Objetivo: Conocer las tcnicas bsicas para el anlisis

microbiolgico del suelo

1) Normas prcticas para el muestreo de suelo
2) Tcnicas para el cultivo de microorganismos
3) Tcnicas de observacin al microscopio
4) Mtodos de aislamiento y conservacin
PRCTICO N 1
Tcnicas para el estudio de microorganismos del suelo
1) Diseo de muestreo:
Cantidad de muestras: topografa y heterogeneidad del lote
Forma de muestreo: cultivo, sistema de labranza
Profundidad: 0 20 cm

2) Acondicionamiento de las muestras

3) Preparacin de las muestras en laboratorio

Normas prcticas para el muestreo de suelo
Cantidad de muestras: topografa y heterogeneidad del lote
15 Submuestras = 1 Muestra
Loma
Medialoma
Bajo
Imagen Satelital
Mapa de Rendimiento Mapa de Ambientes
Agricultura de Precisin
Elementos de muestreo
Barreno Hidrulico Pala Barreno Manual
Forma de muestreo: cultivo y sistema de labranza
Siembra directa Labranza convencional
Rastrojo de maz Rastrojo de soja
Suelo laboreado
Forma de muestreo: profundidad
0 cm.
20 cm.
Acondicionamiento de las submuestras
~200 g.
Preparacin de las muestras en laboratorio
Oreado
Tamizado
Embolsado y
Rotulado
Conservacin
Mnimo 24 hs.
Requerimientos para el cultivo de microorganismos en laboratorio:


1) Condiciones de asepsia: esterilizacin

2) Medios de cultivos

3) Condiciones ambientales

Tcnicas para el cultivo de microorganismos
Condiciones de asepsia: esterilizacin
Esterilizacin: eliminar todos los organismos vivos

Mtodos de esterilizacin:
Calor: hmedo y seco
Radiacin
Filtracin
Productos qumicos
Calor hmedo: Autoclave
A gas con regulacin manual
Elctrica con
regulacin automtica
Combinacin de calor, presin y humedad
Para sustancias acuosas
Temperatura de esterilizacin: 121C - 20 minutos

Temperatura de esterilizacin: 160 C
Tiempo: 2 hs

Calor seco: Horno de esterilizacin
Para materiales estables al calor
(vidrio, metal, porcelana etc.)

Vista exterior
Vista interior

Otros mtodos de esterilizacin

Filtracin: soluciones
lbiles
Agua Oxigenada
Alcohol etlico
Hipoclorito
Formol
Bicloruro de mercurio

Radiacin UV: superficies,
aire y agua

Productos qumicos: mesada,
manos, tapones, etc.
Filtro
Medios de cultivos
Definicin: mezcla balanceada de requerimientos nutritivos para el
crecimiento de microorganismos

Tipos:
Generales
Selectivos

Composicin qumica: fuente de carbono, fuente de nitrgeno,
fuente de energa, base mineral y factores de crecimiento

Caractersticas: lquidos o slidos: agentes solidificantes
Composicin de medios de cultivos
FUENTE COMPUESTO CANTIDAD
Fuente de
C y
energa

Sucrosa

20 g




Base
mineral
Fosfato di potsico 0.05 g
Fosfato
monopotsico
0.15 g
Cloruro de calcio 0.01 g
Sulfato de
magnesio
0.2 g
Molibdato de sodio 0.002 g
Cloruro frrico 0.01 g
Carbonato de
calcio
0.1 g
Agua Agua destilada 1000 ml
pH = 7
FUENTE COMPUESTO CANTIDAD
Fuente de C
y energa
Almidn 12 g
Fuente de N NO3 Na 0.5 g

Base
mineral
PO4 HK2 1.0 g
SO4 Mg 7 H2O 0.5 g
Agente
solidificante
Agar 15 g
Agua Agua destilada 1000 ml
pH = 7
Medio selectivo: Fijadores de Nitrgeno
Medio general
Preparacin de medios de cultivo
encender
colocar recipiente para
pesar
tarar
colocar el componente
a pesar registrar la
lectura
Pesar componentes slidos:
Disolver con agua destilada: hidratar
componentes slidos agregar agua
disolver
Regular pH: pHmetro

soluciones reguladoras encendido y lavado lectura
lavado del electrodo
proteccin del electrodo
Preparacin de medio slido
agregar agar
fundir al calor
medio lquido
medio agarizado
Fraccionar y acondicionar para esterilizar
Fraccionamiento de
medio lquido
Fraccionamiento de
medio slido
(en caliente)
Acondicionado
para esterilizar
Esterilizar en autoclave
Medios en Pico de flauta
Visualizacin de microorganismos: porta objeto enterrado
Suelo en estudio
Portaobjeto enterrado
Riego
Incubacin
Cultivo de microorganismos del suelo en medio lquido
Incubacin
Siembra
Dilucin
Muestreo
de suelo
Cantidad
de
muestras
Composicin
Profundidad
Tamao del
lote
Topografa
Una muestra
n submuestras
0-20 cm.
con
rastrojos
Preparacin de muestras en laboratorio
Oreado Tamizado Envasado y Rotulado Conservacin en heladera
Guardar en
conservadora
Laboratorio
Esterilizacin

Autoclave - horno
Radiacin
Filtracin
Productos qumicos
Medio de cultivo Observacin
Aislamiento
Prctico 2
Composicin qumica

Base mineral
Fuente de carbono
Fuente de energa
Agua

Preparacin de medios
Lquidos

Pesar drogas
Disolver con
agua destilada
Regular pH
Fraccionar
Slidos

Pesar drogas
Disolver con agua destilada
Regular pH
Agarizar
Fundir
Fraccionar

Esterilizacin en autoclave
Siembra de suelo
Incubacin
Prctico 1
Actividades
1) Preparacin de muestras de suelo en laboratorio:
tamizar, embolsar y rotular.

2) Visualizacin de microorganismos de suelo:
enterrar un portaobjeto.
3) Cultivo de microorganismos de suelo: colocar una
alcuota de suelo en medios general y selectivo enterrar
un portaobjeto.
4) Visita al Laboratorio de Microbiologa Agrcola F.C.A