Mus musculus como

modelo animal para

estudio de leucemias
Silvia Elena Snchez Mendoza
Estudiante de Doctorado
Programa de Oncologia Clinica, Celulas-Tronco e Terapia Celular
Faculdade de Medicina de Ribeiro Preto-Universidade de So Paulo
Clasificacin de las leucemias
Clasificacin de las lecucemias
Leucemia
Linaje Celular
Porcentaje de
Blastos
Linfoide Mieloide Crnica Aguda
http://www.cancer.gov/espanol/tipos/necesita-saber/leucemia/page3
Clasificacin de la OMG
Informacin
Morfolgica, citoqumica, inmunofenotpica
y gentica se conjugan com las
caractersticas clnicas del paciente para
definir el dignstico.
Clasificacin de la OMG
Informacin
Morfolgica, citoqumica, inmunofenotpica
y gentica se conjugan com las
caractersticas clnicas del paciente para
definir el dignstico.
Clasificacin de la OMG
Informacin
Morfolgica, citoqumica, inmunofenotpica
y gentica se conjugan com las
caractersticas clnicas del paciente para
definir el dignstico.
Clasificacin de la OMG
Informacin
Morfolgica, citoqumica, inmunofenotpica
y gentica se conjugan com las
caractersticas clnicas del paciente para
definir el dignstico.
Clasificacin de la OMG
Clasificacin de la OMG
Clasificacin de la OMG
Desarrollo de modelos animales
transgnicos a partir de Mus musculus
Algunas definiciones
Animal transgnico
Todo animal que posee genoma de otra especie o de la misma especie por
medio de la tecnologia de ADN recombinante.
Inbred
Individuos de una espcie en particular que son casi idnticos desde el punto
de vista gentico. Apareamiento por 20 generaciones.
C57BL/6J
129/SvImJ
BALB/cJ
Datos interesantes
Ratones y humanos comparten 95% de sus genes por lo cual los ratones son
modelos eficientes para el estudio de enfermedades humanas.
En 1929, Clarence Cook Little funda el Laboratorio Roscoe B. Jackson
Memorial en Bar Harbor, Maine.
Em 1933, ratones del Jackson Laboratory son vendidos por
primera vez a otras instituciones.
Tcnicas para produccin de animales
transgnicos
Inyeccin en proncleos.
Vectores virales.
Transferencia de DNA exgeno mediada por esperma durante la fertilizacin
(SMGT, sperm mediated gene transfer).
Inyeccin, en la cavidad de blastocistos, de clulas madre embrionarias
previamente modificadas genticamente mediante la tcnica de gene
targeting.
Transferencia nuclear.
Inyeccin en proncleos
Vectores virales
Sperm mediated gene transfer
Gene targeting
Gene targeting
http://ki.mit.edu/sbc/escell/services/details
129S1/SvIm
J
C57BL/6J
BALB/cJ
Gene targeting
http://www.addgene.org/13442/
Gene targeting: Knock-in
http://ki.mit.edu/sbc/escell/models/kno
ck
Gene targeting: Knock-out
http://ki.mit.edu/sbc/escell/models/kno
ck
Gene targeting: condiotional Knock-out
http://ki.mit.edu/sbc/escell/models/kno
ck
Transferencia nuclear
Modelo doble knock-in de leucemia
mieloide aguda
Mutacin Mll PTD
Mll -> Mixed lineage leukemia
Es uma duplicacin parcial em tandem (Partial Tandem Duplication)
dentro del marco de lectura de los exones 5 a 11.
La insercin puede producirse antes del exon 11 o 12 12.
Nature Reviews Cancer 7, 823-833 (November 2007)
Mutacin Mll PTD
Presente em 4-7% de los pacientes com leucemia mieloide aguda y cariotipo
normal.
Considerada de mal pronstico.
El gen Mll codifica uma protena de unin al ADN.
En modelo in-vitro, regula la expresin de algunos genes HOX mediante
modificaciones de regiones cis regulatorias:
Acetilacin de histonas H3/H4.
Metilacin de lisina 4 en H3.
Mutacin Flt3 ITD
La mutacin es una duplicacin interna en tandem (3-400 pb) en el dominio
juxtamembrana del receptor Flt3.
http://asheducationbook.hematologylibrary.org/content/2006/1/178/F1.expansion
Ratn knock-in Mll PTD
15 clulas madre embrionarias fueron inyectadas en blastocistos de 3,5 das
de edad en hembras C57BL/6.
Ratn knock-in Flt3 ITD
Ratn doble knock-in Mll PTD y Flt3 ITD
Fmeas
C57BL/6J
Flt3
WT:ITD
Machos BALB/cJ
Flt3
WT:ITD
Mll
WT:PTD
Mll
WT:PTD
Flt3
WT:ITD
Mutacin Mll PTD
Ratones con mutacin Mll PTD presentan:
Alteracin de los lmites normales de expresin de genes homeobox
(Hoxa9) durante la embriognesis.
Mutacin Mll PTD
Ratones con mutacin Mll PTD presentan:
Defectos del esqueleto axial.
Mutacin Mll PTD
Ratones con mutacin Mll PTD presentan:
Nmero aumentado de clulas hematopoyticas progenitoras.
BFU-E:
burst forming unit-erythroid
GEMM-CFU:
granulocyte, erythroid cell,
monocyte, and megakaryocyte
colony forming unit
GM-CFU:
granulocyte/macrophage
colony forming unit
Mutacin Mll PTD
Ratones con mutacin Mll PTD presentan:
Aumento de la expresin de genes Hoxa7, Hoxa9 e Hoxa10 en mdula
sea, bazo y sangre perifrica.
Mutacin Flt3 ITD
Ratones con la mutacin Flt3 ITD presentan:
Una enfermedad mieloproliferativa parecida a Leucemia Mielomonoctica
Crnica.
Mac-1: monocitos y granulocitos. Gr-1: granulocitos.
Mutacin Flt3 ITD
Ratones con la mutacin Flt3 ITD presentan:
Nmero aumentado de clulas madre multipotentes y clulas progenitoras (LSK Lin
-
Sca1
+
ckit
+
).
GMP: granulocyte-
monocyte progenitors
MEP:
megakaryocyteerythroid
progenitors
CMP: Common myeloid
progenitor
Mutacin Flt3 ITD
Ratones con la mutacin Flt3 ITD presentan:
Nmero aumentado de clulas madre multipotentes y clulas progenitoras
(LSK Lin
-
Sca1
+
ckit
+
).
GMP: granulocyte-
monocyte progenitors
MEP:
megakaryocyteerythroid
progenitors
CMP: Common myeloid
progenitor
Mutacin Flt3 ITD
Ratones con la mutacin Flt3 ITD presentan:
Nmero aumentado de clulas madre multipotentes y clulas progenitoras
(LSK Lin
-
Sca1
+
ckit
+
).
GMP: granulocyte-
monocyte progenitors
MEP:
megakaryocyteerythroid
progenitors
CMP: Common myeloid
progenitor
Mutacin Flt3 ITD
Ratones con la mutacin Flt3 ITD presentan:
Aumento de proporcin de clulas LSK em fase S/G2/M.
Mutacin Flt3 ITD
Ratones con la mutacin Flt3 ITD presentan:
Disminucin de la apoptosis en clulas LSK y clulas progenitoras.
Modelo Mll
PTD:WT
Flt3
ITD:WT
Modelo Mll
PTD:WT
Flt3
ITD:WT
Modelo Mll
PTD:WT
Flt3
ITD:WT
Modelo Mll
PTD:WT
Flt3
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Modelo Mll
PTD:WT
Flt3
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Modelo Mll
PTD:WT
Flt3
ITD:WT
Modelo Mll
PTD:WT
Flt3
ITD:WT
Modelo Mll
PTD:WT
Flt3
ITD:WT
1. DNA de camundongos de 4 semanas
de idade extrado da cauda para
genotipagem.
2. DNA extrado do MO antes do
sacrifcio (50-80 semanas de
idade).
3. Blastos AML de transplante
secundrio.
Modelo Mll
PTD:WT
Flt3
ITD:ITD
Modelo Mll
PTD:WT
Flt3
ITD:ITD
Modelo Mll
PTD:WT
Flt3
ITD:ITD
Gracias por la atencin