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FONDECYT-REGULAR - 2001 - 1011051

FUNCION DE LAS PROTEASAS TIPO


QUIMOTRIPSINA Y EL PROTEOSOMA EN LA
REGULACION DE LA FISIOLOGIA
ESPERMATICA Y SU PARTICIPACION EN LA
FECUNDACION EN MAMIFEROS
Programa: Fondecyt Regular La fecundacin en mamferos es un proceso
complejo, que comprende la interaccin secuencial del espermatozoide con el
cmulo oforo, la zona pelcida (ZP) y la membrana plasmtica del ovocito. La
participacin en este proceso de proteasas con actividad tipo tripsina y
quimotripsina ha sido descrita en espermatozoides de invertebrados marinos y
mamferos. Especficamente, estas proteasas estaran involucradas en la unin
del espermatozoide al ovocito, la reaccin acrosomal (RA) y la penetracin a
travs de las cubiertas ovocitarias. En mamferos, una de las proteasas
acrosomales mejor estudiadas presenta actividad tipo tripsina y ha sido
denominada acrosina. La importancia de esta proteasa en la fecundacin ha
sido, sin embargo, puesta en duda ya que animales transgnicos cuyos
espermatozoides carecen de acrosina son tan frtiles como los controles.
Recientemente, fue descrito en espermatozoides humanos y de ratn un
complejo protesico multienzimtico o proteosoma, con un coeficiente de
sedimentacin similar al de proteosomas purificados de otros tejidos humanos y
actividad enzimtica tipo tripsina, tipo quimotripsina y peptidilglutamil
peptidasa. Los proteosomas son el principal complejo proteoltico citoslico de
las clulas eucariotas y corresponden hasta el 1% de las protenas
citoplasmticas. Este complejo enzimtico est constituido por un cuerpo
proteoltico llamado proteosoma 20S (aprox. 700 kDa), el que puede asociarse
a protenas reguladoras, ATPasas y activadores, constituyendo el proteosoma
26S (aprox. 2.000 kDa). El sitio activo del proteosoma contiene una Thr,
sugiriendo que podra tratarse de un nuevo tipo de proteasa. Lactacistina, un
inhibidor potente y muy especfico de proteosomas, se une covalentemente a la
Thr y lo inhibe de manera irreversible. La principal funcin del proteosoma es
la de degradar la mayor parte de las protenas nucleares y citoslicas, despus
de que stas son marcadas para su destruccin por unin covalente a molculas
de ubiquitina. Adems, el sistema ubiquitina-proteosoma podra constituir un
sistema regulador para varias reacciones biolgicas. Por ejemplo, el
proteosoma puede activar el factor de transcripcin NF-B, a travs de la
conversin del precursor p105 a la protena madura p50. Otros estudios han
demostrado que varios receptores de superficie que sealan a travs de la
activacin de protena tirosina quinasa, se ubiquitinan y se degradan en
respuesta a la unin con el ligando o a la fosforilacin. Sin embargo, el
proteosoma tambin puede degradar protenas no ubiquitinadas. Finalmente, la
estructura, composicin y localizacin intracelular del proteosoma puede variar
CONICYT: Repositorio Institucional: Ficha de Iniciativa de CIT (Ciencia, Tecnologa e Innovacin) 1
en relacin a su funcin. As, existen diferencias en la actividad y estructura de
proteosomas aislados de diferentes rganos y ocurren cambios en la
distribucin intracelular de los proteosomas durante la progresin del ciclo
celular. Estos cambios podran servir para controlar la velocidad de protelisis
en regiones especficas dentro de la clula. La funcin biolgica de los
proteosomas ha sido estudiada en espermatozoides de invertebrados marinos.
En estos organismos, el proteosoma espermtico est involucrado en mltiples
etapas del proceso de fecundacin, tal como la RA inducida por la gelatina del
ovocito, la unin y digestin/penetracin de la membrana vitelina y la fusin
con la membrana plasmtica del ovocito. La funcin biolgica de los
proteosomas en los espermatozoides de mamferos, sin embargo, constituye un
rea aun inexplorada. De lo anteriormente sealado y del anlisis de la
literatura es claro que la informacin existente sobre la funcin biolgica de las
proteasas acrosomales tipo quimotripsina y el proteosoma en los
espermatozoides de mamferos es muy limitada. La proposicin de este proyecto
consiste en investigar la funcin biolgica de estas actividades protesicas en
espermatozoides de mamferos, con particular nfasis en la especie humana.
Por analoga de lo que se conoce en otras clulas eucariotas y en
espermatozoides de invertebrados marinos, nuestra hiptesis de trabajo plantea
que la actividad protesica tipo quimotripsina sera parte del complejo
multienzimtico denominado proteosoma. El proteosoma, a su vez, estara
involucrado en la regulacin de la fisiologa espermtica y en una o mas etapas
claves e irreversibles del proceso de fecundacin. Especficamente, el
proteosoma podra estar involucrado en la RA; la unin y penetracin a travs
de la ZP; y en la fusin con la membrana plasmtica del ovocito. Sin lugar a
dudas esta es una hiptesis atractiva que abre una nueva rea de investigacin
en el estudio de la fisiologa espermtica y su regulacin. Por lo tanto, en este
proyecto proponemos especficamente: 1) estudiar la participacin de las
proteasas tipo quimotripsina y el proteosoma en los diferentes eventos que
caracterizan la fisiologa espermtica y la fecundacin; 2) caracterizar
bioqumicamente las proteasas tipo quimotripsina y/o el proteosoma en
espermatozoides de mamferos; y 3) determinar cambios en la localizacin
intracelular de la actividad tipo quimotripsina y/o el proteosoma durante la
capacitacin espermtica.
Antecedentes
# Nombre : FUNCION DE LAS PROTEASAS TIPO QUIMOTRIPSINA Y EL
PROTEOSOMA EN LA REGULACION DE LA FISIOLOGIA ESPERMATICA Y SU
PARTICIPACION EN LA FECUNDACION EN MAMIFEROS
# Nmero : 1011051
# Ao Concurso : 2001
# Concurso : FONDECYT-REGULAR
# Consejo : CIENCIA
# Duracin : 3 aos
# Estado : APROBADO
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# Sector de Aplicacin :
La fecundacin en mamferos es un proceso complejo, que comprende la interaccin
secuencial del espermatozoide con el cmulo oforo, la zona pelcida (ZP) y la membrana
plasmtica del ovocito. La participacin en este proceso de proteasas con actividad tipo
tripsina y quimotripsina ha sido descrita en espermatozoides de invertebrados marinos y
mamferos. Especficamente, estas proteasas estaran involucradas en la unin del
espermatozoide al ovocito, la reaccin acrosomal (RA) y la penetracin a travs de las
cubiertas ovocitarias. En mamferos, una de las proteasas acrosomales mejor estudiadas
presenta actividad tipo tripsina y ha sido denominada acrosina. La importancia de esta
proteasa en la fecundacin ha sido, sin embargo, puesta en duda ya que animales transgnicos
cuyos espermatozoides carecen de acrosina son tan frtiles como los controles.
Recientemente, fue descrito en espermatozoides humanos y de ratn un complejo protesico
multienzimtico o proteosoma, con un coeficiente de sedimentacin similar al de proteosomas
purificados de otros tejidos humanos y actividad enzimtica tipo tripsina, tipo quimotripsina y
peptidilglutamil peptidasa. Los proteosomas son el principal complejo proteoltico citoslico
de las clulas eucariotas y corresponden hasta el 1% de las protenas citoplasmticas. Este
complejo enzimtico est constituido por un cuerpo proteoltico llamado proteosoma 20S
(aprox. 700 kDa), el que puede asociarse a protenas reguladoras, ATPasas y activadores,
constituyendo el proteosoma 26S (aprox. 2.000 kDa). El sitio activo del proteosoma contiene
una Thr, sugiriendo que podra tratarse de un nuevo tipo de proteasa. Lactacistina, un
inhibidor potente y muy especfico de proteosomas, se une covalentemente a la Thr y lo
inhibe de manera irreversible. La principal funcin del proteosoma es la de degradar la mayor
parte de las protenas nucleares y citoslicas, despus de que stas son marcadas para su
destruccin por unin covalente a molculas de ubiquitina. Adems, el sistema
ubiquitina-proteosoma podra constituir un sistema regulador para varias reacciones
biolgicas. Por ejemplo, el proteosoma puede activar el factor de transcripcin NF-B, a
travs de la conversin del precursor p105 a la protena madura p50. Otros estudios han
demostrado que varios receptores de superficie que sealan a travs de la activacin de
protena tirosina quinasa, se ubiquitinan y se degradan en respuesta a la unin con el ligando o
a la fosforilacin. Sin embargo, el proteosoma tambin puede degradar protenas no
ubiquitinadas. Finalmente, la estructura, composicin y localizacin intracelular del
proteosoma puede variar en relacin a su funcin. As, existen diferencias en la actividad y
estructura de proteosomas aislados de diferentes rganos y ocurren cambios en la distribucin
intracelular de los proteosomas durante la progresin del ciclo celular. Estos cambios podran
servir para controlar la velocidad de protelisis en regiones especficas dentro de la clula.
La funcin biolgica de los proteosomas ha sido estudiada en espermatozoides de
invertebrados marinos. En estos organismos, el proteosoma espermtico est involucrado en
mltiples etapas del proceso de fecundacin, tal como la RA inducida por la gelatina del
ovocito, la unin y digestin/penetracin de la membrana vitelina y la fusin con la
membrana plasmtica del ovocito. La funcin biolgica de los proteosomas en los
espermatozoides de mamferos, sin embargo, constituye un rea aun inexplorada.
De lo anteriormente sealado y del anlisis de la literatura es claro que la informacin
existente sobre la funcin biolgica de las proteasas acrosomales tipo quimotripsina y el
proteosoma en los espermatozoides de mamferos es muy limitada. La proposicin de este
proyecto consiste en investigar la funcin biolgica de estas actividades protesicas en
espermatozoides de mamferos, con particular nfasis en la especie humana. Por analoga de
lo que se conoce en otras clulas eucariotas y en espermatozoides de invertebrados marinos,
nuestra hiptesis de trabajo plantea que la actividad protesica tipo quimotripsina sera parte
del complejo multienzimtico denominado proteosoma. El proteosoma, a su vez, estara
involucrado en la regulacin de la fisiologa espermtica y en una o mas etapas claves e
irreversibles del proceso de fecundacin. Especficamente, el proteosoma podra estar
involucrado en la RA; la unin y penetracin a travs de la ZP; y en la fusin con la
membrana plasmtica del ovocito. Sin lugar a dudas esta es una hiptesis atractiva que abre
una nueva rea de investigacin en el estudio de la fisiologa espermtica y su regulacin.
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Por lo tanto, en este proyecto proponemos especficamente: 1) estudiar la participacin de las
proteasas tipo quimotripsina y el proteosoma en los diferentes eventos que caracterizan la
fisiologa espermtica y la fecundacin; 2) caracterizar bioqumicamente las proteasas tipo
quimotripsina y/o el proteosoma en espermatozoides de mamferos; y 3) determinar cambios
en la localizacin intracelular de la actividad tipo quimotripsina y/o el proteosoma durante la
capacitacin espermtica.
Resultados
ARTICULOS
# PARTICIPATION OF SPERM PROTEASOME IN HUMAN FERTILIZATION,
HUMAN REPRODUCTION, VOL.18 (5):1010-1017, 2003.
# Autores Asociados al Proyecto
# MORALES RETAMAL, PATRICIO JOSE.
Autores No Asociados al Proyecto
# KONG, MILENE
# PASTEN RAMOS, MARIA CONSUELO
# PIZARRO MOYA, EDUARDO.
# ROLE OF THE SPERM PROTEASOME DURING IN VITRO FERTILIZACION
IN THE MOUSE, FERTILITY AND STERILITY, VOL.80 (3) 2003.
# Autores Asociados al Proyecto
# MORALES RETAMAL, PATRICIO JOSE.
Autores No Asociados al Proyecto
# PASTEN RAMOS, MARIA CONSUELO.
EVENTOS
# DISMINUCION DE LA ACTIVIDAD PROTEOSOMAL EN
ESPERMATOZOIDES DE PACIENTES CON ANOMALIAS GENETICAS, En:
CONICYT: Repositorio Institucional: Ficha de Iniciativa de CIT (Ciencia, Tecnologa e Innovacin) 4
14 REUNION ANUAL DE LA SOCIEDAD CHILENA DE REPRODUCCION Y
DESARROLLO. LA SERENA, CHILE. 20030816-20030816.
# Autores Asociados al Proyecto
# MORALES RETAMAL, PATRICIO JOSE.
Autores No Asociados al Proyecto
# CHEMES, H E
# DIAZ LOIS, EMILCE SILVINA
# PIZARRO MOYA, EDUARDO
# RAWE, V Y.
# EXTRACELLULAR LOCALIZATION OF THE PROTEASOME IN HUMAN
SPERM, En: 28 ANNUAL MEETING AMERICAN SOCIETY OF ANDROLOGY.
ARIZONA, ESTADOS UNIDOS DE AMERICA. 20030329-20030401.
# Autores Asociados al Proyecto
# MORALES RETAMAL, PATRICIO JOSE.
Autores No Asociados al Proyecto
# JARA, MARCOS
# KONG, MILENE
# PASTEN RAMOS, MARIA CONSUELO
# PIZARRO MOYA, EDUARDO.
# FUNCION DEL PROTEOSOMA EN ESPERMATOZOIDES HUMANOS, En: 13
REUNION ANUAL DE LA SOCIEDAD CHILENA DE REPRODUCCION Y
DESARROLLO. LA SERENA, CHILE. 20020815-20020817.
# Autores Asociados al Proyecto
# MORALES RETAMAL, PATRICIO JOSE.
Autores No Asociados al Proyecto
# KONG, MILENE
# PASTEN RAMOS, MARIA CONSUELO
# PIZARRO MOYA, EDUARDO
# SILVA, C.
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# FUNCION DEL PROTEOSOMA ESPERMATICO DURANTE LA
FECUNDACION IN VITRO (FIV) EN RATON, En: 14 REUNION ANUAL DE LA
SOCIEDAD CHILENA DE REPRODUCCION Y DESARROLLO. LA SERENA,
CHILE. 20030816-20030816.
# Autores Asociados al Proyecto
# MORALES RETAMAL, PATRICIO JOSE.
Autores No Asociados al Proyecto
# KONG, MILENE
# PASTEN RAMOS, MARIA CONSUELO.
# IDENTIFICACION DEL PROTEASOMA EN LA MEMBRANA PLASMATICA
DEL ESPERMATOZOIDE HUMANO, En: 14 REUNION ANUAL DE LA
SOCIEDAD CHILENA DE REPRODUCCION Y DESARROLLO. LA SERENA,
CHILE. 20030816-20030816.
# Autores Asociados al Proyecto
# MORALES RETAMAL, PATRICIO JOSE.
Autores No Asociados al Proyecto
# KONG, MILENE
# PIZARRO MOYA, EDUARDO.
# LOCALIZACION EXTRACELULAR DEL PROTEASOMA EN
ESPERMATOZOIDES HUMANOS, En: 2 REUNION ANUAL DE LA SOCIEDAD
DE ANDROLOGIA Y GAMETOLOGIA DE CHILE. CHILE. 20003010-20030110.
# Autores Asociados al Proyecto
# MORALES RETAMAL, PATRICIO JOSE.
Autores No Asociados al Proyecto
# JARA, MARCOS
# KONG, MILENE
# PASTEN RAMOS, MARIA CONSUELO
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# PIZARRO MOYA, EDUARDO.
# PARTICIPACION DEL PROTEOSOMA ESPERMATICO EN EL PROCESO DE
FECUNDACION EN HUMANOS, En: 1 REUNION ANUAL DE LA SOCIEDAD
DE ANDROLOGIA Y GAMETOLOGIA DE CHILE. TEMUCO, CHILE.
20020103-20020104.
# Autores Asociados al Proyecto
# MORALES RETAMAL, PATRICIO JOSE.
Autores No Asociados al Proyecto
# KONG, MILENE
# PASTEN RAMOS, MARIA CONSUELO
# PIZARRO MOYA, EDUARDO.
# PRESENCIA DE PROTEOSOMAS EN ESPERMATOZOIDES DE
MAMIFEROS, En: 13 REUNION ANUAL DE LA SOCIEDAD CHILENA DE
REPRODUCCION Y DESARROLLO. LA SERENA, CHILE. 20020815-20020817.
# Autores Asociados al Proyecto
# MORALES RETAMAL, PATRICIO JOSE.
Autores No Asociados al Proyecto
# MOYA-MENDEZ, E
# PASTEN RAMOS, MARIA CONSUELO
# PIZARRO MOYA, EDUARDO.
# ROLE OF THE SPERM PROTEASOME DURING IN VITRO FERTILIZACION
IN THE MOUSE, En: 59 ANNUAL MEETING OF THE AMERICAN SOCIETY
FOR REPRODUCTIVE MEDICINE. 20031011-20031015. FERTILITY AND
STERILITY, VOL.80 (3) 203.
# Autores Asociados al Proyecto
# MORALES RETAMAL, PATRICIO JOSE.
Autores No Asociados al Proyecto
CONICYT: Repositorio Institucional: Ficha de Iniciativa de CIT (Ciencia, Tecnologa e Innovacin) 7
# PASTEN RAMOS, MARIA CONSUELO.
# SPERM PROTEASOMES ARE INVOLVED IN HUMAN FERTILIZATION, En:
27 ANNUAL MEETING AMERICAN SOCIETY OF ANDROLOGY. SEATTLE,
ESTADOS UNIDOS DE AMERICA. 20020424-20020427.
# Autores Asociados al Proyecto
# MORALES RETAMAL, PATRICIO JOSE.
Autores No Asociados al Proyecto
# KONG, MILENE
# PASTEN RAMOS, MARIA CONSUELO
# PIZARRO MOYA, EDUARDO.
INFORME FINAL
# FUNCION DE LAS PROTEASAS TIPO QUIMOTRIPSINA Y EL
PROTEOSOMA EN LA REGULACION DE LA FISIOLOGIA ESPERMATICA
Y SU PARTICIPACION EN LA FECUNDACION EN MAMIFEROS, 2004. 16 p.
# Autores Asociados al Proyecto
# MORALES RETAMAL, PATRICIO JOSE.
MANUSCRITOS
# COMPARISON OF TWO TECHNIQUES TO EVALUATE THE ACROSOMAL
STATUS OF ZONA PELLUCIDA BOUND SPERM IN HUMANS, 15 p.
# Autores Asociados al Proyecto
# MORALES RETAMAL, PATRICIO JOSE.
Autores No Asociados al Proyecto
# PASTEN RAMOS, MARIA CONSUELO.
CONICYT: Repositorio Institucional: Ficha de Iniciativa de CIT (Ciencia, Tecnologa e Innovacin) 8
# DECREASED PROTEASOME ENZYMATIC ACTIVITY IN SPERM FROM
PATIENTS WITH GENETIC ABNORMALITIES OF THE HEAD-TAIL
JUNCTION AND ACEPHALIC SPERMATOZOA,
# Autores Asociados al Proyecto
# MORALES RETAMAL, PATRICIO JOSE.
Autores No Asociados al Proyecto
# CHEMES, H E
# DIAZ LOIS, EMILCE SILVINA
# PIZARRO MOYA, EDUARDO
# RAWE, V Y.
# EXTRACELLULAR LOCALIZATION OF PROTEASOMES IN HUMAN
SPERM,
# Autores Asociados al Proyecto
# MORALES RETAMAL, PATRICIO JOSE.
Autores No Asociados al Proyecto
# JARA, MARCOS
# KONG, MILENE
# PIZARRO MOYA, EDUARDO.
# FUNCION DEL PROTESOMA ESPERMATICO DURANTE LA
FECUNDACION Y DESARROLLO PREIMPLANTACIONAL EN EL RATON,
15 p.
# Autores Asociados al Proyecto
# MORALES RETAMAL, PATRICIO JOSE.
Autores No Asociados al Proyecto
# PASTEN RAMOS, MARIA CONSUELO.
CONICYT: Repositorio Institucional: Ficha de Iniciativa de CIT (Ciencia, Tecnologa e Innovacin) 9
# LOCALIZATION OF PROTEASOMES IN HUMAN SPERM, 13 p.
# Autores Asociados al Proyecto
# MORALES RETAMAL, PATRICIO JOSE.
Autores No Asociados al Proyecto
# JARA, MARCOS
# KONG, MILENE
# PIZARRO MOYA, EDUARDO.
# PROTEASOMAL ACTIVITY IN MAMMALIAN SPERMATOZA, 6 p.
# Autores Asociados al Proyecto
# MORALES RETAMAL, PATRICIO JOSE.
Autores No Asociados al Proyecto
# KONG, MILENE
# PASTEN RAMOS, MARIA CONSUELO
# PIZARRO MOYA, EDUARDO.
# PROTEASOMAL ACTIVITY IN MAMMALIAN SPERMATOZOA, 21 p.
# Autores Asociados al Proyecto
# MORALES RETAMAL, PATRICIO JOSE.
Autores No Asociados al Proyecto
# KONG, MILENE
# PASTEN RAMOS, MARIA CONSUELO
# PIZARRO MOYA, EDUARDO.
# ROLE OF THE SPERM PROTEASONE IN THE IN VITRO FERTILIZATION
IN MOUSE,
CONICYT: Repositorio Institucional: Ficha de Iniciativa de CIT (Ciencia, Tecnologa e Innovacin) 10
# Autores Asociados al Proyecto
# MORALES RETAMAL, PATRICIO JOSE.
Autores No Asociados al Proyecto
# KONG, MILENE
# PASTEN RAMOS, MARIA CONSUELO.
TESIS
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