Gua de Trabajos Prcticos

Recopilacin y edicin: Daniela Martinis, Pamela Barrios

Universidad Catlica de Salta
Facultad de Ciencias Veterinarias
Carrera: Mdico Veterinario
Ctedra: Bioqumica
2012
d!unto: "ra# en Cs# Veterinarias "aniela S# Martinis

u$iliar: M#V# Marcelo Farias
Micro%# Mara &ulia Vaira
Brom# Maria del 'ilar Corne!o
(udante dscri)to: M#V# 'amela Barrios

DOCENTES:
+ema:
Meta%olismo de 'rotenas
Ctedra: Bioquimica
Tema: Digestin de Proteinas
2012
Metabolismo de protenas y aminocidos
A diferencia de los carbohidratos y grasas que sirven principalmente como fuentes de
energa, y pueden almacenarse en las clulas, los compuestos nitrogenados resultan indispensables
para la sntesis de estructuras celulares o compuestos de alta actividad biolgica y no son
susceptibles de almacenamiento.
Cuando existe exceso de oferta de sustancias nitrogenadas pueden usarse para producir
energa. Esta funcin energtica es totalmente secundaria y reemplaable !con venta"as# por gl$cidos
y grasas. En cambio la participacin en sntesis de componentes celulares, de hormonas y otras
sustancias es una funcin insustituible.
%ara los monog&stricos, la principal fuente de sustancias nitrogenadas son las protenas
alimentarias.
Como estas sustancias no se almacenan, sus niveles en las clulas se regulan por un
equilibrio entre biosntesis y degradacin, es decir un equilibrio entre anabolismo y catabolismo, que
se conoce como balance nitrogenado. En animales adultos normales, la ingesta de nitrgeno se
equilibra por la eliminacin en orina y heces. En animales "venes y hembras gestantes el nitrgeno
ingerido debe superar al que se excreta, el exceso retenido se utilia en sntesis de nuevos
constituyentes. 'e habla en estos casos de balance nitrogenado positivo. %or otra parte en casos de
desnutricin proteica, en diabetes no controlada, en ciertas neoplasias etc., la excrecin de nitrgeno
supera a la ingesta, esa situacin corresponde a un balance nitrogenado negativo.
(urante la digestin, las protenas de la dieta son hidroliadas por enimas proteolticas hasta
sus amino&cidos constituyentes. )uego de su absorcin en intestino, los amino&cidos son
transportados por sangre a los te"idos, en los cuales pueden utiliarse en sntesis de protenas o
transformarse para dar lugar a compuestos de actividad fisiolgica, en menor cuanta se degradan
con fines energticos.
En sangre circulante y en las clulas, los amino&cidos ingresados con la alimentacin se
confunden con los sintetiados en las clulas !sntesis particularmente activa en hepatocitos# y con
los procedentes de la degradacin de protenas titulares !de protenas constituyentes que sufren
permanentes recambios#. Existe as, un con"unto de amino&cidos libres en el organismo, amino&cidos
de variada procedencia que constituyen un *fondo com$n+ !*pool+# al que los organismos acuden
cuando deben sintetiar una protena o compuestos relacionados, y al que se suman los amino&cidos
sintetiados por las clulas, los originados por la degradacin de protenas titulares o los ingresados
por los alimentos.
El destino m&s importante de los amino&cidos es su incorporacin a cadenas proteicas
durante la biosntesis de protenas especficas para el organismo, en segundo lugar, muchos
amino&cidos se utilian para la sntesis de compuestos nitrogenados no proteicos !,,%# de
importancia funcional y finalmente, los amino&cidos en exceso cuando no pueden almacenarse se
utilian con fines energticos. El grupo amino se desprende en forma de amonaco y se elimina
principalmente como urea. )as cadenas carbonadas siguen diferentes rutas que las llevan a alimentar
el ciclo de -rebs, para producir energa. Alternativamente, dichas cadenas pueden ser derivadas a las
vas glucognicas !amino&cidos glucognicos# o de sntesis de &cidos grasos o cuerpos cetnicos
!amino&cidos cetognicos#.
Destinos de los aminocidos
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Tema: Digestin de Proteinas
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Catabolismo de los aminocidos
)os amino&cidos generalmente, inician su degradacin por procesos que separan el grupo .
amino. As, el resto nitrogenado sigue un camino independiente del de la cadena carbonada.
En primer lugar, el grupo amina se transfiere !/ransaminacin# y luego se separa
!(esaminacin#, quedando libre, formando amonaco !,01#. Esta sustancia, txica para el ',C, ran
por la cual se desarrollaron sistemas eficientes para eliminarla. El hgado es el rgano encargado e
transformar el amonaco en un compuesto soluble y atxico, llamado urea, que se vehiculia en
sangre hasta el ri2n, que la excreta por orina. Es el principal producto terminado del metabolismo
nitrogenado.
Transaminacin
Comprende la transferencia del grupo . amino de un amino&cido a un . ceto&cido. El
amino&cido se convierte en un ceto&cido, y el ceto&cido aceptor del grupo amina, en el amino&cido
correspondiente.
Este tipo de reaccin, f&cilmente reversible, es cataliada por enimas llamadas
transaminasas o aminotransferasas, que usan como coenima al piridoxal fosfato, que constituye su
grupo prosttico.
Ecuacin general
aminocido cetocido cetocido aminocido
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)a reaccin de cada amino&cido es cataliada por una enima especfica, cuyo nombre
describe los compuestos que participan en la transferencia, por e"emplo la glut&mico oxalactico
transaminasa !34/#, tambin llamada aspartato aminotransferasa !A'/#
Existen dos transaminasas, particularmente abundantes en hgado y coran, por lo que se
utilian como herramienta diagnstica en patologas como hepatitis e infarto de miocardio, son
aspartato aminotransferasa !A'/ o 34/# y alanina aminotransferasa !A)/ o 3%/#. A excepcin de
lisina y treonina, todos los amino&cidos participan en reacciones de transaminacin con piruvato,
oxaloacetato o . cetoglutarato.
En las transaminaciones, el grupo amina que se desprende del amino&cido no es eliminado
sino que, se transfiere a un ceto&cido para formar otro amino&cido. %or esta ran, estas reacciones
no solamente sirven para degradar los amino&cidos, de"ando la cadena carbonada libre de nitrgeno,
sino que representan una va de sntesis de nuevos amino&cidos.
Desaminacin
Como el . cetoglutarato es el sustrato m&s frecuente en las transaminaciones, en general se
produce m&s frecuentemente el amino&cido glutamato. A partir del glutamato, el grupo nitrogenado
puede ser separado, para generar amonaco. Al p0 reinante en las clulas, el amonaco !,01# capta
un protn y en su casi totalidad se presenta como in amonio !,05#. Esta reaccin es reversible.
Vas Metablicas del Amonaco
)a principal fuente de amonaco de los organismos es la (esaminacin del glutamato.
/ambin se produce una cantidad considerable de amonaco a partir de la flora intestinal sobre los
restos de alimentos nitrogenados. Este amonaco se absorbe y vehiculia por la circulacin portal.
,ormalmente, el amonaco que llega se elimina en el hgado de manera muy eficiente. Esto es muy
importante, ya que el amonaco es txico y afecta principalmente al ',C, produciendo una
intoxicacin, que puede llevar al coma y a la muerte.
Como ya vimos, la casi totalidad del amonaco se convierte en amonio, solo un 67 del total
permanece como ,01, que es una molcula neutra, que atraviesa libremente las membranas
celulares, mientras el ,05, no puede hacerlo.
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8na de las vas m&s importantes de eliminacin del amonaco es la sntesis de urea, otro
mecanismo es la formacin de glutamina.
Formacin de glutamina
Es una reaccin pr&cticamente irreversible, tiene importancia funcional en el cerebro,
formando un compuesto inocuo que f&cilmente difunde hacia la sangre, tambin se forma en ri2n. )a
glutamina, puede hidroliarse a glutamato y amonaco por un proceso diferente al de su sntesis, ya
que este $ltimo es un proceso irreversible9 reaccin cataliada por la glutaminasa, que se encuentra
en hepatocitos y t$mulos renales, donde la produccin de amonaco y su eliminacin en forma de
sales de amonio es uno de los mecanismos de regulacin del equilibrio &cido:base y para las
conservacin de cationes.
8na reaccin similar a la de la glutaminasa es cataliada por al asparraginasa, que hidrolia
la asparragina a aspartato y amonaco.
Formacin de urea
El principal rgano productor de urea es el hgado. 'e realia a travs de un Ciclo metablico
descrito por -rebs y 0enseleit, en 6;1<, conocido como Ciclo de la urea.
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)as dos primeras etapas del Ciclo de la urea se cumplen dentro de las mitocondrias, el
amonaco proviene de la (esaminacin oxidativa del glutamato, y ambos grupos nitrogenados
provienen de cualquier amino&cido que participe en las transaminaciones. El fumarato liberado es un
intermediario del Ciclo de -rebs.
El oxaloacetato generado puede=
Condensarse con Acetil CoA para ingresar en el Ciclo de -rebs
Convertirse en fosfoenolpiruvato !para ingresar a
gluconeognesis#
>ormar aspartato por transaminacin para seguir alimentando
el ciclo de la urea.
El ciclo de la urea y el del &cido ctrico est&n interconectados de esta manera, y el
funcionamiento del segundo motoria al primero.
)a urea es una sustancia soluble que f&cilmente difunde por las membranas celulares, se
encuentra en la sangre circulante en una concentracin que vara con la especie !caninos hasta ?@
mg 7#, esos niveles aumentan en casos de insuficiencias renales, cuando falla el sistema de
excrecin, en estos casos se habla corrientemente de uremia.
Destino del esqueleto carbonado de los aminocidos
(iferentes experimentos permitieron diferenciar ciertos amino&cidos, algunos son utiliados
para generar glucosa, mientras que otros cuerpos cetnicos, as, se clasifican en amino&cidos
glucognicos o cetognicos. Es interesante destacar que casi todos los amino&cidos no esenciales
son glucognicos, lo que indicara que la conversin de estos amino&cidos en glucosa es un proceso
reversible !es decir que pueden sintetiarse sus esqueletos carbonados a partir de la glucosa#. %or
otra parte los amino&cidos esenciales son cetognicos, pero no se produce el proceso inverso.
Aminocidos glucognicos= alanina, arginina, aspartato, cistena, cistina, glicina, glutamato,
histidina, 0idroxiprolina, %rolina, Aetionina, serina, treonina y Balina.
Aminocidos cetognicos= leucina y lisina.
Aminocidos gluco y cetognicos= >enilalanina, Csoleucina, /irosina y /riptfano.
)as vas degradativas que siguen los amino&cidos varan seg$n las naturaleas de las cadenas. (e
acuerdo a esto, los amino&cidos pueden separarse en los siguientes grupos.
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Descarboxilacin
Ciertas bacterias y te"idos poseen enimas que catalian la (escarboxilacin de los
amino&cidos. Esta reaccin da lugar a la formacin de aminas biolgicas, sustancias que poseen
intensa actividad farmacolgica o forman parte de la putrefaccin de protenas por accin de enimas
bacterianas. El piridoxal fosfato es la coenima de estas descarboxilasas.
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(e la (escarboxilacin del amino&cido /riptfano obtenemos triptamina, que "unto con
tiramina son aminas vasoconstrictoras, de dicho proceso de &cido glut&mico se forma &cido gamma
amino butrico, preferentemente en la sustancia gris del ',C, un compuesto muy importante,
regulador de la actividad neuronal, act$a como inhibidor o depresor de la transmisin del impulso
nervioso.
Transerencia de restos monocarbonados
)os grupos monocarbonados forman un con"unto de fragmentos molecuylares,
frecuentemente transferidos en procesos de sntesis de estructuras qumicas m&s o menos
comple"as. (ichos restos de 6 carbono no pueden encontrarse en distinto grado de oxidacin, como
metilo !C01:#, hidroximetilo !:C0<40#, formilo !:C4.0# dixido de carbono !C4<#. El principal
donante de metilos es el amino&cido Aetionina. Ello es $nicamente posible cuando la Aetionina se
encuentra en forma *Activada+, para lo cual debe reaccionar con A/% y formar ' : Adenosil Aetionina
!'AA#. )a 'AA es la forma activa de la Aetionina. )a unin entre el metilo y el aufre es una unin de
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alta energa, lo que explica la labilidad del grupo metilo y su capacidad para intervenir en ciertas
reacciones. Estas reacciones son cataliadas por metil /ransferasas especficas en cada caso.
!as metablicas de aminocidos
Adem&s de los procesos ya mencionados, cada amino&cido puede seguir vas que le son
especficas y dar origen a diferentes productos. ,o realiaremos ac& un estudio exhaustivo de cada
una de dichas vas, m&s que nada por la extensin y comple"idad del estudio de dichas
transformaciones bioqumicas. %resentaremos algunos e"emplos de mayor importancia.
Metabolismo de "enilalanina y Tirosina
%or su parecido estructural, estos dos amino&cidos se consideran en con"unto.
)os organismos animales no poseen capacidad para sintetiar el anillo bencnico, por lo que
este debe ingresar preformado con los alimentos, una de las principales fuentes de dicho anillo son
los amino&cidos >enilalanina y /irosina de las protenas.
)a >enilalanina puede convertirse en /irosina en el hgado. )a inversin del proceso no es
posible. %or esta ran la >enilalanina es un amino&cido esencial mientras que la /irosina no lo es. )a
mayor parte de la >enilalanina se metabolia previa transformacin en /irosina. 4tras vas
metablicas llevan a la produccin de sustancias de gran actividad fisiolgica, como las
catecolaminas adrenalina, noradrenalina y dopamina.
A partir de (4%A se produce la melanina, pigmento de color pardo negruco. /ambin la tiroxina,
hormona de la gl&ndula tiroides, a considerarse en el captulo de hormonas.
Metabolismo del Triptano
'olo mencionaremos algunas vas de especial inters.
8na de las vas que puede seguir el amino&cido /riptfano es su hidroxilacin en el C? para
formar ? hidroxi: /riptfano, en una segunda etapa se descarboxila para formar ? D hidroxi:triptamina
tambin llamada serotonina o trombocitina.
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)a serotonina es un poderoso vasoconstrictor y estimulante de la contraccin del m$sculo
liso. /iene accin sobre el metabolismo cerebral, debe producirse en el mismo cerebro, ya que la
serotonina no atraviesa la barrera hemato encef&lica. 8n exceso de serotonina produce estimulacin
de la actividad cerebral, mientras que la deficiencia produce un efecto depresor.
/ambin se forma melatonina a partir de serotonina. Eloquea la accin de la hormona
melanocito estimulante y de la adrenocorticotrofina.
&cido nicotnico es una vitamina del comple"o E que participa en la constitucin de las
molculas de ,A( y ,A(%. El &cido nicotnico se forma a partir de /riptfano.
Sntesis de Creatina
)a creatina es una sustancia presente en m$sculo, cerebro y sangre, en forma libre y unida a
fosfato, formando fosfocreatina.
Arginina, glicina y Aetionina se involucran en la biosntesis de creatina. )a creatina se
convierte en creatinina por deshidratacin. )a creatinina libre se halla en sangre y orina. Al parecer, la
formacin de creatinina es un paso previo para la eliminacin de la creatina.
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MET#$O%&SMO DE %#S '(OTE)N#S
E"ercitacin sobre reacciones comunes del metabolismo de amino&cidos y protenas en
diferentes especies animales.
6. Aecanismo de las reacciones de transaminacin ! formacin de Eases de 'chiff#
<. Escribir las frmulas correspondientes a las reacciones cataliadas por las enimas A)A/!3%/# y
A'A/!34/#.
1. Escribir las reacciones de formacin de cadaverina y putrescina . qu tipo de reacciones sonF
5. Cu&les son los aa precursores de las siguientes aminas bigenasF= histamina, tiramina y
triptaminaF
?. Cu&l es la funcin de la ' : adenosil metioninaF. Esquematiar su estructura.
G. Hu es una reaccin de transpeptidacinF. Escribir la ecuacin correspondiente a la formacin
de glutatin.
I. Esquematiar el metabolismo de triptofano, fenilalanina e histidina.
J. Crucigrama
Horizontales:
<.:Krgano mayoritario de
metaboliacin de los
amino&cidos en los
mamferos.
5.:%recursor de la urea en
ciclo de -rebs.
;.:Amino&cido ba"o el cual
se puede almacenar y
transportar el grupo amino
de los amino&cidos, en
situaciones de exceso de
ion amonio.
6@.:Abreviatura de un
intermedio com$n a las
biosntesis de melaninas y
de catecolaminas a partir de
tirosina.
6<.:Compuesto intermedio
de adicin que se forma
tanto en la unin de la
enima al fosfato de
piridoxal como de la
coenima al sustrato !alfa:
amino&cido# en la reaccin
de transaminacin !dos
palabras#.
61.:,ombre trivial de la
enima que catalia la
hidrlisis del grupo amida de
la glutamina para liberar ion
amonio.
65.:Amino&cido que se
degrada exclusivamente a
acetilCoA.
6I.:Compuesto que se
forma cuando un alfa:
amino&cido pierde su grupo
amino durante el recambio
normal !dos palabras#.
<@.:Leaccin de eliminacin
del grupo amino del
glutamato por oxidacin con
,A(!%#M cataliada por
glutamato deshidrogenasa.
<<.:Amino&cido que en
mamferos no se puede
sintetiar endgenamente.
<1.:Amino&cido que una ve
descarboxilado origina
dopamina, adrenalina y
noradrenalina.
<5.:Caracterstica general
del metabolismo de
amino&cidos por la que los
mismos se encuentran
sometidos a una continua
sntesis y degradacin
Verticales:
1. Ba metablica cclica que
los mamferos poseen para
la eliminacin del nitrgeno
proteico como urea !dos
palabras#.
3. Amino&cido del ciclo de la
urea que desempe2a el
papel de transportador del
nitrgeno en el ciclo.
5. Amino&cido que en su
degradacin conduce a
intermedios de la va
glicoltica o del CA/.
6. Amino&cido que aporta
uno de los nitrgenos a la
urea y que sirve de unin
entre el ciclo de la urea y el
de los &cidos tricarboxlicos.
7. )ugar de la clula
hep&tica de mamferos
donde transcurre la reaccin
de transaminacin.
8. Amino&cido que a$n no
siendo ni precursor de la
urea ni intermedio del ciclo
de la misma participa en el
transporte del aspartato de
la mitocondria al citosol.
11. (esorden metablico:
gentico producido por una
deficiencia de la fenilalanina
hidroxilasa !dos palabras#.
15. Cnhibidor competitivo de
una enima participante en
la sntesis de corismato y
que se emplea como un
herbicida muy efica.
16. Clula epidrmica
cancerosa en donde se
sobreexpresa la sntesis de
melaninas.
18. %igmento responsable
de la coloracin de la piel.
19. %recursor com$n en la
biosntesis de Ala, Bal, y
)eu.
21. Abreviatura de la
coenima de la vitamina EG,
ba"o la forma de aldehdo.
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1



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O

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