Microbiologa

Introduccin

Microbiologa.
La Microbiologa, el estudio de los organismos microscpicos, deriva de 3 palabras
griegas: mikros (pequeo), bios (vida) y logos (ciencia) que conjuntamente
significan el estudio de la vida microscpica.

Estructura molecular
distribucin de los tomos en un compuesto por medio de los enlaces qumicos.
Existen varios tipos de enlace y las caractersticas tpicas de la sustancia se deben
a ellos. Cuando los tomos de un elemento pierden uno o ms electrones se
convierten en iones cargados positivamente (cationes). Estos electrones son
captados por los tomos de otro elemento, convirtindolos en iones cargados
negativamente (aniones). Como las cargas positivas y negativas se atraen, esos
cationes y aniones se unen mediante un enlace inico para formar un conjunto
que consiste en grandes cantidades de iones de ambas clases. El compuesto
resultante se llama compuesto inico. Un ejemplo es el cloruro de sodio, que est
compuesto por la misma cantidad de cationes de sodio y aniones de cloro.

Clasificacin de los microorganismos Eucariontes Procariontes.
Existen dos tipos fundamentalmente distintos de clulas, las procariotas y
las eucariotas . En las clulas procariticas, el material gentico se encuentra en
forma de una molcula grande y circular de DNA a la que estn dbilmente
asociadas diversas protenas. En las clulas eucariticas, por el contrario, el DNA
es lineal y est fuertemente unido a protenas especiales. Dentro de la clula
eucaritica, el material gentico est rodeado por una doble membrana,
la envoltura nuclear , que lo separa de los otros contenidos celulares en
un ncleo bien definido. En las procariotas, el material gentico no est
contenido dentro de un ncleo rodeado por una membrana, aunque est ubicado
en una regin definida llamada nucleoide .
En el citoplasma se encuentra una gran variedad de molculas y complejos
moleculares. Por ejemplo, tanto los procariotas como los eucariotas contienen
complejos proteicos y de RNA llamadosribosomas que desempean una
funcin clave en la unin de los aminocidos individuales durante la sntesis
de protenas . Las molculas y complejos moleculares estn especializados en
determinadas funciones celulares. En las clulas eucariticas, estas funciones se
llevan a cabo en una gran variedad de estructuras rodeadas por membranas -
llamadas organelas - que constituyen distintos compartimientos internos dentro
del citoplasma. Entre las organelas se destacan los peroxisomas que realizan
diversas funciones metablicas; las mitocondrias , centrales energticas de las
clulas y, en las algas y clulas vegetales, los plstidos como los cloroplastos ,
donde acontece la fotosntesis.
La membrana celular de los procariotas est rodeada por una pared celular
externa que es elaborada por la propia clula. Ciertas clulas eucariticas,
incluyendo las de las plantas y hongos, tienen una pared celular, aunque su
estructura es diferente de la de las paredes celulares procariticas. Otras clulas
eucariticas, incluyendo las de nuestros propios cuerpos y las de otros animales,
no tienen paredes celulares. Otro rasgo que distingue a los eucariotas de los
procariotas es el tamao: las clulas eucariticas habitualmente son de mayor
tamao que las procariticas.
En las clulas eucariticas, ciertas protenas se organizan formando intrincadas
estructuras que dan lugar a una especie de esqueleto interno, el citoesqueleto ,
que aporta sostn estructural y posibilita el movimiento celular.
Algunos ejemplos de clulas procariotas son la bacteria Escherichia coli y las
cianobacterias, grupo de procariotas fotosintticos llamadas antes algas azules.
Un eucariota fotosinttico unicelular es el alga Chlamydomonas.

Caractersticas mas importantes en la industria de los alimentos.
Algunos gneros bacterianos importantes en alimentos
Las bacterias se han utilizado desde los tiempos histricos ms remotos para
producir alimentos[1]. Los procesos bacterianos pueden darle a los alimentos ms
resistencia al deterioro o caractersticas organolpticas ms agradables (sabor,
textura, etc.). Existe un amplio rango de bacterias involucradas en la produccin,
conservacin y alteracin de productos alimenticios.

Bacterias lcticas o productoras de cido lctico
Su caracterstica ms importante es la capacidad de fermentar los azcares para
dar cido lctico. Debido a la rpida produccin de cido son capaces de eliminar
a muchos microorganismos competitivos. La mayora de las bacterias
pertenecientes a este grupo crecen en el rango de los termfilos. En este grupo se
incluyen:
Lactobacillus bacilos Gram positivos, forman cadenas en la mayora de las
especies, no esporulados y generalmente no mviles. Son microaerfilos, aunque
existen algunos anaerbios estrictos; son catalasa negativos y fermentadores. Son
benficas en la elaboracin de quesos y fermentacin de vegetales. Pero pueden
producir gases que perjudican los quesos y vinos.



Streptococcus cocos Gram positivos, dispuestos caractersticamente en pares
o cadenas. Las especies importantes en alimentos se dividen en: pigenos y
estreptococos. Los pigenos comprenden especies patgenas, entre las que se
encuentran S. agalactiae, que ocasiona mastitis en las vacas, y S. pyogenes, muy
patgeno en humanos, el cual causa la faringitis sptica, escarlatina y otras
enfermedades. Se puede encontrar en la leche cruda. Los pigenos crecen en
rangos de temperaturas caractersticos de animales de sangre caliente (37C). Los
pertenecientes al grupo de los otrosestreptococoscrecen exclusivamente a 45C.
Incluyen el S. thermophilus, importante en la elaboracin de quesos y en ciertas
leches fermentadas como el yoghurt.

Enterococcus Cocos Gram positivos, no esporulados, hemolticos. Crecen tanto
a 10C como a 45 C. Resisten las temperaturas de pasterizacin de la leche e
incluso mayores.; toleran un porcentaje de sal del 6.5% o superior; crecen a un pH
alcalino de 9,6 unidades. En este grupo se encuentran E. faecalis,resistente al
calor, proveniente de los humanos y E. faecium.
Lactococcus Cocos Gram positivos, no esporulados. Crecen a 10. Se emplean
como fermentadores para la produccin del queso y la mantequilla de varios tipos.
Comprenden bacterias importantes en la leche, como L. lactis y L. cremoris.
Leuconostoc Son cocos Gram positivos, organizados en pares o cadenas. Son
importantes en los alimentos por: producir diacetilo y otras sustancias aromticas;
tolerar las concentraciones salinas de ciertas salmueras, como las de la
fermentacin de encurtidos hortcolas.; algunas especies toleran altas
concentraciones de azcares (55-60%), lo que les permite crecer en jarabes,
caramelo lquido, crema de helados, etc.; producir cantidades considerables de
dixido de carbono a partir de los azcares, ocasionado la aparicin de ojos en
ciertos quesos, alteraciones en alimentos con alto contenido de azcar y la
fermentacin de algunas clases de pan; producir muclago en medios que
contienen sacarosa, proceso ptimo en la produccin de dextrano, pero
representa un riesgo en alimentos ricos en dicho disacrido, como en la
produccin de azcar a partir de caa o remolacha.
Pediococcus Son cocos aislados, en parejas, en cadenas cortas o en ttradas:
Gram positivos, catalasa positiva y microaerfilos. Se han encontrado en las
salmueras de los encurtidos en fase fermentativa, siendo los responsables de
ciertas alteraciones en las bebidas alcohlicas.




Bacterias acticas o productoras de cido actico
La mayor parte de las bacterias acticas pertenecen a uno de los dos
gneros, Acetobacter y Gluconobacter.
Acetobacter Son formas bacilares, Gram negativas, aerbicas estrictas y mviles.
Oxidan el alcohol etlico a cido actico y se encuentran en masa fermentada de
granos de cereales, frutas, hortalizas y bebidas alcohlicas y constituyen un
problema en estas ltimas, ya que causa una alteracin de las mismas. Algunas
especies comoA. aceti oxidan el etanol convirtindolo en cido actico para
producir vinagre, lo que constituye su ms importante aplicacin industrial.

Gluconobacter Este gnero pertenece a la familia Pseudomonadaceae. Las
bacterias pertenecientes a este grupo oxidan el etanol a cido actico. La
especieG. oxydansproduce viscosidad en la cerveza y ms adelante una
proliferacin viscosa que afecta la infusin de malta.

Bacterias Butiricas
Las bacterias de este grupo, en su mayora, son anaerobias esporuladas del
gneroClostridium.
Clostridium Son bacilos anaerobios o microaerfilos, Gram negativos, catalasa-
negativos, formadores de endosporas resistentes a altas temperaturas. Muchas
especies fermentan activamente los carbohidratos, con produccin de cidos,
entre los que se encuentra el butrico, y gases, usualmente dixido de carbono e
hidrgeno.

C. thermosaccharolyticum determina la alteracin gaseosa de las conservas
vegetales. La putrefaccin de los alimentos es a menudo ocasionada por especies
mesfilas proteolticas tales como C. lentoputrescens y C. putrefaciens. El
rompimiento violento de la cuajada de la leche es ocasionado por C. perfringens o
especies semejantes y da lugar a una fermentacin tumultuosa de la leche; C.
butyricum, que fermenta los lactatos, determina la produccin tarda de gas en los
quesos curados.

Bacterias Propinicas Son bacterias pequeas, inmviles, Gram positivas, no
esporuladas, catalasa-positivas de carcter anaerbico o aerotolerante y de forma
bacilar. Fermentan el cido lctico, los carbohidratos y los polialcoholes para
producir grandes cantidades de cidos propinico y actico y a menudo dixido de
carbono. Ciertas especies, como Propionibacterium freudenreichii, proliferan en el
queso suizo fermentando los lactatos con produccin de gas, que da lugar a la
formacin de ojos y contribuyen a la obtencin de su tpico sabor. Las
propionibacterias pigmentadas pueden causar modificaciones del color del queso

Bacterias Proteolticas
Tienen la capacidad de descomponer la estructura de las protenas. Muchas
especies de Clostridium, Bacillus, Pseudomonas y Proteus son proteolticas. Las
bacterias de la putrefaccin son capaces de descomponer anaerbicamente las
protenas y producir compuestos malolientes, como cido sulfhdrico,
mercaptanos, aminas, indol y cidos grasos. La mayor parte de las especies
proteolticas de Clostridium son putrefactivas, as como ciertas especies
deProteus, Pseudomonas y otros gneros no esporulados.

Bacillus cereus En la industria alimentaria ha sido de inters y objeto de estudio
la destruccin de las esporas de B. cereus por su termorresistencia. Produce
graves intoxicaciones debido a que genera una enterotoxina diarreica, un factor
emtico y hemolisinas.
Pseudomonas diversas especies de Pseudomonas son capaces de efectuar
alteraciones en los alimentos. Pueden desarrollarse a bajas temperaturas
(refrigeracin). En aerobiosis, crecen rpidamente y originan productos de
oxidacin y muclago en las superficies de los alimentos, donde es ms probable
una contaminacin abundante. Ciertas especies producen pigmentos como la
fluorescencia verdosa producida por la pioverdina de Pseudomonas fluorescens y
el color blanco, cremoso, rojizo, castao o incluso negro producido por P.
nigrilaciens.
Proteus las bacterias de este gnero son responsables de la alteracin de carnes,
productos pesqueros y huevos. La presencia de estas bacterias en muchos
alimentos no refrigerados las ha hecho sospechosas de ser causantes de
toxiinfecciones alimentarias, o sea infecciones causadas por endotxinas o
exotoxinas producidas por microorganismos. Se hallan en el intestino humano y de
animales.

Bacteria lipolticas
Corresponde a un grupo heterogneo de bacterias que producen lipasas, enzimas
que catalizan la hidrlisis de las grasas a cidos grasos y glicerol. Muchas
bacterias aerbicas y proteolticas son tambin lipolticas. Pseudomonas
fluorocescens es una de las especies fuertemente lipoltica. Los
gnerosPseudomonas, Alcaligenes, Serratia y Micrococcus tienen especies
lipolticas.

Serratia, enterobacteria gram negativa, mvil, en forma de bacilo, fermenta
butanodiol. Muchas de sus especies producen un pigmento rosceo o magenta y
dan lugar a coloraciones rojizas en la superficie de los alimentos. S.
marcescens es la especie ms comn.

Micrococcus son Gram positivos, aerobios y catalasa-positivos. A menudo se
encuentran en utensilios y equipo usados en alimentacin que no han sido
adecuadamente limpiados e higienizados. Son importantes en los alimentos
debido a las siguientes caractersticas: son capaces de utilizar las sales amnicas
y otros compuestos nitrogenados simples como nica fuente de nitrgeno, la
mayora fermentan los azcares, produciendo cantidades moderadas de cido,
otros toleran gran cantidad de sal, creciendo por lo tanto a niveles de humedad
bajos; estas especies se desarrollan en salmueras del curado de carnes, tanques
de salmuera, muchos resisten la pasterizacin comercial de la leche (M. varians),
otros son pigmentados y dan coloracin anormal a las superficies de los alimentos
sobre los que crecen; M. luteus, por ejemplo, es amarillo y M. roseus, rosa.

Bacterias Sacarolticas
Hidrolizan los disacridos o polisacridos a azcares sencillos. Bacillus subtilis y
Clostridium butyricum son amilolticos. Pocas especies bacterianas son capaces
de hidrolizar la celulosa.

Bacterias Pectolticas
Las pectinas son carbohidratos complejos que forman parte de hortalizas y frutas.
Las pectinasas, compuestas de varias enzimas pectolticas, pueden dar lugar al
ablandamiento de los tejidos vegetales o a la prdida de la capacidad de
gelificacin de los zumos de frutas. Se comportan como pectolticas especies
de Erwinia, Bacillus y Clostridium, as como ciertos mohos.
Las especies del gnero Erwinia son patgenas y saprofitos de vegetales, en los
que causan necrosis, agallas, marchitamientos y podredumbre, lesionando frutas,
hortalizas y otros productos vegetales. Puede presentarse directamente en el
campo o durante el almacenamiento de los frutos. Es de inters econmico ya que
las bacterias se pueden diseminar rpidamente por los exudados producidos en
los tejidos y daar un lote de produccin.

Bacterias termfilas
Estas bacterias tienen una temperatura ptima por encima de 45 C, en muchos
casos de 55C o superior y son importantes en el caso de alimentos mantenidos a
elevadas temperaturas. Bacillus spp. causan la fermentacin cida de algunos
alimentos enlatados y Clostridium thermosaccharolyticum da lugar a una alteracin
gaseosa.Lactobacillus thermophilus es un microorganismo cido lctico y termfilo
obligado.

Bacterias psictropas
Estas bacterias se pueden desarrollar a temperaturas no muy por encima de las
de congelacin y tienen importancia en alimentos refrigerados. Las bacterias
psicrotrficas se encuentran principalmente en los gneros Pseudomonas,
Flavobacterium y Alcaligenes, aunque tambin hay especies psicrotrficas de los
gneros Micrococcus, Lactobacillus, Enterobacter; Arthrobacter y otros.

Flavobacterium especies de este gnero, amarillas o anaranjadas, determinan
coloraciones anormales superficiales en las carnes y toma parte en el deterioro de
mariscos, aves, huevos, mantequilla y leche. Algunos miembros son psicrtrofos,
habindose observado su crecimiento, tras la descongelacin, en hortalizas
congeladas.

Bacterias halfitas
Necesitan para su crecimiento determinadas concentraciones de cloruro sdico.
Pertenecen a los gneros Halobacterium, Micrococcus, Pseudomonas, Vibrio,
Pediococcus y Alcaligenes.

Halobacterium normalmente aparecen en los pecados salados y en pieles
adobadas debido a que la sal utilizada es portadora de este grupo de bacterias,
produciendo manchas coloreadas.
Vibrio son patgenos importantes para el hombre. V. cholerae es el agente
causante del colera y V. parahaemolyticus produce gastroenteritis en humanos por
el consumo de comida de mar contaminada. V. anguillarum y otras especies, son
responsables de enfermedades en peces.

Bacterias formadoras de viscosidad

Pertenecientes a este tipo de bacterias se pueden citar: Alcaligenes viscolatis
(viscosus) y Enterobacter aerogenes, que producen la alteracin viscosa de la
leche, especies de Leuconostoc, que originan mucosidad en las soluciones de
sacarosa y el crecimiento viscoso superficial de ciertas bacterias presentes en los
alimentos. Algunas especies de Streptococcus y Lactobacillus poseen variedades
que determinan la viscosidad o mucosidad de la leche; se conoce un micrococo
que hace viscosas las soluciones de curado de las carnes. Hay cepas
de Lactobacillus plantarum y de otros lactobacilos que pueden causar viscosidad
en varios productos derivados de las frutas, hortalizas y cereales, por ejemplo, en
la sidra y cerveza.

Bacterias coliformes
Son bacilos que han sido definidos como aerbicos o anaerbicos facultativos,
Gram negativos y no esporulados, que fermentan la lactosa con formacin de
gas.
Las principales especies de bacterias coliformes son Escherichia coli y
Enterobacter aerogenes. E. aerogenes produce menor cantidad de cido, forma
acetona pero no indol, da lugar a dixido de carbono e hidrgeno en la proporcin
2:1 y utiliza el citrato como nica fuente de carbono. Produce ms gas queE. coli y
por lo tanto, es ms peligroso como microorganismo, ya que puede originar gas en
quesos, leche y otros alimentos. Ambas especies fermentan los azcares con
formacin de cido lctico, etanol, cidos actico y succnico, dixido de carbono e
hidrgeno.
Los recuentos de coliformes, Coliformes fecales y de E. coli se emplean en los
alimentos con carcter indicador. En general, no se admite la presencia de
bacterias coliformes en los alimentos y en algunos casos, como el agua o las
ostras, es ndice de contaminacin con materiales cloacales y, por lo tanto, con
posibles patgenos entricos. Adems pueden dar lugar a la alteracin de los
alimentos por multiplicacin en los mismos



Otras bacterias importantes en alimentos
Salmonella las bacterias de este gnero son intestinales. A este grupo pertenecen
los agentes productores de fiebre tifoidea y paratifoidea, as como los causantes
de Salmonelosis humanas transmitidas por alimentos. Su presencia en alimentos
es totalmente inadmisible.
Staphylococcus la mayora de las cepas de S. aureus producen un pigmento
dorado y coagulan el plasma sanguneo mientras que S. epidermis no produce ni
coagulasa ni pigmentos. Se asocian con la piel, membranas mucosas del hombre
y animales. S. aureus causa abscesos, forunculosis, neumona infecciones en
heridas y un importante sndrome de toxoinfeccin alimenticia en el hombre.
Algunas cepas han presentado ltimamente mltiple resistencia a los
medicamentos. El S. epidermis se encuentra comnmente en la piel y es el
responsable de endocarditis e infecciones en pacientes con baja resistencia.

Hongos fundamentales en la industria alimenticia
Las levaduras forman parte de la poblacin mictica unicelular, que por su
capacidad de degradar azcares puede producir efectos importantes en la
industrializacin de alimentos.
Las levaduras son un grupo particular de hongos unicelulares (constituidos por
una sola clula) y caracterizados por su capacidad de transformar los azcares.
Hay muchas especies de levaduras. La ms comnmente conocida
es Saccharomyces cerevisiae la cual es utilizada en la industria panadera y en la
elaboracin de la cerveza. Las levaduras tambin juegan un papel importante en
la produccin de otros productos como el vino y el kefir.
La mayora de las levaduras usadas en la industria alimentaria son de forma
redonda y se dividen produciendo pequeos brotes. Esta produccin de brotes es
una caracterstica utilizada para reconocerlas a travs del microscopio, ya que,
durante el brote, las clulas poseen una forma de ocho (8).
Las levaduras necesitan azcares para crecer y los fermentan produciendo
alcohol y dixido de carbono (CO
2
). Esta reaccin y sus productos derivados
hacen que la levadura posea una funcin muy importante en la industria
alimentaria. As mismo, las levaduras tambin producen componentes de aroma
agradable, los cuales juegan un papel muy importante en el aroma del producto
final. Por ejemplo, en la cerveza, la levadura se necesita para producir el alcohol y
el dixido de carbono que forma la espuma. Por otro lado, en la industria panadera
el alcohol producido durante la fermentacin se evapora durante el horneado.

Las levaduras pueden encontrarse en todas partes en la naturaleza,
especialmente en plantas y frutas.

Trichothecium La especie habitual Trichothecium roseum es un moho de color
rosa que crece en la madera, en el papel, en las frutas como manzanas y en
hortalizas como los pepinos. Este moho se identifica fcilmente por los grupos de
conidios bicelulares situados en el extremo de conidiforos cortos y erectos. Los
conidios poseen una prolongacin apezonada en el punto de insercin, y
encontrndose en este extremo la menor de las dos clulas de conidio.

Geotrichum Las especies de este gnero, cuyo crecimiento primeramente tiene
aspecto de una masa compacta que se vuelve blanda y cremosa, puede tener un
color blanco, grisceo, naranja o rojo. La especie Geotrichum candidum se le
conoce como hongo de la lechera, da un crecimiento de aspecto cremoso de
color variable entre el blanco y el rojo. Las hifas de los mohos de este genero son
septadas y, en las especies habituales, poseen ramificaciones. Las esporas
asexuales son astrosporas (oidios), las cuales pueden tener forma rectangular
cuando son producidas en hifas sumergidas, y forma ovalada si las producen las
hifas aereas.

Neurospora A la especie Neurospora sitophila, la mas importante de las que
crece en los alimentos, se le conoce con la denominacin de moho rojo del pan
porque su crecimiento rosado de textura laxa se le suele encontrar en la superficie
del pan.
Tambin crece en la superficie de la caa de azucar y en la distintos alimentos.
Rara vez se observa su fase perfecta, o fase en la que se producen ascosporas.

Sporotrichum Entre las especies saprofitas de este gnero se encuentra
Sporotrichum carnis, cuyo crecimientoha sido hallado en la superficie de carnes
refrigeradas, en las que se produce un moteado Blanco.

Botritis La nica especie que tiene importancia en los alimentos es Botritis
cinerea. Produce una enfermedad en las uvas, aunque puede crecer como
saprofita en la superficie de algunos alimentos.

Mucor Los mohos de este gnero Mucor intervienen en la alteracin de algunos
alimentos y se utilizan en la fabricacin de otros. La especie Mucor rouxii se utiliza
en el proceso industrial para la sacarificacin del almidon siendo especies de este
gnero las que contribuyen a madurar algunos quesos.


Rhizopus La especie Rhizopus stolonifer el denominado moho del pan, es muy
corriente e interviene en la alteracin de algunos alimentos como frutas, hortalizas,
pan, etc.




Thamnidium elegans se encuentra en carne que se mantiene almacenada a
temperaturas de refrigeracin en las que produce las denominadas barbas.

Aspergillus Los aspergillus son mohos muy abundantes. Algunas especies
intervienen en las alteraciones que experimentan los alimentos, mientras que son
de utilidad para preparar determinados alimentos.el grupo Aspergillus glaucus con
Aspergillus repens son especies que intervienen en la alteracin de alimentos. Los
mohos de esta especie crecen bien en concentraciones elevadas de azcar y de
sal, por tanto,en muchos alimentos con escaso contenido de humedad.

Endomyces Hongos levaduriformes, que producen micelio y artrosporas. Algunas
especies pudren las frutas.

Monascus Las colonias de Monascus purpureus son delgadas e invasoras y de
color rojizo o morado. Se encuentran creciendo en la superficie de los productos
lcteos y del arroz chino rojo.

Sclerotinia Algunas especies producen pudredumbre de las hortalizas y frutas, en
las que se encuentran en la fase de los conidios.

Alternaria Los mohos de este gnero son con frecuencia causa de alteracin de
los alimentos. Alternaria citri produce pobredumbre en los frutos. La masa miceliar
suele tener un aspecto seco y un color verde grisceo, aunque las hifas, vistas al
microscopio, muchas veces parecen casi incoloras.

Penicillum Es otro genero de mohos de frecuente incidencia y de importancia en
los alimentos. Penicillum expansum, moho cuyas esporas tienen un color verde
azulado, produce la pobredumbre blanda de las frutas; Penicillum digitatum, con
conidios color verde oliva o verde amarillento, que produce la pobredumbre blanda
en las frutas ctricas. Penicillum italicum, se le conoce con la denominacin de
hongo azul de contacto, provisto de conidios verde azulados, tambin produce
pobredumbre de las frutas ctricas. Penicillum camembert, con conidios grisceos,
que se utilizan en la maduracin de quesos de Camembert y penicillum roqueforti,
provisto de conidios de color verde con tinte azulado, ayuda en la maduracin de
quesos azules, como el queso de Roquefort. Unas pocas especies producen
ascas cuyas esporas se hayan en el interior de cleistotecios, mientras que otras
pocas producen esclerocios y por esta razn han originado alteraciones en
alimentos cidos enlatados.








Tcnicas bsicas de laboratorio.

Tcnicas de esterilizacin de medios de cultivo y de material de laboratorio.

Preparacin y esterilizacin de medios de cultivo.










































Preparacin y esterilizacin de material de vidrio.

1. Lavar material con detergente lquido, enjuagar con abundante agua de la
llave y al final con agua destilada.

2. Secar el material de vidrio de preferencia en horno, si no es posible secar al
aire.

3. Colocar (con un clip) un filtro de algodn en la boquilla a las pipetas de 1.0
mL.

4. Envolver las cajas de Petri y las pipetas con papel kraft, en la envoltura de
stas ltimas, anotar el volumen.

5. Introducir los hisopos en un tubo de 22x175 y tapar con algodn.

6. Introducir el material en un horno previamente calentado a 180C, esperar a
que la temperatura se estabilice nuevamente y a partir de este momento
contar el tiempo de esterilizacin (1 hora).


Metodos para aislar bacterias.

Las bacterias son esenciales para el apropiadofuncionamiento de los ecosistemas.
Descomponen los organismos muertos y reciclan materia orgnica
transformndola en nutrientes minerales. Aislar bacterias en un cultivo puro ayuda
a los investigadores a estudiar y ganar entendimiento sobre
laspropiedades fisiolgicas de ciertos organismos que no es posible recabar en
una base de estudio ms amplia. Las diferentes bacterias prefieren diferentes
condiciones fsicas y qumicas. Algunas tienen un lmite de tolerancia. Por esta
razn, se utilizan varios mtodos para aislar y estudiar microbios.

Placa de diseminacin
El mtodo de aislamiento por diseminacin en placa es un procedimiento en el
cual el investigador disemina una mezcla diluida de clulas sobre una superficie
de agar, utiliza una varilla doblada de vidrio esterilizada, de tal forma que cada
clula crece en su propia colonia separada. Los cultivos son incubados por un
periodo de tiempo especfico. En el medio slido aparece un crecimiento
macroscpicamente visible o un grupo de microorganismos, cada colonia
representando un cultivo puro. Luego de que las colonias han crecido, son
contadas y se calcula el nmero de bacterias en la muestra original.

Placa vertida
El procedimiento de placa vertida se utiliza extensivamente con bacterias y hongos
y tambin puede producir colonias aisladas. Se prepara una muestra
bacteriolgica diluida. El investigador introduce una pequea cantidad dentro de
un plato de petri vaco. Se vierte agar derretido dentro del plato de petri que
contiene la muestra. El agar y la muestra se mezclan meticulosamente al cubrir el
plato e inclinarlo y revolverlo suavemente. Se le da tiempo para que el agar se
vuelva gel mientras se asienta sobre la superficie plana. Los platos recubiertos se
invierten y se dejan incubar por un periodo de tiempo especfico. Las colonias son
luego observadas y contadas, y se registra la informacin.

Placa estriada
El mtodo de estras en placa es el procedimiento clsico para aislar cepas de
bacterias. El investigador esteriliza un lazo de alambre con una llama. Luego de
enfriarse, el lazo de alambre es colocado en una placa de agar estril. El
investigador sumerge el lazo dentro de la muestra, recogiendo miles de bacterias,
y a continuacin realiza estras con el lazo en la superficie de agar. Luego de
esterilizar nuevamente el lazo y dejar que se enfre, el investigador arrastra el lazo
a travs del recorrido anterior, levantando un grupo de bacterias y realiza otra
estra en un rea diferente del agar. Este procedimiento se repite varias veces.
Los platos cerrados son incubados por un periodo de tiempo especfico, luego del
cual se observa el crecimiento bacteriano.

Placa de exposicin
La exposicin de un medio estril al ambiente demuestra la tcnica asptica. El
investigador etiqueta dos placas de agar de nutrientes para una comparacin y
observacin posterior y se las deja descubiertas. Se permite que una placa de
agar permanezca como est, exponindola al ambiente por un corto periodo de
tiempo. La segunda placa es expuesta a una fuente de posibles contaminantes,
tales como un estornudo, tos o dedos colocados en contacto directo con la
superficie de agar. Las placas se cubren, invierten e incuban a temperatura
ambiente por un periodo de tiempo antes de la observacin.


Tcnicas de identificacin de microorganismos

La identificacin bacteriana primaria se basa en los siguientes puntos:

Tincin de Gram: Revela la forma de la bacteria, agrupacin y grupo taxonmico
al que pertenece: Gram positivo o Gram negativo.

Tincin de Ziehl Neelsen: Las bacterias Alcohol-cido resistentes (BAAR), son
difciles de cultivar, tal vez y en un agar sangre muestre algo de crecimiento, por
eso es til esta tincin de identificacin primaria.

Tincin de esporas: La espora es un mecanismo de defensa generalmente de los
gneros Bacillus y Clostridium.

Prueba de catalasa: La catalasa es una enzima que descompone al perxido de
hidrgeno en oxgeno y agua, esta enzima es similar a la estructura de la
hemoglobina. Excluyendo al gnero Streptococcus y algunos otros la mayora de
las bacterias aerobias y anaerobias facultativas tienen catalasa.
La base de esta prueba es demostrar la presencia de la enzima catalasa,
colocando 2 o 3 gotas al cultivo.

El resultado es positivo si en la colonia hay efervescencia. Ejemplos:

Catalasa (+): Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas sp.
Catalasa (-): Streptococcus spp.

Prueba de oxidasa: Bsicamente es la deteccin de la enzima oxidasa, muy til
en la identificacin de bacterias Gram (-). La reaccin de la oxidasa se debe a la
presencia del sistema de citocromo-oxidasa, la cual activa citocromos reducidos
por oxgeno molecular, por la transferencia de un aceptor al estado terminal del
sistema de transferencia de electrones.

El sistema de citocromos est generalmente presente en organismos aerbicos.
Un resultado positivo a la oxidasa consiste en una serie de reacciones en las
cuales un componente auto-oxidable del sistema de citocromo es al final
catalizado. Utilizando un tubo capilar con tetrametil-p-phenylendiamina al 1%, se
adiciona una pequea cantidad a un cultivo bacteriano colocado sobre un papel
filtro y obtenemos las siguientes reacciones: una reaccin positiva (presencia de
oxidasa) se indica por la apariencia de un color prpura obscuro en el papel, en
menos de 10 segundos; al contrario una reaccin negativa, que consiste en una
ausencia de color prpura, indica segn los ejemplos:

Oxidasa (+): Pasteurella multocida Oxidasa (-): Escherichia coli

cido de la Glucosa: La mayora de las bacterias de inters mdico usan la
glucosa como fuente de carbono, como parte importante de su metabolismo. Se
determina si la bacteria usa la glucosa produciendo cido y/o gas a partir de dicho
carbohidrato. En un tubo con agua peptonada al 1% tapado, y un tubo de Durham,
se inocula la bacteria por agitacin teniendo cuidado de no mover el tubo de
Durham e incubndolo 24 horas y 37C se obtienen los siguientes resultados.

Si la bacteria usa la glucosa producir cido y/o gas, por lo tanto el agua
peptonada se observar rosa, si produce gas, se observar una burbuja en el tubo
de Durham. Ejemplos:

cido y gas a partir de la glucosa: Escherichia coli
Negativo a produccin de gas: Proteus stuartii.
Prueba de O/F: para realizar esta prueba se usa el medio bsico de Hugh y
Leisfon con un pH de 7.1. Es un medio semislido de color verde que se inocula
por picadura, contiene carbohidratos como: glucosa, lactosa, sacarosa o maltosa
al 10%. Como indicador de pH tiene Azul de bromotimol. Se usa en dos tubos, uno
sin aceite y otro con acetie o vaselina sellndolo. Se inoculan los dos tubos con la
bacteria por picadura y se mantiene a 37C por 24 horas, obtenindose:

TUBO ABIERTO TUBO SELLADO INTEPRETACIN
Amarillo Verde Oxidacin (aerobio)
Amarillo (anaerobio facultativo) Amarillo Fermentacin
Verde (anaerobio estricto) Amarillo Fermentacin
Verde Verde Negativo (NH
3
)

Prueba de Motilidad: Llamada tambin de la gota suspendida. Algunas bacterias
son mviles por presentar flagelo, los flagelos son encontrados principalmente en
las formas bacilares y pueden presentarse en nmero y posicin
variados(monotricos, peritricos, etc.). La base de esta prueba es determinar si la
bacteria es mvil o inmvil. Con un asa de inoculacin se le coloca a un
cubreobjetos un poco de muestra y se le agrega una gota de agua destilada. Se
coloca sobre un portaobjetos y se observa al microscopio. Podremos observar si
las bacterias tienen movimientos rectilneos o curvos y en todas direcciones.
Ejemplos:

Motilidad (+): como en Pseudomonas auruginosa.
Motilidad (-): como en Pasteurella multocida.