MTODOS DE ANLISIS EN QUMICA CLNICA.

Curso 2007-2008

PROBLEMAS.
1. Cuntos gramos de NaCl se necesitan para preparar 500 mL de una disolucin 0.5 M?
(Pm NaCl = 58.5).
2. Cmo prepararas 250 mL de una disolucin de HCl 0.1 M a partir de otra disolucin
concentrada de HCl 1 M? Cul es el factor de dilucin?
3. A fin de determinar la concentracin de creatinina en orina de 24 horas, la muestra debe
diluirse 1:5 antes de la medicin. Calcular la excrecin de creatinina en orina de 24 horas si
el volumen de orina de 24 horas es de 1800 mL y la determinacin de creatinina urinaria da
una concentracin de 260 mg/L.
4. Calcular la nueva concentracin de las siguientes disoluciones:
Una disolucin de NaOH 10 M que se diluye 1:20
Una disolucin de HCl 2 M que se diluye 1:5
Una disolucin de glucosa de 1000 mg/L que se diluye 1:10 y a continuacin 1:2.
5. Para determinar el ttulo anti-Rho (D), el suero se diluye 1:5 por adicin de 0.2 mL de
suero a 0.8 mL de disolucin salina, en el tubo 1. Los tubos 2 al 8 contienen 0.5 mL de
disolucin salina como diluyente. La dilucin se realiza por transferencia de 0.5 mL del
tubo 1 al 2, mezclado y luego transferencia de 0.5 mL a travs del resto de los tubos hasta
el tubo 8. Calcular el factor con que decrece la concentracin del suero en cada dilucin.
6. En una dilucin seriada de suero conteniendo aglutininas, el tubo 1 contiene 0.9 ml de
solucin salina, los tubos 2 a 8 contienen 0.5 ml de disolucin salina. Se aaden 0.1 ml de
suero al tubo 1 y se realizan las diluciones seriadas transfiriendo 0.5 ml a la hilera de tubos
restantes. En todos se aaden hemates de carnero y la aglutinacin se demuestra en el tubo
nmero 7 Cul es el ttulo de aglutininas para los glbulos rojos de carnero?
7. Calcular la cantidad de urea si el nivel de nitrgeno ureico del paciente es de 800 mg/L. La
frmula para la urea es NH
2
-CO-NH
2
y su Pm es de 60 g/mol.
8. Cul es la concentracin en mEq/L de cloruro en suero que ha sido informado como 250
mg/dl si la estequiometra de la reaccin que tiene lugar es 1:1?
9. El HCl tiene una densidad de 1.25 g/ml y una riqueza del 38%(p/p) Cul es la cantidad de
HCl por ml?
10. Utilizando el ejemplo anterior Cuntos ml son necesarios para preparar 1 L de disolucin
0.1 N de HCl si el Pm es de 36.5 y en la reaccin se intercambia un solo protn?
11. Cuntos gramos de MgCl
2
hay en un gramo de MgCl
2
.3H
2
O? Cul es el porcentaje de
Mg contenido en el MgCl
2
.3H
2
O?
12. Cunto CuSO
4
.5H
2
O debe ser pesado para preparar 1 L de disolucin que contenga 80 mg
de sulfato de cobre? (Pm CuSO
4
.5H
2
O = 250, Pm CuSO
4
. = 160)
13. Si 24.5 g de H
2
SO
4
(Pm= 98g/mol) se disuelven en 1 L de disolucin Cul es la M y N si
en la reaccin en que va a participar se intercambian dos protones?
14. Si el Pm del CaCO
3
es de 100 g/mol y el Pa del Ca es 40 g/mol Cuntos g se requieren
para preparar 100 mL de una disolucin que contenga 100 mg/dl de Ca
2+
usando CaCO
3
?
Y para preparar 1 L de disolucin que contenga 0.2 mEq/L de Ca
2+
si la estequiometra de
la reaccin es 1:2?
15. Qu porcentaje de CuSO
4
.5H
2
O es agua?
16. Si una disolucin estndar de una sustancia que contiene 4 mg/L da una absorbancia de
0.40 y una muestra de esa misma sustancia y de concentracin desconocida da una
absorbancia de 0.25 Cul es la concentracin de la sustancia en la muestra desconocida?
17. Calcular la concentracin de glucosa de una muestra si tiene un porcentaje de transmitancia
del 55% sabiendo que un estndar de glucosa de 1000mg/L tiene un porcentaje de
transmitancia del 49%.
18. Un estndar de bilirrubina 1M se diluye 1:60700 y luego 1:2. La Absorbancia de esta
ltima dilucin es de 0.495 medido en una cubeta de 1 cm de paso ptico. Cul es el
coeficiente de extincin molar de este patrn de bilirrubina?
19. Un tcnico qumico tiene una disolucin de NADH con una concentracin de 0.05x10
-3
M.
Calcular el coeficiente de extincin molar si esta disolucin da una lectura de absorbancia
de 0.300 a = 340 nm y en cubetas de 1 cm de paso ptico.
20. Calcular el pH de un tampn actico/acetato compuesto por acetato de sodio 0.20 M y
cido actico 0.05 M (pKa = 4.76).
21. Cuntos gramos de cido actico y cuntos de acetato sdico hay en un tampn que
contiene una concentracin total 0.2 M y pH= 5? (pKa = 4.76, Pm actico = 60 y Pm del
acetato sdico= 82).
22. Cul es la actividad de la enzima lactato deshidrogenasa (LD) de 0.1 mL de suero + 3 mL
de sustrato si el NADH formado exhibe un A/minuto = 0.002 a = 340 nm? ( =
6.22x10
3
L mol
-1
cm
-1
y b= 1 cm).
23. Cul es la actividad de la enzima fosfatasa alcalina de la cual se han tomado 0.5 mL y se
han llevado a un volumen total de 5.5.mL presentando un A = 0.070? ( = 50000 L mol
-1

cm
-1
, b= 1 cm y t= 15 min).
24. A un tubo que contiene 15 ml de NaCl se le aaden 3.0 ml de suero Cul es la dilucin
resultante?
25. Tranformar 70mg/dl de glucosa a mmol/L (PM= 180)
26. Convertir 10 mg/dl de calcio a mmol/L (PM=40)
27. Transformar 3.5 g/dl de albmina a mol/l (PM=65000)
28. 3 ml de suero se extraen con 50 ml de cloroformo, 40 ml de la disolucin clorofrmica se
extraen con 4.0 ml de base. La absorbancia de esta disolucin bsica es 0.40 cuando el
espesor de la cubeta empleada es 1 cm. La absortividad molar para un compuesto Y es
4.000 l mol
-1
cm
-1
, su peso molecular es 150g/mol. Suponiendo que la extraccin es del
100% en todos los pasos Cul es la concentracin del compuesto Y en mg/100 ml?
29. Si una mezcla formada por dos componentes tiene una absorbancia de 0.700 a 350 nm y
0.790 a 400 nm. Cul es la concentracin del compuesto A y del compuesto B,
suponiendo que las cubetas empleadas fueron de 1 cm de paso ptico?
Datos: Compuesto A Compuesto B
= 350 nm = 10
4
l mol
-1
cm
-1
= 350 nm = 7.5x10
3
l mol
-1
cm
-1
= 400 nm = 5x10
3
l mol
-1
cm
-1
= 350 nm = 1.3x10
4
l mol
-1
cm
-1
30. Considerando los datos siguientes:
Concentracin de cido rico Absorbancia
1.00 mg/dl
0.75 mg/dl
0.50 mg/dl
Blanco
Dilucin 1:10 de una muestra libre de protenas
0.261
0.176
0.114
0,000
0,134
Cul es la concentracin de cido rico en la muestra de suero? Asumir que en cada
disolucin se utiliz una cubeta de 1.20 cm de espesor.
31. El magnesio en suero ha sido determinado mediante su reaccin con el cido 8-hidroxi-5-
quinolnsulfnico. Al pH utilizado la reaccin es:

Mg
2+
+ 2 cido 8-hidroxi- In bis(8-hidroxi-5-quinoln-
quinolnsulfnico sulfonato) magnesio (II)
El in bis (8-hidroxi-5-quinoln-sulfonato)magnersio(II) puede ser excitado a 400nm, para
producir un mximo de emisin de fluorescencia a 510nm. Desgraciadamente el cido 8-
hidroxi-quinolnsulfnico tiene una ligera fluorescencia a estas longitudes de onda.
Considerense los siguientes datos:


Tubo N Patrn de Mg
5mmol/L (ml)
Agua destilada
(ml)
Reactivo
Fluorgeno (ml)
Suero del
Paciente (ml)
Emisin
fluorescente
1
2
3
4
5
6
7
8
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0.0
0.0
0.0
0.0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.0
4.5
4.5
4.5
4.5
4.5
4.5
4.5
4.5
0.0

0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.5
0.5
100.0
82.0
61.0
40.0
20.8
9.0
48.9
0.8

Cul es la concentracin de magnesio en el suero del paciente?

32. Se puede determinar fluorimtricamente la concentracin de salicilato en suero. El
salicilato es excitado aproximadamente a 310 nm, su espectro de emisin fluorescente
presenta una
max
= 400 nm. El suero puede ser desproteinizado con cido wolfrmico antes
del anlisis. Considrese el procedimiento:
Aadir 0.5 ml de suero a un tubo de centrfuga. Aadir lentamente 4.50 ml de reactivo de
cido wolfrmico. Dejar reaccionar la mezcla durante 10 minutos. Centrifugar el tubo
durante 10 minutos a 3.000 rpm. Pipetear 2 ml de la disolucin transparente a un tubo de
ensayo. Denomnese a este tubo muestra. Considrense los siguientes datos:

Tubo N Patrn de Salicilato
10 mg/dl (ml)
Agua destilada
(ml)
cido
wolfrmico (ml)
NaOH 10M
(ml)
Emisin
fluorescente
1
2
3
4
5
Muestra
0.20
0.15
0.10
0.05
0.00
0.00
0.00
0.05
0.10
0.15
0.20
0.00
1.8
1.8
1.8
1.8
1.8
-
3
3
3
3
3
3
100
77
55
38
0
59

a) Preparar una curva estndar mediante la representacin grfica de la intensidad de
emisin fluorescente frente a la concentracin de salicilato en cada patrn.
b) Calclese la concentracin de salicilato en la muestra de suero original.



PROBLEMAS CROMATOGRAFIA.
1. Una mezcla de benceno, tolueno y aire es inyectada en el cromatgrafo de gases. El aire da un
pico de 42 s, mientras que el benceno y el tolueno son eludos respectivamente a 251 s y 333 s.
Calcular el tiempo de retencin corregido, el factor de capacidad (o factor de retencin) para
cada soluto, as como el coeficiente de retencin relativa (o factor de selectividad) para los dos
solutos.
2. En un sistema cromatogrfico, un soluto tiene un tiempo de retencin de 407 s y una anchura
en la base de 13 s. Un pico vecino es eludo a 424 s y tiene una anchura en la base de 16 s.
Calcular la resolucin de la columna para estos dos componentes.
3. En un sistema cromatogrfico, un soluto tiene un tiempo de retencin de 407 s y una anchura
en la base de 13 s en una columna de 12.2 m de longitud. Calcular el nmero de platos tericos
y la AEPT.
4. Una mezcla que contiene 52.4 nM de iodoacetona (X) y 38.9 nM de p-diclorobenceno (S) nos
da una respuesta relativa del detector rea del pico de X / rea del pico de S = 0.644. Una
disolucin que contiene una cantidad desconocida de X ms 38.9 nM de S da una respuesta
relativa del detector de 1.093. Encontrar la concentracin de X en la muestra desconocida.
5. Vamos a considerar el cromatograma de la figura, correspondiente al anlisis del suero de un
paciente donde se han encontrado una serie de drogas anticonvulsivantes:

a) La altura del pico para el fenobarbital es de 56 unidades. Si un estndar de
fenobarbital de 5 mg/dl produce un pico de 93 unidades en idnticas
condiciones analticas Cul es la concetracin de fenobarbital en el suero del
paciente?
b) La altura de pico para la primidona es de 40 unidades. Un estndar de primidona
de 3 mg/dl da un pico de 98 unidades en idnticas condiciones analticas Cul
es la concentracin de primidona en la muestra del paciente?
c) Se quiere determinar la concentracin de carbamacepina en el suero del
paciente. Sabiendo que el rea de pico es de 29.3 mm
2
despus de haber
realizado una dilucin 1:5 de la muestra y que el anlisis de cinco disoluciones
estndares de carbamacepina dieron los siguientes resultados Cul es la
concentracin de carbamacepina en el suero del paciente?
Concentracin (mg/dl) Area de pico (mm
2
)
Blanco 0
1 19.7
2 39.9
3 61.0
4 80.5
5 98.7
Si la columna es de 30 cm Cul es el valor de la AEPT para la carbamacepina?
Si el primer pico es de un compuesto no retenido Cul es la retencin relativa de la
primidona con respecto a la etosuximida?.
6. Se analiza por cromatografa gaseosa una muestra de suero en la que se quiere determinar
etanol utilizando acetona como patrn interno. Para ello se inyecta primero en el cromatgrafo
una muestra que contiene 30 mg /100 ml de cada uno de estos compuestos obtenindose un
rea de pico para la acetona de 47 mm
2
y de 92 mm
2
para el etanol A continuacin se inyecta la
muestra desconocida etanol a la que se aaden 30 mg/100 ml de acetona obtenindose reas de
pico de 43 mm
2
para el etanol y 49 mm
2
para la acetona. Calcular la concentracin de etanol en
la muestra.



PROBLEMAS DE EXTRACCIN CON DISOLVENTES.
1. Se extrajo una alcuota de 25.0 mL de una disolucin acuosa de acetanilida al 0.4% (p/v) con
tres partes de ter de 10.0 mL. Se evaporaron a sequedad los extractos de ter combinados y se
pes el residuo. El coeficiente de particin en ter/agua para la acetanilida es 3.0 Cunto pes el
residuo?
2. Se dispone de los siguientes datos espectrofotomtricos para la acetanilida:
Disolvente
max
(nm) Absortividad molar
Agua 240 10000
Benceno 239 13000
Se disolv 1 mg de acetanilida en 100 mL de agua. Se extrajo una vez esta disolucin con 50 mL
de benceno. Se separaron las fases y se midieron sus absorbancias a las longitudes de onda
apropiadas en cubetas de 1 cm. La absorbancia de la disolucin acuosa fue 0.245 mientras que la
absorbancia de la disolucin bencnica fue 1.290 Cul es el coeficiente de particin de la
acetanilida en el sistema benceno/agua?
3. El coeficiente de particin de una droga alcaloide entre cloroformo y agua es 8 (es ms soluble
en el disolvente orgnico). Se extrajeron 50 mL de una disolucin acuosa 0.01 M del alcaloide con
una porcin de 10.0 mL de cloroformo y la disolucin clorofrmico se evapor a sequedad. Cul
es el peso del residuo? El PM del alcaloide es 210.
4. Cuntas extracciones se necesitarn para separar el 99.9% de una droga de 50 mL de una
disolucin acuosa si se extrae con porciones de ter de 25 mL y su coeficiente de particin es 1.0?.

5. Se sabe que el coeficiente de particin de un compuesto (sistema benceno/agua) es 0.6. Se
disolvi 1 mmol del compuesto en 50 mL de agua y se agit con 100 mL de benceno. Se examin
espectrofotomtricamente una muestra de la capa bencnica en una cubeta de 1 cm a una longitud
de onda a la que la absortividad molar del compuesto en benceno es 3.2x10
2
Cul es la
absorbancia?

6. Se extrajeron 100 mL de una disolucin acuosa que contiene 1 mg/mL de acetanilida y 3
mg/mL de aspirina, con una porcin de 50 mL de ter, en condiciones tales que los coeficientes de
particin (ter/agua) fueron 3.0 para la acetanilida y 0.5 para la aspirina. Se separ la capa ter y se
evapor a sequedad Cul fue el peso total del residuo seco?

7. Se extraen 50.0 mL de una disolucin acuosa de una droga al 1% (p/v) con tres porciones de
ter de 25 mL , siendo el coeficiente de particin (ter/agua), 0.8. Se combinan los extractos de
ter y evaporan a sequedad Cul es el peso del residuo?

8. Se disolvieron 0.750 g de cido actico en 20 ml de ter. Se agit la mezcla en 10 ml de agua,
se separaron las fases y se valor la fase acuosa con NaOH 0.250 N, requirindose 32.50 mL para
alcanzar el punto final de la fenolftalena. Calclese el coeficiente de particin del cido actico
entre ter/agua.

9. S extrajeron 100.0 mL de una disolucin de una droga al 1%, con dos porciones de 20 mL de
ter. Se evaporaron los extractos de ter combinados y se encontr que el residuo seco pesaba
865.5 mg. Calclese el coeficiente de particin.

10. El pK
a
de la efedrina es 9.5; su coeficiente de particin 8.4 (ter/agua) y su peso molecular
165.2.

(a) Se hicieron fuertemente alcalinos con NaOH 100.0 mL de una disolucin de efedrina
0.10 M en agua. Se extrajeron con dos partes de 50 mL de ter; se combinaron los
extractos de ter y evaporaron a sequedad. Calclese el peso del residuo seco.
(b) Supngase que en (a), se realiz la extraccin con la disolucin acuosa tamponada a pH
9.5. Estmese ahora el peso del residuo seco obtenido siguiendo el mismo
procedimiento de extraccin.


CALCULO SE SENSIBILIDAD, ESPECIFICIDAD Y EFICIENCIA DE UNA PRUEBA

Un fabricante est evaluando un prueba para la glucemia que la dan positiva las personas
diabticas y negativa las no diabticas. Para ello toma una muestra de 500 pacientes: 300
diabticos y 200 no diabticos. Los resultados obtenidos son:



Resultado N pacientes diabticos N pacientes no diabticos
Positivo 250 (PV) 4 (PF)
Negativo 50 (NF) 196 (NV)
TOTAL 300 (PV + NF) 200 (PF + NV)



Determinar la sensibilidad y especificidad y eficiencia de la prueba.
NOTA: PV: positivos verdaderos PF: positivos falsos
NV: negativos verdaderos NF: negativos falsos.

TOXICOLOGA

Para la determinacin espectrofotomtrica de carboxihemoglobina (HbCO) en sangre, la muestra
se trata con Na
2
S
2
O
4
con el fin de convertir toda la HbO
2
en Hb y determinar la concentracin de
las especies Hb y HbCO. Las absorbancias obtenidas para la muestra son 0.690 y 0.785 a
= 420 nm y = 432 nm respectivamente.
Calcular el porcentaje de HbCO en la muestra respecto a la Hb total.

DATOS:

Hb

HbCO
= 420 nm = 4.09 l mmol
-1
cm
-1

= 432 nm = 1.23 l mmol
-1
cm
-1
= 420 nm = 0.33 l mmol
-1
cm
-1

= 432 nm = 5.35 l mmol
-1
cm
-1
b = 1 cm.