UNIVERSIDAD NACIONAL

DEL SANTA
FACULTAD DE INGENIERA

E.A.P:
INGENIERIA AGROINDUSTRIAL
CURSO:
MICROBIOLOGA GENERAL
ESTUDIANTE:
CRISTHIAN CORTEZ CRUZ
DOCENTE:
ETERIO ALVA MUOZ
GRUPO:
C

NVO CHIMBOTE, Noviembre de 2013







PRACTICA 05
METABOLISMO DE LOS
CARBOHIDRATOS

OBJETIVOS GENERALES
Observar e interpretar las diferentes reacciones metablicas de
los microorganismos sobre la glucosa y el almidn incluidos en
los medios de cultivo.

Identificar y diferenciar microorganismos que metabolizan la
glucosa con formacin de cido y/o gas.

Identificar microorganismos que hidrolizan el almidn y
diferenciarlos de aquellos que no lo hidrolizan.


















INTRODUCCIN
La necesidad de un aporte constante de energa a la clula se debe a que
ella lo requiere para realizar varias funciones, entre las que destacan: (a) la
realizacin de un trabajo mecnico, por ejemplo, la contraccin muscular y
movimientos celulares, (b) el transporte activo de iones y molculas y (c) la
sntesis de molculas. Para la mayora de los animales, incluyendo al
hombre, la energa til para la clula es la energa qumica, la cual se
encuentra contenida en los nutrientes (carbohidratos y lpidos,
principalmente) que se consumen.
A travs de un conjunto procesos enzimticos bien definidos, la clula extrae
dicha energa y la hace disponible para que se realicen una gran variedad
de procesos celulares, entre los que destacan los encaminados a la sntesis
de (anabolismo)y degradacin (catabolsmo) de biomolculas, a la suma de
ambos procesos se le identifica como Metabolismo. La clula ha diseado
para la glucosa, los cidos grasos y los aminocidos un proceso metablico
nico (metabolismo de carbohidratos, de lpidos y de protenas,
respectivamente), acompaado cada uno de ellos de un estricto mecanismo
de regulacin (control metablico).
A continuacin presentare un informe acerca del procedimiento que
se llev a cabo en el laboratorio para la siembra de bacterias en
medios de cultivo y su incubacin.








MARCO TERICO
LA GLUCOSA
La glucosa es un monosacrido que es utilizado por la mayora de
microorganismos, cuando es incorporado a un medio de cultivo puede ser
metabolizada por diferentes vas metablicas y derivar fcilmente en la
produccin de cido y/o gas.
La formacin de acido se puede evidenciar adicionando al medio un
indicador de pH como el rojo de fenol que en alcanalidad es tojo y en acidez
es amarillo. La observacin de gas puede ser observada mediante la
acumulacin de gas en tubos invertidos (camapana de Durham) que son
incorporados en los tubos con medio glucosado.

EL ALMIDON
El almidon es un polmero de glucosa y a la vez es usado como fuente de
carbono por aquellos microorganismos que tienen capacidad de
hidrolizarlo en sustancias simples y asimilables. Esta capacidad esta
gobernada genticamente por la sntesis o no de amilasas que son enzimas
producidas solo por ciertos microbios cuando crecen en presencia de
almidon.
Los microorganismos que producen amilasas y por consiguiente hidrolizan
el almidon, se denominan almidon positivo y los que no tienen esa
capacidad se denominan almidon negativo.
Para determinar si un microorganismo es almidon positivo o negativo, se le
siembra en un medio de cultivo con almidon como nica fuente de carbono,
y luego de la incubacin se le adiciona yodo (bajo la forma de lugol).
Cuando el almidon se combina con el yodo se colorea caractersticamente
de azul. Por lo que un color azul indica presencia de almidon (-) y la
aparicin de zonas claras indica ausencia de almidon (+).






MATERIAL Y MTODOS

MATERIALES

A. Material biolgico:
Cultivos puros de Escherichia coli, Shiguella sp, Pseudomonas
sp, Saccharomyces cerevisae y Bacillus subtilis.
B. Medio de cultivo:
Caldo glucosado
Agar almidon
C. Material de vidrio:
Laminas portaobjetos
Placas Petri
Tubos de ensayo
D. Otros:
Lugol
Asa bacteriolgica
Mechero, etc.




















PROCEDIMIENTO:

I. DEGRADACIN DE LA GLUCOSA:

En dos tubos conteniendo caldo glucosado sembramos por separado
Pseudomonas sp y E. coli.

















Incubar a 37C/48h.
Observar la degradacin de la glucosa con la formacin de cido,
mediante el viraje a amarillo del indicador rojo del fenol.
Observar la degradacin de la glucosa con formacin de gas mediante
la acumulacin de gas.
Anotar los resultados.

II. DEGRADACION DEL ALMIDON
En dos placas Petri conteniendo Agar almidon sembramos por
puntura : Bacillus subtilis y proteus.
Incubamos a 37C/48h.
Culminado el tiempo de incubacin, adicionamos lugol a las placas.
Observar y anotar resultados.










RESULTADOS
DEGRADACION DE LA GLUCOSA:























Luego de incubar los dos tubos de glucosa sembrados con E. coli y
pseudomonas obtuvimos los siguientes resultados:
Podemos observar que ha ocurrido un cambio de color de rojo a
amarillo, lo cual nos indica la formacin de cido gracias a la
bacteria pseudomonas. Por otro lado se not tambin que no hay
formacin de gas, esto se debi quizs a que la bacteria E. coli no
logro desarrollarse muy bien en este medio.

DEGRADACION DEL ALMIDON:
:
















Luego de incubar los dos placas petri de agar almidn sembrados con
Bacillus subtilis y proteus obtuvimos los siguientes resultados:
Podemos observar que al agregar lugol a las placas hay formacin
de halos en algunas superficies, lo cual se puede entender que la
bacteria bacillus subtillis ha actuado en esa regin ya que es una
bacteria amilolitica. Por otro lado se puede notar que en unas
regiones donde se sembr la bacteria proteus se tio de azul lo cual
indica la presencia de almidon, entendiendo de esta manera que esta
bacteria al ser no amilolitica no actu sobre el almidn.

DISCUSIONES
Segn Lehninger, A. L. Principios de bioqumica. Barcelona: El
almidn es la forma principal de almacenamiento de glucosa en la
mayora de las plantas. Es fabricado por las plantas verdes durante la
fotosntesis. Forma parte de las paredes celulares de las plantas y de
las fibras de las plantas rgidas.
A su vez sirve de almacn de energa en las plantas, liberando energa
durante el proceso de oxidacin en dixido de carbono y agua. Los
grnulos de almidn de las plantas presentan un tamao, forma y
caractersticas especficos del tipo de planta en que se ha formado el
almidn
Tambin nos dice que los carbohidratos forman un grupo de
compuestos que contienen carbono (C), hidrgeno (H) y oxgeno (O).
Son los compuestos orgnicos ms abundantes en la naturaleza. Las
plantas verdes y las bacterias fotosintetizadoras los producen en el
proceso conocido como fotosntesis, durante el cual absorben el
dixido de carbono del aire y, por accin de la energa solar, producen
glucosa y otros compuestos qumicos necesarios para que los
organismos sobrevivan y crezcan. De los glcidos ms sencillos,
monosacridos, el ms importante es la glucosa. Dos monosacridos
unidos producen un "disacrido", cuyo ejemplo ms importante
encontramos en la sacarosa, la lactosa y la maltosa. Los polisacridos
son enormes molculas formadas por uno o varios tipos de unidades
de monosacridos.







CONCLUSIONES
En este experimento se pudo realizar la siembra en agar glucosa y
agar almidn, lo que nos dio por resultado poder identificar y
diferenciar microorganismos que metabolizan la glucosa con
formacin de cido y/o gas, en este caso no hubo formacin de gas.

Tambin pudimo identificar microorganismos que hidrolizan el
almidn y diferenciarlos de aquellos que no lo hidrolizan, tal es el
caso del bacillus subtilis y el proteus.

Concluida la prctica se pudo observar e interpretar las diferentes
reacciones metablicas de los microorganismos sobre la glucosa y el
almidn incluidos en los medios de cultivo.

















CUESTIONARIO
1. Todos los microbios usan glucosa?
La mayora de las bacterias de inters mdico usan la glucosa como
fuente de carbono, como parte importante de su metabolismo. Se
determina si la bacteria usa la glucosa produciendo cido y/o gas a
partir de dicho carbohidrato.
PROCEDIMIENTO PARA IDENTIFICAR MICROBIOS:
En un tubo con agua peptonada al 1% tapado, y un tubo de Durham,
se inocula la bacteria por agitacin teniendo cuidado de no mover el
tubo de Durham e incubndolo 24 horas y 37C se obtienen los
siguientes resultados.
Si la bacteria usa la glucosa producir cido y/o gas, por lo tanto el
agua peptonada se observar rosa, si produce gas, se observar una
burbuja en el tubo de Durham. Ejemplos:
a) Acido y gas a partir de de la glucosa: E. coli
b) Negativo a produccin de gas: Proteus stuarti.

2. Qu sucedera si no se adiciona el indicador al caldo glucosado?
Pues sencillamente no se podra notar el cambio de color en la
muestra pues un indicador es un colorante cuyo color cambia segn
estn en contacto con un cido o con una base. La variacin de color
se denomina viraje, para esto el indicador debe cambiar su estructura
qumica al perder o aceptar un protn.







3. Qu son amilasas?
Denominadas tambin sacarasa o ptialina, es
un enzima hidrolasa que tiene la funcin de catalizar la reaccin de
hidrlisis de los enlaces 1-4 del componente -Amilosa al digerir
el glucgeno y el almidn para formar azcares simples, se produce
principalmente en las glndulas salivales(sobre todo en las glndulas
partidas) y en el pncreas. Tiene actividad enzimtica a un pH de 7.
Cuando una de estas glndulas se inflama, como en la pancreatitis,
aumenta la produccin de amilasa y aparece elevado su nivel
en sangre (amilasemia).
Fue la primera enzima en ser identificada y aislada por Anselme
Payen en 1833, quien la bautiz en un principio con el nombre de
"diastasa".
4. Por qu algunos microorganismos no hidrolizan el almidn?
Simplemente porque no son microorganismos amiloliticos, es decir no
tienen la capacidad de hidrolizar el almidn.










ANEXOS
COMPOSICION DEL CALDO GLUCOSADO
Composicin:
Peptona...................... 7 gr
D-glucosa.................. 5 gr
Cloruro sdico............. 5 gr
Agar.......................... 15 gr
Agua destilada........... 1000 ml
Se disuelve calentando y agitando hasta ebullir, se ajusta el pH a 7
distribuyndose en tubos aproximadamente 10 ml, se esteriliza en autoclave
a 120 durante 20 minutos.












REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

Mathews, C. K; Van Holde, K. E.: Glcidos EnBioqumica 2ed. Mc Graw
Hill Interamericana.Madrid 1998. 657-665
http://fai.unne.edu.ar/biologia/macromoleculas/azucar.htm
Lehninger, A. L. Principios de bioqumica. Barcelona: Ed. Omega, 2
ed., 1993.
Asp, N.G., Van Amelsvoort, J.M.M. & Hautvast,J.G.A.J. (1996).
Nutricional implications of resistantstarch. Nutr. Res. Rev
Bioqumica. D. Voet y J.G. Voet, EdicionesPanamericana, 2006























PRACTICA 06
METABOLISMO DE LOS LIPIDOS

OBJETIVOS GENERALES
Observar halos de hidrolisis tributirina por accin microbiana.

Distinguir diversas acciones microbianas frente a lpidos en los
medios de cultivo.





















INTRODUCCIN
Lpidos son absorbidos en el intestino y se someten a la digestin y el
metabolismo antes de que puedan ser utilizadas por el cuerpo. La mayora
de los lpidos dietticos son las grasas y las molculas complejas que el
cuerpo necesita para romper con el fin de utilizar y obtener energa de.
Digestin de lpidos
Digestin de las grasas se compone de estas grandes etapas:-
1. Absorcin
2. Emulsificacin de grasas
3. Digestin de las grasas
4. Metabolismo de las grasas
5. Degradacin
Absorcin de lpidos
cidos grasos de cadena corta (hasta 12 carbonos) son absorbidos
directamente.
Triglicridos y grasas en la dieta son insolubles en agua y por lo tanto su
absorcin es difcil. Para lograr esto, la grasa en la dieta se descompone en
partculas pequeas que aumenta el rea expuesta para ataque rpido por
las enzimas digestivas.
Emulsificacin de grasas
Grasas en la dieta se someten a la emulsificacin que conduce a la
liberacin de cidos grasos. Esto se produce por simple hidrlisis de los
enlaces ster de los triglicridos.
Las grasas se descomponen en pequeas partculas por accin detergente y
mezclado mecnico. Se realiza la accin detergente por jugos digestivos,
pero sobre todo por las grasas parcialmente digeridas (cidos grasos
jabones y monacylglycerols) y por sales biliares.
Las sales biliares como el cido clico contienen un lado que es hidrofbica
(repelente al agua) y otro lado de amar o hydrophhillic de agua.

Digestin de las grasas
Despus de la emulsificacin las grasas son hidrolizadas o por las enzimas
secretadas por el pncreas. La enzima ms importante involucrada es la
lipasa pancretica. Lipasa pancretica rompe vnculos ster primario, el 1 o
los 3 enlaces ster. Esto convierte los triglicridos 2-monoglicridos (2-
monoacylglycerols). Menos del 10% de triglicridos siendo unhydrolyzed en
el intestino.
Metabolismo de las grasas
cidos grasos de cadena corta entrar directamente en la circulacin, pero
la mayora de los cidos grasos es reesterified con glicerol en los intestinos
de los triglicridos de forma que entren en la sangre como partculas de
lipoprotenas llamadas quilomicrones.
Lipasa acta sobre estos quilomicrones forma los cidos grasos. Estos
pueden ser almacenados como grasa en el tejido adiposo, su utiliza para
producir energa en cualquier tejido con mitocondrias utilizando oxgeno y
reesterified a los triglicridos en el hgado y exportados como lipoprotenas
llamadas VLDL (lipoprotenas de muy baja densidad).
Degradacin
Los cidos grasos se desglosan por Beta oxidacin. Esto ocurre en las
mitocondrias o en peroxisomas para generar acetil-CoA. El proceso es el
inverso de la sntesis de cidos grasos: fragmentos de dos emisiones de
carbono se quitan del extremo carboxilo del cido. Esto ocurre despus de
deshidrogenacin, hidratacin y oxidacin para formar un cido beta-ceto.
El acetil-CoA, a continuacin, se convierte en ATP, CO2y H2O utilizando el
ciclo del cido ctrico y libera energa de 106 ATP. cidos grasos
insaturados requieren pasos enzimticos adicionales para la degradacin.
A continuacin presentare un informe acerca del procedimiento que
se llev a cabo en el laboratorio para la siembra de bacterias en
medios de cultivo y su incubacin para poder distinguir las acciones
de microbios frente a lpidos.


MATERIAL Y MTODOS

MATERIALES

Material biolgico:

Muestras de caspa y pelos de cuero cabelludo.

Medio de cultivo:

Agar tributirina
Agar yema de huevo

Material de vidrio:

Placas Petri

Otros:

Asa bacteriolgica
Mechero, etc.

















PROCEDIMIENTO:


Tomamos una muestra de caspa y pelos de cuero cabelludo y hacemos
la siembra en el medio Agar tributirina.






















Llevamos a incubar a 37C/24h.

Hacemos las lecturas. En el caso de agar tributirina identificamos los
halos de hidrolisis.





RESULTADOS




















Luego de incubar las placas sembradas en agar tributirina con muestras
de caspa y pelos, obtuvimos los sgtes resultados:
Podemos observar que en la
muestra hay presencia de halos de
hidrolisis de color transparente,
por lo cual se aprecia mejor a
contraluz. Tambin podemos ver la
presencia de un microorganismo
de color verde llamado:
pseudomonas del cual hablaremos
ms adelante.

DISCUSIONES
Segn "Bioqumica," Enciclopedia Microsoft EncartaOnline 2007,
(pag 37) los lpidos son las biomolculas que ms diversidad
presentan. Su funcin estructural bsica es formar parte de
las membranas biolgicas como la membrana celular, o bien como
recurso energtico.
17
Los lpidos son definidos normalmente como
molculas hidrofbicas o anfipticas, que se disuelven en solventes
orgnicos como la bencina o el cloroformo.
Las grasas son un grupo de compuestos que incluyen cidos
grasos y glicerol; una molcula de glicerol junto a tres cidos
grasos ster dan lugar a una molcula de triglicrido. Se pueden dar
variaciones de esta estructura bsica, que incluyen cadenas laterales
como la esfingosina de los esfingolpidos y los grupos hidroflicos tales
como los grupos fosfato en los fosfolpidos. Esteroides como el
colesterol son otra clase mayor de lpidos sintetizados en las clulas.











CONCLUSIONES

En esta prctica se pudo evidenciar los halos de hidrolisis tributirina por
accin microbiana, los cuales no se pueden observar a simple vista sino
deben ser vistos a contraluz para una mejor percepcin.

Tambin se pudo distinguir diversas acciones microbianas frente a
lpidos en los medios de cultivo.

Concluida la prctica se determin los objetivos anteriores, pero tambin
se not la presencia de un microorganismo que anda en todas partes
como es el pseudomonas.

















ANEXOS
PSEUDOMONAS
Pseudomonas es un gnero
de bacilos rectos o ligeramente
curvados, Gramnegativos, oxidasa po
sitivos, aerbicos estrictos aunque en
algunos casos pueden utilizar el
nitrato como aceptor de electrones.
El catabolismo de los glcidos se
realiza por la ruta de Etner-
Doudoroff y el ciclo de los cidos
tricarboxlicos. Algunos miembros
del gnero son psicrfilos, mientras
que otros sintetizan siderforos fluorescentes de color amarillo-verdoso con
gran valor taxonmico. Es comn la presencia de plsmidos y no
forman esporas.
Con el reciente anlisis de secuencias del RNAr 16S se han definido la
taxonoma de muchas especies bacterianas
1
y como resultado, el
gneroPseudomonas incluyen algunas cepas clasificadas anteriormente
dentro de las Chryseomonas y Flavimonas.
2
Otras cepas clasificadas
previamente en el gnero Pseudomonas, ahora son agrupadas en los
gneros Burkholderia y Ralstonia.
NOTA:
Las Pseudomonas crecen en medios simples. En caldo crecen
abundantemente formando un anillo y un sedimento de color verde
azulado. En agar simple forman colonias brillantes, confluentes, de borde
continuo y a veces ondulado con un centro opaco. El pigmento (piocianina)
se difunde en el medio dndole una tonalidad verdosa. Este pigmento tiene
cualidades bactericidas sobre otras bacterias Gram positivas y Gram
negativas.







REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

"Bioqumica," Enciclopedia Microsoft EncartaOnline 2007 En:
http://mx.encarta.msn.com 1997-2007 Microsoft Corporation.
Reservados todos losderechos.
Saura-Calixto, F., Garcia-Alonso, A., Goi, I. &Bravo, L. (2000). In vitro
determination of theindigestible fraction in foods: An alternative to
dietaryfiber analysis.
http://www.practiciencia.com.ar/cbiologicas/biologia/bioquimica/g
lucidos/index.html