Guia-2012

Universidad Nacional del Nordeste
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales y Agrimensura

Biologa Celular
y
Molecular

* 2012 *
Biologa Celular y Molecular FACENA-UNNE
2
A. PRESENTACIN DE LA ASIGNATURA

I. Introduccin
El presente curso de Biologa Celular y Molecular intenta proporcionar al estudiante
una visin esencial de los patrones de estructura, funcin y organizacin de las clulas.
Se procurar que el alumno conozca y aplique el mtodo cientfico, poniendo especial
nfasis en el concepto de que el conocimiento cientfico es provisorio y sometido a constante
revisin.
En el transcurso del cursado de la asignatura se presentar al alumno una visin de la
estructura y ultraestructura celular, los distintos niveles de organizacin y tipos de clulas, la
relacin entre forma y funcin, el metabolismo de las clulas y la reproduccin celular.

II. Objetivos
Al finalizar el cursado de la asignatura, se pretenden alcanzar los siguientes objetivos,
que los docentes de la ctedra tratarn de promover activamente.

Desarrollar destreza en el manejo de los instrumentos de laboratorio, tcnicas
empricas y microscopa.
Conocer los fundamentos, resultados y limitaciones de los principales mtodos
empleados para el estudio de las clulas, sus productos y sus interacciones.
Reconocer las caractersticas fundamentales de las clulas, patrones, diversidad de
formas, actividad metablica y regulacin.
Conocer las bases moleculares del funcionamiento celular.
Establecer relaciones integradoras entre la estructura y la funcin de las clulas.
Examinar a la clula como un organismo autnomo, consolidando el concepto de
niveles de organizacin subcelular.
Instruirse en el empleo de la terminologa bsica de las ciencias biolgicas, tanto en su
expresin grfica, como escrita y oral.
Estimular el desarrollo del pensamiento reflexivo sobre la base del mtodo cientfico.
Desarrollar la capacidad de obtener, seleccionar y registrar la informacin biolgica
pertinente.

III. Programa Analtico

1. Introduccin al estudio de la biologa celular. La biologa celular dentro de las ciencias
biolgicas. Historia e importancia de su conocimiento. Descubrimiento de la estructura
microscpica. Morfologa al microscopio ptico y electrnico. El concepto de la relacin
estructura-funcin.
2. Mtodos de estudio en biologa celular. Anlisis de la estructura y ultraestructura celular.
Microscopa ptica y electrnica. Citoqumica e histoqumica. Fraccionamiento celular.
Cromatografa. Electroforesis. Cultivo de tejidos. Ultracentrifugacin.
Inmunohistoqumica. Autorradiografa. Inmunofluorescencia.
3
3. Caractersticas generales de las clulas. La clula como unidad funcional y estructural de
la vida. Teora celular. Clulas procariotas y eucariotas. Caractersticas de las clulas
vegetales y animales. Organizacin general de las clulas eucariotas.
Compartamentalizacin. Virus. Viroides. Priones.
4. Membrana Celular. Composicin molecular de las membranas biolgicas. Tipos de
protenas, lpidos e hidratos de carbono. Estructura. Modelos de membranas. Propiedades
de las membranas. Diferenciaciones de la membrana. Interacciones de las clulas entre s y
con las matrices extracelulares. Molculas de adhesin celular. Uniones celulares.
Cubiertas externas.
5. Transporte a travs de la membrana. Permeabilidad de la membrana. Transporte activo
y pasivo. Difusin simple y facilitada. Osmosis. Transporte de iones y macromolculas.
Bombas o ATPasas. Cotransporte. Protenas transportadoras.
6. Citosol o Matriz citoplasmtica. Citoesqueleto: caractersticas generales y organizacin.
Microtbulos. Microfilamentos. Filamentos intermedios. Estructura y composicin
molecular. Organoides microtubulares. Movimiento celular. Cilios y flagelos.
7. Organelos citoplasmticos. Organelos membranosos y no membranosos. Retculo
endoplasmtico liso y rugoso. Aparato de Golgi. Distribucin y exportacin de protenas.
Ribosomas. Vesculas con cubierta. Lisosomas. Mecanismo de transporte de vesculas.
Peroxisomas. Descripcin y funciones. Endocitosis especfica e inespecfica. Fagocitosis.
8. Mitocondrias. Aspectos generales. Membrana interna y externa. Composicin y estructura
molecular de las membranas. Transporte interno. Internalizacin de protenas. Sistema
gentico. Acoplamiento quimiosmtico. Fosforilacin oxidativa.
9. La clula vegetal. Morfologa y fisiologa. Organizacin interna. Pared celular:
composicin y estructura. Interaccin y comunicacin entre clulas vegetales.
Puntuaciones. Plasmodesmos. Perforaciones. Plstidos. Vacuolas. Cloroplastos: modelos
estructurales y metabolismo.
10. Ncleo interfsico. Descripcin general. Envoltura nuclear. Las bases qumicas de la
herencia. Estructura del ADN. Modelo de Watson y Crick. Formas alternativas del ADN.
Cromatina. Nucleosomas. Protenas histnicas y no histnicas. Replicacin del ADN.
Cromosomas: morfologa y estructura. Eucromatina y heterocromatina.
11. Mitosis. Ciclo celular. Descripcin detallada de la mitosis. Consecuencias genticas.
Aspectos moleculares. Aparato mittico en clulas vegetales y animales. Huso
acromtico. Migracin de cromosomas. Cinetocoros. Citocinesis. Control del ciclo
celular. Regulacin molecular de los procesos mitticos.
12. Meiosis y Reproduccin Sexual. Descripcin detallada de la meiosis. Consecuencias
genticas. Recombinacin. Metabolismo del ADN en la meiosis. Recombinacin a nivel
molecular. Estructura de la cromatina en espermatozoides. Dominio fsico de los
proncleos masculino y femenino en las primeras clulas del embrin.
13. El material gentico en accin. Funcin del ADN. Transcripcin. Tipos de ARN:
estructura y funcin. Sntesis, regulacin y maduracin de los ARN. Composicin del
nuclolo.
14. Sntesis de protenas. Traduccin del ARN mensajero. Ribosomas en procariotas y
eucariotas. Ensamblaje de los ribosomas. Estructura proteica. Cdigo gentico. Sntesis
de protenas citoslicas y membranosas.

4
IV. Bibliografa General

Alberts, B., A. Johnson, J. Lewis, M. Raff, K. Roberts & P. Walter. 2004. Biologa Molecular
de la Clula. 4 edicin. Ed. Omega, Barcelona. (2)
Alberts, B., D. Bray, K. Hopkin, A. Johnson, J. Lewis, M. Raff, K. Roberts & P. Walter.
2007. Introduccion a la Biologa Molecular. 2 edicin. Ed. Mdica Panamericana,
Buenos Aires. (6).
De Robertis, M. F., J. Hib & R. Ponzio. 1996. Biologa Celular y Molecular. 12 edicin. Ed.
El Ateneo, Buenos Aires. (1).
Karp, G. 1998. Biologa Celular y Molecular. Ed. McGraw-Hill Interamericana, Mxico. (2)
Karp, G. 2005. Biologa Celular y Molecular. Ed. McGraw-Hill Interamericana, Mxico. (3)
Lodish, H., A. Berk, S.L Zipursky, P. Matsudaira, D. Baltimore & J. Darnell. 2002. Biologa
Celular y Molecular. 4 edicin. Ed. Panamericana, Buenos Aires (2)
Lodish, H., A. Berk, P. Matsudaira, C. A. Kaiser, M. Krieger, M. P. Scott, S. Zipursky, S.
Lawrence & J. Darnell. 2008. Biologa Celular y Molecular. 5 edicin. Ed.
Panamericana, Buenos Aires. (7)
Purves, W. K., D. Sadava, G. H. Orians & H. C. Heller. 2006. Vida : la ciencia de la biologa.
6 edicin. Ed. Mdica Panamericana, Buenos Aires. (6)
Watson, J. D., T. Baker, S. P. Bell, A. Gann, M. Levine & R. Losick. 2005. Biologa
molecular del gen. 5 edicin. Ed. Mdica Panamericana, Buenos Aires. (3)

V. Bibliografa Especfica
Beadle, G. W. 1961. Las bases fsicas y qumicas de la herencia. Ed. Eudeba, Buenos Aires.
Bianchi, N. O. 1978. Duplicacin cromosmica y heterocromatina a nivel molecular
citolgico. OEA. Serie de Biologa. Monografa N 19.
Burns, G. W. 1983. The science of genetics: An introduction to heredity. Ed. Macmillan &
Co., New York.
Gardner, E. J., M. J. Simmons & D. P. Snustad. 1998. Principios de Gentica. 4 edicin. Ed.
Limusa-Wiley. Mxico.
Griffiths, A. J. F., J. H. Miller, D. T. Suzuki, R. C. Lewontin & W. M. Gerbart. 1996. An
Introduction to Genetic Analysis. 6 edicin. Ed. Freeman & Co., New York.
Lacadena, J. R. 1988. Gentica. Ed. Agesa, Madrid.
Lacadena, J. R. 1996. Citogentica. 1 edicin. Ed. Complutense, Madrid.
Puertas, M. J. 1992. Gentica: fundamentos y perspectivas. 1 edicin. Ed. McGraw - Hill
Interamericana, Madrid.
Sanchez-Monge, E. & N. Jouve. 1989. Gentica. Ed. Omega, Barcelona.
Sinnott, E. W., Dunn, L. C. & T. Dobzhansky. 1961. Principios de Gentica. Ed. Omega.
Barcelona.
Stern, C. 1963. Principios de gentica humana. Ed. El Ateneo, Buenos Aires.
Strickberger, M. W. 1978. Gentica. 2 edicin. Ed. Omega, Barcelona.
Thompson, J. S. & M. W. Thompson. 1977. Gentica humana. Ed. Salvat, Buenos Aires.
5

VI. Programa de Examen

Bolilla Temas

1 1 11 14
2 2 12 13
3 3 12 14
4 4 11 13
5 5 7 10
6 2 6 9
7 5 7 8
8 1 6 8
9 2 4 9
10 1 2 10

B. ORGANIZACIN DE LA ASIGNATURA

I. Personal Docente

Profesor Titular
Dr. Massimiliano Dematteis

Jefes de Trabajos Prcticos
Dra. Mara de las Mercedes Sosa
Dra. Mara Betiana Angulo
Lic. Juan Pablo Coulleri

Auxiliares Docentes de Primera Adscriptos
Lic. Gabriela E. Farco
Lic. Carolina Brem

Auxiliar Docente de Segunda
Srta. Iliana de los ngeles Araujo

II. Caractersticas Generales

El curso comprende la realizacin de clases tericas y prcticas, realizndose 3
evaluaciones parciales con sus respectivos recuperatorios y un recuperatorio extraordinario.

III. Clases Tericas
Las clases tericas estn destinadas al conjunto de los alumnos y constituyen una
actividad no obligatoria, dnde se desarrollan los aspectos fundamentales y la orientacin
general de la materia. Para facilitar la comprensin de los contenidos desarrollados durante las
clases tericas, es importante la lectura o estudio previo de los temas dictados.

IV. Clases Prcticas
Las prcticas de laboratorio o trabajos prcticos son una actividad obligatoria para
todos los alumnos inscriptos y se desarrollan dos veces por semana, guiados por uno o ms
auxiliares de docencia. Las bases conceptuales de los temas de los trabajos prcticos son
desarrolladas previamente en las clases tericas. Para poder integrar los conocimientos
6
tericos y prcticos, que conduzcan a la comprensin global de la materia, es imprescindible
que los alumnos concurran a los trabajos prcticos habiendo estudiado o preparado
previamente el tema a desarrollar.
Las clases tendrn una duracin aproximada de 2 horas, aunque ocasionalmente
algunos prcticos puedan demandar mayor o menor cantidad de tiempo. Los temas a
desarrollar en los prcticos, as como los materiales necesarios y actividades, se detallan en la
gua de trabajos prcticos. Al final de cada prctico, en la gua de actividades prcticas se
incluyen referencias bibliogrficas a las que el alumno podr recurrir para aclarar conceptos o
estudiar el tema. Para cada clase prctica el alumno deber concurrir conociendo la finalidad
del trabajo y trayendo la gua de trabajos prcticos y los materiales necesarios mencionados
en la misma. Se recomienda el uso de guardapolvo o chaquetilla durante los prcticos, pero su
empleo no es obligatorio.
La realizacin de cada trabajo prctico implica la comprensin de los principios
tericos del fenmeno en estudio, el adiestramiento manual del alumno, la prctica en el
manejo instrumental y entrenamiento en la presentacin de datos e interpretacin de
resultados. Al finalizar cada trabajo prctico, el alumno deber entregar en forma individual
las actividades realizadas durante la clase para su evaluacin (ilustraciones, respuestas del
cuestionario, problemas resueltos, etc.). Si dicho informe se presenta en estado deficiente o
incompleto se considerar que no ha cumplido con la clase prctica. Igualmente, cuando el
alumno se encuentre ajeno al trabajo, sea por ignorar los fundamentos tericos o por
permanecer inactivo en la prctica, se considerar que no ha cumplido esa clase prctica.

V. Evaluaciones
Estarn destinadas a determinar el grado de comprensin de los diferentes temas por
parte de los alumnos y evaluar el grado en que los objetivos propuestos por la asignatura se
cumplen.

a.- Evaluaciones de las Actividades Prcticas: tienen como objetivo determinar si el grado
de comprensin de los fundamentos del tema es satisfactorio y verificar si el alumno es capaz
de aplicar dichos conocimientos en la resolucin de problemas hipottico-deductivos. La
evaluacin de las mismas se realizar a partir de los trabajos o problemas realizados por los
alumnos, que sern entregados al finalizar cada clase.
b.- Evaluaciones Parciales: se realizarn tres evaluaciones parciales, que comprendern
temas estrechamente relacionados, cuya comprensin es fundamental para la correcta
asimilacin de los temas posteriores. Los parciales tendrn como objetivo fundamental
evaluar la capacidad de anlisis y de las diferentes situaciones que pudieran plantearse. Todos
los parciales se desarrollarn por escrito. Los mismos se considerarn aprobados con una
calificacin de 6 (seis) o superior. Dentro de los 7 das posteriores a cada evaluacin se
realizar el recuperatorio correspondiente, el cual tendr modalidad escrito y con preguntas a
desarrollar.

VI. Regularizacin de la Asignatura
Sern considerados alumnos regulares los que cumplieran con las siguientes
exigencias:

a) Alcanzar el 75 % de asistencia en las clases prcticas.
b) Aprobar el 75% de las clases prcticas.
c) Aprobar el 100% de las evaluaciones parciales con calificacin 6 (seis) o superior.
7

Los alumnos que no alcanzaran al 75% de aprobacin de las clases prcticas o no
aprobaran los parciales con un mnimo de 6 (seis) sern considerados alumnos libres.

VII. Promocin sin Examen Final
Para lograr la promocin sin examen final de la asignatura (Resol. C.D. 0217/11), los
alumnos debern cumplir los siguientes requisitos:
a) Alcanzar el 75 % de asistencia a las clases prcticas.
b) Aprobar el 75 % de las clases prcticas.
c) Aprobar las evaluaciones parciales en primera instancia, obteniendo un promedio de 7
(siete) o superior al finalizar el cursado.
Los alumnos que no obtuvieran un promedio mnimo de 7 (siete) en las evaluaciones
parciales y/o no alcanzaran al 75 0% de aprobacin de las clases prcticas, pero cumplimenten
los restantes requisitos para regularizar la asignatura sern considerados alumnos regulares.

VIII. Horarios de Consultas
Las consultas que quieran realizar los alumnos, tanto sobre temas tericos como
prcticos, las debern efectuar al Profesor responsable de la asignatura los das mircoles y
viernes de 14 a 15 hs., previos al inicio de las clases tericas. Cualquier duda que surgiera los
das restantes, las consultas podrn ser realizadas en el Instituto de Botnica del Nordeste,
Sargento Cabral 2131, de 8 a 10 hs.

IX. Cronograma de Actividades

Clases tericas:

Clase Fecha Mdulo/Tema Docente/s
1 21/03/2012 Introduccin al estudio de la biologa celular. La biologa
celular dentro de las ciencias biolgicas. Historia e
importancia de su conocimiento.
Dematteis, Massimiliano
2 23/03/2012 Mtodos de estudio en biologa celular. Anlisis de la
estructura y ultraestructura celular. Microscopa ptica y
electrnica.
3 28/03/2012 Fraccionamiento celular. Cromatografa. Electroforesis.
Cultivo de tejidos. Ultracentrifugacin. Histoqumica.
Inmunohistoqumica. Autorradiografa.
Inmunofluorescencia.
4 30/03/2012 Teora celular. Clulas procariotas y eucariotas.
Caractersticas de las clulas vegetales y animales.
Morfologa y fisiologa de las clulas. Envejecimiento,
degeneracin y muerte de las clulas.
5 04/04/2012 Membrana Celular. Composicin molecular de las
membranas biolgicas. Modelos de membranas.
Propiedades de las membranas.
6 06/04/2012 Feriado Viernes Santo
7 11/04/2012 Diferenciaciones de la membrana. Interacciones de las
clulas entre s y con las matrices extracelulares.
Cubiertas externas.
8 13/04/2012 Transporte a travs de la membrana. Permeabilidad de la
membrana. Transporte activo y pasivo. Bombas o
ATPasas. Protenas transportadoras.
8
9 18/04/2012 Primer Parcial Dematteis, Massimiliano
10 20/04/2012 Citosol o Matriz citoplasmtica. Citoesqueleto:
caractersticas generales y organizacin. Microtbulos.
Organoides microtubulares. Microfilamentos. Filamentos
intermedios. Movimiento de las clulas. Cilios y flagelos.
11 25/04/2012 Organelos citoplasmticos. Organelos membranosos y no
membranosos. Retculo endoplasmtico liso y rugoso.
Aparato de Golgi.
12 27/04/2012 Ribosomas. Vesculas con cubierta. Lisosomas.
Peroxisomas. Descripcin y funciones. Endocitosis
especfica e inespecfica. Fagocitosis.

13 02/05/2012 Mitocondrias. Aspectos generales. Membrana interna y
externa. Transporte. Composicin y estructura molecular
de las membranas. Acople de la cadena respiratoria.
Fosforilacin oxidativa.
14 04/05/2012 La clula vegetal. Morfologa y fisiologa. Pared celular:
composicin y estructura. Organizacin interna. Plstidos.
Vacuolas. Cloroplastos.
15 09/05/2012 Ncleo interfsico. Descripcin general. Envoltura
nuclear. Las bases qumicas de la herencia. Estructura del
ADN. Modelo de Watson y Crick.
16 11/05/2012 Cromatina. Nucleosomas. Empaquetamiento. Protenas
histnicas y no histnicas. Replicacin del ADN.
Cromosomas. Eucromatina y heterocromatina.
17 16/05/2012 Segundo Parcial. Dematteis, Massimiliano
18 18/05/2012 Mitosis. Ciclo celular. Descripcin detallada de la mitosis.
Consecuencias genticas. Aparato mittico en clulas
vegetales y animales. Cinetocoros. Citocinesis.
19 23/05/2012 Aspectos moleculares. Control del ciclo celular. Protenas
reguladoras.
20 25/05/2012 Feriado Nacional
21 30/05/2012 Meiosis y Reproduccin Sexual. Descripcin detallada de
la meiosis. Consecuencias genticas. Recombinacin.
Metabolismo del ADN en la meiosis.
22 01/06/2012 Recombinacin a nivel molecular. Estructura de la
cromatina en espermatozoides. Dominio fsico de los
proncleos masculino y femenino en las primeras clulas
del embrin.
23 06/06/2012 El material gentico en accin. Funcin del ADN. Tipos
de ARN. Sntesis, regulacin y maduracin de ARN.
Composicin del nuclolo.
24 08/06/2012 Cdigo gentico. Sntesis de protenas. Traduccin del
ARN mensajero. Ribosomas en procariotas y eucariotas.
Ensamblaje de los ribosomas. Estructura proteica. Sntesis
de protenas citoslicas y membranosas.
25 13/06/2012 Tercer Parcial Dematteis, Massimiliano
26 20/06/2012 Feriado Nacional Dematteis, Massimiliano
27 22/06/2012 Recuperatorio Tercer Parcial Dematteis, Massimiliano
28 27/03/2012 Recuperatorio Extraordinario Dematteis, Massimiliano

Clases Prcticas:

Clase Fecha Mdulo/Tema Docente/s
1 23/03/2012 Microscopa ptica y electrnica Angulo, Mara Betiana
Coulleri, Juan Pablo
Sosa, Mara de las Mercedes
2 28/03/2012 Tcnicas citoqumicas Angulo, Mara Betiana
9
3 30/03/2012 Electroforesis Angulo, Mara Betiana
4 04/04/2012 Clula Angulo, Mara Betiana
5 06/04/2012 Feriado Angulo, Mara Betiana
7 11/04/2012 Membrana plasmtica Angulo, Mara Betiana
8 13/04/2012 Transporte de membrana Angulo, Mara Betiana
9 18/04/2012 Primer parcial Angulo, Mara Betiana
10 20/04/2012 Citoesqueleto Angulo, Mara Betiana
11 25/04/2012 Organelos citoplasmaticos Angulo, Mara Betiana
12 27/04/2012 Estructura de organelos membranosos Angulo, Mara Betiana
13 02/05/2012 Clula vegetal I Angulo, Mara Betiana
14 04/05/2012 Clula vegetal II Angulo, Mara Betiana
15 09/05/2012 Estructura y funcin de los cromosomas Angulo, Mara Betiana
16 11/05/2012 Cariotipo Angulo, Mara Betiana
17 16/05/2012 Segundo parcial Angulo, Mara Betiana
18 18/05/2012 Mitosis Angulo, Mara Betiana
19 23/05/2012 Recuperatorio Segundo Parcial Angulo, Mara Betiana
20 25/05/2012 Feriado Angulo, Mara Betiana
21 30/05/2012 Meiosis Angulo, Mara Betiana
22 01/06/2012 Gametognesis Angulo, Mara Betiana
23 06/06/2012 Accin gnica: sntesis de ARNr Angulo, Mara Betiana
10
24 08/06/2012 Cdigo gentico Angulo, Mara Betiana
25 13/06/2012 Tercer Parcial Angulo, Mara Betiana
26 20/06/2012 Feriado Nacional Angulo, Mara Betiana
27 22/06/2012 Recuperatorio Tercer Parcial Angulo, Mara Betiana
28 27/03/2012 Recuperatorio Extraordinario Angulo, Mara Betiana

Parciales
Actividad Fecha Horario Docente responsable
1 Examen parcial 18/04/2012 15-17 Dematteis, Massimiliano
Recuperatorio 1 examen parcial 25/04/2012 19-20 Dematteis, Massimiliano
Recuperatorio Extraordinario 28/06/2012 15-17 Dematteis, Massimiliano
11

TRABAJOS PRCTICOS

12
Trabajo Prctico N 1

MICROSCOPA PTICA Y ELECTRNICA

El microscopio ptico o fotnico de campo claro est compuesto por una parte
mecnica o estativo y por un sistema ptico que incluye fuente de luz, condensador,
diafragma, objetivos y oculares, a travs de los cuales se refractan los rayos luminosos
provenientes del objeto en estudio para proporcionar una imagen final de mayor tamao,
invertida y virtual. Para ello, el objeto estudiado debe ser transparente y poseer suficiente
contraste para poder discriminar sus componentes. La transparencia se logra mediante la
realizacin de cortes muy delgados del material en estudio o bien realizando extendidos
celulares. El contraste adecuado se alcanza por medio de diferentes tipos de coloraciones o
por medio de sistemas pticos particulares (por ejemplo: microscopio de contraste de fases).
El microscopio de campo claro es de gran utilidad para el estudio de clulas y tejidos
previamente fijados (muertos) y coloreados. La coloracin de las preparaciones cito-
histolgicas tiene por finalidad provocar la absorcin diferencial de luz, con el propsito de
visualizar las diversas estructuras en distintos colores. Por el contrario, para estudiar clulas u
organismos vivos que no se pueden colorear, es necesario recurrir casi siempre a otros
sistemas pticos especiales, como el microscopio de contraste de fases o el microscopio de
interferencia. En estos dos casos, se aprovecha una caracterstica propia de los diferentes
componentes celulares, que aunque son transparentes a la luz, poseen densidades relativas
distintas.

Existen bsicamente dos tipos de microscopio electrnico: el microscopio electrnico
de barrido o tridimensional (MEB) y el microscopio electrnico de transferencia (MET).
Estos microscopios, a diferencia del microscopio ptico, forman imgenes a partir de una
radiacin de electrones emitida por un filamento de tungsteno y un sistema de electroimanes
que funcionan como lentes.
Otra de las caractersticas es que proporcionan una resolucin mayor que el
microscopio ptico, requieren de procedimientos ms elaborados para la preparacin del
material y slo se pueden examinar clulas deshidratadas y muertas. El MET se utiliza
ampliamente para examinar la estructura interna de la clula, mientras que el MEB examina
con detalle la superficie de las muestras, las cuales se observan tridimensional mente debido a
la profundidad de foco que posee este ltimo tipo de microscopio. Tanto el MET como el
MEB son indispensables para el estudio de la biologa celular y molecular.
El microscopio electrnico de transmisin es un microscopio que utiliza un haz de
electrones para visualizar un objeto debido a que la potencia amplificadora de un microscopio
ptico est limitada por la longitud de onda de la luz visible. Debido a que los electrones
tienen una longitud de onda mucho menor que la de la luz pueden mostrar estructuras mucho
13
ms pequeas, tiene un lmite de resolucin de cerca de 2 nm. Un MET mira clulas muertas,
despus de haber sido fijadas y teidas con iones de metales pesados Las partes principales
de un microscopio electrnico son:
Can de electrones, que emite los electrones que chocan contra el espcimen,
creando una imagen aumentada.
Lentes magnticas para crear campos que dirigen y enfocan el haz de electrones, ya
que las lentes convencionales utilizadas en los microscopios pticos no funcionan con
los electrones.
Sistema de vaco es una parte muy importante del microscopio electrnico. Debido a
que los electrones pueden ser desviados por las molculas del aire, se debe hacer un
vaco casi total en el interior de un microscopio de estas caractersticas.
Placa fotogrfica o pantalla fluorescente que se coloca detrs del objeto a visualizar
para registrar la imagen aumentada.
Sistema de registro que muestra la imagen que producen los electrones, que suele ser
una computadora.

El microscopio electrnico de barrido (MEB) tambin tiene un lmite de 2 nm. El
MEB permite mirar a clulas muertas, despus de haber sido fijadas y teidas con iones de
metales pesados. Con esta tcnica los electrones son reflectados sobre la superficie del
espcimen.

El presente Trabajo Prctico tiene la finalidad de observar las partes integrantes y el
14
funcionamiento del microscopio ptico y un microscopio electrnico, que son los ms
utilizados en el rea de las ciencias biolgicas.
Objetivos:
Reconocer las diferentes partes que componen un microscopio.
Analizar las caractersticas del instrumental ptico
Adquirir destreza en el uso del microscopio ptico.
Aprender las normas bsicas para su cuidado y manejo.
Conocer las caractersticas del microscopio electrnico.
Entender las aplicaciones de la microscopa electrnica de transmisin y barrido.

Materiales:
Elementos de dibujo (hojas blancas, lpiz negro, goma, etc.)
Papel tissue
Actividades:
1. En primera instancia se deber indicar en el esquema proporcionado las partes que
componen un microscopio ptico y una lupa. El esquema deber ser entregado al finalizar
la clase prctica.

2. Posteriormente, se observarn preparaciones cito-histolgicas a los efectos de instruirse en
la utilizacin del microscopio ptico hasta adquirir relativa destreza. Para ello se sugiere
seguir el procedimiento que se detalla a continuacin, hasta que el enfoque de una
preparacin sea una maniobra automtica y sencilla.
Encender la luz del microscopio, colocar el objetivo de menor aumento (5x o 10x) en
el eje ptico, subir el condensador hasta el tope superior y abrir completamente el
diafragma.
Colocar la preparacin sobre la platina con el cubreobjetos hacia arriba y el material
en el orificio de la platina.
Acercar el objetivo al preparado mediante el control o tornillo macromtrico,
mirando desde el costado del microscopio hasta llegar casi hasta el tope o a unos 4-5
mm del preparado.
Mirar por el ocular y separar lentamente el objetivo hasta visualizar la preparacin.
Completar el enfoque mediante el control micromtrico.
Regular la iluminacin ajustando la altura del condensador y la apertura del
diafragma.
Para pasar a objetivos de mayor aumento, bajar un poco la platina. Si se trata de un
objetivo de inmersin, colocar una gota de aceite sobre el preparado y mirar desde el
costado acercando el objetivo con el tornillo macromtrico hasta hacer contacto con
la gota de aceite. Se debe actuar con precaucin para evitar la rotura del portaobjetos
del preparado o de la lente frontal del objetivo.
Mirar por el ocular y maniobrar con el control micromtrico hasta visualizar la
preparacin y enfocar correctamente.
Al finalizar las observaciones se debe apagar la luz del microscopio, separar el
objetivo de la platina y colocar el objetivo de menor aumento. Si se utiliz aceite de
inmersin se debe limpiar el preparado con xilol y las lentes con papel (especial para
lentes).
Una vez terminado esto, se deben guardar los preparados en la caja correspondiente y
15
cubrir el microscopio con la funda o estuche.

Para el adecuado uso de un microscopio ptico, tambin pueden ser importantes
algunas de las recomendaciones que se detallan a continuacin:
Antes de comenzar a trabajar con un microscopio binocular se debe ajustar el sistema
ptico a sus ojos.
Si utiliza anteojos correctores de miopa, no necesita usarlos para mirar al
microscopio. En cambio, si emplea anteojos para astigmatismo, si es necesario
utilizarlos.
Los microscopios utilizados para las clases prcticas varan en cuanto a la forma y
posicin de sus controles de acuerdo a la marca y el modelo del microscopio. Solicite
ayuda siempre al JTP sobre las semejanzas y diferencias para su uso.
Recuerde siempre que, cuanto mayor es el aumento utilizado, menor es el campo
microscpico observado. En todos los casos, se debe empezar a observar una
preparacin con el objetivo de menor aumento.

3. Se deber observar el esquema que se encuentra a continuacin que indica las partes que
componen un microscopio electrnico de barrido y de transferencia.

16

4. Comparar dichos esquemas indicando las similitudes y diferencias que puede observar
entre los dos tipos de microscopios.

5. Examinar las fotografas que se hallan a continuacin e indique en cada caso que tipo de
microscopio fue utilizado.

6. Explicar qu tipo de informacin brinda la utilizacin de cada uno de estos microscopios.

17

Bibliografa:
Alberts, B., D. Bray, J. Lewis, M. Raff, K. Roberts & J. D. Watson. 1989. Molecular biology
of the Cell. 2 edicin. Ed. Garland Publ. Inc., New York.
Curtis, H. & N. S. Barnes. 1987. Invitacin a la Biologa. Ed. Mdica Panamericana, Mxico.
Curtis, H. & N. S. Barnes. 1993. Biologa. 5 edicin. Ed. Mdica Panamericana, Buenos
Aires.
El Ateneo, Buenos Aires.
Karp, G. 1996. Biologa Celular y Molecular. Ed. McGraw-Hill Interamericana, Mxico.
Villee, C. A. 1996. Biologa. 8 Edicin. Ed. McGraw-Hill Interamericana, Mxico.

18
Trabajo Prctico N 2

TCNICAS CITOQUMICAS

El propsito inmediato de la citoqumica consiste en la identificacin y localizacin de
los diferentes compuestos qumicos dentro de la clula. La histoqumica hace lo propio a nivel
tisular. Este propsito es tanto cualitativo como cuantitativo. Puede realizarse con fines
diagnsticos, y en tal sentido debemos sealar que los procedimientos cito-histoqumicos (en
especial los referidos a la inmunohistoqumica) se convirtieron en un instrumento invalorable
en el diagnstico o pronstico de innumerables alteraciones histopatolgicas.
Las tcnicas cito-histoqumicas como instrumento de investigacin involucran el
estudio de los cambios dinmicos en la organizacin citoqumica durante los distintos estadios
funcionales. En tal sentido, es posible establecer el papel que desempean los diferentes
componentes celulares en los procesos metablicos de la clula.
El mtodo citohistoqumico en sentido estricto es microscpico, porque comprende
una serie de procedimientos qumicos y fsicos que se emplean para individualizar con el
microscopio diferentes componentes qumicos en el interior de las clulas o en las matrices
extracelulares.
Deteccin de almidn
Los azcares, glcidos o hidratos de carbono son compuestos formados por tomos de
carbono, hidrgeno y oxgeno. Representan la principal fuente de energa de los organismos y
adems son parte de la extensa variedad de componentes estructurales de la pared celular y de
las sustancias intercelulares. De acuerdo al nmero de molculas que la componen, se
clasifican en: monosacridos, disacridos, trisacridos, oligosacridos (de cuatro a diez),
polisacridos (ms de diez). Estos junto con las protenas y los cidos nucleicos forman las
macromolculas. Entre estos compuestos se encuentran la glucosa, fructosa, sacarosa,
almidn, glucgeno, celulosa, quitina, etc.
Materiales:
Almidn de origen vegetal, suspendido en agua al 10 %.
Reactivo de Lugol (Iodo en solucin de Ioduro de potasio).
Tres tubos de ensayo.
Papa, arroz, trigo, etc.
Agua destilada.
Procedimiento:
1. Rotular con nmeros los tres tubos de ensayo.
2. Agregar al Tubo 1: 4 ml de agua destilada + tres gotas de solucin de Lugol.
3. Al Tubo 2 incorporar 4 ml de suspensin de almidn al 10% + tres gotas de Lugol.
4. En el Tubo 3 poner 4 ml de agua destilada + cantidad necesaria de arroz, trigo o raspado
de papa + tres gotas de Lugol.
5. Agitar los tres tubos durante unos segundos.
6. Observar, dibujar e interpretar los resultados.

Las molculas de yodo se intercalan en los bucles de la hlice de amilosa formando un
complejo de color azul-violceo.
Con los resultados observados, elabore un informe sinttico detallando las sustancias
detectadas, los reactivos utilizados y las caractersticas de la reaccin.

19
Deteccin de ADN
Los cidos nucleicos son macromolculas de gran importancia biolgica, debido a que
contienen la informacin para codificar la sntesis de protenas. Todos los organismos vivos
contienen cidos nucleicos en forma de cido desoxirribonucleico (ADN) y cido
ribonucleico (ARN); algunos virus contienen solo ADN y otros solo ARN.
Los cidos nucleicos resultan de la polimerizacin de nucletidos. Los nucletidos son
las unidades estructurales de los cidos nucleicos y estn formado por tres subunidades: una
base nitrogenada ligada a un azcar (pentosa), que se combina a su vez con una molcula de
cido fosfrico. Las pentosas pueden ser la ribosa en el ARN o la desoxirribosa en el ADN.
Las bases nitrogenadas son molculas cclicas y estn formadas por carbono, oxgeno,
hidrgeno y nitrgeno. Existen dos tipos de bases nitrogenadas, las pirimdicas que se llaman
citosina, timina y uracilo; y las pricas que son la adenina y la guanina. Las bases pirimdicas
estn formadas por una sola molcula cclica, mientras que las pricas tienen dos anillos
fusionados en su molcula. Las bases pricas se encuentran en todos los cidos nucleicos, en
cambio la timina se halla solo en el ADN y el uracilo solo en el ARN, salvo contadas
excepciones.
Los nucletidos se unen entre s formando enlaces entre el fosfato de uno y la pentosa
del siguiente, formando largos polmeros que estn integrados solo por ribonucleicos en el
ARN o desoxirribonucleicos en el ADN. Las funciones de ambos tipos de cidos nucleicos
estn vinculadas a la codificacin de la informacin gentica y la sntesis de protenas.
Materiales:
Portaobjetos y cubreobjetos
2 Pinzas de diseccin
Papel secante
1 Aguja histolgica
Elementos de dibujo
Procedimiento:
1. Colocar las races previamente pretratadas y fijadas en un tubo de ensayo con cido
clorhdrico 1N.
2. Incubar en bao mara a 60C durante 8 minutos.
3. Pasar las races a otro tubo de ensayo que contenga reactivo de Schiff.
4. Inmediatamente despus, colocar el tubo en cmara oscura durante unos 20 o 30 minutos.
Luego de transcurrido ese lapso controlar las races y verificar si han tomado color.
5. Una vez realizada la tcnica de Feulgen se podr observar coloreada en color violeta la
zona de activo crecimiento de la raz.
6. Colocar las races bajo la lupa e ilustrar detalladamente lo observado.
7. Bajo la lupa, en primer lugar se deber retirar la cofia de la raz (que cubre la regin
meristemtica).
8. Posteriormente se debe cortar una solamente la parte coloreada que corresponde al pice
de la raz (unos 2 o 3 mm).
9. Una vez cortado el extremo se debe colocar sobre un portaobjetos y agregarle una gota de
orcena actica o cido actico.
10. Macerar suavemente la regin meristemtica utilizando una varilla de vidrio o la parte
posterior de una aguja histolgica.
11. Por ltimo colocar el cubreobjetos y realizar el aplastado o squash.
12. Observar en el microscopio el aspecto de las clulas y esquematizar una que se encuentre
en divisin.
20

Es importante tener cuidado con el reactivo de Schiff porque colorea todo tipo de
elemento, por ello se debe utilizar una pinza especfica para cada caso.
La hidrlisis cida extrae las purinas a nivel de la unin desoxirribosa purina del ADN
y de esa manera libera los grupos aldehdos de la desoxirribosa. Los grupos aldehdos libres
reaccionan con el reactivo de Schiff. Cuando se aplica a la clula, la reaccin es positiva en el
ncleo y negativa en el citoplasma. El nuclolo es Feulgen negativo.
Bibliografa:
Curtis, H. & N. S. Barnes. 1987. Invitacin a la Biologa. Ed. Mdica Panamericana, Mxico.
Aires.
21
Trabajo Prctico N 3

ELECTROFORESIS

La electroforesis es una tcnica de separacin o resolucin de molculas de una mezcla
por aplicacin de un campo elctrico. Constituye uno de los mtodos ms aplicados en
Biologa Celular cuando se necesita separar, aislar y/o identificar componentes subcelulares o
macromolculas.
En la electroforesis, la separacin aprovecha una caracterstica de la mayora de los
compuestos biolgicos: la de poseer carga elctrica. Por lo tanto, colocados bajo la influencia
de un campo elctrico de corriente continua, esos compuestos son capaces de desplazarse en
forma caracterstica sobre un soporte mantenido en condiciones definidas. Las molculas
disueltas se desplazan o migran a una velocidad determinada por la relacin entre sus cargas.
Por ejemplo, si dos molculas tienen masa y formas iguales, la de mayor carga neta se
desplazar con mayor velocidad hacia un electrodo.
La separacin de molculas pequeas como los aminocidos y los nucletidos, es una
de las muchas aplicaciones de la electroforesis. En este caso se deposita una pequea gota de
muestra sobre una tira de papel de filtro u otra sustancia porosa, que luego es embebida en
una solucin conductora. Cuando se aplica un campo elctrico sobre los extremos de la tira,
las molculas pequeas disueltas en la solucin conductora se desplazan a lo largo de la tira,
en correspondencia con la magnitud de su carga. As, las molculas biolgicas pueden ser
separadas y caracterizadas segn la velocidad con que se mueven y esta propiedad puede ser
utilizada para aislar cidos nucleicos, alcaloides, protenas, etc. de una mezcla compleja,
determinar el PM, identificar molculas similares con diferente carga neta, determinar la
pureza de una fraccin molecular, aislar diferentes compuestos, etc.
Existen varios sistemas electroforticos, aunque el ms usado es la llamada
electroforesis zonal. En este sistema la muestra es sembrada en un soporte semislido (papel)
o gelatinoso (almidn, agar, poliacrilamida) que, al someterse a un campo elctrico, permite
que las molculas migren a travs de ellos.
Objetivos:
Comprender los fundamentos de las tcnicas electroforticas.
Actividades:
1. Observar la fotografa de la corrida electrofortica y determinar las bandas proteicas en la
muestra.
2. Medir las distancias relativas de migracin (Rf) de cada una de las muestras y del
marcador de peso molecular.
3. A partir de los datos obtenidos, calcular el peso molecular de la muestra.

Rf (muestra) yo * Rf a - yo * Rf PM

22

4. Contestar las siguientes preguntas:
a- Cules son las aplicaciones de la cromatografa y la electroforesis?
b- Cul es el fundamento de la electroforesis zonal?

Bibliografa:
Acquaah, G. 1992. Practical protein electrophoresis for genetic research. Dioscorides Press,
Oregon.
Avers, C. J. 1991. Biologa Celular. Ed. Iberoamrica, Mxico.
Lehningher, A., D.L. Nelson & M. Cox. 1995. Principios de Bioqumica. 2 ed. Ed. Omega.
Barcelona.
Celular y Molecular. 4 ed. Ed. Panamericana. Espaa.
Puertas, M. J. 1992. Gentica: fundamentos y perspectivas. 1 edicin. Ed. McGraw - Hill
Interamericana, Madrid.
23
Trabajo Prctico N 4
CLULA

La teora celular fue formulada a principios del siglo XIX antes de la presentacin de
la teora de la evolucin de Darwin, pero estas dos grandes teoras estn estrechamente
vinculadas. Las similitudes entre las clulas nos permiten hacer una rpida mirada a la historia
evolutiva que vincula a los organismos actuales con las primeras clulas que se originaron
hace 3500 m.a.
La teora celular se ha modificando a lo largo del tiempo y se han agregado o
modificado algunos puntos. La teora actual considera que:
la clula constituye la unidad estructural y funcional de todos los seres vivos
las propiedades de un organismo dependen de las propiedades individuales de sus clulas
las clulas se originan nicamente a partir de otras clulas preexistentes por medio de
divisin celular
la unidad ms pequea de vida es la clula
La teora celular es de una importancia enorme para la biologa porque hace nfasis en
la similitud de los sistemas vivos y por lo tanto brinda la base para unificar una gran variedad
de estudios que implican a muchas clases de organismos diferentes.
Objetivos:
Asimilar el concepto de clula como unidad estructural y funcional de los seres vivos.
Reconocer las diferencias entre clulas procariotas y eucariotas.
Distinguir las caractersticas especiales de las clulas.
Relacionar las estructuras observadas con la funcin que cumplen.
Materiales:
Portaobjetos y Cubreobjetos
Pinzas y Agujas
Observaciones:
Para la observacin de clulas procariotas se analizarn las bacterias presentes en el
yogur, para ello se deber colocar una gota de yogur en un portaobjetos y se colocar una gota
de agua. Luego de ello, se observar a distintos aumentos.
El reconocimiento de clulas eucariotas se realizar a partir de preparaciones provistas
por la ctedra y otras realizadas por los alumnos. Para la realizacin de preparados se
requerir de cebolla (bulbo), hojas de Elodea sp. o Vallisneria sp. Para la observacin se
deber desprender una porcin del material y colocar con una gota de agua, sobre el
portaobjetos, luego se coloca el cubreobjetos. Una vez realizada la muestra se lleva al
microscopio y observa en distintos aumentos. En ambos casos se deber esquematizar las
clulas y tejidos.
Actividades:
1. Esquematizar los diferentes tipos de clulas observadas durante el trabajo prctico e
indicar las semejanzas y diferencias que pueden apreciarse.
2. Hacer un cuadro comparativo con las diferencias entre clulas procariotas y eucariotas.
3. Resumir los postulados de la teora celular indicando los autores de la misma.
24
Bibliografa:
Aires.
Lodish, H., A. Berk, S. L. Zipursky, D. Baltimore & J. Darnell. 2002. Biologa Celular y
Molecular. 4 edicin. Ed. Mdica Panamericana, Buenos Aires.
25
Trabajo Prctico N 5

MEMBRANA PLASMTICA

Las clulas tienen una composicin qumica diferente al medio que la rodea y dicha
diferencia es mantenida durante toda la vida por la membrana plasmtica o celular, que es la
encargada de regular el intercambio de iones y molculas entre la clula y el medio
extracelular. Debido a ello la comprensin de la estructura y funcionamiento de la membrana
plasmtica resultan fundamentales para la comprensin de la mayora de las actividades
celulares.
Objetivos:
Reconocer las partes constitutivas de la membrana plasmtica.
Asimilar el concepto de Modelo de Mosaico Fluido.
Actividades:

1. Completar con referencias el esquema de la membrana plasmtica de acuerdo al modelo
actual e indicar los diferentes componentes que puede presentar.

2. La unidad estructural de las membranas biolgicas son los lpidos, de los cuales los ms
abundantes son los fosfolpidos. Hacer un esquema representando la estructura de un
fosfolpido tpico, indicando sus componentes mediante flechas.

3. Segn el modelo del mosaico fluido, los lpidos constituyen la unidad estructural de la
membrana, pero la unidad funcional son las protenas. Describir las propiedades de los
tres tipos diferentes de protenas de membrana, indicando las diferencias y similitudes de
unas con otras.

26

Bibliografa:
ALBERTS, B., D. BRAY, J. LEWIS, M. RAFF, K. ROBERTS & J. D. WATSON. 1989. Molecular
biology of the Cell. 2 edicin. Ed. Garland Publ. Inc., New York.
DE ROBERTIS, E.M.F., J. HIB & R. PONZIO. 1996. Biologa Celular y Molecular. Ed. El
Ateneo, Buenos Aires.
LODISH, H., A. BERK, S. L. ZIPURSKY, D. BALTIMORE & J. DARNELL. 2002. Biologa Celular y
VILLEE, C. A. 1996. Biologa. 8 Edicin. Ed. McGraw-Hill Interamericana, Mxico.
27
Trabajo Prctico N 6

TRANSPORTE DE MEMBRANA

Como resultado de las diferencias en la concentracin de solutos a ambos lados de la
membrana plasmtica, el agua tiende a entrar o a salir de la clula por smosis. Si el medio
extracelular tiene una concentracin ms alta de sales, o sea es hiperosmtico o hipertnico, el
agua tiende a salir de la clula y por lo tanto el volumen celular disminuye.
Por el contrario, si el medio extracelular tiene una concentracin menor de sales, es
hiposmtico o hipotnico con respecto al citoplasma y el agua tiende a ingresar a la clula.
Cuando el medio extracelular posee la misma concentracin de sales que el citoplasma, los
compartimentos son isosmticos o isotnicos y no se modifica el volumen de la clula.
Objetivos:
Asimilar los distintos mecanismos de transporte a travs de la membrana plasmtica
Comprender la naturaleza dinmica de la membrana.
Observaciones:
Con ayuda de un bistur cortar un fragmento pequeo de hoja de la planta acutica
Vallisneria sp. (Hydrocharitaceae).
Colocar en el portaobjetos, agregar una gota de agua y poner el cubreobjetos.
Observar en el microscopio e ilustrar las clulas, poniendo especial atencin al volumen
celular.
Por otro lado, sumergir unos minutos las hojas de Vallisneria sp. en una solucin salina.
Posteriormente realizar el paso 2 y 3 descriptos anteriormente.
Actividades:
Una vez realizadas las observaciones y los dibujos correspondientes, conteste las siguientes
preguntas:

1. Qu sustancia/s han atravesado la membrana plasmtica?

2. Cmo es el medio extracelular en ambos casos? es hipertnico, hipotnico o isotnico
con respecto al citoplasma?

3. Las sustancias transportadas se movilizaron a favor o en contra de su gradiente de
concentracin?

4. Analizar las caractersticas de los distintos mecanismos de transporte a travs de la
membrana plasmtica (difusin simple, difusin facilitada, smosis, transporte activo) y
realizar un cuadro comparativo indicando las particularidades de cada uno en cuanto a
consumo de energa, gradiente de concentracin y las molculas involucradas en el
transporte.

5. Hacer un cuadro con los diferentes tipos de bombas o ATPasa, sealando su estructura,
sustancia que transportan y localizacin ms frecuente.

6. Una solucin es hipertnica respecto a otra cuando posee:

28
a) Menor concentracin de soluto.
b) Mayor concentracin de soluto.
c) Igual concentracin de soluto.
d) Mayor demanda de soluto.

7 Una clula vegetal colocada en un medio cuya concentracin de solutos es menor que la
de la clula:

a) Se plasmoliza.
b) Aumenta su presin de turgencia.
c) Pierde sus solutos por difusin.
d) Activa su sistema de vacuolas contrctiles.
e) No experimenta ningn cambio.

8 Indique que ocurrir respecto al movimiento de solutos y agua, si:

a) Se somete a un glbulo rojo a una solucin hipertnica.
b) Se somete a un glbulo rojo a una solucin isotnica.
c) Se somete a un glbulo rojo a una solucin hipotnica.
d) Se somete a un glbulo rojo a una solucin muy hipotnica.
e) Se coloca a un alga marina en agua destilada.
f) Se sumerge una planta de Vallisneria sp. en una solucin salina hipertnica.
g) Se coloca una planta de Vallisneria sp. en una solucin hipotnica.

9 Un recipiente se halla dividido por una membrana semipermeable delimitando dos
compartimentos: A y B. En A se coloca una solucin de glucosa 3 M y se le agrega
almidn, que conforma una suspensin. En B se coloca agua destilada. Indique qu
cambios espera observar en cuanto al movimiento de solutos y de solvente, y los cambios
esperables en la variacin de volmenes de solvente en ambos compartimentos.
Bibliografa:

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Trabajo Prctico N 7

CITOESQUELETO

El citoesqueleto es un sistema citoplasmtico de fibras, esencial para la movilidad y
estructura celular. Est constituido por tres tipos de fibras citoslicas: microfilamentos
(filamentos de actina), filamentos intermedios y microtbulos. Estas fibras citoesquelticas
estn compuestas por polmeros bien ordenados, construidos a partir de pequeas subunidades
proteicas que se mantienen unidas mediante enlaces no covalentes.
El citoesqueleto no es una estructura esttica, sino que est sometido a
reordenamientos constantes, capaces de producir movimientos. Desempea un papel
estructural importante, al sostener la membrana plasmtica y formar carriles a lo largo de los
cuales se pueden desplazar las organelas y otros elementos del citosol. As, el citoesqueleto
interviene en el mantenimiento de la forma celular, la movilidad celular y los cambios
coloidales que experimenta el citoplasma.
Objetivos:
Analizar los distintos componentes del citoesqueleto.
Comprender las funciones de los diferentes elementos del esqueleto celular.
Reconocer los mecanismos bsicos de movimiento de las clulas.

Observacin de elementos del citoesqueleto en microscopio ptico
Actividades:
Para el presente prctico se observarn preparados permanentes y realizarn
preparaciones para microscopio ptico a los efectos de observar diferentes elementos del
citoesqueleto. Los materiales a observar en cada caso, se detallan a continuacin:

1. Colocar una gota de agua de charco sobre un portaobjetos y colocar el cubreobjetos.
Observar detenidamente el preparado hasta hallar algn organismo ciliado o flagelado.
Esquematizar y colocar las referencias pertinentes.

2. Observar los preparados de espermatozoides de Mamferos provistos por la ctedra.
Analizar la preparacin y esquematizar detalladamente los flagelos.

3. Observar preparados permanentes de corte transversal de trquea. Esquematizar las clulas
ciliadas.

4. Observar clulas en divisin mittica de Allium cepa con y sin pretratamiento. Analizar y
esquematizar las clulas.

Observacin de elementos del citoesqueleto en microfotografas electrnicas
Actividades:
En la presente clase se observarn microfotografas electrnicas de distintos organelos
y de componentes del citoesqueleto. En las mismas se deber identificar el componente del
citoesqueleto de que se trata e indicar las diferentes partes que lo componen.
30
5. Microfotografa electrnica de un corte transversal de la cola de un espermatozoide
humano.

6. Microfotografa electrnica de cilios, en cortes longitudinal y transversal y del cuerpo basal

7. Centrolo

31
Contestar el siguiente cuestionario:
1. En qu fases del ciclo celular encontramos mayor cantidad de tubulina polimerizada?
2. En qu etapa de la divisin de una clula animal, y de qu manera, se organiza el huso
mittico? Compare con lo que ocurre en clulas vegetales.
3. Qu funcin de la actividad celular se vera alterada por la accin de la colchicina?
4. Seale las principales diferencias estructurales y funcionales entre un cilio y un flagelo.
Menciones ejemplos de tipos celulares donde se encuentran.
Bibliografa:
Alberts, B., D. Bray, J. Lewis, M. Raff, K. Roberts & J. D. Watson. 1994. Biologa molecular
de la clula. 3 edicin. Ed. Omega, Barcelona, Espaa.
Avers, C. J. 1991. Biologa Celular. Ed. Iberoamrica, Mxico.
Cooper, G. M. 2002. La Clula. 2 Edicin. Ed. Marbn, Espaa.

32
Trabajo Prctico N 8

ORGANELOS CITOPLASMATICOS

La mayor parte de las clulas eucariotas contienen abundantes membranas internas
que cierran compartimentos especficos, las organelas, y los separa del resto del citoplasma, la
regin de la clula que est por fuera del ncleo. Casi todas las organelas estn rodeadas por
una nica membrana fosfolipdica, pero varias de ellas, entre ellas el ncleo, estn encerradas
por dos membranas.
Cada tipo de organela desempea una funcin singular en el crecimiento y
metabolismo de la clula, y cada una contiene un conjunto de enzimas especficas que
catalizan las reacciones qumicas requeridas. Las membranas que definen estos
compartimentos subcelulares controlan su composicin inica interna, de manera que estas
suelen ser diferente a la del citosol y a las otras organelas.
Objetivos:
Conocer la morfologa de los organelos membranosos presentes en eucariotas.
Relacionar la morfologa con la fisiologa de dichos organelos.
el tipo de clula en que se encuentran presentes.
Materiales:
Elementos de dibujo (hojas blancas, lpiz negro, goma, etc.).
Pinzas de diseccin
Portaobjetos y cubreobjetos.
Gotero
Hoja de afeitar o bistur
Actividades:
Durante la clase prctica se efectuar la observacin de diferentes tipos de organelos
citoplasmticos. Pare ello se realizarn preparaciones para microscopio ptico que sern
examinadas detenidamente. En todos los casos se debern esquematizar las clulas con cada
organelo observado indicando sus respectivas referencias. Una vez finalizado el trabajo
prctico, se debern entregar los dibujos realizados.
1. Cloroplastos
La observacin de cloroplastos se efectuar en hojas de Vallisneria, para lo cual se
deber seguir procedimiento que se detalla a continuacin:
1. Tomar una hoja de la planta y cortarla mediante un bistur.
2. Colocar el fragmento sobre un portaobjetos.
3. Agregar una gota de agua y colocar encima un cubreobjetos.
4. Observar en el microscopio, primero con el menor aumento y luego pasar a 40x.
5. Examinar detenidamente, esquematizar las clulas con cada organelo e indicar las
respectivas referencias.
En las clulas se podr observar, la pared celular, los cloroplastos, que rodea la zona de las
vacuolas. El ncleo no se observa con facilidad debido a su transparencia y a la abundancia de
cloroplastos que lo enmascaran.
2. Ncleo y nuclolo
Para la visualizacin de ncleos y nuclolos se emplearn clulas de la epidermis
33
interna de la tnica reservante de Allium cepa (Liliaceae) o sea la cebolla. El procedimiento a
realizar es el siguiente:
1. Tomar un trozo de tnica reservante con una pinza de puntas finas y arrancar de la cara
cncava una parte de la epidermis.
2. Colocar la epidermis sobre un portaobjetos.
3. Agregar una gota de safranina.
4. Colocar el cubreobjetos y observar en el microscopio.
5. Examinar detenidamente, esquematizar las clulas con cada organelo e indicar las
respectivas referencias.
Con menor aumento podr observar la forma de las clulas, con mayor aumento podr
ver el ncleo coloreado de rojo y uno o ms nuclolos. En el citoplasma podr observar
inclusiones lipdicas, que se presentan como grnulos refringentes.
Bibliografa:
Alberts, B., D. Bray, J. Lewis, M. Raff, K. Roberts & J. D. Watson. 1994. Biologa molecular
de la clula. 3 edicin. Ed. Omega, Barcelona, Espaa.
Cooper, G. M. 2002. La Clula. 2 Edicin. Ed. Marbn, Espaa.
34
Trabajo Prctico N 9

ESTRUCTURA DE ORGANELOS MEMBRANOSOS

La clula eucaritica tiene un alto grado de organizacin estructural. Una vasta red
membranosa de tbulos, vesculas y sacos aplanados subdivide al citoplasma en dos
compartimentos fundamentales: uno comprendido dentro de las membranas y el otro situado
por fuera de ellas (matriz citoplasmtica o citosol).
Las membranas internas proporcionan a las clulas un soporte para la localizacin
ordenada de mltiples sistemas enzimticos diferentes y de subcompartimientos funcionales
cerrados (organelas), cada uno de ellos con estructura, dotacin enzimtica y propiedades
funcionales que lo caracterizan, tales como: a) separacin y asociacin de sistemas
enzimticos, b) digestin intracelular de sustancias, c) distribucin de las diferentes protenas
hacia sus destinos finales, d) regulacin de potenciales de membrana de gradientes inicos y
de diferentes valores de pH intracelular, etc.

Objetivos:
Entender las funciones de los organelos citoplasmticos membranosos y no membranosos.
Conocer la estructura de los diferentes organelos.
Relacionar la morfologa y fisiologa de dichos organelos con el tipo de clula en que se
encuentran presentes.
Actividades:
1. Se debern observar detenidamente las ilustraciones y fotografas que se encuentran a
continuacin.
2. En cada caso se deber indicar el organelo citoplasmtico de que se trata.
3. Posteriormente se colocarn las respectivas referencias.
4. Describir la funcin de cada uno de los organelos dentro de la clula.
a-

35

Cuestionario:
1. Cules son los organelos membranosos que puede tener una clula eucariota?.
2. Qu organelos no forman parte del sistema de endomembranas? Qu actividades
desempean dichos organelos?.
3. Las mitocondrias, cloroplastos y peroxisomas estn rodeados por membrana Por qu no
se los considera parte del sistema de endomembranas?.
Bibliografa:
De Robertis, E.M.F., J. Hib & R. Ponzio. 1996. Biologa Celular y Molecular. Ed. El Ateneo,
Buenos Aires.
Esau, K.1982. Anatoma de las plantas con semillas. Ed. Hemisferio Sur S. A.
Selosse, M. A. & S. Loiseaux-de Gor. 1997. La saga de la endosimbiosis. Mundo Cientfico
179: 436-441.
Strasburger, E., 1986. Tratado de Botnica.8va. ed. Ed. Omega S. A.
36
Trabajo Prctico: N 10

CLULA VEGETAL I

Una de las caractersticas ms sobresalientes de las clulas vegetales es la presencia de
una pared celular, la cual tiene diversas funciones. La pared celular protege los contenidos de
la clula, da rigidez a la estructura celular, provee un medio poroso para la circulacin y
distribucin de agua, minerales, y otras pequeas molculas nutrientes; adems de contener
molculas especializadas que regulan el crecimiento de la planta y la protegen de las
enfermedades. De afuera hacia dentro de la clula presenta varias capas que se desarrollan con
la maduracin celular: la laminilla media, la pared primaria y la pared secundaria. En la pared
primaria es dominante la matriz amorfa, formada por hemicelulosas y polisacridos no
celulsicos. En la pared secundaria domina la fase fibrilar (celulosa, 60%) y la matriz amorfa
est formada por hemicelulosas y lignina (30%).
Las comunicaciones intercelulares como los plasmodesmos, puntuaciones y
perforaciones permiten que los protoplastos de las clulas vegetales puedan intercambiar
material y funcionar de forma armnica. Los plasmodesmos son conexiones citoplasmticas
que atraviesan la pared celular entre clulas contiguas. Estos plasmodesmos comnmente
estn agrupados en zonas adelgazadas, deprimidas de las paredes primarias, constituyendo un
campo primario de puntuacin o puntuacin primordial. En el lmite del campo primario de
puntuacin, las microfibrillas se disponen paralelamente, formando un crculo u valo.
Las puntuaciones son discontinuidades en la deposicin de la pared secundaria a nivel
de un campo primario de puntuacin, aunque tambin pueden diferenciarse en zonas donde no
haba campos primarios. Se distinguen dos tipos principales de puntuaciones, las simples
donde la pared secundaria se interrumpe abruptamente y se presenta en clulas
parenquimticas, fibras y esclereidas; y las areoladas o rebordeadas que son aquellas en las
que la pared secundaria, al depositarse, hace un reborde o arola formando la cmara de la
puntuacin que se abre al lumen celular a travs de la abertura de la puntuacin; este ltimo
se presenta principalmente en fibrotraqueidas y elementos conductores del xilema.
En las perforaciones hay una interrupcin de la pared primaria y laminilla media,
adems de la discontinuidad de pared secundaria y se presenta en clulas de los tejidos de
conduccin, en los vasos del xilema, donde constituyen las placas de perforacin.

Objetivos:
Reconocer la clula como unidad estructural de los tejidos vegetales.
Identificar las partes constitutivas de la pared celular.
Reconocer los tipos de comunicaciones intercelulares a travs de la pared celular.

Actividades:
1. Observar, analizar y dibujar:

a) Puntuaciones simples y ramificadas en esclereidas (braquiesclereidas) a partir de
extendido de parnquima de fruto de pera (Pyrus communis).
b) Puntuaciones areoladas en corte longitudinal o tangencial de rama joven de pino
(Pinus sp.).
c) Perforaciones en corte tangencial o radial de tallo de fresno (Fraxinus sp.).

2. Colocar las referencias:
37

a)- Porcin de pared entre dos clulas

b)- Plasmodesmos

c) Puntuaciones

38

a) Perforaciones

Bibliografa:
Cortes, F. 1980. Histologa Vegetal Bsica. 1 edicin. Ed. Blume, Madrid.
De Robertis, M. F., J Hib & R. Ponzio. 1996. Biologa Celular y Molecular. 12 edicin. Ed .
Esau, K. 1976. Anatoma Vegetal. 3 edicin. Ed. Omega, Barcelona.
Karp, G. 1996. Biologa Celular y Molecular. Ed McGraw-Hill Interamericana, Mxico.
Raven, P. H., Evert, R. F. & Einchhorn, S. E. 1992. Biologa de las Plantas. Ed. Revert
S.A., Barcelona.
Strasburger, E., Noll, F. Schench, H. & Schimper, A. F. W. 1994. Tratado de Botnica. 2 ed.
Ed. Omega.
39
Trabajo Prctico: N 11

CLULA VEGETAL II

La clula vegetal est formada tpicamente de una pared celular ms o menos rgida y un
protoplasto. El protoplasto o protoplasma contiene al citoplasma y el ncleo.
El citoplasma incluye distintas entidades u orgnulos y sistemas membranas. Adems
incluye a la matriz citoplasmtica o citosol que es una masa coloidal qumicamente muy
compleja donde se hallan inmersos los orgnulos y el sistema de membranas. La matriz
citoplasmtica est frecuentemente en movimiento, fenmeno que se denomina flujo
citoplasmtico o ciclosis.
Las clulas vegetales se caracterizan por poseer dentro de su citoplasma una o ms
cavidades llenas de lquido denominadas vacuolas, que pueden ocupan casi todo el interior de
la clula. Esta vacuola est delimitada por una membrana llamada tonoplasto. El contenido
de la vacuola es el jugo celular y est constituido por agua y una variedad de compuestos
orgnicos e inorgnicos, de reserva (como azcares y protenas); de desecho (como cristales y
taninos); venenos (alcaloides y determinados glucsidos); pigmentos hidrosolubles como
antocianos (rojo, violeta, azul), etc.
Las vacuolas son importantes porque dan rigidez tisular, degradan de macromolculas y
reciclan sus componentes dentro de la clula. Tambin actan como lisosomas, orgnulos
digestivos capaces de descomponer y reciclar los componentes de orgnulos innecesarios.
Las sustancias ergsticas son productos del metabolismo celular, de reserva o de
desecho, que se acumulan en la pared celular, en las vacuolas o en plstidos. Ejemplos de
sustancias ergsticas constituyen los granos de almidn (amiloplastos), cristales (vacuolas),
pigmentos antocianicos, gotas de aceites, resinas, gomas, etc. Entre los cristales los ms
conocidos son los de oxalato de calcio y de carbonato de calcio. Los cristales de oxalato de
calcio tienen forma de arena cristalina, de agujas (rafidios), de columnas (estiloides),
prismticas (drusas). Los cristales de carbonato de Ca generalmente estn asociados con las
paredes celulares formando cistolitos, sobre un pednculo celulsico silicificado.
Junto con las vacuolas y la pared celular, los plastos son un componente caracterstico de
las clulas vegetales. Los plastos estn rodeados por una envoltura formada por dos unidades
de membrana y se clasifican segn los tipos de pigmentos que contiene. Pueden ser con
pigmentos: como los cloroplastos, gerontoplastos y cromoplastos; y los sin pigmentos como
los leucoplastos. Los leucoplastos son plstidos no coloreados que muchas veces almacenan
ciertos productos vegetales: almidn (amiloplastos), protenas (proteinoplastos) y grasas
(elaioplastos u oleoplastos). Se hallan en rganos incoloros o no expuestos a la luz.

Objetivos:
Reconocer la clula como unidad estructural de los tejidos vegetales.
Identificar las partes constitutivas y los orgnulos que componen la clula vegetal.
Reconocer las estructuras en que se acumulan sustancias ergsticas en la clula
vegetal.
Diferenciar los diferentes tipos de plastos que se conocen en el Reino Vegetal.

Actividades:

1. Observar, analizar y dibujar las siguientes estructuras:

a) Drusas y rafidios en corte transversal de pecolo de sandalia de pescador (Philodendron
sp.)
40

b) Idioblatos con cistolito de Carbonato de Calcio en corte transversal de hojas de gomero
(Ficus elastica)

c) Cloroplastos en hojas de Vallisneria sp.

d) Cromoplastos en corte transversal de pericarpio de pimiento (Capsicum annuun)

e) Amiloplatos en extendidos de tubrculo de papa (Solanum tuberosum)

2. Responder el siguiente cuestionario:

b) Haga un esquema de un cloroplasto. Marque las membranas y sus compartimientos.
c) Qu caractersticas de la estructura del cloroplasto son especialmente importantes para
la fotosntesis?
d) Indique las mltiples funciones de una vacuola.

Bibliografa:
Cortes, F. 1980. Histologa Vegetal Bsica. 1 edicin. Ed. Blume, Madrid.
Esau, K. 1976. Anatoma Vegetal. 3 edicin. Ed. Omega, Barcelona.
Karp, G. 1996. Biologa Celular y Molecular. Ed McGraw-Hill Interamericana, Mxico.
Raven, P. H., Evert, R. F. & Einchhorn, S. E. 1992. Biologa de las Plantas. Ed. Revert
S.A., Barcelona.
Strasburger, E., Noll, F. Schench, H. & Schimper, A. F. W. 1994. Tratado de Botnica. 2 ed.
Ed. Omega.
41
Trabajo Prctico N 12

ESTRUCTURA Y FUNCIN DE LOS CROMOSOMAS

El trmino cromosoma (del griego chromo = color y soma = cuerpo) es utilizado para
referirse a los filamentos del ncleo que se tien con colorantes bsicos y que son los
portadores de los genes. Actualmente se lo define como una molcula de ADN asociado a
protenas, que porta informacin gentica dispuesta en secuencia lineal. En el caso de los
procariotas solamente hay un cromosoma circular, mientras que en los eucariotas hay varios
cromosomas lineales, cada uno compuesto siempre por una sola cadena de ADN.
Antes de la divisin celular cada cromosoma eucaritico se encuentra formado por dos
cromtidas hermanas genticamente idnticas ya que una es la copa exacta de la otra. Cada
cromtida se encuentra formada por una nica hebra de ADN que se extiende desde un
extremo a otro del cromosoma. Cada uno de estos extremos se denomina telmero. El punto
en que se encuentran unidas las dos cromtidas hermanas es la constriccin primaria o
centrmero.
El centrmero contiene una regin especial llamada cinetocoro que es la que se une a
las fibras del huso acromtico durante la divisin celular. Algunos cromosomas suelen
presentar una constriccin secundaria tambin llamada regin organizadora de nucleolos
(NOR) debido a que es donde se encuentran los genes que sintetizan el ARNr.
La posicin de la constriccin secundaria determina la existencia de un satlite que es
la parte distal del brazo que lleva la constriccin secundaria. El centrmero divide al
cromosoma en dos brazos cromosmicos y determina la forma del cromosoma.
Objetivos:
Comprender la estructura de los cromosomas.
Conocer las diferentes formas de cromosomas.
Materiales:
Lpiz negro y goma
Hojas blancas
Actividades:
Se proveer a los alumnos de preparados permanentes de cromosomas mitticos de
diferentes organismos. A partir de los mismos, debern realizar las siguientes actividades:

1. Determinar el nmero de cromosomas caracterstico de la especie analizada.
2. Esquematizar una metafase mittica de cada preparado observado.
3. Segn la morfologa de los cromosomas, determinar los distintos tipos que presenta cada
especie.
Bibliografa:
Gardner, E.J., M.J. Simmons & D.P. Snustad. 1998. Principios de Gentica. 4. ed. Ed.
Limusa Wiley. Mxico.
Lacadena, J.R. 1988. Gentica. 4 edicin. Ed. Agesa, Madrid.
Strickberger, M.W. 1988. Gentica. 3 edicin. Ed. Omega, Barcelona.
42

CARIOTIPO

La representacin grfica o fotogrfica de los cromosomas somticos caractersticos de
una especie determinada se conoce como cariotipo. A travs de este se puede establecer el
nmero, tamao y forma de los cromosomas, e identificar los miembros de cada par de
cromosomas homlogos. Muchas especies poseen cromosomas bastante semejantes en su
morfologa, por lo que se utilizan tcnicas de bandeo cromosmico para posibilitar la
distincin de los cromosomas del mismo tamao e identificar los homlogos.
El cariotipo se determina a partir de los cromosomas que estn en metafase mittica,
cada uno de los cuales est formado por dos cromtidas hermanas unidas a la altura de sus
centrmeros. El conocimiento del cariotipo de una especie posibilita la deteccin de ciertas
enfermedades genticas que son causadas por anormalidades en el nmero o en la estructura
de los cromosomas.
Objetivos:
Comprender la importancia del cariotipo.
Conocer los pasos para la realizacin de un cariotipo.
Actividades:
Se proveer a los alumnos de fotografas de clulas vegetales en metafase mittica, a
partir de las cuales se confeccionar el cariotipo. El primer lugar se les deber asignar un
nmero arbitrario a cada cromosoma y se medir el brazo corto y el largo total de cada uno,
calculando el correspondiente ndice centromrico (brazo corto x 100 / largo total del
cromosoma). Luego se formarn los pares de cromosomas de acuerdo a los parmetros
obtenidos anteriormente; se recortar cada cromosoma y de construir el cariotipo. Para ello
se colocarn en primer trmino los cromosomas m, luego los sm, los st, los ac y por ltimo los
t. Dentro de cada grupo, sern ordenados de acuerdo a su tamao, en forma decreciente (de
mayor a menor).
Una vez finalizado el trabajo prctico se deber entregar los cariogramas realizados,
incluyendo las medidas de los pares de cromosomas de cada especie y las respuestas de las
preguntas que se detallan a continuacin.

1. Qu se representa a travs del cariotipo?

2. Indique los pasos para la realizacin de un cariotipo.

3. En qu etapa de la mitosis se encuentran los cromosomas observados en el cariotipo y
como se los observa?

Bibliografa:
Aires.
Buenos Aires.
Lacadena, J. R. 1988. Gentica. Ed. Agesa, Madrid.
43

44

MITOSIS

Los organismos pluricelulares forman su cuerpo mediante divisiones celulares
sucesivas, a partir de una sola clula original, el cigoto, el cual porta dos dotaciones
cromosmicas, una derivada del padre y otra de la madre. El fenmeno de la divisin celular
es denominado mitosis y se la divide convencionalmente en cuatro fases diferentes, aunque
los acontecimientos que se suceden ocurren en forma continua. Las etapas se denominan:
profase, metafase, anafase y telofase.
Durante la mitosis ocurren una serie de cambios caractersticos dentro de la clula y
especialmente en los cromosomas. Estos comienzan a contraerse por condensacin de la
cromatina, hasta llegar a individualizarse (profase a metafase), luego se ordenan en la placa
ecuatorial (metafase), separan sus cromtidas y migran a polos opuestos (anafase); por ltimo
se reconstituye la membrana nuclear alrededor de cada polo (telofase). La clula finalmente se
divide por invaginacin de la membrana citoplasmtica en el caso de los animales, o por
formacin de un tabique en las clulas vegetales.
Objetivos:
Comprender el mecanismo de divisin celular.
Distinguir las distintas fases de la mitosis.
Interpretar el mecanismo de distribucin de los cromosomas durante la divisin mittica.
Observar el efecto de las sustancias qumicas sobre la proliferacin celular.
Establecer la duracin comparativa de las diferentes etapas de la mitosis.
Determinar en forma indirecta la duracin del ciclo celular en el meristema radical de la
especie estudiada.
Materiales:
Calculadora
Observaciones:
Se debern observar los preparados de mitosis provistos por la ctedra y diferenciar los
distintos estadios de la mitosis. Se deber poner especial nfasis en los fenmenos que
ocurren en cada fase de la divisin mittica. Una vez finalizado el trabajo prctico, se debern
entregar los dibujos realizados, junto con las respuestas que se detallan a continuacin.
Actividades:
1. Dibujar por separado cada estadio de la mitosis observado en el microscopio ptico.

2. Indicar cuantos cromosomas se pueden distinguir en el material estudiado.

3. En qu fase resulta ms fcil el recuento de los cromosomas?

4. Cuales son las diferencias entre los preparados con pretratamiento y sin pretratamiento?

5. Determinar la proporcin de clulas en interfase y en divisin celular y la proporcin de
clulas en cada fase de la mitosis. Para ello, elegir al azar varios campos de la preparacin
y contar entre 200 clulas la cantidad de stas que se encuentran en: interfase, profase,
45
metafase, anafase y telofase. Con los datos obtenidos, se deber calcular el Indice
Mittico (I
M
), que es la razn entre el nmero de clulas que se encuentran en divisin y
el nmero total de clulas observadas, multiplicado por 100.

I
M
= N cl. en divisin x 100 =
N de cl. observadas

6 Tambin se deber calcular el Indice de Fases (I
F
), que es la razn entre la cantidad de
clulas en cada fase y el nmero total de clulas en divisin, multiplicado por 100.

I
F
= N cl. en una fase x 100 =
N de cl. en divisin

Una vez finalizado el trabajo prctico, se deben entregar todos los datos obtenidos y las
respuestas que se detallan a continuacin.

7. Cul es el porcentaje de clulas que se encuentran en divisin en cada caso?

8. Cul es la fase ms frecuente?

9. Qu proporcin de clulas se observan en cada fase de la mitosis?

Bibliografa:
Buenos Aires.
Gardner, E. 1971. Principios de Gentica. Ed. Limusa-Wiley. Mxico.
Griffiths A.J.F., J.H. Miller, D.T. Suzuki, R.C. Lewontin & W.M. Gerbart. 1996. An
Lacadena, J.R. 1996. Citogentica. 1 edicin. Ed. Complutense. Madrid.
Strickberger, M. W. 1988. Gentica. 3 edicin. Ed. Omega, Barcelona.

46

MEIOSIS

La meiosis es un tipo especial de divisin celular que ocurre en los organismos
superiores durante la formacin de las gametas. La palabra meiosis significa reduccin o
disminucin, debido a que su funcin es la reduccin del nmero de cromosomas a la mitad.
En la meiosis ocurren una serie de fenmenos caractersticos y particulares: la
disminucin del nmero cromosmico a la mitad, el apareamiento y recombinacin entre
cromosomas homlogos y la distribucin al azar de los cromosomas a las clulas hijas.
Objetivos:
Reconocer las distintas fases de la divisin meitica.
Observar el apareamiento de los cromosomas homlogos.
Visualizar la forma que adoptan los cromosomas meiticos.
Esquematizar todas las etapas de la divisin meitica.
Materiales:
Observaciones:
Se realizar la observacin de preparados meiticos provistos por la ctedra y dibujarn
la mayor cantidad posible de estadios diferentes de la meiosis. Se debern localizar y analizar
detenidamente cada una de las etapas de la divisin meitica. Los eventos a observar en cada
caso son los siguientes:

Primera divisin:

Profase I
Leptotene: los cromosomas aparecen como hilos independientes, delgados y con poca
capacidad de tincin.
Cigotene: los cromosomas homlogos comienzan a aparearse (sinapsis), formndose los
bivalentes.
Paquitene: los cromosomas homlogos terminan de aparearse y cada uno se hiende
longitudinalmente, formando dos cromtidas hermanas, para cada par de
cromosomas homlogos (bivalentes); hay cuatro cromtidas, conjunto que se
llama ttrada. En ese momento se produce el intercambio de ADN entre
cromtidas no hermanas de cromosomas homlogos, proceso llamado crossing-
over.
Diplotene: los cromosomas toman formas espiraladas, se van acortando y aparecen los
quiasmas o entrecruzamientos de las cromtidas en el lugar donde hubo crossing-
over. Cada cromosoma se separa de su homlogo, salvo donde se hallan los
quiasmas, que comienzan a desplazarse hacia los extremos (terminalizacin).
Diacinesis: los cromosomas se siguen acortando, y el nuclolo que se percibe en todos los
pasos anteriores, casi ha desaparecido. Contina la terminalizacin de los
quiasmas. Durante este perodo los cromosomas no tienen una ubicacin
determinada en el ncleo.
Metafase I: los cromosomas se ubican en el ecuador de la clula, aparece el huso
acromtico y el nuclolo ha desaparecido.
Anafase I: los cromosomas homlogos se separan, yendo a polos opuestos de la clula, se
47
produce as la reduccin del nmero de cromosomas a la mitad.
Telofase I: los cromosomas llegan a los polos.

Interfase: el huso desaparece, el nuclolo reaparece y quedan constituidos dos ncleos hijos
que contienen un nmero n de cromosomas. Algunos lo llaman perodo de reposo, pero
es en realidad un verdadero estado metablico debido a que las funciones celulares
continan.

Segunda divisin:

Profase II: las cromtidas de cada cromosoma aparecen unidas casi exclusivamente por el
centrmero, observndose los cromosomas en forma de X.
Metafase II: cada cromosoma se ubica en el ecuador de la clula.
Anafase II: dividiendo el centrmero del cromosoma, cada una de las cromtidas se dirige
a un polo.
Telofase II: cada cromtida llega al polo correspondiente. En cada polo el nmero de
cromosomas es igual a n, la mitad del que posea la clula somtica que le dio origen.

Una vez finalizado el trabajo prctico, se debern entregar los dibujos de meiosis
realizados, junto con las respuestas de las preguntas que se detallan a continuacin.

Actividades:
1. Esquematizar cada una de las etapas de la meiosis observada.

2. Indicar cuantos bivalentes se observan durante diacinesis y metafase I en el material
estudiado.

3. Calcular cuantas clulas y con cuantos cromosomas se obtendrn al final de la meiosis del
material estudiado.

Bibliografa:
Buenos Aires.
Lacadena, J.R. 1996. Citogentica. 1 edicin. Ed. Complutense. Madrid.
48

GAMETOGNESIS

En los animales la reproduccin ocurre mediante la formacin de gametos haploides que
se unen en el proceso de fecundacin formando un cigoto diploide. El proceso de fecundacin
puede ser externo o interno. En la fecundacin externa, como ocurre en los anfibios y peces,
los gametos son liberados al exterior y all se ponen en contacto. En la fecundacin interna se
produce la unin de los gametos dentro del tracto genital femenino. La fecundacin interna
constituye una adaptacin a la vida terrestre presente en muchos animales, principalmente los
vertebrados superiores.
Tanto en la fecundacin externa como la interna, se distinguen dos tipos de gametos, el
gameto masculino o espermatozoide que es mvil y de tamao pequeo, y el gameto
femenino llamado vulo que tiene mayor tamao y es inmvil.
La gametognesis es el proceso por el cual se producen los gametos masculinos y
femeninos. La gametognesis incluye a la meiosis y la diferenciacin de las clulas
resultantes en vulos y espermatozoides. Los vulos animales se caracterizan por acumular
nutrientes para el posterior desarrollo del embrin, mientras que los espermatozoides
generalmente desarrollan un flagelo que le permite moverse y fecundar al vulo.

Objetivos:
Reconocer las distintas fases de la gametognesis.
Visualizar diferentes estados de la espermiognesis.
Esquematizar todas las etapas de la espermatognesis.
Materiales:
Actividades:
1. Se realizar la observacin de preparados meiticos provistos por la ctedra y dibujarn la
mayor cantidad posible de estadios diferentes de la espermatognesis.
2. Indicar en el siguiente diagrama los diferentes estados de la ovognesis y
espermatognesis.

Bibliografa:
Buenos Aires.

49

50

ACCIN GNICA: SNTESIS DE ARNr

Adems de la constriccin primaria o centrmero, algunos cromosomas suelen
presentar una constriccin secundaria conocida como Regin Organizadora Nucleolar
(NOR). Mediante las tcnicas citolgicas convencionales, esta regin aparece como una zona
heteropicntica negativa (sin teir) ubicada generalmente en posicin subterminal en el brazo
del cromosoma, denominndose satlite a la parte distal del brazo. Por la presencia de dicho
satlite, a los cromosomas que llevan la regin NOR se los denomina tambin cromosomas
SAT o satelitados.
En las regiones NOR se encuentran los genes que codifican el ARN ribosmico
(ARNr), el cual formar parte de los ribosomas. Estos genes ribosmicos se hallan reunidos
en clusters o grupos que contienen numerosas copias y forman la regin NOR. La cantidad
de copias de los genes ribosmicos presentes en el genoma vara entre diferentes organismos.
Por ejemplo en la bacteria Escherichia coli hay de 5 a 10 copias, en la mosca de la fruta,
Drosophila melanogaster hay unas 130 copias y en el anfibio Xenopus laevis alrededor de
400 o 500 copias por genoma haploide.
Las regiones organizadoras de nuclolo, que portan los genes ribosmicos, pueden
detectarse mediante la tincin con nitrato de plata (NO
3
Ag). Una particularidad importante de
la tincin con plata o tincin argntica, es que solamente se tien los NORs que estuvieron
activos durante la interfase anterior. Ello significa que, la tincin argntica puede ser usada
para analizar la actividad gnica en las regiones organizadoras de nuclolo.
Objetivos:
Comprender las caractersticas y fundamentos de la tincin argntica.
Identificar los genes que sintetizan el ARNr mediante la tincin argntica.
Observar la estructura de los nucleolos.
Materiales:
Elementos para dibujar (hojas blancas, lpices, etc.)
Actividades:
En el desarrollo del trabajo prctico se observarn preparaciones de cromosomas en
mitosis, teidas mediante la tcnica de impregnacin con nitrato de plata o tincin argntica.
Se debern esquematizar clulas en interfase con el/los nucleolos y adems metafases en
dnde se observen los cromosomas portadores de los genes ribosmicos o regiones NOR.
Bibliografa:
Buenos Aires.
51

CDIGO GENTICO

Las reacciones que ocurren en los organismos vivos estn siempre mediadas por
enzimas, las cuales son protenas. Una protena es un polmero de subunidades menores
(monmeros) llamados aminocidos. Cada enzima consiste de un determinado nmero de
aminocidos, unidos en una secuencia especfica. En las protenas naturales se observan un
total de 20 aminocidos, que de acuerdo a como se ordenen, formarn los diferentes tipos de
protenas.
El molde para formar las protenas esta codificado en la cadena de ADN. Cada
aminocido es codificado por 3 nucletidos, los cuales constituyen un codn. Debido a que
existen cuatro bases diferentes (A, T, C, G) el nmero posible de combinaciones y por ende
de aminocidos sera 4
3
=64. Como los aminocidos son solamente 20, se deduce que existe
ms de un codn para la mayora de los aminocidos.
La informacin del ADN es transcripta primeramente a ARNm, utilizando al primero
como molde. El mensajero pasa del ncleo al citoplasma, donde ocurrir la sntesis proteica.
La lectura del mensajero es mediada por otro tipo de ARN, llamado ARN de transferencia
(ARNt), que posee una secuencia complementaria a cada codn, llamada anticodn. Debido a
que cada codn posee una secuencia especfica, existen tantos ARNt como aminocidos.
Objetivos:
Asimilar los conceptos de transcripcin y traduccin.
Comprender la naturaleza y caractersticas del cdigo gentico.
Entender el mecanismo por el cual se transmite la informacin del ADN hasta las
protenas.
Materiales:
Elementos de dibujo (hojas blancas, lpices, etc.)
Fibras de diferentes colores
Un libro de texto de Gentica general
Actividades:
A partir de la secuencia hipottica de ADN entregada por la Ctedra, los alumnos
debern transcribir el ARN mensajero correspondiente. Suponiendo que este no posee
intrones, se deber formar un polipptido valindose de una tabla con los codones que
codifican cada tipo aminocido. Se deber tener en cuenta que la lectura se realiza en
direccin 5-3 y que el codn de inicio es siempre AUG. La tabla se extraer del captulo
correspondiente a accin gnica y sntesis de protenas de algn libro de Gentica de texto.
Resultados:
Se deber detallar mediante un esquema el ARN mensajero resultante. Tambin se
deber especificar e ilustrar a que aminocidos corresponden los codones, utilizando un color
diferente para cada uno de ellos. Por ltimo, mediante un esquema se detallar la cadena
polipeptdica resultante.
Bibliografa:
52
Buenos Aires.

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