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Microbiologa

Concepto e historia
1. Introduccin
2. Desarrollo histrico de la microbiologa
3. El debate sobre la generacin espontnea
4. Los avances tcnicos
5. El papel de los microorganismos en las enfermedades
6. Desarrollo de la asepsia, uimioterapia ! antioterapia
7. El auge de la microbiologa general
8. El desarrollo de la inmunologa
9. El desarrollo de la virologa
10. "elaciones entre la microbiologa ! otras ciencias biolgicas
11. #b$eto de estudio de la microbiologa% material ! formal
& I'("#D)CCI*' +L C#'CE,(# - C#'(E'ID# DE L+
MIC"#.I#L#/0+
La Microbiologa se puede definir, sobre la base de su ei!ologa, co!o la
ciencia "ue raa de los seres #i#os !u$ pe"ue%os, concrea!ene de a"uellos
cu$o a!a%o se encuenra por deba&o del poder resolui#o del o&o 'u!ano. (so
'ace "ue el ob&eo de esa disciplina #enga deer!inado por la !eodologa
apropiada para poner en e#idencia, $ poder esudiar, a los !icroorganis!os.
)recisa!ene, el origen ardo de la Microbiologa con relaci*n a oras ciencias
biol*gicas, $ el reconoci!ieno de las !+liples aci#idades desplegadas por los
!icroorganis!os, 'a$ "ue aribuirlos a la carencia, durane !uc'o ie!po, de
los insru!enos $ ,cnicas perinenes. -on la in#enci*n del !icroscopio en el
siglo ./00 co!ien1a el leno despegue de una nue#a ra!a del conoci!ieno,
ine2isene 'asa enonces. 3urane los siguienes 150 a%os su progreso se
li!i* casi a una !era descripci*n de ipos !orfol*gicos !icrobianos, $ a los
pri!eros inenos a2on*!icos, "ue buscaron su encuadra!ieno en el !arco
de los 4sise!as naurales4 de los 5einos 6ni!al $ /egeal.
(l asena!ieno de la Microbiologa co!o ciencia es7 esrec'a!ene ligado a
una serie de conro#ersias seculares 8con sus nu!erosas filraciones de la
filosofa e incluso de la religi*n de la ,poca9, "ue se prolongaron 'asa finales
del siglo .0.. La resoluci*n de esas pol,!icas dependi* del desarrollo de una
serie de esraegias e2peri!enales fiables 8eserili1aci*n, culi#os puros,
perfecciona!ieno de las ,cnicas !icrosc*picas, ec.9, "ue a su #e1 dieron
naci!ieno a un cuerpo co'erene de conoci!ienos "ue consiiu$* el n+cleo
agluinador de la ciencia !icrobiol*gica. (l reconoci!ieno del origen
!icrobiano de las fer!enaciones, el definii#o abandono de la idea de la
generaci*n espon7nea, $ el riunfo de la eora ger!inal de la enfer!edad,
represenan las con"uisas definii#as "ue dan cara de naurale1a a la &o#en
Microbiologa en el ca!bio de siglo.
:ras la (dad de ;ro de la <aceriologa, inaugurada por las grandes figuras de
)aseur $ =oc', la Microbiologa "ued* durane ciero ie!po co!o una
disciplina descripi#a $ aplicada, esrec'a!ene i!bricada con la Medicina, $
con un desarrollo paralelo al de la >u!ica, "ue le aporara #arios a#ances
!eodol*gicos funda!enales. ?in e!bargo, una corriene, en principio
!inoriaria, dedicada a los esudios b7sicos cenrados con cieras bacerias
del suelo poseedoras de capacidades !eab*licas especiales, inclu$endo el
descubri!ieno de las "ue afecan a la nurici*n de las planas, logr* 'acer #er
la ubicuidad ecol*gica $ la e2re!a di#ersidad fisiol*gica de los
!icroorganis!os. 3e esa for!a, se esableca una cabe1a de puene enre la
Microbiologa $ oras ciencias biol*gicas, "ue lleg* a su !o!eno decisi#o
cuando se co!prob* la unidad "u!ica de odo el !undo #i#o, $ se de!osr*,
con !aerial $ ,cnicas !icrobiol*gicas "ue la !ol,cula de la 'erencia era el
63@. -on ello se asise a un ni!o $ f,ril inerca!bio enre la Microbiologa,
la Aen,ica $ la <io"u!ica, "ue se plas!a en el naci!ieno de la <iologa
Molecular, base del especacular auge de la <iologa desde !ediados de ese
siglo.
)or oro lado, el 4progra!a4 inicial de la Microbiologa 8b+s"ueda de agenes
infeci#os, desenra%a!ieno $ apro#ec'a!ieno de los !ecanis!os de defensa
del 'ospedador9 condu&eron a la creaci*n de ciencias subsidiarias 8/irologa,
0n!unologa9 "ue final!ene ad"uirieron su !a$ora de edad $ una acenuada
auono!a.
)or +li!o, la #eriene aplicada "ue esu#o en la base de la creaci*n de la
Microbiologa, !anu#o su #igencia, enri"uecida por coninuos apores de la
in#esigaci*n b7sica, $ 'o$ !uesra una i!presionane 4'o&a de ser#icios4 $ una
no !enos pro!eedora perspeci#a de e2pansi*n a !+liples ca!pos de la
aci#idad 'u!ana, desde el conrol de enfer!edades infecciosas 8'igiene,
#acunaci*n, "ui!ioerapia, anibioerapia9 'asa el apro#ec'a!ieno econ*!ico
racional de los !+liples procesos en los "ue se 'allan i!plicados los
!icroorganis!os 8bioecnologas9.
6s pues, la sencilla definici*n con la "ue se abri* ese aparado, esconda odo
un c+!ulo de conenidos $ ob&eos de indagaci*n, odos e!anados de una
peculiar !anera de apro2i!arse a la porci*n de realidad "ue la Microbiologa
iene enco!endada. (n las pr*2i!as p7ginas a!pliare!os $ concreare!os el
concepo al "ue 'e!os 'ec'o r7pida referencia. 5eali1are!os un recorrido por
su el desarrollo de la Microbiologa a lo largo de su 'isoria, "ue nos per!iir7
una #isi*n concrea de algunos de sus caracersicos !odos de abordar su
ob&eo de esudioB final!ene, esare!os en disposici*n de definir ese +li!o,
desglosado co!o ob&eo !aerial $ for!al.
#.1E(I2#3%
-onocer los ob&eos de esudio de la !icrobiologa
5econocer los principales apores "ue conibu$eron al segui!ieno de esa
ciencia
;benes una #isi*n general de la !aeria
0nroducir concepos uili1ando el glosario
4 DE3+""#LL# 5I3(*"IC# DE L+ MIC"#.I#L#/0+6
La Microbiologa, considerada co!o una ciencia especiali1ada, no aparece 'asa
finales del siglo .0., co!o consecuencia de la confluencia de una serie de
progresos !eodol*gicos "ue se 'aban e!pe1ado a incubar lena!ene en los
siglos aneriores, $ "ue obligaron a una re#isi*n de ideas $ pre&uicios seculares
sobre la din7!ica del !undo #i#o.
?iguiendo el $a cl7sico es"ue!a de -ollard 8l9769, pode!os disinguir cuaro
eapas o periodos en el desarrollo de la MicrobiologaC
)ri!er periodo, e!inene!ene especulai#o, "ue se e2iende desde la
anigDedad 'asa llegar a los pri!eros !icroscopisas.
?egundo periodo, de lena acu!ulaci*n de obser#aciones 8desde l675
apro2i!ada!ene 'asa la !iad del siglo .0.9, "ue arranca con el
descubri!ieno de los !icroorganis!os por LeeuEen'oeF 8l6759.
:ercer periodo, de culi#o de !icroorganis!os, "ue llega 'asa finales del siglo
.0., donde las figuras de )aseur $ =oc' encabe1an el logro de crisali1ar a la
Microbiologa co!o ciencia e2peri!enal bien asenada.
-uaro periodo 8desde principios del siglo .. 'asa nuesros das9, en el "ue
los !icroorganis!os se esudian en oda su co!ple&idad fisiol*gica, bio"u!ica,
gen,ica, ecol*gica, ec., $ "ue supone un e2raordinario creci!ieno de la
Microbiologa, el surgi!ieno de disciplinas !icrobiol*gicas especiali1adas
8/irologa, 0n!unologa, ec9, $ la esrec'a i!bricaci*n de las ciencias
!icrobiol*gicas en el !arco general de las -iencias <iol*gicas. 6 coninuaci*n
se reali1a un bre#e recorrido 'is*rico de la disciplina !icrobiol*gica,
desglosando los perodos 3G $ 4G en #arios aparados e!7icos.
46& ,E"I#D# ,"E2I# +L DE3C)."IMIE'(# DEL MIC"#3C#,I#
?i bien el descubri!ieno efeci#o de seres #i#os no #isibles a si!ple #isa
debi* aguardar 'asa el +li!o ercio del siglo ./00, sus aci#idades son
conocidas por la 'u!anidad desde !u$ aniguo, ano las beneficiosas,
represenadas por las fer!enaciones i!plicadas en la producci*n de bebidas
alco'*licas, pan $ producos l7ceos, co!o las per&udiciales, en for!a de
enfer!edades infecciosas.
3i#ersas fuenes escrias de la anigDedad griega $ ro!ana 'ablan de
g,r!enes in#isibles "ue rans!ien enfer!edades conagiosas. Lucrecio 896H
55 a.-.9, en su 43e reru! naura4 'ace #arias alusiones a 4se!illas de
enfer!edad4. (n el 5enaci!ieno europeo, Airola!o Irascaorius, en su libro
43e conagione e conagionis4 815469 dice "ue las enfer!edades conagiosas
se deben a 4g,r!enes #i#os4 "ue pasan de di#ersas !aneras de un indi#iduo a
oro. (sos inicios de e2plicaci*n "ue renunciaban a in#ocar causas
sobrenaurales fueron probable!ene caali1ados por la inroducci*n en
(uropa de la sfilis, una enfer!edad en la "ue esaba clara la necesidad de
conaco para su conagio. )ero la 4cosa4 "ue se rans!ie en la enfer!edad
sigui* siendo ob&eo de con&euras durane !uc'o ie!po.
464 EL ,E"I#D# DE L#3 ,"IME"#3 MIC"#3C#,I3(+36
Ja en el siglo .0/, con la in#enci*n de las pri!eras lenes para corregir la
#isi*n, surgi* una ciera curiosidad sobre su capacidad de au!enar el a!a%o
aparene de los ob&eos. (n el siglo ./0 surgieron algunas ideas sobre aspecos
de la fsica *pica de las lenes de au!eno, pero no enconraron una aplicaci*n
in!ediaa. ?e dice "ue Aalileo 'i1o algunas obser#aciones 4!icrosc*picas4
in#iriendo su elescopio a parir de lenes !onadas en un ubo, pero en
cual"uier caso es7 claro "ue no u#ieron ninguna repercusi*n.
La pri!era referencia segura sobre el !icroscopio 816219 se debe a
-onsani&n Ku$gens, "uien relaa "ue el ingl,s -ornelis 3rebbel ena en su
aller un insru!eno !agnificador, "ue recibi* el no!bre de !icroscopiu! en
l625, en la 6ccade!ia dei Lincei, de 5o!a.
(l descubri!ieno de los !icroorganis!os fue obra de un co!erciane 'oland,s
de e&idos, 6nonie #an LeeuEen'oeF 81632H17239, "uien en su pasi*n por pulir
$ !onar lenes casi esf,ricas sobre placas de oro, plaa o cobre, casi lleg* a
descuidar sus negocios. Iabric* unos cuarocienos !icroscopios si!ples, con
los "ue lleg* a obener au!enos de casi 300 di7!eros. (n 1675 descubri* "ue
en una goa de agua de esan"ue pululaba una aso!brosa #ariedad de pe"ue%as
criauras a las "ue deno!in* 4ani!7lculos4. (n 1683 descubre las bacerias, por
lo "ue se considera el 4padre de la Microbiologa4. 3urane #arias d,cadas
LeeuEen'oeF fue co!unicando sus descubri!ienos a la 5o$al ?ocie$ de
Londres a ra#,s de una serie de caras "ue se difundieron, en raducci*n
inglesa, en las 4)'ilosop'ical :ransacions4. ?us !agnficas does de
obser#ador le lle#aron asi!is!o a describir proo1oos 8co!o Aiardia, "ue
enconr* en sus propias 'eces9, la esrucura esriada del !+sculo, la
circulaci*n capilar, a descubrir los esper!ao1oides $ los gl*bulos ro&os 8por lo
"ue a!bi,n se le considera el fundador de la Kisologa ani!al9, as co!o a
deallar di#ersos aspecos esrucurales de las se!illas $ e!briones de
planas. LeeuEen'oeF se perca* de la abundancia $ ubicuidad de sus
ani!7lculos, obser#7ndolos en #inagre, placa denal, ec.
6un"ue los descubri!ienos de LeeuEen'oeF desperaron iner,s al ser
co!unicados, pocos inenaron o pudieron reproducirlos seria!ene. 6de!7s, la
fabricaci*n de lenes sencillas de gran au!eno era difcil $ el !ane&o de los
!icroscopios si!ples, basane engorroso.
467 EL DE.+(E 3#."E L+ /E'E"+CI*' E3,#'(8'E+6
La auoridad inelecual de 6ris*eles por un lado, $ la auoridad !oral
represenada por la <iblia, por oro, &uno con las opiniones de escriores
cl7sicos co!o Aaleno, )linio $ Lucrecio, a los "ue se ciaba co!o referencias
inconro#eribles en la lieraura !,dica en la (dad Media $ 5enaci!ieno,
dieron cara de naurale1a a la idea de "ue algunos seres #i#os podan
originarse a parir de !aeria inani!ada, o bien a parir del aire o de
!aeriales en purefacci*n. (sa docrina de la 4generaio sponanea4 o
abiog,nesis, fue puesa en enredic'o por los e2peri!enos de Irancesco 5edi
81621H16979, "uien 'aba acu%ado la e2presi*n 4;!ne #i#u! e2 o#o4 816689,
ras co!probar "ue los insecos $ ne!aodos procedan de 'ue#os puesos por
ani!ales adulos de su !is!a especie. 3e!osr* "ue si un ro1o de carne era
cubiero con gasa de for!a "ue las !oscas no podan deposiar all sus 'ue#os,
no aparecan 4gusanos4, "ue ,l correca!ene idenific* co!o fases lar#arias
del inseco. Los descubri!ienos de 5edi u#ieron el efeco de desacrediar la
eora de la generaci*n espon7nea para los ani!ales $ planas, pero la
rea#i#aron respeco de los reci,n descubieros 4ani!7lculos4, de !odo "ue
aun"ue se acep* la coninuidad de la #ida en cuano a sus for!as superiores,
no odos esaban dispuesos a ad!iir el !7s a!plio 4;!ne #i#u! e2 #i#o4
aplicado a los !icroorganis!os.
Kubo "ue esperar un siglo !7s 'asa "ue una serie de nauralisas
reco!en1aran el aa"ue a la eora prefor!acionisa. La11aro ?pallan1ani
81729H17999 sosu#o una dispua con L.:. @eed'a! 81713H17819 en la "ue el
pri!ero de!osr* "ue los 4infusorios4 no aparecan en !uesras de
!aceraciones ani!ales o #egeales so!eidas durane ie!po suficiene a
ebullici*n en frascos 'er!,ica!ene cerrados, pero #ol#an a aparecer si se
pracicaban agu&eros en el recipiene. ?in e!bargo los prefor!acionisas no se
daban por #encidosB el !is!o @eed'a!, recogiendo una idea $a e2presada por
Ku$gens, a!igo de LeeuEen'oeF, replic* Hcon argu!enos #ialisas !u$
propios de la ,pocaH "ue el calor 'aba desruido la 4fuer1a #egeai#a4 de las
infusiones $ 'aba ca!biado la 4cualidad4 del aire denro de los frascos.
3urane el pri!er ercio del siglo .0. la docrina de la ar"ueg,nesis o
generaci*n espon7nea recibi* un +li!o refuer1o anes de !orir, debido por
un lado a ra1ones e2racienficas 8el auge del concepo de rans!uaci*n
producido por la escuela de la filosofa de la naurale1a9, $ por oro al
descubri!ieno del o2geno $ de su i!porancia para la #ida, de !odo "ue los
e2peri!enos de ?pallan1ani se inerprearon co!o "ue al calenarse las
infusiones, el o2geno del aire se desrua, $ por lo ano desapareca la 4fuer1a
#egeai#a4 "ue originaba la aparici*n de !icroorganis!os.
:'eodor ?c'Eann 81810H18829 presen* en 1836 un !,odo seguro para
refuar la eora abiog,nicaC calen* !aceraciones en frascos a los "ue se
'aba eli!inado pre#ia!ene el aire, pero no coninu* raba&ando en esa lnea.
)ara co!plicar !7s las cosas, la publicaci*n de 4?obre el origen de las
especies4 por 3arEin en 1859, fue uili1ada por algunos prefor!acionisas para
apo$ar sus argu!enos. (l !is!o KaecFel, en una fec'a an arda co!o 1866,
se !osraba esc,pico ane las pruebas aporadas por )aseur.
Iue, efeci#a!ene Louis )aseur 81822H18959 el "ue ases* el golpe definii#o
$ 1an&* la cuesi*n a fa#or de la eora biog,nica. (n un infor!e a la 6cad,!ie
des ?ciences de )ars, en 1860 84(2p,riences r,lai#es au2 g,n,raions dies
sponan,es49 $ en escrios poseriores co!unica sus sencillos $ eleganes
e2peri!enosC calen* infusiones en !araces de #idrio a los "ue esiraba
laeral!ene el cuello, 'aci,ndolo largo, esrec'o $ sinuoso, $ de&7ndolo sin
cerrar, de !odo "ue el conenido esu#iera en conaco con el aireB ras esa
operaci*n de!osr* "ue el l"uido no desarrollaba !icroorganis!os, con lo "ue
eli!in* la posibilidad de "ue un 4aire alerado4 fuera la causa de la no aparici*n
de g,r!enes. 6nes bien, co!prob* "ue los g,r!enes del aire "uedaban
reenidos a su paso por el largo cuello sinuoso, en las paredes del ubo, $ no
alcan1aban el inerior del recipiene donde se enconraba la infusi*n, "uedando
,sa es,ril indefinida!ene. ?*lo si se ro!pa el cuello laeral o si se inclinaba
el frasco de !odo "ue pasara pare de l"uido a la porci*n de cuello, los
g,r!enes podan cona!inar la infusi*n $ originar un r7pido creci!ieno.
(n 1861 )aseur publica oro infor!e en el "ue e2plica c*!o se pueden
capurar los 4cuerpos organi1ados4 del aire con a$uda de un ubo pro#iso de
un ap*n de algod*n co!o filro, $ la !anera de recuperarlos para su
obser#aci*n !icrosc*pica. 3e esa for!a "uedaba definii#a!ene aclarado el
origen de los !icroorganis!os, $ se abra la (dad de ;ro del esudio cienfico
de las for!as de #ida no obser#ables a si!ple #isa.
Los +li!os esc,picos "uedaron silenciados cuando en 1877 Lo'n :$ndall
81820H18939 aplic* su sise!a de eserili1aci*n por calena!ieno disconinuo
8'o$ conocida precisa!ene co!o indali1aci*n9, "ue e#idenci* la e2isencia de
for!as !icrobianas de reposo !u$ resisenes al calor, lo cual fue confir!ado
poco !7s arde por Ierdinand -o'n al descubrir las esporas bacerianas.
469 EL DE.+(E 3#."E L#3 :E"ME'(#3
Mn segundo facor conribu$ene al naci!ieno de la ciencia !icrobiol*gica fue
el esableci!ieno de la relaci*n "ue une cieras ransfor!aciones "u!icas
"ue se dan en las infusiones con el creci!ieno de los g,r!enes en ellas
e2isenes. -agniardHLaour en 1836, $ ?c'Eann $ =D1ing en 1837 'aban
sugerido "ue las le#aduras eran las causanes de la fer!enaci*n alco'*lica por
la "ue el a1+car pasa a alco'ol elico $ di*2ido de carbono, pero se
enconraron con la crica ad#ersa de los grandes "u!icos de la ,poca
8<er1elius, No'ler $ Liebig9. Liebig, 'acia 1840, 'aba reali1ado i!poranes
confir!aciones a la 4eora !ineral4 sobre la nurici*n de las planas,
enfren7ndose a la 4eora del 'u!us4 sosenida por :'aer, asesando un golpe
a las ideas #ialisas 'eredadas de Leibni1. )ueso "ue se consideraba a las
le#aduras co!o planas !icrosc*picas, se supona "ue los procesos de
fer!enaci*n $ purefacci*n se deban a fen*!enos "u!icos de
desco!posici*n $ !uere encuadrables en el !arco de la eora !ineral de la
fisiologa #egeal. ?u con#enci!ieno de "ue oda aci#idad #ial se poda
e2plicar en ,r!inos de "u!ica $ fsica reras* por alg+n ie!po la adscripci*n
de esos fen*!enos a c,lulas #i#as.
Iue )aseur 8"ue, desde sus pri!eros esudios sobre las propiedades *picas
de los crisales de arrao, #ena suponiendo "ue esos co!puesos enan un
orgen org7nico9 "uien de nue#o iner#ino en el debae de for!a decisi#a. (n
1857 de!osr* "ue los agenes de la fer!enaci*n l7cica eran
!icroorganis!os, raba&ando sobre un proble!a "ue 'aba surgido enre los
desiladores de Lille cuando en sus cubas la fer!enaci*n alco'*lica se #io
susiuida por una indeseable fer!enaci*n l7cica. (se fue el inicio de una
larga serie de esudios "ue 'abra de durar 'asa 1876, en los "ue )aseur
idenific* disinos !icroorganis!os responsables de diferenes clases de
procesos fer!enai#os. 6s, en 1860 adscribe ine"u#oca!ene la
fer!enaci*n alco'*lica a cieros ipos de le#aduras, $ en 1866, en sus Oudes
sur le #in resu!e sus 'alla1gos al respeco, inaugurando la Microbiologa
6plicada, una de las pri!eras deri#aciones pr7cicas no e!pricas e!anadas de
la <iologa. 6 finales del siglo .0. e!inenes bi*logos co!o Kansen, en
-open'ague, $ <ei&erinF, en 3elf, desarrollaban su aci#idad en indusrias $
desileras.
:raba&ando sobre los agenes de la fer!enaci*n burica, )aseur descubri* la
presencia de !icroorganis!os "ue se desarrollaban en ausencia de o2geno, lo
cual des!ena la creencia de "ue odas las for!as de #ida necesian aire para
crecer. 6cu%* los ,r!inos aerobiosis $ anaerobiosis para deno!inar,
respeci#a!ene, a la #ida en presencia $ en ausencia de o2geno.
:ras el descubri!ieno de la anaerobiosis, el !is!o )aseur co!prendi* las
disinas i!plicaciones energ,icas sub$acenes a la uili1aci*n de susraos
org7nicos en presencia $ en ausencia de o2geno, de!osrando "ue, en el
segundo caso el rendi!ieno 8!edido co!o creci!ieno !icrobiano9 era
sie!pre !enor, al no poder reali1arse la degradaci*n oal de las
correspondienes susancias.
Mna profundi1aci*n en los fen*!enos de fer!enaci*n lleg* cuando en 1897
<uc'ner obu#o, a parir de le#aduras, una preparaci*n en1i!7ica 81i!asa9 "ue
era capa1 de reali1ar la !is!a ransfor!aci*n de 4fer!enaci*n4 "ue las
c,lulas #i#as. (se descubri!ieno, "ue e#ocaba las propuesas de <er1elius $
Liebig, supuso en realidad la confluencia de los enfo"ues "u!ico $ biol*gicoC las
fer!enaciones eran procesos "u!icos caali1ados por en1i!as presenes
denro de c,lulas #i#as, "ue podan ser esudiados e2racelular!ene. 3e esa
for!a, la <io"u!ica, nacida co!o una ra!a de la "u!ica fisiol*gica, "ue se
#ena especiali1ando en la en1i!ologa, enconr* una alian1a frucfera $
duradera con la &o#en Microbiologa.
46; L#3 +2+'CE3 (<C'IC#3
La docrina del pleo!orfis!o, #igene durane buena pare del siglo .0.,
!anena "ue los !icroorganis!os adopaban for!as $ funciones ca!bianes
dependiendo de las condiciones a!bienales. 6 esas ideas se oponan
fronal!ene in#esigadores co!o =oc', )aseur $ -o'n, "ue esaban
con#encidos de la especificidad $ consancia !orfol*gica $ fisiol*gica de cada
ipo de !icroorganis!o 8!ono!orfis!o9. (l pleo!orfis!o 'aba surgido co!o
una e2plicaci*n a la gran #ariedad de for!as $ aci#idades "ue aparecan en un
si!ple frasco de infusi*n, pero $a )aseur, en sus esudios sobre la
fer!enaci*n, se 'aba percaado de "ue los culi#os "ue aparecan podan
considerarse co!o una sucesi*n de disinas poblaciones de !icroorganis!os
predo!inanes, "ue, a resulas de sus aci#idades, condicionaban la ulerior
co!posici*n de la co!unidad !icrobiana. La soluci*n definii#a a esa cuesi*n
dependa, de nue#o, de un desarrollo ,cnico, "ue a su #e1 iba a su!inisrar una
de las 'erra!ienas caracersicas de la nue#a cienciaC los !,odos de culi#o
puro.
Los pri!eros culi#os puros fueron obenidos por el !ic*logo <refeld, "uien
logr* aislar esporas de 'ongos $ culi#arlas sobre !edios s*lidos a base de
gelaina. )or su !enor a!a%o, ese !,odo se 'aca in#iable para las
bacerias, por lo "ue se recurri* a un !,odo basado en dilucionesC Liser, en
1878 reali1* diluciones secuenciales de culi#os !i2os, 'asa lograr !uesras
en las "ue e2isa una sola c,lula. )ero la ,cnica era larga $ ediosa $, ade!7s,
nor!al!ene s*lo se lograban aislar c,lulas del ipo baceriano !7s abundane
en el culi#o originalB sin e!bargo, el e2peri!eno sir#i* para confir!ar la
naurale1a 4pariculada4 de los agenes de las fer!enaciones.
)or a"uella ,poca =oc' buscaba con a'nco !,odos !7s sencillos de culi#o
puro, indispensables para proseguir sus in#esigaciones sobre bacerias
pa*genas. )ri!ero 8$ "ui17 de for!a un ano casual9 e!ple* roda&as de
paaa co!o susrao s*lido nurii#o sobre el "ue se podan desarrollar
colonias !acrosc*picas de bacerias "ue presenaban !orfologa
caracersica, "ue =oc' inerpre* co!o resulanes del creci!ieno a parir
de c,lulas indi#iduales. )ero enseguida recurri* a co!pacar el pico caldo de
culi#o a parir de carne 8dise%ado por Loeffler9 a%adi,ndole gelaina 818819. (l
!edio s*lido as logrado era ransparene, lo "ue per!ia #isuali1ar f7cil!ene
los rasgos coloniales, $ conena los nurienes adecuados para el creci!ieno
de una a!plia ga!a de bacerias. Osas eran inoculadas en la superficie del
!edio con un 'ilo de plaino pasado pre#ia!ene por la lla!a, por la ,cnica de
sie!bra en esra. ?in e!bargo, la gelaina presenaba los incon#enienes de
ser aacada por deer!inados !icroorganis!os, $ de ener un ba&o puno de
fusi*nB a!bos proble!as se sol#enaron cuando en 1882 el !,dico ale!7n
Naler Kesse, siguiendo una sugerencia de su !u&er Iann$, inrodu&o el agarH
agar 8polisac7rido e2rado de algas ro&as9 co!o nue#o agene solidificane. (l
raba&o de =oc' $a ciado u#o la rascendenal consecuencia de derribar las
ideas pleo!orfisas, $ supuso la pri!era propuesa del concepo de especie
denro del !undo baceriano. (n 1887 )eri, un a$udane de =oc', susiu$* las
engorrosas bande&as de #idrio cubieras con ca!panas, usadas 'asa enonces
para los culi#os s*lidos, por un sise!a !ane&able de placas de crisal planas,
"ue se conoce co!o ca&as de )eri.
(l desarrollo de los !edios seleci#os $ de enri"ueci!ieno fue una
consecuencia de las in#esigaciones lle#adas a cabo por <ei&erincF $
NinogradsF$ enre 1888 $ los pri!eros a%os del siglo .., sobre bacerias
i!plicadas en procesos biogeo"u!icos $ poseedoras de caracersicas
fisiol*gicas disini#as 8"ui!ioau*rofas, fi&adoras de nir*geno, ec.9. (sos
!edios, donde se aplica a pe"ue%a escala el principio de selecci*n naural, se
dise%an de for!a "ue su co!posici*n "u!ica definida fa#ore1ca s*lo el
creci!ieno de cieros ipos fisiol*gicos de !icroorganis!os, +nicos capaces
de usar cieros nurienes del !edio.
;ra i!porane aporaci*n a ese 4perodo de culi#o4 denro del desarrollo
de la Microbiologa surgi* del uso de !edios diferenciales, en los "ue se
!anifiesa alg+n rasgo bio"u!ico o !eab*lico, lo "ue conribu$e a la
idenificaci*n !icrobiana. Iue NDr1 "uien, en 1892, inrodu&o el uso de
indicadores de pK, incorporados en los !edios, lo cual per!ia re#elar la
producci*n de acidificaciones por fer!enaci*n en cieras bacerias.
Mienras ano, en la ciudad de Lena se 'aba creado una a!*sfera de
progreso donde confluan grandes nauralisas co!o KaecFel, ?rassburger o
6bb, ineraccionando con una pu&ane ediorial especiali1ada en <iologa $
Medicina 8Ausa# Iisc'er9 $ con una poderosa indusria *pica $ "u!ica. (sas
influencias recprocas se plas!aron en nu!erosos pro$ecos "ue refle&aban la
efer#escencia de las ciencias naurales ras la esela de 3arEin 8cfr. La'n e
al., 19859. -oncrea!ene, la indusria *pica de 6bb, $ Peiss, "ue se !anena
en cone2i*n con la co!pa%a #idriera ?c'o, pudo saisfacer la necesidad de
=oc' de perfeccionar el !icroscopio co!pueso, inroduciendo lenes
acro!7icas $ una ilu!inaci*n inferior pro#isa de condensador. (l !is!o 6bbe
desarroll* en 1878 el ob&ei#o de in!ersi*n en aceie. )or oro lado, la
indusria "u!ica <6?I, "ue por a"uella ,poca se enconraba en pleno auge de
paenes de nue#os coloranes, su!isr* al laboraorio de =oc' una serie de
deri#ados de anilina "ue e%an las bacerias per!iiendo su f7cil #isuali1aci*n
al !icroscopio en frois de e&idos infecados. (n 1875 -arl Neiger i%*
bacerias con pirocar!n, un colorane "ue $a #ena siendo usado desde 'aca
unos a%os en esudios 1ool*gicos. (n a%os sucesi#os se fueron inroduciendo el
a1ul de !eileno 8=oc', 18779, la fuc'sina, $ el #iolea crisal. (n 1882H1883
Pie'l $ @eelsen desarrollan su !,odo de 7cidoHalco'ol resisencia para e%ir
M$cobaceriu! uberculosis. (n 1884 el pa*logo dan,s -'risian Ara!
esablece una inci*n de conrase "ue per!ie disinguir dos ipos
bacerianos en funci*n de sus reacci*n diferencial de inci*n $ "ue, co!o se
#era !uc'o !7s arde, refle&aba la e2isencia de dos grupos de bacerias con
rasgos esrucurales disini#os. (n 1890 Loeffler logra #isuali1ar flagelos
bacerianos por !edio de su ,cnica de i!pregnaci*n arg,nica. -o!o #ere!os
!7s adelane, la !is!a indusria de coloranes ale!ana pre#ia a la pri!era
guerra !undial fue decisi#a a!bi,n para los co!ien1os de la "ui!ioerapia.
(sas inno#aciones ,cnicas 8!,odos de culi#o, !icroscopa $ inciones9
fueron funda!enales 8&uno con los sise!as de eserili1aci*n abordados en el
anerior aparado9 para la consolidaci*n de la Microbiologa co!o ciencia,
per!iiendo eli!inar las grandes dosis de especulaci*n "ue 'asa enonces
'aban predo!inado.
46= EL ,+,EL DE L#3 MIC"##"/+'I3M#3 E' EL DE3+""#LL# DE
L+3 E':E"MED+DE3
3urane el siglo .0. la aenci*n de !uc'os nauralisas se 'aba dirigido 'acia
las di#ersas for!as de ani!ales $ planas "ue #i#an co!o par7sios de oros
organis!os. (se iner,s se redobl* ras la publicaci*n de los libros de 3arEin,
esudi7ndose las nu!erosas adapaciones e#olui#as "ue los disinos par7sios
'aban ad"uirido en su peculiar esilo de #ida. ?in e!bargo, la ad&udicaci*n de
propiedades de par7sios a los !icroorganis!os #ino del ca!po !,dico $
#eerinario, al re#alori1arse las ideas sobre el origen ger!inal de las
enfer!edades infecciosas.
(n 1835 6gosino <assi 81773H18569 de!osr* "ue ciera enfer!edad del
gusano de seda 8!al di segno9, "ue 'aba 'ec'o su aparici*n en Lo!barda, se
deba a un 'ongo 8<or$is bassiana9. -uaro a%os !7s arde L.L. ?c'Qnlein
descubri* la asociaci*n de un 'ongo con una enfer!edad 'u!ana de la piel. (n
1840 Kenle, de la escuela fisiol*gica de Lo'annes MDller, plane* la eora de
"ue las enfer!edades infecciosas es7n causadas por seres #i#os in#isibles,
pero de nue#o la confir!aci*n de esas ideas u#o "ue esperar a "ue la
iner#enci*n de )aseur de!osrara la e2isencia de !icroorganis!os
especficos responsables de enfer!edades.
Kacia !ediados del siglo .0. ora enfer!edad infecciosa 8pebrina9 co!en1* a
dise!inarse por los criaderos de gusano de seda de oda (uropa, alcan1ando
final!ene a -'ina $ Lap*n. 6 insancias de su !aesro Lean <apise 3u!as,
)aseur acep* el reo de #ia&ar a la )ro#en1a para in#esigar esa enfer!edad
"ue esaba de&ando en la ruina a los indusriales sederos, a pesar de "ue nunca
'asa enonces se 'aba enfrenado con un proble!a de paologa. (s !7s "ue
probable "ue )aseur #iera a"u la oporunidad de confir!ar si sus esudios
pre#ios sobre las fer!enaciones podan ener una e2ensi*n 'acia los
procesos fisiol*gicos del 'o!bre $ de los ani!ales. (s sorprendene "ue, al
principio no se !osrara dispueso a acepar la idea de "ue la pebrina fuera una
enfer!edad ocasionada por un agene e2ra%o, cre$endo durane los dos
pri!eros a%os "ue se raaba de aleraciones !era!ene fisiol*gicas. :ras una
serie de aneos, $ en !edio de una inensa aci#idad inelecual "ue le
obligaba a repasar coninua!ene los e2peri!enos $ las conclusiones
e2radas, in!erso en el dra!a personal de la !uere de su padre $ de dos de
sus 'i&as en un coro lapso de ie!po, )aseur llega final!ene, en 1869, a
idenificar al proo1oo @ose!a bo!b$cis co!o el responsable de la epide!ia, $
por !edio de una serie de !edidas de conrol, ,sa co!ien1a a re!iir de !odo
especacular.
La iner#enci*n de bacerias co!o agenes especficos en la producci*n de
enfer!edades fue descubiera a ra1 de una serie de in#esigaciones sobre el
carbunco o 7nra2, enfer!edad "ue afeca a ganado $ "ue puede rans!iirse
al 'o!bre. -. 3a#aine, enre 1863 $ 1868, enconr* "ue en la sangre de #acas
afecadas aparecan grandes canidades de !icroorganis!os a los "ue lla!*
baceridiosB ade!7s, logr* inducir la enfer!edad e2peri!enal!ene en #acas
sanas, inocul7ndoles !uesras de sangre infecada. (n 1872 el !,dico ale!7n
-.L. (ber' consigui* aislar los bacilos filrando sangre de ani!ales
carbuncosos. )ero fue 5ober =oc' 81843H19109, "ue 'aba sido alu!no de
Kenle, "uien con su reciene ,cnica de culi#o puro logr*, en 1876, el pri!er
aisla!ieno $ propagaci*n in #iro del bacilo del 7nra2 8<acillus an'racis9,
consiguiendo las pri!eras !icrofoografas sobre preparaciones secas, fi&adas
$ e%idas con a1ul de !eileno. M7s arde 818819, =oc' $ sus colaboradores
confir!aron "ue las esporas son for!as diferenciadas a parir de los bacilos, $
!7s resisenes "ue ,sos a una #ariedad de agenes. )ero !7s funda!enal
fue su de!osraci*n de "ue la enfer!edad se poda rans!iir sucesi#a!ene a
raones sanos inocul7ndoles bacilos en culi#o puro, obenidos ras #arias
ransferencias en !edios l"uidos.
(se ipo de esraegias para de!osrar el origen baceriano de una
enfer!edad fue lle#ado a una ulerior perfecci*n en 1882, con la publicaci*n de
43ie R'iologie der :uberFulose4, donde se co!unica por pri!era #e1 la
aplicaci*n de los crierios "ue Kenle 'aba posulado en 1840. (sos crierios,
"ue 'o$ #an asociados al no!bre de =oc', son los siguienesC
1. (l !icroorganis!o debe de esar presene en odos los indi#iduos
enfer!os.
2. (l !icroorganis!o debe poder aislarse del 'ospedador $ ser crecido en
culi#o puro.
3. La inoculaci*n del !icroorganis!o crecido en culi#o puro a ani!ales
sanos debe pro#ocar la aparici*n de sno!as especficos de la
enfer!edad en cuesi*n.
4. (l !icroorganis!o debe poder ser reaislado del 'ospedador infecado
de for!a e2peri!enal.
Iue asi!is!o =oc' "uien de!osr* el principio de especificidad biol*gica del
agene infecciosoC cada enfer!edad infecciosa especfica es7 causada por un
ipo de baceria diferene. (sos raba&os de =oc' abren definii#a!ene el
ca!po de la Microbiologa M,dica sobre fir!es bases cienficas.
3urane las dos d,cadas siguienes la Microbiologa e2peri!en* una au,nica
edad de oro, en la "ue se aislaron $ caraceri1aron !uc'as bacerias
pa*genas. La 6le!ania del 5eic', "ue a la sa1*n se 'aba con#erido en una
poencia polica $ !iliar, se decidi* a apo$ar la coninuidad de los raba&os
del e"uipo de =oc', dada su enor!e i!porancia social $ econ*!ica, creando un
0nsiuo de in#esigaci*n, siendo =oc' su direcor en el 3epara!eno de
?alud. 3e esa for!a, en la (scuela 6le!ana se aislaron los agenes
producores del c*lera asi7ico 8=oc', 18839, de la diferia 8Loeffler, 18849,
del ,anos 8@icolaier, 1885 $ =iasao, 18899, de la neu!ona 8IraenFel, 18869,
de la !eningiis 8Neic'selbaun, 18879, de la pese 8Jersin, 18949, de la sfilis
8?c'audinn $ Koff!an, 19059, ec. 0gual!ene se pudieron desenra%ar los
ciclos infeci#os de agenes de enfer!edades ropicales no bacerianas "ue la
poencia colonial se enconr* en ulra!arC !alaria 8?c'audinn, 1901H19039,
enfer!edad del sue%o 8=oc', 19069, pese #acuna africana 8debida al ingl,s
<ruce, 1895H18979, ec.
)or oro lado, la (scuela Irancesa, nucleada en el 0nsiuo )aseur, se
concenr* en los esudios sobre los procesos infeci#os, la in!unidad del
'ospedador, $ la obenci*n de #acunas, sobre odo a ra1 de la #acuna
anirr7bica ensa$ada por )aseur 818859, conribu$endo al naci!ieno de la
0n!unologa 8#er aparado 2. 99.
46> DE3+""#LL# DE L+ +3E,CI+, ?)IMI#(E"+,I+ -
+'(I.I#(E"+,I+
Los a#ances de las ,cnicas "uir+rgicas 'acia !ediados del siglo .0.,
i!pulsados por la inroducci*n de la anesesia, ra&eron consigo una gran
incidencia de co!plicaciones posHoperaorias deri#adas de infecciones. Mn
&o#en !,dico bri7nico, Losep' Lise 81827H19129, "ue 'aba ledo aena!ene
los raba&os de )aseur, $ "ue crea "ue esas infecciones se deban a
g,r!enes presenes en el aire, co!prob* "ue la aplicaci*n de co!puesos co!o
el fenol o el bicloruro de !ercurio en el la#ado del insru!enal "uir+rgico, de
las !anos $ de las 'eridas, dis!inua noable!ene la frecuencia de infecciones
posH"uir+rgicas $ puerperales.
M7s arde, )aul ('rlic' 81854H19199, "ue 'aba #enido e!pleando disinas
susancias para e%ir c,lulas $ !icroorganis!os, $ "ue conoca bien el efeco
de inci*n seleci#a de bacerias por cieros coloranes "ue de&aban, en
ca!bio, incoloras a c,lulas ani!ales, concibi* la posibilidad de "ue algunos de
los co!puesos de snesis "ue la indusria "u!ica esaba produciendo
pudieran acuar co!o 4balas !7gicas4 "ue fueran *2icas para las bacerias
pero inocuas para el 'ospedador. ('rlic' concibi* un progra!a racional de
snesis de susancias nue#as seguido de ensa$o de ,sas en infecciones
e2peri!enales. :raba&ando en el laboraorio de =oc', prob* sise!7ica!ene
deri#ados del ao2ilo 8un co!pueso "ue $a :'o!pson, en 1905, 'aba !osrado
co!o efica1 conra la ripanoso!iasis9, $ en 1909 infor!* de "ue el co!pueso
606 8sal#ars7n9 era efeci#o conra la sfilis. 6un"ue el sal#ars7n presenaba
algunos efecos colaerales, fue durane !uc'o ie!po el +nico agene
disponible conra enfer!edades producidas por espiro"ueas, $ sir#i* para
ilusrar brillane!ene la #alide1 del enfo"ue de la lla!ada "ui!ioerapia
8,r!ino acu%ado por el !is!o ('rlic'9, de !odo "ue encau1* oda la
in#esigaci*n poserior.
(n 1927 Aer'ard 3o!agF, en cone2i*n con la poderosa co!pa%a "u!ica 0.A.
Iarbenindusrie, inici* un a!bicioso pro$eco de b+s"ueda de nue#os agenes
"ui!ioer7picos, siguiendo el es"ue!a de ('rlic'B en 1932H1935 descubre la
acci*n del ro&o de pronosilo frene a neu!ococos 'e!olicos denro del
'ospedador, pero se%ala "ue esa droga es inaci#a sobre bacerias creciendo
in #iro. La e2plicaci*n la su!isra el !ari!onio :r,fouSl, del 0nsiuo
)aseur, al descubrir "ue la aci#idad anibaceriana depende de la con#ersi*n
por el 'ospedador en sulfanila!ida. (l !ecanis!o de acci*n de las sulfa!idas
8in'ibici*n co!peii#a con el 7cido paraHa!inoben1oico9 fue dilucidado por el
esadounidense 3onald 3. Noods. Las in#esigaciones de ,se enca!inaron a la
indusria far!ac,uica 'acia la snesis de an7logos de !eabolios esenciales,
inroduciendo un enfo"ue !7s racional frene a la ,poca anerior, !7s
e!prica.
(n 1874, el !,dico ingl,s N. 5obers 'aba descrio las propiedades
anibi*icas de cieros culi#os de 'ongos 8)enicilliu! glaucu!9 conra las
bacerias, e inrodu&o en Microbiologa el concepo de anagonis!o. ;ros
in#esigadores de finales del siglo .0. reali1aron obser#aciones si!ilares,
pero fue Ile!ing "uien, en 1929, logr* e2presar ideas claras sobre el e!a, al
aribuir a una susancia "u!ica concrea 8la penicilina9 la acci*n in'ibidora
sobre bacerias producida por el 'ongo )enicilliu! noau!. Ile!ing desarroll*
un ensa$o crudo para deer!inar la poencia de la susancia en sus filrados,
pudiendo seguir su producci*n a lo largo del ie!po de culi#o, $ !osrando "ue
no odas las especies bacerianas eran igual!ene sensibles a la penicilina. Las
dificulades ,cnicas para su e2racci*n, &uno al 'ec'o de "ue el iner,s de la
,poca a+n esaba cenrado sobre las sulfa!idas, i!pidieron una prona
purificaci*n de la penicilina, "ue no lleg* 'asa los raba&os de -'ain $ Ilore$
819409, co!prob7ndose enonces su gran efeci#idad conra infecciones
bacerianas, sobre odo de Ara!Hposii#as, $ la ausencia de efecos *2icos
para el 'ospedador.
0n!ediaa!ene co!en1* una b+s"ueda sise!7ica de !icroorganis!os del
suelo "ue !osraran aci#idades anibi*icas. (n 1944 6. ?c'a1 $ ?. NaFs!an
descubren la esrepo!icina, producida por ?repo!$ces griseus, siendo el
pri!er e&e!plo de anibi*ico de a!plio especro. Los die1 a%os "ue si"uieron
al ,r!ino de la segundad guerra !undial #ieron la descripci*n de 96
anibi*icos disinos producidos por 57 especies de !icroorganis!os,
principal!ene 6cino!iceos.
(n la d,cada de los 60 se abri* una nue#a fase en la era de los anibi*icos al
obenerse co!puesos se!isin,icos por !odificaci*n "u!ica de anibi*icos
naurales, pali7ndose los proble!as de resisencia baceriana a drogas "ue
'aban e!pe1ado a aparecer, dis!inu$,ndose en !uc'os casos los efecos
secundarios, $ a!pli7ndose el especro de acci*n.
6pare de la re#oluci*n "ue supusieron en el ca!po de la aplicaci*n clnica, los
anibi*icos 'a per!iido noables a#ances en el desenra%a!ieno de
deer!inados aspecos de ar"uiecura $ funci*n !oleculares de las c,lulas
suscepibles 8paredes celulares !icrobianas, riboso!as, snesis proeica,
ec.9.
46@ +)/E DE L+ MIC"#.I#L#/0+ /E'E"+L6
Aran pare de los a#ances en Microbiologa descrios 'asa a'ora se debieron a
la necesidad de resol#er proble!as pr7cicos. )ero 'acia finales del siglo .0.
una serie de in#esigadores Halgunos de ellos procedenes de 7reas !7s
cl7sicas de la Kisoria @auralH desarrollaron i!poranes esudios b7sicos "ue
fueron re#elando una enor!e #ariedad de !icroorganis!os $ sus aci#idades
!eab*licas, as co!o su papel crucial en ciclos biogeo"u!icos, sus relaciones
con procesos de nurici*n #egeal, ec.
(l descubri!ieno de la "ui!ioauorofa, obra del gran !icrobi*logo ruso
?ergei NinogradsF$ 81856H19539, oblig* a re#isar los concepos pre#ios,
procedenes de la Iisiologa /egeal, de "ue el creci!ieno auor*fico
dependa de la presencia de clorofila. NinogradsF$ 'aba co!en1ado
in#esigando las bacerias del 'ierro descubieras por -o'n en 1875,
obser#ando "ue podan crecer en !edios !inerales, por lo "ue supuso "ue
obenan su energa de la o2idaci*n de sales ferrosas a f,rricas 818889. (n
1889, co!binando ,cnicas de obser#aci*n secuencial de culi#os !icrosc*picos
con ensa$os !icro"u!icos sobre bacerias del a1ufre 8<eggiaoa, :'io'ri29,
infiri* "ue esos !icroorganis!os o2idaban sulfuro de 'idr*geno 'asa a1ufre
ele!enal 8acu!ulando ,se co!o gr7nulos9, $ luego 'asa 7cido sulf+rico,
obeniendo de ese !odo su energa. (sas obser#aciones pueden 'aber sido el
arran"ue del concepo de liorofa. )ero el descubri!ieno de la
"ui!ioauorofa lleg* cuando al a%o siguiene NinogradsF$ $ ;!eliansF$
pasaron a esudiar las bacerias nirificanes, de!osrando de !anera clara
"ue la energa obenida de la o2idaci*n del a!onio o del nirio era usada para
fi&ar -;
2
81889H18909. M7s arde el !is!o NinogradsF$ e2endi* la
de!osraci*n a culi#os puros en los "ue el agene solidificane de los !edios
era el gel de slice. La e2plicaci*n del proceso de o2idaci*n de los co!puesos
de a1ufre no lleg* 'asa los esudios de 3angeard 819119 $ =iel 819129. @ue#as
capacidades !eab*licas fueron re#eladas al esudiar los procesos
respiraorios de las bacerias "ue o2idan 'idr*geno o !eano 8?Q'ngen, 19069.
(l "u!ico <er'elo 'aba se%alado 818859 "ue los !icroorganis!os del suelo
podan incorporar nir*geno !olecular direca!ene del aire. Iue igual!ene
NinogradsF$ el pri!ero en aislar una baceria capa1 de fi&ar nir*geno
a!osf,rico 8-losridiu! paseurianu!9 $ en e2plicar el ciclo del nir*geno en
la naurale1a 818909, siendo el 'oland,s Marinus <ei&erincF 81851H19319 el
descubridor de 61oobacer co!o baceria aerobia fi&adora de #ida libre
819019. M7s arde <ei&erincF de!osr* por !,odos "u!icos "ue, en efeco,
61oobacer incorpora nir*geno de la a!*sfera !ienras crece 819089. La
i!porancia de la fi&aci*n de nir*geno para la nurici*n #egeal lleg* con los
esudios sobre bacerias for!adoras de n*dulos en las races de las
legu!inosas. Ja los e2peri!enos cuaniai#os sobre planas creciendo en
recipienes, reali1ados por <oussingaul a !ediados del siglo .0., 'aban
indicado "ue las legu!inosas asi!ilaban nir*geno de la a!*sfera. (n 1866
/oronin descubri* las bacerias de los n*dulos radicales de esa fa!ilia de
planas. IranF, en 1879, de!osr* "ue los n*dulos parecan inducirse por las
!is!as bacerias albergadas en ellos, $ Nard 818879 us* bacerias
procedenes de n*dulos !ac'acados para inocular se!illas, logrando la
producci*n de n*dulos en suelo es,ril, $ describiendo en un bello raba&o el
proceso de infecci*n, con su producci*n de 4'ifas4 8cord*n de infecci*n9. :ras
la inroducci*n del concepo de si!biosis por 3e <ar$, en 1878, fue ?c'indler
818849 el pri!ero en describir los n*dulos radicales co!o resulado de una
si!biosis enre plana $ bacerias. Los raba&os de Ker!ann Kellriegel 81831H
18959 $ de su colaborador Ker!ann Nillfa'r 81853H19049, "ue raba&aban en
la (saci*n (2peri!enal de <ernburg, co!unicados en pri!er lugar en un
cogreso en <erln, en 1886, $ publicados en un arculo e&e!plar en 1888,
asociaron la ferilidad nirogenada naural de las legu!inosas con la presencia
de sus n*dulos radicales, se%alando "ue esos n*dulos se inducan por
!icroorganis!os especficosB de ese !odo lograron una brillane snesis de
las obser#aciones !icrobiol*gicas $ "u!icas. (l !is!o a%o de 1888 <ei&erincF
logr* el culi#o puro in #iro de las bacerias nodulares 8a las "ue baui1* co!o
<acillus radicicola9, obser#ando "ue no reducan nir*geno en #ida libreB !7s
arde 818909 apor* la prueba definii#a de "ue las bacerias aisladas eran
capaces de nodular especfica!ene cieras especies de legu!inosas,
ad"uiri,ndose de esa for!a la faculad de fi&ar nir*geno en su asociaci*n con
la ra1 de la plana. 0r*nica!ene el no!bre definii#o para las bacerias de los
n*dulos de legu!inosas 85'i1obiu!9 fue propueso por IranF, "uien durane
!uc'o ie!po se 'aba negado a reconocer los resulados de Kellriegel $
Nillfa'r, $ "ue 'aba oscilado en sus opiniones, desde suponer "ue la fi&aci*n
de nir*geno era un rasgo general de las planas, 'asa creer "ue las
esrucuras nodulares obser#adas a !icrocopio 8baceroides9 eran gr7nulos de
reser#a 8incluidas las "ue ,l !is!o obser#* en planas no legu!inosas de los
g,neros 6lnus $ (leagnus, originadas por una baceria baui1ada en su 'onor
HIranFia9B incluso cuando se con#enci* de "ue los si!biones eran bacerias 8$
no 'ongos o !i2o!icees9, pensaba "ue ,sas s*lo esi!ulaban a "ue las planas
fi&aran nir*geno en sus 'o&asB su 4con#ersi*n4 8$ a+n as inco!plea $ con
reicencias9 no lleg* 'asa 1892. (l aisla!ieno de los baceroides
inranodulares 8)ra1!oEsFi, 18909, $ la relaci*n enre su for!aci*n $ la
fi&aci*n de nir*geno 8@obbe $ Kilner, 18939 co!ple* esa pri!era oleada de
in#esigaci*n sobre ese e!a "ue ana rascendencia presenaba para la
6grono!a. (sos esudios es7n en la base de odos los uleriores raba&os de
Microbiologa 6grcola, de !odo "ue esa especiliadad fue incorporada
e!prana!ene a los laboraorios cienficos $ esaciones e2peri!enales.
Las obras rascendenales de NinogradsF$ $ <ei&erincF abrieron un nue#o
'ori1one para el esudio de la di#ersidad !icrobiana. La escuela de <ei&erincF,
en la Mni#ersidad :,cnica de 3elf, fue coninuada por por 6.L. =lu$#er $ -.<.
#an @iel, siendo ese +li!o el 4padre4 de la escuela norea!ericana desde su
esableci!ieno en -alifornia, $a "ue for!* a figuras an i!poranes co!o
5.J. ?anier, 5.(. Kungae o M. 3oudoroff. La escuela 'olandesa fundada por
<ei&erincF u#o asi!is!o ora frucfera 4colonia4 en la ciudad ale!ana de
=onsan1, donde @. )fennig coninu* el raba&o e!prendido &uno a #an @iel en
3elf. :odos esos auores, $ sus colaboradores, fueron reali1ando
conribuciones esenciales sobre una a!plia di#ersidad de bacerias,
descubriendo la #ariedad de las bacerias foosin,icas, los ipos de
organis!os lior*ficos, $ profundi1ando en !uliud de aspecos esrucurales
$ fisiol*gicos de las bacerias reci,n descubieras. -o!o dice :.3. <rocF en
una recensi*n de =lu$#er 819619 4los 'o!bres de la escuela de 3elf de
Microbiologa Aeneral fueron pioneros en una ,poca en la "ue la !a$ora de los
in#esigadores esaban de!asiado fascinados por proble!as aplicados en
!edicina, agriculura o indusria, co!o para preocuparse por !icroorganis!os
"ui!iosin,icos o foosin,icos, o por a"uellos "ue !uesran fer!enaciones
inusuales...4. )ero, co!o en anas oras ocasiones, ese enfo"ue de ciencia
b7sica 'a sido e2raordinaria!ene f,ril, $ apare de la profundi1aci*n en la
unidad $ di#ersidad de la #ida 'a dado origen a peneranes percepciones en
!uliud de proble!as planeados, arde o e!prano, a las ciencias biol*gicas.
46A DE3+""#LL# DE L+ I'M)'#L#/0+
La in!unologa es, en la acualidad, una ciencia au*no!a $ !adura, pero sus
orgenes 'an esado esrec'a!ene ligados a la Microbiologa. ?u ob&eo
consise en el esudio de las respuesas de defensa "ue 'an desarrollado los
ani!ales frene a la in#asi*n por !icroorganis!os o parculas e2ra%os, aun"ue
su iner,s se 'a #olcado especial!ene sobre a"uellos !ecanis!os ala!ene
e#olucionados e inegrados, doados de especificidad $ de !e!oria, frene a
agenes reconocidos por el cuerpo co!o noHpropios, as co!o de su
neurali1aci*n $ degradaci*n.
-o!o anas oras ciencias, la 0n!u!ologa presena un prolongado perodo
preHcienfico, de obser#aciones $ apro2i!aciones !era!ene e!pricas. La
resisencia a uleriores aa"ues de una enfer!edad infecciosa fue $a recogida
en escrios de la anigDedadB el 'isoriador griego :ucdides 8464H404 a.-.9
narra "ue en una epide!ia acaecida durane la guerra del )eloponeso, los
enfer!os eran aendidos solo por a"uellos "ue 'aban sobre#i#ido pre#ia!ene
a la enfer!edad, en la seguridad de "ue ,sos no #ol#eran a ser conagiados.
0gual!ene, en la anigua -'ina se 'aba obser#ado "ue las personas "ue en su
ni%e1 'aban padecido la #iruela no la ad"uiran !7s adelane en su #ida. Los
!is!os c'inos, en el siglo .0 a. -., fueron los pri!eros en inenar una
aplicaci*n de esas obser#aciones "ue indicaban la inducci*n de un esado
proecor por !edio de una for!a sua#e de la enfer!edadC la in'alaci*n de
pol#o de escaras de #iruela pro#ocaba un aa"ue sua#e "ue confera resisencia
ane infecciones poseriores. Mna !odificaci*n fue inroducida en ;ccidene
en el siglo ./000 por )$larini $ :i!oni, $ fue populari1ada en Aran <rea%a por
Lad$ Mar$ Norle$ Monagu, esposa del e!ba&ador ingl,s en -onsaninopla,
ras una serie inicicial de pruebas sobre 4#olunarios4 8prisioneros9. ?in
e!bargo, ese ipo de pr7cicas no llegaron a arraigar a!plia!ene, $a "ue no
esaban e2enas de riesgos, enre los cuales figuraba la posibilidad de
rans!isi*n de oras enfer!edades.
(l pri!er acerca!ieno a la in!uni1aci*n con crierios racionales fue reali1ado
por el !,dico ingl,s (dEard Lenner 81749H18239, ras su consaaci*n de "ue
los #a"ueros "ue 'aban ad"uirido la #iruela #acunal 8una for!a benigna de
enfer!edad "ue s*lo produca p+sulas en las !anos9 no eran aacados por la
gra#e $ defor!ane #iruela 'u!ana. (n !a$o de 1796 inocul* a un ni%o fluido
procedene de las p+sulas #acunales de ?ara' @el!esB se!anas despu,s el
ni%o fue in$ecado con pus de una p+sula de un enfer!o de #iruela,
co!probando "ue no "uedaba afecado por la enfer!edad. Lenner public* sus
resulados en 1798 846n en"uir$ ino 'e causes and effecs of 'e #ariolae
#accinae...49, pronosicando "ue la aplicaci*n de su !,odo podra llegar a
erradicar la #iruela. Lenner fue el pri!ero en recalcar la i!porancia de
reali1ar esudios clnicos de segui!ieno de los pacienes in!uni1ados,
consciene de la necesidad de conar con conroles fiables.
La fala de conoci!ieno, en a"uella ,poca, de las bases !icrobiol*gicas de las
enfer!edades infecciosas reras* en casi un siglo la coninuaci*n de los
esudios de Lenner, aun"ue cieros auores, co!o :urenne, en su libro 4La
s$p'ili1aion4 818789 lograron aricular propuesas e*ricas de ciero iner,s.
(l pri!er aborda&e plena!ene cienfico de proble!as in!unol*gicos se debi*,
de nue#o, a )aseur. (sudiando la baceria responsable del c*lera a#iar 8!7s
arde conocida co!o )aseurella a#isepica9, obser#* 818809 "ue la inoculaci*n
en gallinas de culi#os #ie&os, poco #irulenos, las proega de conraer la
enfer!edad cuando poserior!ene eran in$ecadas con culi#os nor!ales
#irulenos. 3e esa for!a se obu#o la pri!era #acuna a base de
!icroorganis!os aenuados. Iue precisa!ene )aseur "uien dio cara de
naurale1a al ,r!ino #acuna, en 'onor del raba&o pionero de Lenner. (n los
a%os siguienes )aseur abord* la in!uni1aci*n arificial para oras
enfer!edadesB concrea!ene, esableci* de for!a clara "ue culi#os de
<acillus an'racis aenuados por incubaci*n a 45T- conferan in!unidad a
o#e&as e2puesas a conagio por carbunco. Mna fa!osa de!osraci*n p+blica de
la bondad del !,odo de )aseur u#o lugar en )ouill$ le Ior, el dos de &unio
de 1881, cuando ane un geno e2pecane se pudo co!probar la !uere del
grupo conrol de o#e&as $ #acas no inoculadas, frene a la super#i#encia de los
ani!ales #acunados. 6%os despu,s, abordara la in!uni1aci*n conra la rabia,
enfer!edad de la "ue se desconoca el agene causal. )aseur obser#* "ue ,se
perda #irulencia cuando se !anenan al aire durane ciero ie!po e2racos
!edulares de ani!ales infecados, por lo "ue dic'os e2racos se podan
e!plear efica1!ene co!o #acunas. 5eali1* la pri!era #acunaci*n anirr7bica
en 'u!anos el 6 de &ulio de 1885, sobre el ni%o Losep' Meiser, "ue 'aba sido
!ordido gra#e!ene por un perro rabioso. 6 ese caso siguieron oros !uc'os,
lo "ue #ali* a )aseur reconoci!ieno uni#ersal $ supuso el apo$o definii#o a su
!,odo de in!uni1aci*n, "ue abra perspeci#as pro!eedoras de profila2is
ane !uc'as enfer!edades. (sos logros deer!inaron, en buena !edida, la
creaci*n del 0nsiuo )aseur, "ue !u$ prono reuni* a un seleco grupo de
cienficos, "ue enfocaran sus esfuer1os en di#ersos aspecos de las
in!uni1aciones $ de sus bases biol*gicas. 6 su #e1, los norea!ericanos ?al!on
$ ?!i' 818869 perfeccionaron los !,odos serol*gicos de )aseur, lo "ue les
per!ii* producir $ conser#ar !7s f7cil!ene sueros ipificados conra la
pese porcina.
6 finales del siglo .0. e2isan dos eoras opuesas sobre los funda!enos
biol*gicos de las respuesas in!unes. )or un lado, el 1o*logo ruso 0l$a 0lic'
Mec'niFo# 81845H19169, "ue 'aba reali1ado obser#aciones sobre la fagociosis
en esrellas de !ar $ pulgas de agua, esableci*, a parir de 1883, su 4:eora
de los fagocios4, ras esudiar fen*!enos de engloba!ieno de parculas
e2ra%as por los leucocios de cone&o $ de 'u!anos. 0nfor!* "ue e2isan
fen*!enos de eli!inaci*n de agenes pa*genos por !edio de 4c,lulas
de#oradoras4 8fagocios9 "ue acuaban en ani!ales #acunados conra el
carbunco, $ e2plic* la in!uni1aci*n co!o una 4'abiuaci*n4 del 'ospedador a la
fagociosis. M7s arde, $a inegrado en el 0nsiuo )aseur, propugn* la idea
de "ue los fagocios segregan en1i!as especficos, an7logos a los 4fer!enos4
digesi#os 819009. (sa eora de los fagocios consiu$* el n+cleo de la eora
de la in!unidad celular, de !odo "ue la fagociosis se consideraba co!o la base
principal del sise!a de defensa in!une del organis!o.
)or oro lado, la escuela ale!ana de =oc' 'aca 'incapi, en la i!porancia de
los !ecanisnos 'u!orales. (!il #on <e'ring 81854H19179 $ ?'ibasaburo
=iasao 81856H19319, a resulas de sus raba&os sobre las o2inas del ,anos
$ de la diferia, obser#aron "ue el cuerpo produce 4anio2inas4 8!7s arde
conocidas co!o anicuerpos9 "ue endan a neurali1ar las o2inas de for!a
especfica, $ e#idenciaron "ue el suero "ue coniene anio2inas es capa1 de
proeger a ani!ales e2puesos a una dosis leal de la o2ina correspondiene
818909. La iner#enci*n de ('rlic' per!ii* obener sueros de caballo con
ni#eles de anicuerpos suficiene!ene alos co!o para conferir una
proecci*n efica1, e igual!ene se pudo disponer de un ensa$o para cuanificar
la 4anio2ina4 presene en suero. ('rlic' dirigi* desde 1896 el 0nsiuo
(saal para la 0n#esigaci*n $ -o!probaci*n de ?ueros, en ?egli1, cerca de
<erln, $, a parir de 1899, esu#o al frene del !e&or e"uipado 0nsiuo de
:erapia (2peri!enal, en IranFfur. 3urane ese +li!o periodo de su #ida,
('rlic' produce una i!presionane obra cienfica, en la "ue #a a'ondando en la
co!prensi*n de la in!unidad 'u!oral. (n 1900 da a lu1 su 4:eora de las
cadenas laerales4, en la "ue for!ula una e2plicaci*n de la for!aci*n $
especificidad de los anicuerpos, esableciendo una base "u!ica para la
ineracci*n de ,sos con los angenos. )or su lado, 5. =raus #isuali1a por
pri!era #e1, en 1897, una reacci*n angenoHanicuerpo, al obser#ar el
enurbia!eno de un filrado baceriano al !e1clarlo con un suero in!une
especfico 8anisuero9. (n 1898 Lules <orde 81870H19619 descubre oro
co!ponene s,rico relacionado con la respuesa in!uniaria, al "ue baui1a
co!o 4ale2ina4, caraceri1ado, frene al anicuerpo, por su er!olabilidad e
inespecificidad. 8M7s arde se i!pondra el no!bre de co!ple!eno, propueso
por ('rlic'9. (l !is!o <orde desarroll*, en 1901, el pri!er sise!a
diagn*sico para la deecci*n de anicuerpos, basado en la fi&aci*n del
co!ple!eno, $ "ue inici* una larga andadura, "ue llega a nuesros das.
La conciliaci*n de las dos eoras se debi* a 6l!or' Nrig' $ ?eEar 5.
3ouglas, "uienes en 1904 descubren las opsoninas, anicuerpos presenes en los
sueros de ani!ales in!uni1ados $ "ue, ras unirse a la superficie baceriana,
incre!enan la capacidad fagocica de los leucocios.
(l 7rea de la in!unopaologa inicia su andadura con la descripci*n del
fen*!eno de anafila2ia producido por inroducci*n en un ani!al de un suero de
una especie disina 8)orier $ 5ic'e, 1902B 6r'us, 19039, lo "ue a su #e1
abrira la posibilidad de !,odos de serodiagn*sico, con aplicaciones !+liples
en Medicina, Poologa, $ oras ciencias biol*gicas. (n 1905 )ir"ue sugiere "ue
la enfer!edad del suero 8un fen*!e!o de 'ipersensibilidad9 iene relaci*n
direca con la producci*n de anicuerpos conra el suero in$ecado,
inroduciendo el ,r!ino de alergia para referirse a la reaci#idad in!unol*gica
alerada.
La in!uno"u!ica cobra un gran i!pulso en las pri!eras d,cadas del siglo ..
con los raba&os de =arl Landseiner 81868H19439. ?u pri!era conribuci*n de
i!porancia 'aba sido la descripci*n, !ediane reacciones de agluinaci*n, del
sise!a de angenos naurales 86<-09 de los erirocios 'u!anos 81901H19029,
co!pleada 8en colaboraci*n con /on 3ungern $ Kir1feld9, con las subdi#isiones
del grupo 6 $ el esudio de su rans!si*n 'erediaria. (sos raba&os sir#ieron
de es!ulo para a#an1ar en el desenra%a!ieno de la especificidad "u!ica de
los angenos "ue deer!inan la for!aci*n de anicuerpos. Landseiner esudi*
sise!7ica!ene las caracersicas de in!unogenicidad $ especificidad de
reacci*n de angenos con anicuerpos, #ali,ndose de la !odificaci*n "u!ica de
angenos, deno!inando 'apenos a a"uellos grupos "u!icos "ue por s !is!os
no desencadenan for!aci*n de anicuerpos, pero s lo 'acen ras ser
con&ugados a proenas poradoras.
La cuesi*n de las reacciones angenoHanicuerpo se con#iri* en ora pol,!ica
enre escuelas 'asa finales de los a%os 20. Mienras ('rlic' $ sus seguidores
!anenan "ue esas reacciones ienen una base pura!ene "u!ica, <orde $
sus discpulos las e2plicaban co!o fen*!enos fsicos de reacciones enre
coloides. La resoluci*n del debae debi* aguardar 'asa finales de los a%os 30,
al incorporarse a#ances ,cnicos co!o la elecroforesis, la cro!aografa en
papel, la ulracenrifugaci*n $ el !icroscopio elecr*nico. Keidelberg $ =endall
819369 purificaron anicuerpos a parir de sueros por disociaci*n de
precipiados. :iselius 819399 de!osr* "ue los anicuerpos consiu$en la
fracci*n ga!!aHglobulnica del suero. /eine a%os despu,s 5.5. )orer $ A.M.
(del!an esablecen la esrucura de las in!unoglobulinas. 3urane ese lapso
de ie!po se descubre "ue la snesis de anicuerpos ocurre en las c,lulas
plas!7icas, aun"ue ,sas no son puesas en relaci*n a+n con los linfociosB
durane !uc'os a%os se sigui* cre$endo "ue los linfocios eran c,lulas pasi#as,
sin funci*n in!une. )or a"uella ,poca se describe, a!bi,n, la di#ersidad de
in!unoglobulinas, lleg7ndose al esableci!ieno de una no!enclaura. (nseguida
co!ien1a la era de los !+liples e2peri!enos sobre i!eco!a en raones
neonaos $ sobre burseco!a en a#es, as co!o los de reconsiuci*n de
ani!ales irradiados, con i!ocios $ c,lulas de la !edula *sea, $ "ue per!ien
afir!ar el papel esencial de los linfocios, encuadrarlos en ipos funcionales :
$ <, $ relacionarlos con las respuesas in!unes celular $ 'u!oral,
respeci#a!ene.
Mna i!porane facea de la in!unologa de la pri!era !iad del siglo .. fue la
obenci*n de #acunas. ?e lograron o2oides in!unog,nicos a parir de o2inas
bacerianas, en !uc'os casos por raa!ieno con for!olC o2oide e7nico
8(isler $ LoEensein, 19159 $ o2oide dif,rico 8Alenn$, 19219. (n 1922 se
desarrolla la #acuna <-A conra la uberculosis, 'aciendo uso de una cepa
aenuada de M$cobaceriu! uberculosis, el bacilo de -al!eeHAu,rin. La
uili1aci*n de coad$u#anes se inicia en 1916, por LeMoignic $ )iro$.
La in!unogen,ica nace cuando <ernsein describe en 1921 el !odelo de
rans!isi*n 'erediaria de los cuaro grupos sanguneos principales, bas7ndose
en el an7lisis esadsico de sus proporciones relai#as, $ con el descubri!ieno
por Landseiner $ Le#Une 819279 de los nue#os sise!as M@ $ ). Los
e2peri!enos de ransfusiones sanguneas inerespecficas per!iieron
disinguir la gran co!ple&idad de los angenos sanguneos, e2plicables seg+n
unos 300 alelos !+liples.
Mna conribuci*n esencial a las ideas sobre el !ecanis!o de for!aci*n de los
anicuerpos la reali1* el ausraliano Macfarlane <urne 81899H19859, al
esablecer su eora de la selecci*n clonalB ,sa argu!ena "ue cada linfocio <
sinei1a un +nico ipo de anicuerpo, especfico para cada angeno
8deer!inane anig,nico9, de !odo "ue la uni*n del angeno causa la
proliferaci*n clonal del linfocio <, con la consecuene snesis incre!enada
de anicuerpos especficos. 0gual!ene, <urne lan1* una 'ip*esis sobre el
!ecanis!o sub$acene a la auoHolerancia in!unol*gica, "ue fue confir!ada
e2peri!enal!ene por )eer MedaEar. M7s reciene!ene @iels Lerne 'a
reali1ado nue#as aporaciones $ refina!ienos a la eora de la selecci*n clonal,
proponiendo un !odelo de regulaci*n in!une conocido co!o eora de las redes
idiopicas.
Los a#ances en 0n!unologa durane los +li!os a%os 'an sido especaculares,
consolidando a ,sa co!o ciencia independiene, con su con&uno propio de
paradig!as, $a relai#a!ene escindida de su ronco originario !icrobiol*gico.
(nre los 'ios recienes 'a$ "ue ciar la ,cnica de producci*n de anicuerpos
!onoclonales a parir de 'ibrido!as, desarrollada original!ene por -,sar
Milsein $ Aeorges =o'ler en 1975, $ "ue presena una enor!e ga!a de
aplicaciones en bio!edicina, o el desenra%a!ieno de los fen*!enos de
reorgani1aci*n gen,ica responsables de la e2presi*n de los genes de
in!unoglobulinas, por ?usu!u :onegaEa.
46&B #"I/E' - DE3+""#LL# DE L+ 2I"#L#/0+
La /irologa 'a sido la ciencia !icrobiol*gica de origen !7s ardo, 'abiendo
surgido co!o resulado del 'alla1go de enfer!edades infecciosas en las "ue la
de!osraci*n de i!plicaci*n de !icroorganis!os se de!osraba es"ui#a con los
!edios 'abiuales disponibles a finales del siglo .0.. La euforia "ue se #i#a en
los 7!bios cienficos $ !,dicos, al socaire de la edad de oro de aisla!ieno
de bacerias pa*genas, se plas!* en el pre&uicio de "ue la incapacidad de
'acer crecer los agenes causanes de cieras enfer!edades se deba a una
,cnica inapropida o !al aplicada.
(l bo7nico ruso 3i!iri 0Eano#sFi 'aba obser#ado 818929 "ue la enfer!edad
del !osaico del abaco poda ser reproducida e2peri!enal!ene usando el
fluido "ue ara#esaba los filros de porcelana "ue nor!al!ene reenan a las
bacerias, pero siendo incapa1 de aislar $ crecer el supueso !icroorganis!o,
abandon* la in#esigaci*n. )ocos a%os !7s arde 818989, $ probable!ene sin
ener noicias del raba&o de 0Eano#sFi, <ei&erinF reali1* e2peri!enos
si!ilares con el !is!o sise!a, $ en oro rasgo de su genio, enfren7ndose a
los concepos de la ,poca, a#an1* la idea de "ue el agene filrable 8un
conagiu! #i#u! fluidu!, seg+n su e2presi*n9, deba de incorporarse al
prooplas!a #i#o del 'ospedador para lograr su reproducci*n. (se ipo de
agenes infeci#os "ue ara#esaban los filros de porcelana fueron lla!ados en
principio 4#irus filrables4, "uedando !7s arde su deno!inaci*n si!ple!ene
co!o #irus. 6"uel !is!o a%o de 1898 Loeffler $ Irosc' descubren los #irus
ani!ales al co!probar "ue un #irus filrable es responsable de la glosopeda del
ganado. (n 1901 5eed descubre el pri!er #irus 'u!ano, el de la fiebre a!arilla,
$ en 1909 Landseiner $ )ope deecan el de la polio!ieliis. 6 co!ien1os de
siglo -ope!an desarrolla su ,cnica de !uliplicaci*n de #irus ani!ales en
e!briones de pollo, con la "ue ). 5ous aisla $ culi#a el #irus del sarco!a a#iar
819119.
Los #irus bacerianos fueron descubieros en 1915 por I.N. :Eor, si bien su
raba&o no alcan1* la elegancia $ claridad del desarrollado poco !7s arde por
el canadiense I,li2 dVK,relle 819179B fue ,se "uien acu%* el ,r!ino
baceri*fago, $ supuso correca!ene "ue el fen*!eno de lisis por esos
agenes deba de esar a!plia!ene difundido enre las bacerias. 6un"ue su
esperan1a en la aplicaci*n de los fagos co!o ele!enos bacericidas para uso
!,dico no pudo saisfacerse, la conribuci*n de los #irus bacerianos al a#ance
de la gen,ica $ biologa !oleculares 'a sido decisi#aC de 'ec'o, los pri!eros
esudios cuaniai#os sobre replicaci*n #ir7sica se reali1aron sobre fagos de
(sc'eric'ia coli, lo "ue su!inisr* !odelos aplicables a oros #irus, incluidos
los de ani!ales. (n 1925 <orde $ <al describen por pri!era #e1 el fen*!eno
de lisogenia, pero las relaciones enre los ciclos lico $ lisog,nico de los fagos
no fueron aclaradas 'asa los esudios de 6ndr, LEoff 819509.
La pri!era #isuali1aci*n de un #irus se debe a las obser#aciones a !icroscopio
ulra#iolea del baceri*logo ingl,s <arnard 819259, $ en 1939 se reali1a la
pri!era foografa de un #irus a !icroscopio elecr*nico. )ero los a#ances !7s
significai#os en el esudio de la co!posici*n $ esrucura de los #irus se
inician con la purificaci*n $ crisali1aci*n, por Nendell M. ?anle$, del #irus del
!osaico del abaco H:M/H 819359, aplicando procedi!ienos picos de la
crisali1aci*n de en1i!as. 0nicial!ene ?anle$ co!prob* "ue el :M/ conena
gran proporci*n de proena, pero poco !7s arde deeca, ade!7s, la
presencia de 7cido nucleico. 6 parir de a"u, la /irologa enra en una fase de
ciencia cuaniai#a, en la "ue paricipan nu!erosos fsicos, bio"u!icos $
geneisas, en un esfuer1o inerdisciplinar "ue da origen a la !oderna <iologa
Molecular.
Mn i!porane a#ance !eodol*gico para el esudio de los #irus ani!ales se
debi* a (nders, Neller $ 5obbins 819499, al desarrollar por pri!era #e1 un
!,odo para la !uliplicaci*n #ir7sica sobre culi#os de e&idos de !a!feros,
,cnica "ue fue perfeccionada !7s arde por el e"uipo de 5enao 3ulbecco.
Los recienes progresos en las nu!erosas ,cnicas de biologa !olecular 'an
propiciado una au,nica e2plosi*n de descubri!ienos sobre la biologa de los
#irus $ de sus c,lulas 'ospedadorasB base ciar la replicaci*n del geno!io de
65@ de los rero#irus por re#ersoranscripci*n a 63@, los fen*!enos de
ransfor!aci*n oncog,nica #ir7sica $ su aplicaci*n a los esudios generales del
c7ncer, el dise%o de #acunas reco!binane por !anipulaci*n in #iro de
geno!ios #ir7sicos, la pr*2i!a aplicaci*n clnica de la pri!eras erapias g,nicas
en 'u!anos recurriendo a #ecores #ir7sicos, ec. (n el erreno de las
necesidades urgenes, la !eodologa e2isene 'a per!iido la r7pida
idenificaci*n $ caraceri1aci*n del #irus de la in!unodeficiencia 'u!ana, lo
"ue se es7 raduciendo en una inensa $ racional b+s"ueda de procedi!ienos
para pre#enir $ eli!inar la inesperada epide!ia de ?036.
(n a%os recienes 'an sido descubieros dos nue#os ipos de enidades
infeci#as, sub#ir7sicasC :.;. 3iener describi* en 1967 la e2isencia de 65@
desnudos infeci#os en planas, a los "ue lla!* #iroides, $ en 1981 )rusiner puso
de !anifieso "ue deer!inadas enfer!edades de !a!feros se deben a
parculas proeicas aparene!ene despro#isas de !aerial gen,ico, a las
"ue baui1* co!o priones.
46&& "EL+CI#'E3 E'("E L+ MIC"#.I#L#/0+ - #("+3 CIE'CI+3
.I#L*/IC+36
(l auge de la !icrobiologa desde finales del siglo .0. se plas!*, enre oras
cosas, en el aisla!ieno de gran #ariedad de cepas sil#esres de
!icroorganis!os, lo "ue su!inisr* un enor!e #olu!en de nue#o !aerial
biol*gico sobre el "ue raba&ar, aplic7ndose una serie de enfo"ues "ue eran $a
'abiuales en las ciencias naurales !7s aniguasB as, 'aba "ue crear un !arco
a2on*!ico 8con sus nor!as de no!enclaura9 para encuadrar a los organis!os
reci,n descubieros, era facible desarrollar raba&os sobre !orfologa $
fisiologa co!paradas, sobre #ariabilidad $ 'erencia, e#oluci*n, ecologa, ec.
3e ese !odo la &o#en Microbiologa fue ob&eo, en pocos a%os, de la
uili1aci*n, a un ri!o acelerado, de los !,odos a2on*!icos $ e2peri!enales
"ue 'aban ido surgiendo $ !adurando desde el siglo ./000 en los 7!bios de la
4Kisoria @aural4 cl7sica.
6un"ue nos referire!os en oro aparado 8#,ase cap. 29 a los a#ances de
:a2ono!a Microbiana, #ale la pena rese%ar a"u los esfuer1os e!pranos para
lograr un clasificaci*n baceriana por pare de -o'n 818759 $ Migula 818949,
"ue susenaban su concepo de especie predo!inane!ene sobre caraceres
!orfol*gicos. )ero 'acia 1900 era e#idene la arbirariedad e insuficiencia de
ese ipo de clasificaciones, de !odo "ue los inenos poseriores 'icieron uso
de caraceres bio"u!icos 8;r!a Lensen, 19099, o de una !e1cla de rasgos
!orfol*gicos, bio"u!icos, paog,nicos $ de inci*n 8<uc'anan, 19159. (l
sise!a de a2ono!a baceriana ad"uiri* un nue#o i!pulso a parir de la 1W
edici*n del 4<erge$Vs Manual of 3eer!inai#e <aceriolog$4 819239, $ de las
propuesas de =lu$#er $ #an @iel 84)rospecs for a naural s$se! of
classificaion of baceria4, 19369. (n cuano a la no!enclaura, no fue 'asa
1958 en "ue cua&* un -*digo 0nernacional de @o!enclaura <aceriol*gica,
aun"ue $a se #ena aplicando desde 'aca ie!po el procedi!ieno ipol*gico
para los !icroorganis!os, con crierios si!ilares a los de la Poologa $ la
<o7nica.
(l esableci!ieno de relaciones a2on*!icas precis* el recurso a !,odos
cada #e1 !7s a!plios $ afinados de an7lisis gen,ico, esrucural o fisiol*gico.
(n un aparado anerior $a #i!os las cone2iones e!pranas enre la <io"u!ica
$ la Microbiologa a prop*sio del descubri!ieno de la base en1i!7ica de las
fer!enaciones, lo cual abri* el ca!ino para dilucidar el !eabolis!o
energ,ico !icrobiano, $ para de!osrar su si!iliud "u!ica con ruas
!eab*licas de organis!os superiores. ;ro paso i!porane en la percepci*n
de la unidad bio"u!ica del !undo #i#o deri#a del descubri!ieno de las
#ia!inas 8,r!ino acu%ado por IunF e! 19119, al esablecerse "ue
deer!inados facores de creci!ieno re"ueridos por algunos !icroorganis!os
eran "u!ica!ene si!ilares a las #ia!inas necesarias en la diea de los
ani!ales, $ "ue ese ipo de co!puesos represena precursores biosin,icos
de coen1i!as del !eabolis!o celular. 6s pues, ese ipo de in#esigaciones
sen* clara!ene la idea de la unidad "u!ica de los seres #i#os,
independiene!ene de su encuadre a2on*!ico, $ encau1* una buena pare de
los raba&os bio"u!icos 'acia los !icroorganis!os, dadas sus cualidades de
facilidad de !ane&o $ culi#o en laboraorio.
(n cuano a las cone2iones de la Microbiologa con la Aen,ica, $a <ei&erinF, en
1900, ras anali1ar la eora de la !uaci*n de 3e /ries, 'aba predic'o "ue los
!icrooganis!os podran con#erirse en ob&eos de in#esigaci*n !7s adecuados
"ue los sise!as ani!ales o #egeales. )ero las pri!eras cone2iones enre
a!bas ciencias arrancan de la necesidad "ue 'ubo, a principios del siglo .., de
deer!inar la se2ualidad de los 'ongos con fines a2on*!icos. (n 1905 Maire
de!osr* la e2isencia de !eiosis en la for!aci*n de ascosporas, $ -laussen
819079 e#idenci* fusi*n de n+cleos en 6sco!iceos, !ienras "ue =niepp, 'acia
finales de los a%os 30 'aba recogido un gran #olu!en de infor!aci*n sobre
procesos se2uales en <asidio!iceos. (l sueco Lindegren 819369 reali1a las
pri!eras carografas gen,icas en cro!oso!as de @eurospora, durane su
esancia en el laboraorio californiano de MorganB ese +li!o, propugnador de
la 4eora de los genes4 819269, confiaba desde 'aca a%os en a!pliar sus
,2ios, logrados en 3rosop'ila, 'acia el esudio de la gen,ica !icrobiana. (n
1941, oros dos discpulos de Morgan, <eadle $ :au!, aislan !uanes
au2or*ficos de @eurospora, con lo "ue se inicia el esudio de la base
bio"u!ica de la 'erencia, $ con#ieren a ese 'ongo en una #aliosa 'erra!iena
de raba&o en esa lnea de in#esigaci*n.
Las esraegias dise%adas por <eadle $ :au! fueron aplicadas por Luria $
3elbrDcF 819439 a culi#os bacerianos, in#esigando la aparici*n de !uaciones
espon7neas resienes a fagos o esrepo!icina. La cone2i*n de esos
e2peri!enos con las obser#aciones pre#ias de Ariffi' 819289 sobre la
ransfor!aci*n del neu!ococo, lle#* a 6#er$ $ colaboradores 819449 a
de!osrar "ue el 4principio ransfor!ane4 porador de la infor!aci*n
gen,ica es el 63@. (n 1949 (rEin -'argaff de!uesra bio"u!ica!ene la
rans!isi*n gen,ica !ediane 63@ en (sc'eric'ia coli , $ en 1952 6lfred
Kers'e$ $ Mar'a -'ase, en e2peri!enos con co!ponenes !arcados de
fagos, ponen un elegane colof*n a la confir!aci*n de la funci*n del 63@, con
lo "ue se derribaba el aniguo $ asenado 4paradig!a de las proenas4 "ue
'asa !ediados de siglo inenaba e2plicar la base de la 'erencia. 3e esa
for!a, la Microbiologa e2peri!enal se si+a en pleno cenro del naci!ieno de
la Aen,ica !olecular, de la !ano de los a#ances paralelos en <io"u!ica
8an7lisis por ra$os . de la esrucura del 63@ debido a Maurice NilFins $
5osalind IranFlin, !odelo de Nason $ -ricF de la doble ',lice del 63@, ec.9,
dando origen esa confluencia a lo "ue se 'a lla!ado la 4edad de oro4 de la
<iologa Molecular.
7 #.1E(# DE E3()DI# DE L+ MIC"#.I#L#/0+
(l ob&eo de esudio de una ciencia se puede desglosar en dos aparadosC
ob&eo !aerial $ ob&eo for!al.
76& #.1E(# M+(E"I+L% L#3 MIC"##"/+'I3M#3
La Microbiologa es la ciencia "ue se ocupa del esudio de los !icroorganis!os,
es decir, de a"uellos organis!os de!asiado pe"ue%os para poder ser
obser#ados a si!ple #isa, $ cu$a #isuali1aci*n re"uiere el e!pleo del
!icroscopio. (sa definici*n i!plica "ue el ob&eo !aerial de la Microbiologa
#iene deli!iado por el a!a%o de los seres "ue in#esiga, lo "ue supone "ue
abarca una enor!e 'eerogeneidad de ipos esrucurales, funcionales $
a2on*!icosC desde parculas no celulares co!o los #irus, #iroides $ priones,
'asa organis!os celulares an diferenes co!o las bacerias, los proo1oos $
pare de las algas $ de los 'ongos. 3e esa !anera la Microbiologa se disingue
de oras disciplinas organs!icas 8co!o la Poologa $ la <o7nica9 "ue se
cenran en grupos de seres #i#os definidos por concepos biol*gicos
'o!og,neos, $a "ue su ob&eo de indagaci*n se asiena sobre un crierio
arificial "ue obliga a incluir enidades sin !7s relaci*n en co!+n "ue su
pe"ue%o a!a%o, $ a e2cluir a di#ersos organis!os !acrosc*picos !u$
e!parenados con oros !icrosc*picos.
6 pesar de eso 8o incluso debido a ello9, la Microbiologa per!anece co!o una
disciplina perfeca!ene asenada $ diferenciada, "ue deri#a su co'erencia
inerna del ipo de !eodologas a&usadas al esudio de los organis!os cu$o
a!a%o se si+a por deba&o del l!ie de resoluci*n del o&o 'u!ano, aporando
un con&uno especfico de concepos "ue 'an enri"uecido la !oderna <iologa.
)ode!os definir, pues, a los !icroorganis!os co!o seres de a!a%o
!icrosc*pico doados de indi#idualidad, con una organi1aci*n biol*gica sencilla,
bien sea acelular o celular, $ en ese +li!o caso pudiendo presenarse co!o
unicelulares, cenocicos, coloniales o pluricelulares, pero sin diferencianci*n en
e&idos u *rganos, $ "ue necesian para su esudio una !eodologa propia $
adecuada a sus pe"ue%as di!ensiones. <a&o esa deno!inaci*n se engloban
ano !icroorganis!os celulares co!o las enidades subcelulares.
76&6& MIC"##"/+'I3M#3 CEL)L+"E3
-o!prenden odos los procarioas $ los !icroorganis!os eucari*icos 8los
proo1oos, los !o'os !ucosos, los 'ongos $ las algas !icrosc*picas9. (l
encuadre de odos esos grupos 'eerog,neos ser7 abordado en el pr*2i!o
capulo.
76&64 2I")3 - ,+"(IC)L+3 3).2I"+3IC+3
;ro ipo de ob&eos de esudio de la !icrobiologa son las enidades no
celulares, "ue a pesar de no poseer cieros rasgos aribuibles a lo "ue se
eniende por #ida, cuenan con indi#idualidad $ enidad biol*gica, $ caen de
lleno en el do!inio de esa ciencia.
Los virus son enidades no celulares de !u$ pe"ue%o a!a%o 8nor!al!ene
inferior al del !7s pe"ue%o procarioa9, por lo "ue debe de recurrirse al
!icroscopio elecr*nico para su #isuali1aci*n. ?on agenes infeci#os de
naurale1a obligada!ene parasiaria inracelular, "ue necesian su
incorporaci*n al prooplas!a #i#o para "ue su !aerial gen,ico sea replicado
por !edio de su asociaci*n !7s o !enos co!plea con las aci#idades celulares
nor!ales, $ "ue pueden rans!iirse de una c,lula a ora. -ada ipo de #irus
consa de una sola clase de 7cido nucleico 863@ o 65@, nunca a!bos9, con
capacidad para codificar #arias proenas, algunas de las cuales pueden ener
funciones en1i!7icas, !ienras "ue oras son esrucurales, disponi,ndose
,sas en cada parcula #ir7sica 8#iri*n9 alrededor del !aerial gen,ico
for!ando una esrucura regular 8c7pside9B en algunos #irus e2ise, ade!7s,
una en#uela e2erna de ipo !e!branoso, deri#ada en pare de la c,lula en la
"ue se desarroll* el #iri*n 8bicapa lipdica procedene de !e!branas celulares9
$ en pare de origen #ir7sico 8proenas9.
(n su esado e2racelular o dur!iene, son oal!ene ineres, al carecer de la
!a"uinaria de biosnesis de proenas, de replicaci*n de su 7cido nucleico $ de
obenci*n de energa. (so les obliga a un !odo de #ida parasiario inracelular
esrico o fase #egeai#a, durane la "ue el #iri*n pierde su inegridad, $
nor!al!ene "ueda reducido a su !aerial gen,ico, "ue al superponer su
infor!aci*n a la de la c,lula 'ospedadora, logra ser e2presado $ replicado,
produci,ndose e#enual!ene la for!aci*n de nue#os #iriones "ue pueden
reiniciar el ciclo.
Los viroides son un grupo de nue#as enidades infeci#as, sub#ir7sicas,
descubieras en 1967 por :.;. 3iener en planas. (s7n consiuidos
e2clusi#a!ene por una pe"ue%a !ol,cula circular de 65@ de una sola 'ebra,
"ue adopa una peculiar esrucura secundaria alargada debido a un e2enso,
pero no oal, e!pare&a!ieno inracaenario de bases por 1onas de 'o!ologa
inerna. -arecen de capacidad codificadora $ !uesran ciera se!e&an1a con
los inrones auocaalicos de clase 0, por lo "ue podran represenar
secuencias inercaladas "ue escaparon de sus genes en el ranscurso e#olui#o.
?e desconocen dealles de su !odo de !uliplicaci*n, aun"ue algunos se
locali1an en el nucleoplas!a, e2isiendo pruebas de la i!plicaci*n de la 65@
poli!erasa 00 en su replicaci*n. (sa replicaci*n parece re"uerir secuencias
conser#adas 'acia la porci*n cenral del #iroide. Los #iroides aislados de
planas originan una gran #ariedad de !alfor!aciones paol*gicas. (l
!ecanis!o de paogenia no es7 aclarado, pero se sabe "ue !uc'os de ellos se
asocian con el nucleolo, donde "ui17 podran inerferirB sin e!bargo, no e2isen
indicios de "ue aleren la e2presi*n g,nica 8una de las 'ip*esis sugeridas9B
cada !ol,cula de #iroide coniene uno o dos do!inios conser#ados "ue !odulan
la #irulencia.
(n 1986 se descubri* "ue el agene de la 'epaiis dela 'u!ana posee un
geno!io de 65@ de ipo #iroide, aun"ue re"uiere para su rans!isi*n 8pero no
para su replicaci*n9 la colaboraci*n del #irus de la 'epaiis <, e!pa"ue7ndose
en parculas si!ilares a las de ese #irus. 6 diferencia de los #iroides
#egeales, posee capacidad codificadora de algunas proenas.
Los +"'s satlites son pe"ue%as !ol,culas de a!a%o si!ilar al de los #iroides
de planas 8330H400 bases9, "ue son e!pa"ueados en c7psidas de
deer!inadas cepas de #irus 8con cu$os geno!ios no !uesran 'o!ologas9. ?e
replican s*lo en presencia del #irus colaborador especfico, !odificando
8au!enando o dis!inu$endo9 los efecos pa*genos de ,se.
Los virusoides consiu$en un grupo de 65@s sa,lies no infeci#os, presenes
en el inerior de la c7psida de cieros #irus, con se!e&an1as esrucurales con
los #iroides, replic7ndose e2clusi#a!ene &uno a su #irus colaborador.
Los priones son enidades infeci#as de un ipo oal!ene nue#o $ original,
descubieras por ?anle$ )rusiner en 1981, responsables de cieras
enfer!edades degenerai#as del sise!a ner#ioso cenral de !a!feros 8por
e&e!plo, el 4scrapie4 o prurio de o#e&as $ cabras, la encefaliis espongifor!e
bo#ina9, inclu$endo los 'u!anos 8Furu, sndro!e de Aers!annH?raDssler,
enfer!edad de -reu1feldHLaFob9. ?e definen co!o pe"ue%as parculas
proeicas infeci#as "ue resisen la inaci#aci*n por agenes "ue !odifican
7cidos nucleicos, $ "ue conienen co!o co!ponene !a$oriario 8si no +nico9
una isofor!a an*!ala de una proeina celular. :ano la #ersi*n celular nor!al
8)r)
-
9 co!o la pa*gena 8)r)
?c
en el caso del 4scrapie49 son glicoproenas
codificadas por el !is!o gen cro!os*!ico, eniendo la !is!a secuencia
pri!aria. ?e desconoce si las caracersicas disini#as de a!bas isofor!as
esriban en diferencias enre los respeci#os oligosac7ridos "ue ad"uieren por
procesa!ieno posHraduccional.
6 diferencia de los #irus, los priones no conienen 7cido nucleico $ es7n
codificados por un gen celular. 6un"ue se !uliplican, los priones de nue#a
snesis poseen !ol,culas de )r) "ue refle&an el gen del 'ospedador $ no
necesaria!ene la secuencia de la !ol,cula del )r) "ue caus* la infecci*n
pre#ia. ?e desconoce su !ecanis!o de !uliplicaci*n, $ para discernir enre las
di#ersas 'ip*esis propuesas "ui17 'a$a "ue dilucidar la funci*n del produco
nor!al $ su posible con#ersi*n a la isofor!a pa*gena infeci#a.
5eciene!ene se 'a co!probado "ue, al !enos algunas de la enfer!edades
por priones son si!ul7nea!ene infeci#as $ gen,icas, una siuaci*n ins*lia
en la )aologa 'u!ana, 'abi,ndose de!osrado una relaci*n enre un alelo
do!inane del )r) $ la enfer!edad de -reu1feldHLaFob. (l gen del pri*n
8)rnHp9 es7 ligado gen,ica!ene a un gen auos*!ico 8)rnHi9 "ue condiciona en
pare los largos ie!pos de incubaci*n 'asa el desarrollo del sndro!e.
764 #.1E(# :#"M+L
:odos los aspecos $ enfo"ues desde los "ue se pueden esudiar los
!icroorganis!os confor!an lo "ue deno!ina!os ob&eo for!al de la
MicrobiologaC caracersicas esrucurales, fisiol*gicas, bio"u!icas,
gen,icas, a2on*!icas, ecol*gicas, ec., "ue confor!an el n+cleo general o
cuerpo b7sico de conoci!ienos de esa ciencia. )or oro lado, la Microbiologa
a!bi,n se ocupa de las disinas aci#idades !icrobianas en relaci*n con los
inereses 'u!anos, ano las "ue pueden acarrear consecuencias per&udiciales
8$ en ese caso esudia los nic'os ecol*gicos de los correspondienes agenes,
sus !odos de rans!isi*n, los di#ersos aspecos de la !icrobioa pa*gena en
sus ineracciones con el 'ospedador, los !ecanis!os de defensa de ,se, as
co!o los !,odos desarrollados para co!bairlos $ conrolarlos9, co!o de las
"ue reporan beneficios 8ocup7dose del esudio de los procesos !icrobianos
"ue suponen la obenci*n de !aerias pri!as o elaboradas, $ de su !odificaci*n
$ !e&ora racional con #isas a su i!bricaci*n en los flu&os produci#os de las
sociedades9. Iinal!ene, la Microbiologa 'a de ocuparse de odas las ,cnicas
$ !eodologas desinadas al esudio e2peri!enal, !ane&o $ conrol de los
!icroorganis!os, es decir, de odos los aspecos relacionados con el !odo de
raba&o de una ciencia e!prica.
CILLI+M3 LE#'+"D# 5E"E'+'DED ,E"ED
(sudiane del 000 ?e!esre de (nfer!era
-aracas 3o. -apial X /ene1uela