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bioblot

BIOKIT, S.A. - Can Mal s/n - 08186 Lli dAmunt - Barcelona - SPAIN 3000-1474 R06 08.2012 spa.doc
0843

bioblot HCV
3000-1474 18 tests
Ensayo inmunoenzimtico cualitativo para la deteccin de anticuerpos IgG frente al virus de la Hepatitis C
en suero o plasma humanos. Su uso previsto es como anlisis complementario ms especfico para
muestras de suero o plasma humanos que presentan reactividad repetida utilizando procedimientos de
cribado como la tcnica de ELISA.

Sumario
El HCV se ha identificado como el principal agente causante de hepatitis no-A, no-B (NANB) de transmisin
parenteral. Existe actualmente una amplia disponibilidad de pruebas de cribado para el diagnstico de la infeccin
por Hepatitis C. Dichos anlisis tpicamente incluyen antgenos de la regin estructural (Core) as como uno o ms
antgenos especfico de regiones no estructurales del virus (NS3, NS4, NS5). Las muestras, que presentan
reactividad repetida utilizando procedimientos de cribado, requieren anlisis de confirmacin de seropositividad de
HCV ms especficos, dado que los actuales mtodos de cribado de ELISA HCV pueden dar lugar a falsos
positivos.

El uso previsto del kit bioblot HCV es como anlisis complementario ms especfico para muestras de suero o
plasma humanos que presentan reactividad repetida utilizando el ensayo ELISA. Es una prueba enzimtica de
inmunoblot que incorpora en la misma tira cuatro protenas recombinantes del HCV provenientes del ncleo y
de las regiones NS3, NS4 y NS5 del genoma del HCV. Cada tira incluye tambin un control interno de adicin de
muestras para reducir al mnimo el riesgo de falsos negativos debidos a errores operativos y para garantizar la
adicin de las muestras. Los posibles perfiles serolgicos definidos por el bioblot HCV son los siguientes: HCV
seropositivo, HCV seronegativo e indeterminado.

Principio
Las tiras de nitrocelulosa contienen protenas recombinantes de HCV, del Core y de las regiones NS3, NS4 y
NS5 del genoma vrico. Estas protenas estn expresadas como protenas de fusin a la protena GST. Por este
motivo se ha incluido en la tira una banda de control GST para detectar reactividad a la GST nativa. Las tiras
tambin contienen una banda control de IgG y anti-IgG. Las tiras de nitrocelulosa se incuban individualmente
con el suero o plasma diluido de las muestras y controles. Los anticuerpos frente al HCV si estn presentes, se
unirn a las protenas del HCV presentes en la tira. Las tiras se lavan para eliminar el material que no se ha
fijado y posteriormente se incuban con anti-IgG humana de cabra purificada por afinidad conjugada con
fosfatasa alcalina. El anticuerpo conjugado se unir a cualquier complejo antgeno-anticuerpo formado en los
blots. El conjugado no unido se elimina mediante lavados. Las bandas de protenas reactivas se visualizan en
las tiras al aadir el sustrato BCIP/NBT.

Componentes
1. STRIPS TIRAS DE NITROCELULOSA:
18 tiras de nitrocelulosa que contienen antgenos recombinantes estructurales y no estructurales del HCV y
dos bandas de control de adicin (anti-IgG humana e IgG humana). Las tiras estn numeradas
consecutivamente del 1 al 18, o del 19 al 36. Mantener secas y al abrigo de la luz.

2. CONJ 1000x CONJUGADO CONCENTRADO:
1 x 120 l de anticuerpos de cabra anti-IgG humana conjugados con fosfatasa alcalina. Contiene azida sdica.

3. CONTROL CONTROL NEGATIVO:
1 x 80 l de suero humano inactivado negativo en anticuerpos frente a HCV, HIV-1, HIV-2 y en antgeno de
superficie de la hepatitis B (HBsAg). Contiene azida sdica y mertiolato sdico.

4. CONTROL + CONTROL POSITIVO:
1 x 80 l de suero humano inactivado conteniendo un elevado ttulo de anticuerpos frente al HCV. Negativo
en antgeno de superficie de la hepatitis B (HBsAg) y en anticuerpos frente a HIV-1, HIV-2 y HTLV-I/II.
Contiene azida sdica y mertiolato sdico.

5. WASH SOLN 20x SOLUCIN DE LAVADO CONCENTRADA:
1 x 70 ml de tampn Tris concentrado (20x). Contiene Tween 20 y mertiolato sdico.

6. BLOT BUF 10x TAMPN DE BLOTTING CONCENTRADO:
1 x 20 ml de tampn Tris concentrado (10x). Contiene suero de cabra normal inactivado por calor y mertiolato
sdico.

LEER CAMBIOS SOMBREADOS



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7. SUBS SUSTRATO:
1 x 100 ml de solucin de 5-bromo-4-cloro-3-indolil-fosfato (BCIP) y nitroazul de tetrazolio (NBT). Listo para
usar.

8. BLOT POW POLVO DE BLOTTING:
10 x 1 g de leche descremada en polvo.

9. TRAYS BANDEJAS DE INCUBACIN:
2 bandejas de incubacin de 9 pocillos.

10. FORCEPS PINZAS:
1 par.

Precauciones
bioblot HCV es slo para el diagnstico IN VITRO.
Para uso exclusivo por profesionales.
Consulte las etiquetas del producto para obtener informacin sobre los componentes potencialmente peligrosos.

INFORMACIN SANITARIA Y DE SEGURIDAD

PRECAUCIONES: Este kit contiene productos de origen humano. Ningn mtodo de anlisis permite ofrecer una
garanta absoluta de que los hemoderivados humanos no transmitan una infeccin. MANIPULE LAS MUESTRAS,
LOS CONTROLES POSITIVO Y NEGATIVO COMO SI FUERAN POTENCIALMENTE INFECCIOSOS. Se
recomienda manipular los componentes del kit y las muestras, de conformidad con las buenas prcticas de
laboratorio. Asimismo, deben desecharse siguiendo los procedimientos de seguridad establecidos.

El control positivo y el control negativo contienen mertiolato y azida sdica; el tampn de blotting concentrado y el
tampn de lavado concentrado contienen mertiolato; el conjugado contiene azida sdica. La azida sdica puede
reaccionar con el cobre y el plomo que se utilizan en ciertas tuberas y formar sales explosivas. Aunque las cantidades
que se usan en este kit son pequeas, los materiales que contienen azida deben eliminarse con volmenes
relativamente grandes de agua para evitar la acumulacin de azidas metlicas en las tuberas. A continuacin figuran
las frases relativas a los riesgos (R) correspondientes.

R20/21/22 Nocivo por inhalacin, por ingestin y en contacto con la piel.

El sustrato contiene 5-bromo-4-cloro-3-indolil fosfato y nitroazul de tetrazolio, clasificados como nocivos (Xn) por las
directivas de la Comunidad Econmica Europea (CEE) que son de aplicacin. A continuacin figuran las frases
relativas a los riesgos (R) correspondientes.

R20/21/22 Nocivo por inhalacin, por ingestin y en contacto con la piel.

1. Evite la contaminacin microbiana de los reactivos al abrirlos y al extraer partes alcuotas de los viales o
frascos originales.

2. No pipetee con la boca.

3. Manipule las muestras, las tiras de nitrocelulosa, los controles positivo y negativo como si fueran
potencialmente infecciosos.

4. Use bata de laboratorio y guantes desechables mientras realiza el ensayo. Deseche los guantes en bolsas
para residuos biopeligrosos. Lvese bien las manos al finalizar.

5. Es muy recomendable que este ensayo se lleve a cabo en una cmara de bioseguridad.

6. Mantenga el material alejado de bebidas y alimentos.

7. En caso de accidente o contacto con los ojos, lvese inmediata y abundantemente con agua y acdase a un
mdico.

8. Acuda a un mdico de inmediato si ingiere material contaminado o si ste entra en contacto con heridas abiertas u
otras lesiones de la piel.



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9. Limpie de inmediato los vertidos de material potencialmente peligroso con un papel absorbente y lave la zona
contaminada con una solucin de hipoclorito sdico al 1% antes de reanudar el trabajo. El hipoclorito sdico
no debe utilizarse para vertidos que contengan cido, a menos que se seque la zona previamente con un
papel absorbente. Para su eliminacin, el material utilizado (incluidos los guantes desechables) debe tratarse
como material de riesgo biolgico. No utilice el autoclave para el material que contenga hipoclorito sdico.

10. Esterilice en autoclave todos los materiales usados y contaminados a 121C y 15 psi durante 30 minutos antes
de desecharlos. Otra opcin consiste en descontaminar los materiales con una solucin de hipoclorito sdico al
5% durante 30-60 minutos antes de desecharlos en una bolsa para residuos de riesgo biolgico.

11. Descontamine todos los productos qumicos y reactivos usados aadindoles un volumen de hipoclorito sdico
suficiente como para conseguir una concentracin final de al menos el 1%. Djelos en reposo durante
30 minutos para lograr una descontaminacin eficaz.

12. No recomendamos la reutilizacin de las bandejas de incubacin.

PRECAUCIONES ANALTICAS

1. Puede utilizarse muestras de suero o plasma con EDTA o citrato. Muestras de plasma con heparina no deben
utilizarse ya que pueden causar una reaccin inespecfica con la banda de core.

2. Para obtener un rendimiento ptimo del ensayo es necesario un CUMPLIMIENTO ESTRICTO del procedimiento
descrito en el presente Manual de instrucciones. Cualquier modificacin del procedimiento puede provocar
resultados anmalos.

3. NO CAMBIE NI SUSTITUYA LOS REACTIVOS DE UN LOTE DEL KIT POR LOS DE OTRO. Los controles, el
conjugado y las tiras de Western Blot estn ajustados para un funcionamiento ptimo. Use slo los reactivos que
se suministran con el kit.

4. No utilice los componentes del kit despus de la fecha de caducidad que figura en la caja.

5. Evite la contaminacin microbiana de los reactivos al abrirlos y al extraer partes alcuotas de los viales o frascos
originales, ya que ello reducira de forma prematura el periodo de validez de los kits y dara lugar a resultados
errneos. Al extraer partes alcuotas de los viales utilice tcnicas aspticas, como pipetas o puntas de pipeta
desechables.

6. Los controles del kit deben analizarse al mismo tiempo que las muestras clnicas en cada serie de anlisis.

7. Para evitar la contaminacin cruzada, use una punta de pipeta nueva para cada alcuota de la muestra.

8. Para obtener resultados ptimos, dispense todos los reactivos mientras todava estn fros y vulvalos a guardar a
2C - 8C lo antes posible.

9. Se aconseja lavar el material de vidrio que se vaya a utilizar para los reactivos con cido clorhdrico 2M y
aclararlo bien con agua destilada o desionizada antes de usarlo.

10. Utilice slo agua destilada o desionizada de calidad reactivo para diluir los reactivos.

11. Todos los reactivos deben mezclarse bien antes de su uso.

12. La solucin del conjugado de trabajo, el tampn de lavado diluido y el tampn de blotting deben estar recin
preparados.

13. La solucin del conjugado de trabajo debe prepararse en un recipiente o vaso de precipitado de polipropileno.

14. No exponga los reactivos ni realice el anlisis en un rea en la que exista un nivel elevado de vapores de
desinfectantes qumicos (p. ej., vapores de hipoclorito) durante las etapas de almacenamiento y de incubacin:
el contacto inhibe la reaccin de color. Los reactivos tampoco deben exponerse a la luz intensa.

15. Es preferible efectuar el ensayo a temperatura ambiente (25C 3C).

16. Asegrese de colocar las tiras con los nmeros hacia arriba.



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17. En los ensayos de Western Blot es importante utilizar un agitador con plato basculante; el uso de un agitador
rotativo podra poner en peligro el rendimiento del kit. La velocidad de agitacin y el ngulo de inclinacin
recomendados son, respectivamente, de 12 a 16 ciclos por minuto y de 5 a 10 grados.

18. Si se utiliza equipo automatizado, debe verificarse que haya sido validado antes de su uso.

19. Asegrese de aadir las muestras sin que toquen la tira. Para ello, puede inclinar la bandeja y aadir la
muestra en la parte baja donde se acumula el tampn. De este modo se evitar la formacin de puntos
negros debidos a la adicin de muestra a la tira.

20. No utilice congeladores con funcin de descongelacin automtica para conservar los reactivos y las
muestras.

Instrucciones de conservacin
1. Conserve el bioblot HCV y sus componentes a 2C - 8C cuando no se estn utilizando.

2. Todos los reactivos y tiras de anlisis, si se conservan a 2C - 8C, son estables hasta la fecha de caducidad
que figura en el kit. No congele los reactivos.

A. Tiras de antgenos
- Evite las exposiciones innecesarias de las tiras de antgenos a la luz.

B. Reactivos
- Conserve los reactivos en sus viales o frascos originales, que deben permanecer tapados.
- Dispense todos los reactivos cuando an estn fros y vulvalos a guardar a 2C - 8C lo antes posible.
- Cuando el sustrato se conserva a 2C - 8C puede precipitar, sin que ello afecte al funcionamiento
del kit.

PRECAUCIN: Evite las exposiciones innecesarias del sustrato a la luz.

Recoleccin de las muestras
Se pueden utilizar muestras de suero o plasma con EDTA o citrato sdico. Es preferible no utilizar muestras de
plasma con heparina ya que pueden presentar reaccin no especfica con la banda del core del HCV. Antes de
guardar las muestras, verifique que se haya separado por centrifugacin los cogulos o las clulas sanguneas.

Las muestras deben conservarse a 2C - 8C si el anlisis se va a llevar a cabo en los 7 das posteriores a la
extraccin, o congelarse a una temperatura de al menos -20C si el anlisis se va a retrasar ms de 7 das. Es
preferible utilizar muestras transparentes y no hemolizadas. Las muestras lipmicas, ictricas o contaminadas
(por partculas o bacterias) deben filtrarse (0,45 m) o centrifugarse antes del ensayo.

El suero de los pacientes puede estar inactivado, pero no es un requisito indispensable para el funcionamiento
ptimo del anlisis.

Para efectuar la inactivacin:
1. Afloje las tapas de los recipientes con el suero.
2. Caliente el suero a 56C durante 30 minutos al bao de agua.
3. Deje enfriar el suero antes de volver a ajustar las tapas.
4. El suero puede conservarse congelado hasta el anlisis.

Recomendamos que el suero de los pacientes no se someta a ciclos repetidos de congelacin y descongelacin
antes del ensayo.

Material necesario no incluido en el kit
- Agua destilada o desionizada.
- Guantes desechables.
- Plato basculante (con velocidad de balanceo de 12 - 16 oscilaciones por minuto e inclinacin de 5 - 10 para
lavar las tiras uniformemente).
- Pipetas y puntas del volumen adecuado.
- Aspirador con depsito de hipoclorito sdico.
- Bao de agua a 56C (optativo).
- Hipoclorito sdico para la descontaminacin.




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Operaciones previas
1. SOLUCIN DE LAVADO DILUIDA
(a) La SOLUCIN DE LAVADO DILUIDA debe estar recin preparada.
(b) Diluya 1 volumen de SOLUCIN DE LAVADO CONCENTRADA (20x) con 19 volmenes de agua de calidad
reactivo. Mezcle bien.

2. TAMPN DE BLOTTING DE TRABAJO
(a) El TAMPN BLOTTING DE TRABAJO debe estar recin preparado.
(b) Diluya 1 volumen de TAMPN DE BLOTTING CONCENTRADO (10x) con 9 volmenes de agua de calidad
reactivo. Mezcle bien.
(c) Aada 1 g de POLVO DE BLOTTING por cada 20 ml del TAMPN DE BLOTTING diluido preparado en el
paso anterior 2(b). Agite hasta que el polvo se disuelva por completo.
(d) Agite de nuevo antes de dispensar la mezcla.

3. SOLUCIN DE CONJUGADO DE TRABAJO
NOTA: prepare la solucin en un recipiente o vaso de precipitado de polipropileno.
(a) LA SOLUCIN DE CONJUGADO DE TRABAJO debe estar recin preparada.
(b) Prepare la SOLUCIN DEL CONJUGADO DE TRABAJO diluyendo CONJUGADO en TAMPN DE
BLOTTING DE TRABAJO en proporcin de 1:1000; p. ej., 5 l de CONJUGADO en 5 ml de TAMPN DE
BLOTTING DE TRABAJO.

4. SOLUCIN SUSTRATO (lista para su uso)
(a) Dispense el volumen necesario directamente del frasco.
Use una pipeta limpia. Cierre bien el frasco despus de usarlo.

Realizacin del ensayo
NOTA: a) Aspire todos los productos qumicos y reactivos utilizados con un aspirador provisto de depsito con
hipoclorito sdico.
b) Todas las incubaciones deben efectuarse en un plato basculante.

PRECAUCIONES:
Algunas muestras pueden causar manchas oscuras en el punto de la tira en el que se aadieron. Para evitar este
problema, proceda de la forma siguiente:

I. Aada siempre la muestra despus de haber dispensado el TAMPN DE BLOTTING.

II. Incline ligeramente la bandeja elevando su extremo superior o su fondo. El tampn de blotting se desplazar
hacia la zona ms baja de la bandeja. Aada la muestra en la zona en la que se haya acumulado el tampn
de blotting. Cuando haya dispensado todas las muestras, devuelva la bandeja a su posicin plana inicial.
Asegrese siempre de que las tiras se mantengan hmedas durante el proceso.

III. Otra opcin, si no desea inclinar la bandeja, es dispensar las muestras en el extremo superior o en el fondo
del pocillo. De esta forma, si aparecen manchas oscuras, la lectura de los resultados de la tira no se ver
afectada.

Procedimiento:
1. Utilizando unas pinzas, extraiga con cuidado del tubo la cantidad de TIRAS necesaria y
coloque cada tira en su pocillo con el nmero hacia arriba. Incluya tiras para los controles
positivo y negativo.


2. Aada 2 ml de SOLUCIN DE LAVADO DILUIDA a cada pocillo.

2 ml
3. Incube las tiras durante al menos 1-2 minutos a temperatura ambiente (25 3C) en un plato
basculante (velocidad 12 - 16 oscilaciones por minuto). Extraiga el tampn por aspiracin.

2 minutos
4. Aada 2 ml de TAMPN DE BLOTTING DE TRABAJO a cada pocillo.

2 ml
5. Aada 20 l de suero de los pacientes o de controles, segn corresponda, en cada uno de los
pocillos. Debe tomar precauciones para evitar aadir las muestras directamente en las tiras.

20 l
6. Cubra la bandeja con la tapa suministrada e incube durante 1 hora a temperatura ambiente
(25 3C) en el plato basculante.
60 minutos


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7. Destape la bandeja con cuidado para evitar salpicaduras y el mezclado de las muestras.
Incline la bandeja para aspirar la mezcla de los pocillos. Cambie las puntas del aspirador entre
muestras para evitar la contaminacin cruzada.


8. Lave 3 veces cada tira con 2 ml de SOLUCIN DE LAVADO DILUIDA, dejando en remojo
durante 5 minutos en el plato basculante entre los lavados.

3 x 2 ml
9. Aada 2 ml de SOLUCIN DE CONJUGADO DE TRABAJO a cada pocillo.

2 ml
10. Cubra la bandeja con la tapa suministrada e incube durante 1 hora a temperatura ambiente
(25 3C) en el plato basculante.

60 minutos
11. Aspire el CONJUGADO de los pocillos. Lave como en el paso 8.

3 x 2 ml
12. Aada 2 ml de SOLUCIN SUSTRATO a cada pocillo.

2 ml
13. Cubra la bandeja e incube durante 15 minutos en el plato basculante.

15 minutos
14. Aspire el SUSTRATO y aclare las tiras un mnimo de tres veces con agua de calidad reactivo
para detener la reaccin (el lavado insuficiente durante esta etapa puede provocar la
aparicin de un fondo oscuro).

3 x 2 ml
15. Utilizando unas pinzas, coloque las tiras con suavidad sobre paos de papel. Cbralas con
los paos de papel y squelas. Otra posibilidad es dejar que las tiras se sequen en los
pocillos de la bandeja.


16. Coloque las tiras en una hoja de trabajo (papel blanco no absorbente). No aplique cinta
adhesiva sobre las bandas reveladas. Observe las bandas (vase Interpretacin de los
resultados) y califique los resultados. Para el almacenamiento, mantenga las tiras en la
oscuridad.



RESUMEN DE LOS PROTOCOLOS DE ENSAYO
Reactivos Cantidad Tiempo
Tiras de nitrocelulosa 1 -
Solucin de lavado 2 ml 2 min
Tampn de blotting 2 ml -
Muestra 20 l 60 min
Solucin de lavado 3 x 2 ml 3 x 5 min
Conjugado 2 ml 60 min
Solucin de lavado 3 x 2 ml 3 x 5 min
Sustrato (listo para usar) 2 ml 15 min
Agua destilada 3 x 2 ml -


CANTIDAD DE REACTIVOS NECESARIA PARA DIVERSOS NMEROS DE TIRAS
Reactivos
Nmero de tiras a utilizar
3 6 9 15 18
Solucin de lavado diluida (ml) 60 100 140 240 300
Tampn de blotting de trabajo (ml) 20 40 60 80 100
Conjugado de trabajo (ml) 10 20 30 40 50
Sustrato (ml) 11 17 23 35 45
Polvo de blotting (g) 1 2 3 4 5


Control de calidad
Los controles negativo y positivo se deben probar en todos los ensayos independientemente del nmero de muestras
que se analicen. Para que los resultados obtenidos en cualquier ensayo se consideren vlidos se deben cumplir las
siguientes condiciones:





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1. BANDAS DE CONTROL (IgG y anti-IgG)
Las dos bandas de control (vea la figura 1 en la ltima pgina) deben apreciarse en todas las tiras. La
presencia de una banda anti-IgG indica que se aadi suero en la primera incubacin. La ausencia de control
anti-IgG y la presencia de la banda IgG significaran un fallo en aadir el suero. Si no hay ninguna de las dos
bandas en ninguna de las tiras, incluyendo los controles, indicara un error en la tcnica o en uno de los
componentes del kit.

2. CONTROL NEGATIVO
Slo debe observarse la banda de control anti-IgG y la banda de control IgG en la tira del control negativo.

3. CONTROL POSITIVO
Deben observarse todas las bandas de las protenas recombinantes del HCV en la tira utilizada con el
control positivo. Adems deben observarse las bandas de control anti -IgG e IgG. La banda de control GST
no debe observarse (Fig. 1).

Interpretacin de los resultados
NOTA: las tiras reveladas deben estar completamente secas para evitar errores en la interpretacin.

La presencia o ausencia de anticuerpos frente al HCV en la muestra se determina comparando cada tira de
nitrocelulosa con las tiras de control del ensayo con los controles NEGATIVO Y POSITIVO.

Por favor, observe en la figura 1 (ltima pgina de este inserto) el perfil de los antgenos y controles presentes en las
tiras de nitrocelulosa. Localice e identifique la intensidad de las bandas de control. El 3+ de intensidad corresponde a
la banda anti-IgG. El valor 1+ corresponde a la intensidad de la bandas IgG. Estas dos bandas deben observarse en
todas las tiras. La intensidad de cada banda reactiva debe compararse con estas dos bandas como referencia. Esta
comparacin se realiza para asignar un valor de reactividad para cada antgeno de la tira.

REACTIVIDAD PUNTUACIN
No reactiva -
Reactividad < control 1+
Reactividad = control 1+ 1+
Reactividad > 1+ y < 3+ 2+
Reactividad = control 3+ 3+
Reactividad > control 3+ 4+

PERFIL INTERPRETACIN
No aparecen bandas especficas de HCV con reactividad 1+ NEGATIVO
Slo banda de control GST NEGATIVO
Dos o ms bandas de HCV con reactividad 1+ POSITIVO
Una sola banda en Core con reactividad 2 + POSITIVO
Una sola banda en Core con reactividad 2 + INDETERMINADO
Una sola banda de HCV en NS3, NS4 o NS5 con reactividad 1 + INDETERMINADO
Mltiples bandas de HCV y tambin reactividad 1+ en la banda control
de protena GST
INDETERMINADO

Limitaciones del procedimiento
Para conseguir unos resultados ptimos con este mtodo, deben seguirse de forma estricta los pasos descritos en
el procedimiento. Cualquier desviacin puede dar lugar a resultados aberrantes.

Un resultado NEGATIVO no excluye la posibilidad de una exposicin o infeccin al HCV.

Un resultado INDETERMINADO no debe utilizarse como base para el diagnstico de una infeccin de HCV.

Una sola banda de antgeno HCV con reactividad 1+ puede deberse a una reaccin no especfica, o bien puede
ser un indicador de infeccin anterior resuelta o de seroconversion reciente. Se recomienda repetir el test pasados
entre 2 y 6 meses utilizando muestras frescas.

Un resultado INDETERMINADO por la banda GST, indica que la muestra posee anticuerpos que reaccionan con
la protena de fusin presente en los antgenos recombinantes de esta prueba. La muestra debe ensayarse con
otro mtodo confirmatorio que utilice otra protena de fusin.



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Las muestras indeterminadas deben ensayarse con PCR para determinar si una persona ha estado expuesta o
infectada por el HCV.

Caractersticas funcionales
Las caractersticas funcionales del bioblot HCV para la deteccin de anticuerpos anti-HCV se evaluaron utilizando
muestras de banco de sangre, de pacientes conocidos positivos de anticuerpos anti-HCV, de pacientes con
enfermedades relacionadas con el HCV y de pacientes con enfermedades no relacionadas con el HCV. A dems se
probaron paneles de seroconversion disponibles comercialmente.

Sensibilidad:
Se estudiaron 330 muestras reactivas con ELISA anti -HCV de las cuales 329 fueron detectadas como positivas
por el bioblot HCV. La muestra discordante result ser un falso positivo de ELISA. La sensibilidad calculada fue
> del 99,9%.

La sensibilidad adems se ha comprobado analizndose 14 paneles de seroconversin y 4 paneles de ttulo mixto o
bajo, todos ellos disponibles comercialmente. La funcionalidad del bioblot HCV fue comparable a la de Chiron
HCV RIBA 3.0. Adems, el bioblot HCV fue capaz de detectar las muestras del panel de genotipos de HCV
(genotipo 1 a 6) de BBI (PHW 201).

Especificidad:
Se probaron 200 muestras de banco de sangre de las cuales 193 fueron negativas y 7 indeterminadas. Se
probaron, adems, un total de 280 muestras clnicas que incluan especmenes de fase aguda de infecciones
vricas y bacterianas, de mujeres embarazadas, muestras lipmicas, ictricas y hemolizadas. Se obtuvo una alta
especificidad con estas muestras.

Clusula de exencin de responsabilidad
El fabricante garantiza exclusivamente que el kit de anlisis funcionar como ensayo diagnstico in vitro, de
acuerdo con las especificaciones y limitaciones descritas en el Manual de instrucciones del producto, cuando se
use de conformidad con las instrucciones citadas en el mismo. El fabricante rehusa cualquier garanta, explcita o
implcita, incluida la garanta explcita o implcita relativa a la comercializacin, adecuacin para el uso o supuesta
utilidad para cualquier fin. El fabricante slo se obliga a la sustitucin del producto o al reembolso del precio de
compra del mismo. El fabricante no ser responsable ante el comprador ni ante terceros, de cualesquiera daos,
perjuicios o prdidas econmicas provocados por la utilizacin o la aplicacin del producto.

Problemas tcnicos
En caso de problemas tcnicos o si desea presentar una reclamacin, proceda de la siguiente manera:

1. Anote el nmero de lote del kit y su fecha de caducidad y el nmero de lote de la tira.
2. Conserve los kits y los resultados obtenidos.
3. Pngase en contacto con su distribuidor local.


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FIGURA 1.
PERFIL DE LOS ANTGENOS Y CONTROLES FIJADOS EN BIOBLOT HCV.








Anti-IgG control 3+







Core


NS3-1


NS3-2

NS4

NS5


GST control (no visible)

IgG control 1+