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Sobre el crecimiento de mltiples nutrientes limitado de microorganismos,

Con especial referencia a la doble limitacin por sustratos de carbono y nitrgeno


Thomas Egli
Instituto Suizo Federal de Recursos Hdricos y Control de la Contaminacin del Agua (EAWAG), berlandstrasse
133,
CH-8600 Diibendorf, Suiza
Palabras clave: quimiostato, el rendimiento del crecimiento, la limitacin del crecimiento, la limitacin de
nutrientes mltiples, carbono, nitrgeno
Resumen:
Limitacin simultnea del crecimiento microbiano por dos o ms nutrientes se analiza para la doble
carbon/nitrogen- crecimiento limitado en cultivo continuo. Los lmites de la zona en la que se produce un
crecimiento de dos limitados pueden ser claramente definidas a partir de datos de cultivo y la composicin
celular y pueden ser tambin predecir a partir de datos de rendimiento de crecimiento medidos en
condiciones slo o en sustrato limitado. Se demuestra que para los dos nutrientes de carbono y nitrgeno de
la zona de la limitacin de nutrientes doble depende tanto de la relacin C: N de tasa (dilucin) el medio de
crecimiento y el crecimiento. El concepto de doble (carbono / nitrgeno) crecimiento limitado que aqu se
presenta se puede extender a otras combinaciones binarias y mltiples de nutrientes.
Introduccin
El uso de los medios de comunicacin mineral
definido para el crecimiento de los
microorganismos fue un acontecimiento
importante en microbiologa. En combinacin con
los avances en las tcnicas de cultivo, por ejemplo,
la cultura quimiostato, se permitido el crecimiento
reproducible de microbios en ambientes
seleccionados bajo condiciones definidas y para
estudiar los efectos de nutrientes especficos en
varios fenmenos fisiolgicos. Como general regla
general, los medios de comunicacin minerales
definidos se han formulado a fin de permitir que
los microbios de sintetizar su celular componentes
procedentes de fuentes individuales de carbono,
nitrgeno, fsforo, etc Adems, se hizo una
prctica comn para las concentraciones relativas
de los nutrientes individuales que se ajusta de
manera que, como formulado en la "ley del
mnimo" por Justus von Liebig (1840), slo uno de
ellos, por lo general el fuente de carbono, limita la
cantidad mxima de
biomasa que se podra producir, con todos los
dems nutrientes en exceso (Monod 1942;
Stephenson 1949)
En contraste con las condiciones que son microbios
expuesto a en cultivos de laboratorio , los
ambientes se encuentran en la naturaleza son
completamente diferentes . All, los microbios
tienen que hacer frente a tanto la presencia
simultnea y bajas concentraciones de una
multiplicidad de nutrientes homlogas , es decir ,
compuestos que puede satisfacer la misma funcin
fisiolgica . Esto es especialmente cierto para el
carbono , el nitrgeno y el fuentes de fsforo . De
hecho , se ha sealado que la presuncin de que la
limitacin del crecimiento de la Naturaleza est
limitada por un nico sustrato o nutrientes es
probablemente una suposicin errnea ( Veldkamp
y Jannasch 1972 ; Perla 1977 ) . Aunque se han
logrado progresos considerables en los ltimos
aos con respecto a la comprensin de la
crecimiento simultneo en cualquiera de dos
fuentes de carbono o dos receptores de electrones
( Harder & Dijkhuizen 1976 ; Harder & Dijkhuizen
1982 ; Egli et al . 1986 ; Robertson y Kuenen 1990 )
, ha habido pocos informes relativos a la limitacin
simultnea pormltiples nutrientes no homlogas ,
como se discutepor Harrison ( 1972 ) y Baltzis y
Fredrickson (1988).
En consecuencia, la mayora de los microbilogos
siguen apoyar la opinin de que slo un compuesto
puede ser que limita el crecimiento en un
momento determinado.
En esta prueba la contribucin de apoyo al ex
existencia de bien definida de mltiples sustrato
limitado-Se evaluarn los regmenes de
crecimiento. Debido a la escasez de datos,
ejemplos de la limitacin simultnea de
crecimiento por dos macro-nutrientes, carbono y
nitrgeno, se destac, pero se convertir en claro
que el principio de mltiples nutrientes limitados-
crecimiento es igualmente aplicable a una amplia
gama de otras limitaciones de nutrientes. La
influencia que la limitacin del crecimiento
simultneo de carbono y nitrgeno tiene sobre la
composicin celular y la fisiologa de las clulas se
ser examinada y una hiptesis de trabajo para el
crecimiento de mltiples nutrientes limitado de
microbios ser presentado.
El fenmeno de mltiples nutrientes
limitados- crecimiento
Primeros indicios de que el crecimiento del
fitoplancton puede ser limitado por varios
factores eran simultneamente re - portado
para los sistemas de agua dulce oligotrfico
(suma - mirse en Pearl 1977 ) . Con respecto a
los microorganismos - nismos , los datos
experimentales preliminares sugieren la
ocurrencia de limitacin simultnea de
crecimiento por dos nutrientes heterlogas se
inform por Cooney et al . ( 1976 ) para el
nitrgeno y fosfato rus , Hueting y Tempest (
1979 ) para el carbono y de nitrgeno y de
carbono y de potasio , Harrison ( 1972 ) y
Hamer et al . ( 1975 ) para la nutricin gaseosa
padres , y por Egli ( 1982 ) para el carbono y el
nitrgeno . Sin embargo , fue slo
recientemente , que la existencia de
un / rgimen de crecimiento limitado en
nitrgeno doble carbono
bajo condiciones de cultivo chemostat era
claramente demostrado tanto para bacterias y
levaduras en la base tanto de los parmetros
de la cultura y la fsica - caractersticas
metodolgicas de las clulas en crecimiento (
Egli y Quayle 1984 ; Egli y Quayle , 1986; Gr ~
izer Lampert et al . 1986 ; Minkevich et al .
1988 ; Duchars y Att- madera de 1989 ;
Rutgers et al . 1990 ) . Un ejemplo tpico de la
respuesta generalmente observada como una
funcin de la relacin C: N en el alimento
medio se ilustra en la figura . 1 para una
cultura de Hyphomicrobium ZV620 creciendo a
una di constante
tasa lucin de 0,054 h -1 en un quimiostato
con metadonanol/NH4 como las fuentes de
carbono / nitrgeno . En este experimentar la
concentracin del nitrgeno fuente ( NH4 + )
en el depsito de medio se mantuvo constante
a 223 mg l -l NH4 + - N, mientras que el con-
concentracin de metanol se incrementa de
forma gradual de 0.95gl -1 ( C : N = 1,6 ) a 12,4
g de 1 - L ( C : N = 20,85 ) . A juzgar por las
concentraciones residuales de metanol y NH4
la composicin celular y la sntesis de
enzimas + NH4 - asimilar , tres regmenes de
crecimiento distintas fueron reconocidos : -
Limitacin de metanol con presencia de
amoniaco estaba enexceso ( C: N < 7.1 )
- Limitacin de amonaco eran metanol era en
exceso ( C: N> 12.6 )
- Un rgimen de transicin donde ambos
metanol y NH4 + se encontraban por debajo
del lmite de deteccin ( 7.1 < C: N < 12,6 )
Llama la atencin que , aunque
aparentemente creciente nitrogeno limitado
en C: N> 7.1 , donde hay residual nitrgeno era
detectable , el peso seco de la calle tura
todava aument linealmente cuando el
carbono adicional sustrato se aadi al medio
de crecimiento (Fig. 1A ) . Cuando el
crecimiento se vio limitado por un solo
nutriente slo , las clulas mostraron
esencialmente una constante a lo largo - toda
la composicin celular con respecto a N , la
protena y el contenido de productos de
almacenamiento (Fig. 1B ) . dentro de la
composicin celular rgimen de crecimiento
transicin fue ex - depende extremadamente
de la relacin de los dos limitar sustratos y que
se ajust de acuerdo a la disponibilidad real de
los dos nutrientes que re - restringida la
sntesis de material celular . Se calcula que el
material de almacenamiento de poli - 13 -
hydroxybu - tyrate ( PHB ) sintetizado en estas
condiciones representado hasta el 90 % de la
biomasa adicional producida ( Grfizer -
Lampert et al . 1986 ) . generalizar - cin , se
puede concluir a partir de los datos de que
durante crecimiento limitado en carbono , el
contenido de protena y probablemente
tambin de los cidos nucleicos es alta y el
alma- contenido de los productos de edad es
baja, mientras que lo contrario es cierto para
las clulas cultivadas bajo limitacin de
nitrgeno . este hallazgo no es nuevo y se ha
informado de muchos Aunque los microbios ,
por lo que el autor es consciente , composicin
general de la celda siempre estaba implcito en
lugar


















La figura. 1. Composicin celular y enzimtica
de Hyphomicrobium ZV620 crecido con
metanol y NH4 en una quimiostato a una
temperatura constante
tasa de dilucin, D = 0,054 h ~, como una
funcin de la relacin carbono: nitrgeno en la
alimentacin [S0 (NH4 + - N) se mantuvo
constante, S0 (metanol) fue
aumento]. Abreviaturas: GS, la glutamina
sintetasa, GOGAT, glutamato sintasa; GDH,
glutamato deshidrogenasa; PHB, poli-[~ -
hidroxibutirato. Los datos de Grazer-Lampert
et al. (1986).

















que se muestra a ser independiente del medio
de C: N relacin. Como respuesta a las
condiciones de crecimiento descritos
anteriormente, la composicin de protenas de
las clulas de Hy-phomicrobium ZV620 no slo
se vio afectada quan-cuantitativamente, sino
tambin cualitativamente. Los datos de la
figura. 1C demuestran que en esta bacteria,
amoniaco fue asimilado principalmente a
travs de la baja afinidad de glutamato sistema
de deshidrogenasa bajo el exceso de nitrgeno
condiciones de crecimiento, mientras que, en
cuanto la disponibilidad capacidad de
amoniaco se convirti restringido, el alto af-
sistema sintetasa glutamina sintetasa finity /
glutamato se hizo cargo. Fue sorprendente ver
lo diferente que era la sntesis de las tres
enzimas implicadas regulada. Gdizer-Lampert
et al. (1986) tambin mostraron que no slo la
concentracin del total protena de la
glutamina sintetasa aument durante el
cambiar de condiciones de C a N-limitados,
pero tambin la fraccin de deadenylated, es
decir, glutamina activa sintetasa aument. Un
comportamiento muy similar con respecto a la
celda composicin y regulacin de la enzima
ha sido re-portado por la levadura Hansenula
methylotrophic po -lymorpha durante su
crecimiento quimiostato a una temperatura
constantetasa de dilucin de 0,10 h -1 con
medios que contienen dife -rentes C: N , donde
una transicin de C / N - limitadoSe observ
rgimen de crecimiento entre 12 < C: N <31 (
Egli y Quayle 1986 ) . Recientemente,
Minkevich etal. ( 1988 ) , utilizando el mismo
enfoque experimental ,informado de la
existencia de una doble carbon/nitro-rgimen
de crecimiento limitado - gen de la levadura
Candidavalidacin , Duchars y Attwood (1989)
para Hypho -microbium X , A1 - Awadhi et al . (
1990 ) para la el crecimiento de un
metilotrfica termotolerantes Bacil - lus sp. , y
Rutgers et al. ( 1990 ) para Klebsiella
pneumoniae . Todos estos autores observaron
una virtualmente
patrn idntico de comportamiento para el
com celular posicin de estos organismos
que la descrita anteriormentepara
Hyphomicrobium . De todo esto
experimentalpruebas para diferentes
microorganismos , se puedeconcluir que la
existencia de una transicin , es decir , unade
doble sustrato limitado - , rgimen de
crecimiento entredos zonas de un solo
nutriente limitado distintas, para
lascrecimiento es un fenmeno general .
Prediccin de la gama de doble sustrato
limitado- crecimiento
La aceptacin de la existencia del fenmeno
surge la pregunta de si el rango donde
crecimiento est limitado por las restricciones
en la disponibilidad de dos (o ms) los
nutrientes al mismo tiempo puede ser
predicho. De sus datos experimentales, Egli y
Quayle (1986) demostr que los bounderies de
los tres regmenes de crecimiento en un cierto
crecimiento fijo tasa podra predecir cuando
los rendimientos de crecimiento para se
conocen los sustratos individuales. La ecuacin
emprica para la concentracin de biomasa en
el cultivo (x), como primera propuesta por Egli
Y Quayle (1986) para el carbono dos y
nutrientes nitrgeno, se puede deducir de lo
conceptual esquema que se muestra en la
figura. 2, es decir,
x = (Co- c)" Yx/c = (no- n). YX/N (I)
donde CO y NO son las concentraciones de
carbono y nitrgeno en la alimentacin
quimiostato, c y n son el correspondiente
concentraciones residuales de los dos


La figura. 2. Diagrama conceptual que muestra
la dependencia de la rendimiento de
crecimiento de carbono (Yx / c) y nitrgeno (Yx
/ N) en el auto-Bon: la proporcin de nitrgeno
en el medio de crecimiento suministrado. Es
como-Sumed que el crecimiento se lleva a
cabo en un quimiostato en una constante tasa
de dilucin. Las concentraciones residuales de
carbono (C) y el nitrgeno (N) fuente,
respectivamente, en la cultura se muestran. El
rendimiento se da como biomasa seca
formada por g de elemento (Y ~, E). nutrientes
y Yx / C y Yx / N son el crecimiento de la
biomasa coeficientes de rendimiento sobre la
base de carbono y nitrgeno. Debido a que
tanto cyn aproximarse a cero en virtud de
carbono / crecimiento limitado en nitrgeno,
la ecuacin (1) puede ser re-escrito en
trminos de la relacin C: N en el flujo de
entrada de medio, es decir,
c (/ n0 = Yx / N / Yx / c

Suponiendo coeficientes de rendimiento
constante bajo una sola las condiciones de
crecimiento de sustrato limitada, el lmite
entre la limitacin de carbono y carbono /
nitrgeno limitacin puede calcularse por los
valores sustituyendo para YX / N y los valores
Yx / c mediciones realizadas en carbono las
condiciones de crecimiento limitadas en la
ecuacin (2). Simi-cialmente, YX sustituyendo /
N y Yx / c miden para nitro-
Tabla 1. Pronosticado y los lmites observados
experimentalmente para crecimiento de una y
de dos sustrato (carbono / nitrgeno) limitado
de Hyphomicrobium ZV620 con metanol y NH4
+ en una constante tasa de dilucin de 0.054 h
~ de la ehemostat.