficos:
Quimioorganotrficos
Quimiolitotrficos
Metabolismo : Anabolismo
Hetertrofas:
Obtienen el carbono a partir de molculas ms
complejas
(Ej.: hidratos de carbono, aminocidos, lpidos)
Auttrofas:
Obtienen el carbono a partir de molculas simples
(Ej.: CO
2
y CH
4
)
Segn su fuente de carbono, las bacterias se clasifican en:
La gran mayora de las bacterias de inters clnico son hetertrofas
Anabolismo: Sntesis de componentes estructurales
Metabolismo. Anabolismo: Biosntesis de Macromolculas
Los microorganismos son la base de todas las cadenas alimenticias
Metabolismo. Anabolismo: Fijacin de molculas simples
Fijacin de Carbono (CO
2
)
Ciclo de Calvin: Es realizado por todas las bacterias fototrficas.
Metabolismo. Anabolismo: Fijacin de molculas simples
Fijacin de Fsforo (P)
Fotofosforilacin: Formacin de ATP desde ADP y Pi durante la
fotosntesis.
Fosforilacin Oxidativa: Formacin de ATP desde ADP y Pi durante la
cadena transportadora de electrones.
Fosforilacin a Nivel de Sustrato: Ej. Durante la gliclisis
Gliceraldehido-3-P + Pi + NAD
+
1,3-Bisfosfoglicerato + NADH + H
+
Metabolismo. Anabolismo: Fijacin de molculas simples
Fijacin de Azufre (S)
SO
4
2-
H
2
S
ATP
H
2
S + Serina Cistena + H
2
O
Fijacin de Nitrgeno (N)
NO
3
-
+ H
+
+ NADH NO
2
-
+ NAD
+
+ H
2
O
NO
2
-
NH
3
N
2
NH
3
NH
3
+ c. glutmico glutamina
ATP
Metabolismo y Crecimiento Bacteriano II
Crecimiento y Medios de Cultivo
Facultad de Ciencias Biolgicas
Departamento de Ciencias Biolgicas
Campus Via del Mar
BIO050 Microbiologa
El tiempo requerido para la duplicacin bacteriana es variable para cada especie
(Ej: 20 min para Escherichia coli; 24 horas para Mycobacterium tuberculosis)
Se requiere coordinacin
espacial y temporal
(secuencial) en la sntesis de
macromolculas:
DNA
Protenas
Hidratos de Carbono
Lpidos
Reflejado (poblacionalmente)
por un aumento en el nmero
de organismos presentes
Divisin Bacteriana: Fisin Binaria
Definiciones
Crecimiento: Aumento del nmero de individuos
(M.O.) en una poblacin.
(Implica un aumento de la biomasa del M.O.)
Velocidad de crecimiento: Crecimiento de un M.O.
por unidad de tiempo.
Tiempo de generacin (g): Tiempo requerido para
que se formen dos clulas hijas a partir de una
clula parental. Es el tiempo necesario para que la
poblacin bacteriana se duplique.
(Implica la duplicacin de todos los componentes
estructurales de la clula)
Consecuencias moleculares de la temperatura en el crecimiento bacteriano
Factores que afectan el Crecimiento Bacteriano: TEMPERATURA.
Psicrfilos: Temperatura ptima baja (<1 a 15C)
Mesfilos: Temperatura ptima en rango medio (25 a 42C)
Termfilos: Temperatura ptima alta (50 a 70C)
Hiper termfilos: Temperatura ptima muy alta (80 a >100C)
Factores que afectan el Crecimiento Bacteriano: TEMPERATURA.
Aguas termales del
Parque Nacional Yellowstone
TEMPERATURA: Hipertermfilos.
Thermus aquaticus
Extremfilo, de la familia arquea
T ptima de crecimiento 70C
No halfilos: No toleran ni siquiera concentraciones moderadas de sal
Halotolerantes: Toleran concentraciones moderadas de sal; crecen mejor sin ella
Halfilos: Leves (1 a 6% NaCl) y Moderados (6 a 15% NaCl)
Halfilos extremos: 15 a 30% NaCl
Factores que afectan el Crecimiento Bacteriano: SALINIDAD.
Halobacterium salinarum
Necesita 12 a 15% de NaCl en el
medio para crecer.
Mar: 3% NaCl
Sangre: 0,85% NaCl
Lago poblado por
Halobacterium salinarum
Factores que afectan el Crecimiento Bacteriano: pH (acidez)
Tiobacillus ferrooxidans
En medio altamente cido (en H
2
SO
4
concentrado, pH 1) es capaz de oxidar
minerales de cobre insolubles como
CuFeS
2
(calcopirita), Cu
2
S (chalcocita),
CuS (covelita) y Cu
5
FeS
4
(bornita),
produciendo CuSO
4
(soluble)
Mina de cobre Bingham Canyon, Salt
Lake City, Utah, USA
Factores que afectan el Crecimiento Bacteriano: pH (acidez)
Grupo Relacin con el O
2
Metabolismo Ej.
Aerobios:
Obligados Requerido Respiracin aerbica M. luteus
Facultativos No requerido (Mejor con O
2
) Respiracin, fermentacin E. coli
Microaeroflicos Requerido (Bajos niveles) Respiracin aerbica S. volutans
Anaerobios:
Aerotolerantes No requerido (Peor con O
2
) Fermentacin S. pyogenes
Obligados Daina o Letal Respiracin, fermentacin M. formicicum
Factores que afectan el Crecimiento Bacteriano: Oxgeno
(a) Aerbica
(b) Anaerbica
(c) Facultativa
(d) Microaeroflica
(e) Anaerobio aerotolerante
Factores que afectan el Crecimiento Bacteriano: Oxgeno
Jarra Anaerbica
(GasPack)
Diseada para el
crecimiento de
bacterias anaerbicas
Mecanismo hermtico,
que posee un
catalizador qumico
que consume todo el
oxgeno presente
dentro del recipiente
Factores que afectan el Crecimiento Bacteriano: Oxgeno
Esterilidad
Tener todos los nutrientes esenciales (agua, fuente de
nitrgeno, fuente de carbono, sales minerales, micronutrientes,
vitaminas, etc.)
Cumplir con requisitos fsicos: temperatura (37C), pH neutro
(7.0 - 7.2 ), condicin atmosfrica (10% CO
2
)
Estar protegidos del medio ambiente (Evitar su contaminacin
con microbiota ambiental y/o comensal)
Condiciones de los medios de cultivo:
Medios de Cultivo.
Siembra
T , Tpo. O
2
Nutrientes, etc
En medio lquido:
Enturbiamiento
Aparicin de grumos
Formacin de un velo o pelcula en la superficie
En medio slido: formacin de colonias
Cmo se observa desarrollo bacteriano en los medios de cultivo?
Colonia: Multiplicacin de una bacteria que forma una
masa visible a ojo desnudo
Medios de Cultivo.
Morfolog Morfolog a de colonias: a de colonias:
An
An

lisis macrosc
lisis macrosc

pico de colonias...
pico de colonias...
Aislamiento de bacterias a partir de una muestra
(agua, secreciones, aire, alimentos, muestras
clnicas)
Obtencin de cultivos puros, para el estudio de
propiedades fisiolgicas e identificacin
Conservacin de cepas
Evaluacin de antibiticos
Pruebas de esterilidad
Fabricacin de sueros, vacunas, etc.
Cul es la utilidad de los medios de cultivo?
Medios de Cultivo.
Segn su estado fsico...
Medio lquido
Medio semi slido
(agar 0,8%)
Medio slido
(agar 1,5%)
Medios de Cultivo.
Objetivo: movilidad y movilidad y
almacenaje almacenaje
En placa
En tubo
Segn su presentacin...
Medios de Cultivo.
Medios definidos (qumicamente):
Contienen cantidades precisas y bien formuladas de diversos
componentes inorgnicos y orgnicos. Renen los requerimientos
nutricionales para el desarrollo de un determinado microorganismo
Medios complejos (indefinidos):
No poseen una formulacin precisa.
Se preparan en base a infusiones de
digeridos proteicos (carne, soya,
casena, extracto de levadura). La
mayora de estos medios se venden
deshidratados, lo que facilita su
preparacin
Segn su contenido de nutrientes...
Medios de Cultivo.
1.- Corriente (bsicos):
Contienen slo los elementos nutritivos esenciales. Ej.:caldo Luria (medio
lquido) y agar corriente (medio slido)
2.- Especiales:
Mejorados o enriquecidos: Son medios corrientes adicionados de
sustancias de alto valor nutritivo (sangre, suero, vitaminas, extractos
de levaduras), que permiten el desarrollo de bacterias ms exigentes.
Ej.: Agar sangre (medio slido), agar chocolate (medio slido)
Medios selectivos: Contienen sustancias inhibidoras para
determinadas bacterias. Ej.: Agar SS para Salmonella y Shigella,
Thayer Martin para N. gonorrhoeae y Agar MacConkey para Gram (-)
Medios diferenciales: Permiten establecer si una bacteria desarrolla
una determinada funcin metablica que la diferencia de otras
bacterias. Ej.: Citrato de Simmons, TSI, MIO, LIA, Caldo urea
Segn su utilidad...
Medios de Cultivo.
Streptococcus pyogenes
Bacillus subtilis
Enriquecidos...
Medios de Cultivo.
-hemlisis: Total -hemlisis: Parcial
-hemlisis: No produce hemlisis...
Enriquecido...y diferencial
Medios de Cultivo.
E. coli
Gram (-), lac
+
S. typhimurium
Gram (-), lac
-
S. aureus
Gram (+)
Selectivo y diferencial
Medios de Cultivo.
Siembra en cuadrantes... Siembra en cuadrantes...
Objetivo: aislamiento de colonias aislamiento de colonias
Tipos de Siembra.
Siembra en c Siembra en c sped... sped...
Objetivo: antibiograma antibiograma
test por difusi test por difusi n n
Tipos de Siembra.