Reaes Qualitativas para Identificao de Carboidratos

1. Reao de Molish
A ao desidratante do H
2
SO
4
concentrado sobre as molculas de mono, oligo e
polissacardeos provoca a formao de furfural (pentoses) e hidroximetilfurfural (hexoses).
Estes podem condensar com um composto fenlico (a-naftol) formando um produto violeta.


Tcnica
Preparar os tubos conforme a tabela abaixo:
REAGENTES TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3 TUBO 4
Glicose 1% 10 gotas - - -
Sacarose 1% - 10 gotas - -
Amido 1% - - 10 gotas -
Celulose - - - 10 gotas H
2
O +
algodo
Molisch 3 gotas 3 gotas 3 gotas 3 gotas
Misturar e adicionar cuidadosamente deixando escorrer lentamente pela parede do tubo
2mL de H
2
SO
4
concentrado. NO AGITAR O TUBO ! Deixar em repouso e observar a
formao do anel violeta.
Resultado
Anotar os resultados. Concluir.

2. Reao de Selliwanoff
Esta reao utilizada para diferenciar aldoses de cetoses. Os carboidratos sob ao
desidratante do HCl so convertidos em aldedos cclicos, os quais condensam com o
resorcinol formando um complexo de cor vermelha. A reao com cetoses rpida e intensa.
Com aquecimento prolongado, as aldoses do reao positiva.

Tcnica
Preparar os tubos conforme a tabela abaixo:
REAGENTES TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3
Glicose 1% 10 gotas - -
Frutose 1% - 10 gotas -
Sacarose1% - - 10 gotas
HCl conc. 0,5 mL 0,5 mL 0,5 mL
Selliwanoff 5 gotas 5 gotas 5 gotas
Agitar e aquecer at o aparecimento de cor vermelha.
Resultado
Anotar os resultados. Concluir.

3. Reao de Bial
Reao especfica para pentoses. As pentoses produzem furfural por ao do HCl a
quente. O furfural combina-se com o orcinol e na presena de sais frricos forma um produto
de cor azul ou verde-azulado.
Tcnica
Preparar os tubos conforme a tabela abaixo:
REAGENTES TUBO 1 TUBO 2
Glicose 1% 10 gotas -
Xilose 1% - 10 gotas
Reativo de Bial 0,5 mL 0,5 mL
Misturar e aquecer em banho-maria fervente durante 10 minutos ou at o
aparecimento da cor azul ou verde azulada.
Resultado
Anotar os resultados. Concluir.

4. Reaes de Identificao de Acares Redutores
As reaes para deteco de carboidratos redutores ocorrem em meio alcalino. O acar
redutor, em meio alcalino diludo, forma enediol, altamente reativo e instvel que pode ceder
facilmente os eltrons e prtons respectivos.
4.1. Reaes de Benedict
O reativo de Benedict constitudo de soluo alcalina de CuSO
4
. O on cprico (Cu
2+
)
do CuSO
4
, aceita os eltrons do enediol reduzindo-se a ons cuproso (Cu
+
), o qual em meio
alcalino forma hidrxido cuproso (amarelo) que convertido a um precipitado vermelho de
xido cuproso (Cu
2
O), por aquecimento. As cores verde, amarelo e vermelho tijolo refletem
quantidades crescentes de acares redutores.


Tcnica:
Preparar os tubos conforme tabela abaixo:
REAGENTES TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3 TUBO 4 BRANCO
Glicose 10 gotas - - - -
Frutose - 10 gotas - - -
Amido - - 10 gotas - -
Sacarose - - - 10 gotas -
H
2
O - - - - 10 gotas
Benedict 10 gotas 10 gotas 10 gotas 10 gotas 10 gotas
Ferver por 5 minutos
Resultados
Anotar os resultados. Concluir.














Caracterizao e Hidrlise do Amido

1. Fundamento terico
O amido o carboidrato que as plantas sintetizam como principal reserva alimentar.
constitudo de a-amilose e amilopectina. A a-amilose um polmero linear formado por
diversos milhares de resduos de glicose unidos por ligao a(14). A amilopectina um
polmero ramificado de glicose com ligaes do tipo a(14) na parte linear e ligaes do
tipo a(16) nos pontos de ramificao. A amilopectina contm 10
6
resduos de glicose.
O amido insolvel em gua fria, porm, quando aquecido ou colocado em contato
com gua fervente, os grnulos so desintegrados e formam uma soluo coloidal.

2. Caracterizao do amido
2.1. Reao de Molish
Reao utilizada para pesquisa de carboidratos, baseada na formao de compostos de
furfural pela ao desidratante do cido forte. Os compostos de furfural reagem com o a-
naftol formando um produto colorido
REGENTES TUBO 1 BRANCO
Amido 1,0 mL -
gua - 1,0 mL
Molish 3 gotas 3 gotas
Misturar e adicionar cuidadosamente deixando escorrer lentamente pela parede do tubo
2,0 mL de H
2
SO
4
concentrado. NO AGITAR O TUBO !
Deixar em repouso e observar a formao do anel violeta


2.2. Reao com o Iodo (Lugol : KI + I
2
)
O amido forma complexo de colorao azul com o iodo. O complexo se dissocia por
aquecimento e forma-se novamente quando a soluo resfriada. A explicao para este
fenmeno devido s molculas de amido que tendem a formar agregados ou micelas. O
iodo reage com as micelas formando o complexo colorido, sob aquecimento as micelas
desagregam-se e a cor desaparece.

REGENTES TUBO 1 BRANCO
Amido 1,0 mL -
gua destilada - 1,0 mL
Lugol 1 gota 1 gota
Aquecer levemente o tubo 1 e anotar o resultado
Resfriar o tubo 1 em gua corrente na torneira e anotar o resultado
2.3. Precipitao do Amido
Os vrios resduos de glicose que constituem o amido apresentam grupos hidroxilas
polares tornando o polissacardeo altamente hidratado. O sulfato de amnio e o etanol
desidratam o amido provocando precipitao.
TUBO 1: Adicionar 1,0 mL de amido e adicionar etanol at o aparecimento do
precipitado.

3. Hidrlise do Amido
As ligaes glicosdicas das amiloses e amilopectinas do amido podem ser hidrolisadas
por HCl concentrado e a quente. O processo de hidrlise do amido pode ser acompanhado
pela liberao de acares redutores que no decorrer da hidrlise aumentado e detectado
pela reao de Benedict.

3.1 Tcnica Benedict
Preparar uma srie de 6 tubos de ensaio e identific-los conforme o tempo de hidrlise:
0, 5, 10, 15, 20 e 25 minutos. Adicionar a cada tubo 10 gotas do reagente de Benedict e 2
gotas de NaOH 2,5N e reservar.
Em um tubo de ensaio grande pipetar 10 mL da soluo de amido e deixar em banho-
maria fervente para atingir a temperatura. Marcar o tempo e ento adicionar 0,3mL de HCl
concentrado e misturar. Imediatamente, retirar 0,5 mL e passar para o tubo do tempo 0.
Manter o tubo grande no banho-maria e a cada 5 minutos passar 0,5mL para os respectivos
tubos.
Levar os 6 tubos de ensaio contendo a amostra hidrolisada mais o reagente de Benedict
para o banho-maria fervente por 5 minutos e analisar os resultados.

3.2 Tcnica do Iodo (Lugol)
Em uma placa escavada, coletar 1 gota da amostra (tempo zero) na primeira cavidade
e colocar 1 gota de lugol. Na segunda cavidade, coletar aps 5 minutos 1 gota da amostra e 1
gota de lugol. E assim, a cada 5 minutos coletar amostras e adicionar lugol at completar 25
minutos de hidrlise.

Reaes Qualitativas para Identificao de Lipdios

1. VERIFICAO DA ACIDEZ EM LEO OU GORDURA RANOSA
Os leos e gorduras no muito purificados contm pequenas quantidades de cidos
graxos livres. Quanto maior for o grau de impureza destes lipdios ou quanto mais tempo
forem deixados em contato com o ar, temperatura ambiente, maior ser a quantidade de
cidos graxos livres.
Tcnica
Preparar os tubos conforme tabela abaixo:
REAGENTES TUBO 1 TUBO 2
Etanol 2 mL 2 mL
NaOH 0,1 N 1 gota 1 gota
Fenolftalena 1 gota 1 gota
leo ranoso Gota a gota, at descorar -
leo fresco - Adicionar o dobro do n de
gotas gastos para o leo
ranoso
N de gotas
Anotar os resultados. Concluir.

2 SAPONIFICAO
Os leos e gorduras, quando tratadas com soluo alcalina e a quente, se hidrolisam
produzindo glicerol e os sais de cidos graxos (sabes).



+ 3 KOH + 3R-COO
-
K
+



Triacilglicerol Glicerol Sabes (sais dos
A.G.)
Tcnica:
Em um tubo de ensaio grande adicionar:
H
2
C
HC
H
2
C
O
O
O
C
C
C
R1
O
O
O
R2
R3
CH
2
OH
CHOH
CH
2
OH
15 gotas de leo vegetal fresco.
5 mL de potassa alcolica (2,5 mL de KOH 40% e 2,5 mL de etanol).
Aquecer o tubo em banho-maria fervente at 30 minutos.
Anotar o resultado e concluir.

3. PROPRIEDADES DOS SABES
Tcnica:
Repartir a soluo de sabo obtida anteriormente em trs tubos de ensaio e
realizar os seguintes testes:
3.1. Abaixamento da tenso superficial
Adicionar ao tubo 1, 10 mL de gua destilada, agitar e verificar a formao de
espuma.
3.2. Precipitao de cidos graxos
O aparecimento da turbidez com a adio de cido actico, indica a liberao dos
cidos graxos, os quais sendo insolveis em gua e menos densos ficam nos sobrenadante.
Adicionar gota a gota cido actico at o aparecimento da turbidez.

R-COO
-
K
+
+ CH
3
COOH R-COOH + CH
3
COO
-
K
+

Sabes cido actico cido graxo Acetato de K
Adicionar ao tubo 2, gota a gota, cido actico concentrado at o aparecimento de
turbidez, resultante da liberao de cidos graxos.

3.3. Precipitao de sabes de clcio insolveis
Os sais de cidos graxos em presena de clcio formam um precipitado de sabo
de clcio insolvel. Adicionar gota a gota s soluo de CaCl
2
10% at o aparecimento de um
precipitado branco de sabo de clcio.
Adicionar, gota a gota, soluo de CaCl
2
10%, at aparecimento de um
precipitado de sabes de clcio. Colocar gua e agitar para verificar a formao de espuma.

3.4. Precipitao por excesso de eletrlitos
Os sais de cidos graxos precipitam em presena de excesso de eletrlitos, devido
ao efeito de on comum da dissociao do sal. Adicionar um volume igual de soluo
saturada de NaCl. Observar a formao de um precipitado de sabo por excesso de eletrlitos.
Colocar gua e agitar para verificar a formao de espuma.
4. Caracterizao do Glicerol
O glicerol sob ao de um desidratante como o bissulfato de potssio (KHSO
4
), d
origem a acrolena, reconhecida pelo odor desagradvel.
Em um tubo de ensaio colocar 2 gotas de leo vegetal e adicionar uma pitada de
bissulfato de potssio e aquecer.