PROYECTO DE SEMINARIO

CATLISIS ENZIMTICA






PRESENTADO POR:
KAREN JULIETH CAMARGO RUEDA
CRISTIAN GIOVANY GMEZ
NGELA MARA ORTIZ SUREZ





PRESENTADO A:
ADRIANA LUCA MANOSALVA CORTS






UNIVERSIDAD INDUSTRIAL DE SANTANDER
FACULTAD DE INGENIERAS FISICOQUMICAS
ESCUELA DE INGENIERA QUMICA
MICROBIOLOGA INDUSTRIAL J2
BUCARAMANGA, MARZO DE 2014

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CONTENIDO


INTRODUCCIN................................................................................................................................. 3
OBJETIVO ........................................................................................................................................... 4
CONTEXTO HISTRICO ................................................................................................................... 5
LA BIOCATLISIS .............................................................................................................................. 7
ENZIMAS, CATALIZADORES BIOLGICOS ..................................................................................... 8
CARACTERSTICAS DE LAS ENZIMAS ............................................................................................ 9
TERMINOLOGA ENZIMTICA ........................................................................................................ 10
CLASIFICACIN GENERAL DE LAS ENZIMAS .............................................................................. 11
ESPECIFICIDAD DE LA ENZIMA Y EL SUSTRATO. ...................................................................... 16
COMPLEJO ENZIMA-SUSTRATO ................................................................................................... 17
INTERACCIONES ENZIMA- SUSTRATO. ....................................................................................... 17
CINETICA ENZIMTICA ................................................................................................................... 18
VELOCIDAD DE REACCIN ENZIMTICA CON RELACIN AL SUSTRATO. ............................. 19
CINTICA DE MICHAELIS-MENTEN. .............................................................................................. 20
REVERSIBILIDAD, ECUACIN DE HALDANE., MECANISMO DE BRIGGS-HALDANE: K
M
> K
S .
23
MECANISMO EN EL QUE OCURREN VARIOS INTERMEDIOS DESPUS DE ES: K
M
< K
S
...... 24
CINTICA DE TIPO ALOSTRICO. ................................................................................................. 25
INHIBICIN DE REACCIONES CATALIZADAS POR ENZIMAS .................................................... 25
EFECTOS DE LA TEMPERATURA EN LA ACTIVIDAD ENZIMTICA ........................................... 27
EFECTOS DEL PH EN LA ACTIVIDAD ENZIMTICA ..................................................................... 28
DIAGRAMA DE FLUJO PARA IMPLEMENTAR UN PROCESO DE BIOCATLISIS A NIVEL
INDUSTRIAL ..................................................................................................................................... 29
ALGUNOS REACTORES ................................................................................................................. 29
FUNCIN BIOLGICA DE LAS ENZIMAS ...................................................................................... 30
APLICACIONES INDUSTRIALES..................................................................................................... 31
CONCLUSIN................................................................................................................................... 32
BIBLIOGRAFA.................................................................................................................................. 33
WEBGRAFA. .................................................................................................................................... 33


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INTRODUCCIN

Durante las ltimas dcadas se han dado enormes pasos en el desarrollo y aplicacin de
la biocatlisis en muchas reas que involucran procesos sintticos. Hoy en da las
muchas enzimas son representantes de la mayora de las reacciones biocatalticas
implementadas a escala industrial. Las enzimas no son transformadas durante la
reaccin, por ejemplo en el caso de la fermentacin, las enzimas elaboradas a partir de
levadura convierten a las molculas de azcar en alcohol sin desvanecerse en el proceso;
esta caracterstica le permite a pequeas cantidades de enzimas comerciales dar grandes
resultados, y al comparar con otros procesos resulta ms econmico y por supuesto
brinda una mayor eficiencia. Gran parte de las enzimas tienen su origen en organismos
bacterianos y fngicos por lo que resulta sencillo conseguirlas, claro est bajo condiciones
adecuadas de los cultivos.
Es de vital importancia para la industria futura el mejoramiento de las tcnicas de este
gran mecanismo de procesos.




















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OBJETIVO

Comprender la importancia de las variables involucradas en la biocatlisis en los procesos
industriales, conociendo la manera adecuada de trabajar con cultivos de microorganismos
para optimizar estos procesos.


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CONTEXTO HISTRICO


Desde finales del siglo XVIII y principios del siglo XIX, se conoca la digestin de
la carne por las secreciones del estmago
8
y la conversin del almidn en azcar por los
extractos de plantas y la saliva. Sin embargo, no haba sido identificado el mecanismo
subyacente.
9

En el siglo XIX, cuando se estaba estudiando la fermentacin del azcar en
el alcohol con levaduras, Louis Pasteur lleg a la conclusin de que esta fermentacin era
catalizada por una fuerza vital contenida en las clulas de la levadura,
llamadas fermentos, e inicialmente se pens que solo funcionaban con organismos vivos.
Escribi que "la fermentacin del alcohol es un acto relacionado con la vida y la
organizacin de las clulas de las levaduras, y no con la muerte y la putrefaccin de las
clulas".
10
Por el contrario, otros cientficos de la poca como Justus von Liebig, se
mantuvieron en la posicin que defenda el carcter puramente qumico de la reaccin de
fermentacin.
- En 1878 el fisilogo Wilhelm Khne (18371900) acu el trmino enzima, que
viene del griego "en levadura", para describir este proceso. La palabra
enzima fue usada despus para referirse a sustancias inertes como la pepsina.
Por otro lado, la palabra "fermento" sola referirse a la actividad qumica producida
por organismos vivientes.
- En 1897 Eduard Buchner comenz a estudiar la capacidad de los extractos de
levadura para fermentar azcar a pesar de la ausencia de clulas vivientes de
levadura. En una serie de experimentos en la Universidad Humboldt de Berln,
encontr que el azcar era fermentado inclusive cuando no haba elementos vivos
en los cultivos de clulas de levaduras.
11
Llam a la enzima que causa la
fermentacin de la sacarosa, zimasa.
12
En 1907 recibi el Premio Nobel de
Qumica "por sus investigaciones bioqumicas y el haber descubierto la
fermentacin libre de clulas". Siguiendo el ejemplo de Buchner, las enzimas son
usualmente nombradas de acuerdo a la reaccin que producen. Normalmente, el
sufijo "-asa" es agregado al nombre del sustrato (p. ej., la lactasa es la enzima que
degrada lactosa) o al tipo de reaccin (p. ej., la ADN polimerasa forma polmeros
de ADN).
Tras haber mostrado que las enzimas pueden funcionar fuera de una clula viva, el
prximo paso era determinar su naturaleza bioqumica. En muchos de los trabajos
iniciales se not que la actividad enzimtica estaba asociada con protenas, pero algunos
cientficos (como el premio Nobel Richard Willsttter) argumentaban que las protenas
eran simplemente el transporte para las verdaderas enzimas y que las protenas per se no
eran capaces de realizar catlisis. Sin embargo, en 1926, James B. Sumner demostr que
la enzima ureasa era una protena pura y la cristaliz. Summer hizo lo mismo con la
enzima catalasa en 1937. La conclusin de que las protenas puras podan ser enzimas

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fue definitivamente probada por John Howard Northrop y Wendell Meredith Stanley,
quienes trabajaron con diversas enzimas digestivas como la pepsina (1930), la tripsina y
la quimotripsina. Estos tres cientficos recibieron el Premio Nobel de Qumica en1946.
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El descubrimiento de que las enzimas podan ser cristalizadas permita que sus
estructuras fuesen resueltas mediante tcnicas de cristalografa y difraccin de rayos X.
Esto se llev a cabo en primer lugar con la lisozima, una enzima encontrada en
las lgrimas, la saliva y los huevos, capaces de digerir la pared de algunas bacterias. La
estructura fue resuelta por un grupo liderado por David Chilton Phillips y publicada en
1965.
14
Esta estructura de alta resolucin de las lisozimas, marc el comienzo en el
campo de la biologa estructural y el esfuerzo por entender cmo las enzimas trabajan en
el orden molecular.























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LA BIOCATLISIS

La biocatlisis, tambin conocida como catlisis enzimtica o biotransformacin, es el uso
de enzimas para catalizar reacciones qumicas.
El uso de enzimas aisladas o clulas enteras como catalizadores ofrece varias ventajas
sobre los catalizadores metlicos tradicionales. En primer lugar, las enzimas son muy
eficaces, lo que proporciona velocidades de reaccin mayores que las obtenidas con
catalizadores qumicos, a concentraciones ms bajas. En segundo lugar, las enzimas
funcionan a temperaturas y condiciones de pH ptimos, as como en entornos acuosos, lo
que permite una tendencia hacia los procesos sostenibles a gran escala. En tercer lugar,
las enzimas ofrecen una gran especificidad, ya que pueden ser quimioespecficas,
regioespecficas, diastereoespecficas y enantioespecficas, de modo que su objetivo son
grupos funcionales especficos. Por ltimo, las enzimas reducen los costes de la sntesis
qumica y pueden producirse de forma masiva.




















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ENZIMAS, CATALIZADORES BIOLGICOS

La enzima como unidad fundamental de vida:

Cada clula y cada tejido tienen su actividad propia, lo que comporta continuos cambios
en su estado bioqumico, en la base de la cual estn las enzimas, que tienen el poder de
catalizar, facilitar, y agilizar determinados procesos sintticos y analticos. Los propios
genes son reguladores de la produccin de las enzimas; por tanto, genes y enzimas
pueden considerados como las unidades fundamentales de la vida.
Este concepto poco difundido casi hasta el siglo XX, se ha desarrollado y concretado cada
vez ms, y constituye un componente esencial de diversas disciplinas: la microbiologa,
la fisiologa, la bioqumica, la inmunologa y la taxonoma, formando adems parte del
campo aplicado, en gran variedad de industrias. El rasgo particular de las enzimas es que
pueden catalizar procesos qumicos a baja temperatura, compatible con la propia vida, sin
el empleo de sustancias lesivas para los tejidos. La vida es, en sntesis, una cadena de
procesos enzimticos, desde aquellos que tienen por sustratos los materiales ms
simples, como el agua (H2O) y el anhdrido carbnico (CO2), presentes en los vegetales
para la formacin de hidratos de carbono, hasta los ms complicados que utilizan
sustratos muy complejos.
La formacin de los prtidos, los glcidos y los lpidos es un ejemplo tpico: Son a la vez
degradados y reconstruidos por otras reacciones enzimticas, produciendo energa a
una velocidad adecuada para el organismo, sin el gasto energtico que exigen
los mtodos qumicos de laboratorio.
















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CARACTERSTICAS DE LAS ENZIMAS



Desde el punto de vista qumico, las enzimas estn formadas de carbono
(C), Hidrgeno (H), oxigeno (O), Nitrgeno (Ni), y Azufre (S) combinados, pero siempre
con peso molecular bastante elevado y con propiedades catalticas especficas. Su
importancia es tal que puede considerarse la vida como un "orden sistemtico de enzimas
funcionales". Cuando este orden y su sistema funcional son alterados de algn modo,
cada organismo sufre ms o menos gravemente y el trastorno puede ser motivado tanto
por la falta de accin como por un exceso de actividad de enzima.
Las enzimas son catalizadores de naturaleza protenica que regulan la velocidad a la cual
se realizan los procesos fisiolgicos, producidos por los organismos vivos. En
consecuencia, las deficiencias en la funcin enzimtica causan patologas.
Las enzimas, en los sistemas biolgicos constituyen las bases de las complejas y
variadas reacciones que caracterizan los fenmenos vitales. La fijacin de la energa solar
y la sntesis de sustancias alimenticias llevadas a cabo por los vegetales dependen de las
enzimas presentes en las plantas. Los animales, a su vez, estn dotados de las enzimas
que les permiten aprovechar los alimentos con fines energticos o estructurales; las
funciones del metabolismo interno y de la vida de relacin, como la locomocin, la
excitabilidad, la irritabilidad, la divisin celular, la reproduccin, etc. Estn regidas por la
actividad de innumerables enzimas responsables de que las reacciones se lleven a cabo
en condiciones favorables para el individuo, sin liberaciones bruscas de energa a
temperaturas fijas en un medio de pH, concentracin salina, etc.; prcticamente
constante.
A diferencia de un catalizador inorgnico que interviene en numerosas reacciones las
enzimas producidas por los organismos vivos habitualmente solo catalizan un tipo de
reaccin o solo una reaccin determinada; la especificidad de las enzimas es tan
marcadas que en general actan exclusivamente sobre sustancias que tienen una
configuracin precisa; por ejemplo, si solo atacan a los aminocidos que tienen su
carbono a , asimtrico, con estructura L-, no muestran la menor actividad sobre formas
idnticas de dichos aminocidos, pero que sean del tipo D-.
En los sistemas biolgicos se llevan a cabo diversas reacciones a partir de la misma
sustancia; por ejemplo algunos microorganismos convierten la glucosa en alcohol y
bixido de carbono, al paso que otros grmenes la convierten en cido lctico o cido
pirvico o acetaldehdo. Esto quiere decir que la glucosa puede descomponerse en
distintos productos y aunque todas las posibilidades son tericas y prcticamente posibles
la presencia de ciertas enzimas favorece uno de los caminos que llevan a la acumulacin
de determinados compuestos.
Las enzimas, por lo tanto, se consideran como catalizadores altamente especficos que:
Modifican la velocidad de los cambios promovidos por ellas.
Determinan que sustancias particulares, de preferencia a otras distintas son las que
van a sufrir los cambios.
Impulsan dentro de los distintos cambios posibles que pueda seguir una sustancia,
cul de ellos en especial, ser el utilizado.

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Las enzimas representan las sustancias encargadas de graduar la velocidad de una
reaccin determinada en el interior de las clulas. Es posible, por lo tanto, que la mayor
parte de esta estructura protenica celular est formada por enzimas, encargadas de las

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diversas funciones de sntesis, degradacin, oxidacin, etc. caractersticas de la actividad
vital de los distintos organismos.

En general, las enzimas:
Desde el punto de vista qumico son protenas, pero pueden asociarse con
substancias no protenicas, llamadas coenzimas o grupos prostticos, que son
esenciales para la accin de la enzima.
Poseen sitios de unin con el sustrato (sitio activo) en el cul se lleva a cabo la
actividad cataltica.
Son sensibles a temperatura, pH y salinidad.
Su actividad disminuye cuando cambia su conformacin

TERMINOLOGA ENZIMTICA

Las enzimas: producidas por los sistemas vivos, son protenas naturales con
propiedades catalticas. Como catalizadores, las enzimas son eficiente y a la vez
altamente especfica para una reaccin qumica particular, que implica la sntesis,
la degradacin o la alteracin de un compuesto.
Los cofactores: estn implicados en reacciones donde se oxidan y reducen
molculas, que estn reorganizadas o conectadas. Pueden ser iones metlicos o
una molcula orgnica, denominada coenzima. Si el cofactor est unido
fuertemente al enzima se denomina grupo prosttico.

Apoenzima: parte proteica del enzima (no activa)

Holoenzima: apoenzima + cofactor

Biotecnologa se define ampliamente como una tcnica que implica el uso de
organismos vivos o sus productos para crear o modificar un producto con fines
comerciales.

Biotransformacin: es una reaccin catalizada por enzimas (clulas enteras),
donde un sustrato no natural de las enzimas est involucrado.

La molecularidad: es el nmero de especies que deben chocar para producir la
reaccin enzimtica que corresponde a cada etapa del elemento.



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CLASIFICACIN GENERAL DE LAS ENZIMAS
Actualmente, ms de mil enzimas han sido aisladas y clasificadas de acuerdo con el
substrato especfico sobre el cual actan.
Entre las numerosas clasificaciones, algunas se basan en las reacciones que catalizan las
enzimas, otras en el substrato sobre el que actan e incluso muchas enzimas se designan
con nombres triviales de origen histrico.
La comisin de Enzimas de la Unin Internacional de Bioqumica introdujo en 1964, para
uniformar la nomenclatura, la siguiente clasificacin sistemtica, en la cual se consideran
6 grupos principales de enzimas de acuerdo al tipo reaccin implicada:

1. Oxidorreductasas:
Catalizan una amplia variedad de reacciones de xido-reduccin, empleando coenzimas,
tales como NAD
+
y NADP
+
, como aceptor de hidrgeno. Este grupo incluye las enzimas
denominadas comnmente como deshidrogenasas, reductasas, oxidasas, oxigenasas,
hidroxilasas y catalasas.

1.1. Deshidrogenasas/reductasas: producen reacciones de deshidrogenacin e
hidrogenacin de grupos funcionales, siendo el aceptor de electrones un grupo
diferente al O
2
molecular.
1.2. Oxidasas: cuando el aceptor final es el O
2
liberando H
2
O
2.

1.3. Dioxigenasas: Los dos tomos de O
2
se incorporan a la molcula y siempre hay
implicacin de ruptura de C-C
1.4. Monooxigenasas: Son de funcin mixta, le quitan un tomo de oxgeno al O
2
, se
incorporan al sustrato y el otro es reducido a H
2
O.

12

1.5. Peroxidasas: Utilizan el perxido de H
2
en lugar de O
2
como oxidante, son
importantes las catalasas.


2. Transferasas:
Catalizan varios tipos de transferencia de grupos de una molcula a. otra (transferencia
de grupos amino, carboxilo, carbonilo, metilo, glicosilo, acilo, o fosforilo). Ej.:
aminotransferasas (transaminasas).


2.1. Grupos monocarbonados: que trasnfieren grupos monocarbonados.
2.2. Grupos aldehido o cetona: que transfiere aldehidos o cetnas.
2.3. Aciltransferasas: que trasnfieren grupos acilo.
2.4. Glicosiltransferasas: qe trasnfieren grupos glicosilo.
2.5. Alquil-o Ariltransferasas: que trasnfieren grupos arilo o alquilo.
2.6. Grupos nitrogenados: que trasnfieren grupos nitrogenados.
2.7. grupos sulfatos: que trasnfieren grupos sulfatos.

3. Hidrolasas:
Catalizan reacciones que implican la ruptura hidroltica de enlaces qumicos, tales como
C=O, C-N, C-C. Sus nombres comunes se forman aadiendo el sufijo -asa al nombre de

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substrato. Ej.: lipasas, peptidasas, amilasa, maltasa, pectinoesterasa, fosfatasa, ureasa.
Tambin pertenecen a este grupo la pepsina, tripsina y quimotripsina.




3.1. Esterasas( carboxilesterasas, fosfoesterasas, sulfoesterasas): Catalizan reacciones
de hidrlisis (fase I de la biotransformacin) de steres carboxlicos (carboxiesterasas),
amidas (amidasas), steres de fosfato (fosfatasas), etc.
3.2. Glicosidasas: catalizan la hidrlisis de enlaces glucosdicos para
generar glcidos menores
3.3. ter hidrolasas
3.4. Pptido hidrolasas: hidrolizan enlaces peptdicos CO-NH-.
3.5. Acil anhdrido hidrolasas: catalizan la hidrlisis de enlaces difosfato en compuestos
tales como nuclesido di- y tri-fosfatos y anhdridos que contienen sulfonil, tales como el
adenililsulfato.

4. Liasas:
Tambin catalizan la ruptura de enlaces (C-C, C-S y algunos C-N, excluyendo enlaces
peptdicos), pero no por hidrlisis. Ej.: decarboxilasas, citrato-liasa, deshidratasas y
aldolasas.

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4.1. Descarboxilasas: Enzima que se encarga de eliminar los radicales carboxilo (-COOH)
liberando CO
2
como producto de desecho.
4.2. Hidratasas: activas sobre la unin carbono-oxgeno, las cuales estn constituidas por
las hidroliasas, que son las que introducen una molcula de agua sobre un doble enlace
de una cadena carbonada.
4.3. Deshidratasas: se encarga de eliminar los elementos del agua en una reaccin de
deshidratacin. Por ejemplo, el citrato deshidratasa convierte el citrato en cis-aconitato.
4.4. Amino liasas: catalizan la ruptura de un enlace carbono-nitrgeno a travs de medios
ajenos a la hidrlisis y la oxidacin.
4.5. Sintasas: catalizan reacciones de sntesis que no conllevan hidrlisis de un enlace
fosfrico rico en energa.
4.6. Aldolasas: cataliza la transformacin de la FRUCTOSA-1,6-BISFOSFATO
en gliceraldehdo-3-fosfato y dihidroxiacetona-3-fosfato.

5. Isomerasas:
Transforman sus substratos de una forma isomrica en otra. Ej.: Epimerasas, racemasas
y mutaras.

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5.1. Mutasas: cataliza la transferencia intramolecular de un grupo funcional como el
fosforilo. La transferencia no tiene por qu ser directa sino que puede implicar un enzima
fosforilado intermedio.
5.2. Epimerasas: catalizan la inversin de un centro estereoespecfico en una molcula
biolgica.


5.3. Racemasas: cataliza la inversin de la configuracin alrededor de un carbono
asimtrico en un sustrato que solo tiene un centro de asimetra.
6. Ligasas:
Catalizan la formacin de enlace entre C y O, S, N y otros tomos. Generalmente, la
energa requerida para la formacin de enlace deriva de la hidrlisis del ATP. Las
sintetasas y carboxilasas estn en este grupo.

6.1. Uniones O-C.
6.2. Uniones C-S.

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6.3. Uniones C-N.
6.4. Uniones C-C.
6.5. Formacin de steres fosfricos.
6.6. Unin nitrgeno-metal.


ESPECIFICIDAD DE LA ENZIMA Y EL SUSTRATO.





Una de las caractersticas ms importantes de los enzimas es su alta especificidad sobre
la reaccin que catalizan. Cada enzima cataliza un solo tipo de reaccin, y casi siempre
acta sobre un nico sustrato o sobre un grupo muy reducido de ellos. Esta especificidad
se debe a la complementariedad que debe existir entre el sustrato y el centro activo del
enzima.

Existen dos teoras:

1. En 1894, Emil Fischer propuso la hiptesis de la llave y la cerradura en la que se
pensaba que el centro activo tena una forma tridimensional determinada y el
sustrato encajara perfectamente.
2. En 1958 Daniel Koshland propuso la hiptesis del ajuste inducido o de la mano y
el guante. La especificidad radica en los aminocidos de unin del centro activo,
que son los encargados de establecer enlaces dbiles con el sustrato. Esta afirma
que no hay una adaptacin predeterminada como ocurre en el modelo de la llave-
cerradura, sino una adaptacin inducida por los aminocidos de unin.

La especificidad se establece a dos niveles:

Especificidad de accin: Es decir un enzima solo puede realizar un determinado tipo de
reaccin: hidrlisis, xido-reduccin, etc.
Especificidad de sustrato: Esto significa que cada enzima slo puede actuar sobre un
sustrato, o sobre un reducido nmero de sustratos. Esta especificidad puede ser:

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Absoluta. El enzima acta sobre un nico sustrato. Ej. Ureasa acta sobre la urea y la
desdobla en CO2 y NH3.
De grupo. El enzima acta sobre un grupo de sustratos que presentan un determinado
tipo de enlace. Ej. Las decarboxilasas eliminan un grupo CO2 de los aminocidos.
Estereoqumica. La enzima acta sobre un estereoismero y no sobre el otro. Ej. La
aspartasa acta sobre el L-asprtico y no sobre la forma D.



COMPLEJO ENZIMA-SUSTRATO

Enzima en relacin al tipo de sustrato

Aunque las enzimas son altamente especficas para el tipo de reaccin que catalizan, lo
mismo no es siempre la verdad sobre los sustratos que estas atacan. Generalmente,
las enzimas que tienen una especificidad amplia de sustrato son ms activas con un
sustrato en particular. En el caso de la ADH, el etanol es el sustrato preferido.
Las enzimas son tambin especficas para una configuracin estrica particular
(ismero ptico) de un sustrato. Las enzimas conocidas con el nombre de racemasas
proveen una excepcin importante a estas generalizaciones; de hecho, el papel de las
racemasas es convertir a los ismeros D a ismeros L y viceversa. As, las racemasas
atacan a las formas D y L de sus sustratos.
Como las enzimas tienen ms o menos un amplio rango de especificidad de sustrato,
entonces un sustrato determinado puede ser utilizado por un nmero diferente de


enzimas, cada una de las cuales utiliza el mismo sustrato(s) y produce el mismo
producto(s).

Interacciones enzima- sustrato.
El modelo ms favorecido de la interaccin enzima sustrato se conoce como el modelo
de ajuste inducido. Este modelo propone que la interaccin inicial entre la enzima y el
sustrato es relativamente dbil, pero que estas interacciones dbiles rpidamente
inducen cambios conformacionales en la enzima que fortalecen la unin y atraen los
sitios catalticos en proximidad a los enlaces del sustrato que deben alterar. Despus
de que la unin se ha hecho, uno o ms mecanismos de catlisis generan complejos de
estado-de transicin y productos de la reaccin. Los posibles mecanismos de catlisis
son cuatro:
1. Catlisis por tensin de enlace: en esta forma de catlisis, los rearreglos
estructurales inducidos que se hacen con la unin del sustrato y enzima
finalmente producen uniones de sustrato tensionadas, que ms fcilmente logran
es estado de transicin. La nueva conformacin frecuentemente forza a los

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tomos del sustrato y a grupos catalticos, como el glutamato y el aspartato, a
conformaciones que tensan enlaces de sustrato existentes.
2. Catlisis por proximidad y orientacin: las interacciones enzima-sustrato
orientan los grupos reactantes y los juntan uno con otro. Adems de inducir
tensin, grupos como el aspartato son frecuentemente qumicamente reactivos
tambin, y su orientacin y proximidad al sustrato favorecen su participacin en
la catlisis.
3. Catlisis que involucran donadores (cidos) y aceptores (bases) de
protones: otros mecanismos tambin contribuyen significativamente para
completar los eventos catalticos que se inician por mecanismos de tensin, por
ejemplo, el uso de glutamato como un catalizado acido en general (donador de
protones).
4. Catlisis covalente: en las catlisis que se realizan por mecanismos
covalentes, el sustrato se orienta a los sitios activos de las enzimas de tal
manera que se forma un intermediario covalente entre la enzima o la coenzima y
el sustrato. Uno de los ejemplos ms conocidos de este mecanismo es el que
involucra protelisis por las proteasas de serina, que incluye a enzimas
digestivas (tripsina, quimotripsina, y elastasa) y varias enzimas de la cascada de
la coagulacin. Estas proteasas contienen en su sitio activo serina cuyo hidroxilo
del grupo-R forma un enlace covalente con un carbono carbonilo de un enlace
peptdico, por lo tanto causan hidrlisis del enlace peptdico.










CINETICA ENZIMTICA

En fundamental entender todo a cerca de la cintica enzimtica para comprender el
funcionamiento de los sistemas enzimticos dentro de la clula.





Preparacin de las enzimas para la determinacin de su actividad

Para medir la actividad de una enzima es necesario, desde luego partir de un tejido o
material que la contenga. Lo que generalmente se hace es romper todas las clulas de
tejido mediante diversos procedimientos en un medio lquido, a una temperatura entre 0 y
4 con objetivo de evitar la desnaturalizacin de las protenas. A este proceso se le llama

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homogeneizacin. Y al licuado resultante homogeneizado, el cual constituye ya una
preparacin que permita medir la actividad de la enzima. A partir del homogeneizado es
posible separar partculas subcelulares, como ncleos, mitocondrias, partculas de retcula
endoplasmtico, membranas, etc. O bien los pasos habituales para la purificacin de las
protenas y purificar la enzima.

Tiempo de incubacin: La manera ms usual de medir la actividad enzimtica es
incubar la preparacin enzimtica, generalmente a 37, por periodos variables de tiempo y
medir el producto de la reaccin enzimtica en un tiempo dato. Si la reaccin es lineal en
el tiempo, hasta un periodo determinado, se puede expresar la actividad enzimtica en
trminos de la velocidad, sea la cantidad de producto formado por unidad de tiempo. La
velocidad de la reaccin (v) se expresa generalmente como micromoles de producto
formado/ minuto.


VELOCIDAD DE REACCIN ENZIMTICA CON RELACIN AL SUSTRATO.

A [S] bajas, v es directamente proporcional a [S]
A [S] muy altas, v es independiente de [s], (a pesar de seguir aumentando [s]), por
tanto V= Vmx.
Existe un valor de [S] en el que v=Vmx/2, el cual es llamado Km,
correspondiente a la abreviatura de constante de Michaelis.
Si se aumenta [E] el doble, se duplican V y Vmx pero Km permanece constante.














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CINTICA DE MICHAELIS-MENTEN.


Las velocidades de las reacciones catalizadas por enzimas son en general
proporcionales a la primera potencia de la concentracin de la enzima (son de
primer orden respecto a la enzima). Sin embargo, es frecuente encontrar una
dependencia de la concentracin del sustrato (sobre el que acta la enzima),
como se muestra en la figura 5. La velocidad vara linealmente con la
concentracin de sustrato a concentraciones bajas (primer orden respecto al
sustrato) y se hace independiente de la concentracin de ste (orden cero) a
concentraciones elevadas. Este tipo de comportamiento fue explicado por
Michaelis y Mente en funcin del mecanismo siguiente:
1. Interaccin de la enzima con el substrato (reactivo), para formar un complejo
intermediario
11 k1
E1+1S1 1ES
xxxk-1
2. Descomposicin del complejo intermediario para dar los productos y regenerar
la enzima


21


k2111
E1S E + P



E es la enzima, S el sustrato, ES un complejo y P es el producto. Aplicando el
tratamiento cintico denominado del estado estacionario, en el que se asume
que la concentracin del complejo intermediario es constante obtenemos

K
1
[E] S - k_
1
[ES] - K
2
[ES] = 0 I




Si la concentracin total de la enzima [E]o es igual a la suma de la concentracin
en enzima libre [E], ms la concentracin de enzima que forma el complejo [ES]:



[E]
o
= [E] + [ES] II



Introduciendo [E] de la ecuacin II en la ecuacin I, tenemos:


K1 ([E]
o
- [ES]) [S] - (K_
1
+ K
2
)[ES] = 0
de donde podemos obtener la concentracin de enzima que est formando el
complejo



Se asume que la etapa determinante de la reaccin es la descomposicin del
complejo, entonces la velocidad de la reaccin es v=k
2
[ES] en donde se
substituye [ES]

22



Que rearreglando nos da:

III


Donde k
m
= se denomina constante de Michaelis.
De la ecuacin III se deduce que cuando [S] es suficientemente pequea,

Lo que indica primer orden respecto a la concentracin de sustrato. Por el contrario,
cuando [S] es mucho mayor que K
m
,

v = k
2
[E
o
]
Y cintica es orden cero respecto al sustrato. En ambos casos el orden es b>1 para
la concentracin de enzima. La ecuacin III da cuenta entonces del comportamiento
observado en la figura 5.




23



El diagrama de Lineweaver-Burk se emplea como herramienta grfica para calcular los
parmetros cinticos de una enzima. (Linealizacin de la ecuacin de Michaelis-menten)






REVERSIBILIDAD, ECUACIN DE HALDANE., MECANISMO DE BRIGGS-
HALDANE: K
M
> K
S .

Tambin se puede interpretar la ecuacin de Michaelis con el siguiente mecanismo
propuesto por Briggs y Haldane

Ahora, el complejo de Michaelis no est en equilibrio con el substrato y el enzima libre,
sino que en cuanto se forma evoluciona rpidamente hacia los productos. Realmente, en
el tratamiento cintico formal de ES, puede aplicrsele la aproximacin del estado
estacionario. La ecuacin de velocidad resultante es:

Que comparada con la ecuacin experimental de Michaelis da como resultado:
o k
cat
= k
2

o K
M
= ( k
2
+ k
-1
)/ k
1
= K
S
+ k
2
/ k
1


24

Donde: k
1
, k
2
y k
3
son las constantes cinticas individuales de cada proceso y tambin
reciben el nombre de constantes microscpicas de velocidad, y k
cat
es la constante de
velocidad de la segunda etapa, cuando el complejo ES pasa a E+P.

MECANISMO EN EL QUE OCURREN VARIOS INTERMEDIOS DESPUS DE
ES: K
M
< K
S

En los dos esquemas anteriores se asume la existencia de slo un complejo enzimtico y
ningn intermedio de reaccin, lo cual es tan slo una aproximacin a la realidad. Es
mucho ms habitual que una vez formado el complejo de Henry-Michaelis, ste
evolucione para generar uno o varios intermedios de reaccin que finalmente llevan al
enzima libre y los productos.

Los intermedios y el complejo pueden estar en equilibrio, tal como se ha sealado en la
ecuacin anterior, o no, en cuyo caso se les aplicar la aproximacin del estado
estacionario. Con una ecuacin como la anterior, en donde v = k
4
[ES"], la ecuacin de
velocidad tiene la misma estructura que la ecuacin de Michaelis, en donde:


Por ejemplo en las serin proteasas, enzimas que catalizan la hidrlisis de los enlaces
peptdicos de las protenas, una vez formado el complejo ES, el ataque nuclefilo del OH
de la serina sobre el carbono carbonlico del substrato genera, mediante una reaccin de
transferencia de grupos acilo, un compuesto intermedio, el acil-enzima EAc, que
posteriormente mediante la adicin de agua, evoluciona desacilando y generando el
enzima libre y los productos:

Aplicando el estado estacionario a este intermedio, la velocidad de esta reaccin puede
expresarse como:

Por tanto:

25



La constante cataltica tambin se puede expresar como:

CINTICA DE TIPO ALOSTRICO.




La razn de la curva diferente en el caso de las enzimas alostricas, es que las primeras
molculas que se combinan con la enzima, modifican la estructura terciaria de sta, de
modo que la siguiente molcula de sustrato entra al sitio activo ms fcilmente que la
primera, lo cual origina la rpida subida de la curva, que le da la forma de sigmoide.

Las enzmas alostricas tienen la caracterstica de estar formadas por subunidades y
donde se lleva a cabo la modificacin de una subunidad por la entrada del sustrato (o de
un inhibidor o un activador) cambia la conformacin de las dems subunidades para
hacerlas ms menos afines al sustrato.



INHIBICIN DE REACCIONES CATALIZADAS POR ENZIMAS

Inhibidores reversibles:

Se unen a las enzimas mediante interacciones no covalentes tales como los
puentes de hidrogeno, las interacciones hidrofbicas y los enlaces inicos. Los

26

enlaces dbiles mltiples entre el inhibidor y el sitio activos se combinan para
producir una unin fuerte y especifica. Al contrario de lo que ocurre con el sustrato
y los inhibidores irreversibles, los Inhibidores reversibles generalmente no
experimentan reacciones qumicas cuando se unen a la enzima y pueden ser
eliminados fcilmente por dilucin o por dilisis.




Tipos de Inhibidores reversibles:
* Inhibicin competitiva: el sustrato y el inhibidor no se pueden unir a la misma
enzima al mismo tiempo.
* Inhibicin mixta: el inhibidor se puede unir a la enzima al mismo tiempo que el
sustrato
* Inhibicin no competitiva: inhibicin mixta donde la unin del inhibidor con la
enzima reduce su actividad pero no afecta la unin con el sustrato








Inhibidores Irreversibles:

Normalmente modifican una enzima covalentemente con la que la inhibicin no
puede ser invertida. Los Inhibidores irreversibles suelen contener grupos
funcionales reactivos como mostazas nitrogenadas, aldehdos, haloalcanos o
alquenos. Estos grupos electroflicos reaccionan con las cadenas de aminocidos
para formar uniones covalentes. Los residuos modificados son aquellos que
contienen en sus cadenas laterales nuclefilos como por ejemplo un grupo
hidroxilo o un grupo sulfhidrilo. Esto incluye a los aminocidos serina, cistena,
treonina o tirosina.






27










EFECTOS DE LA TEMPERATURA EN LA ACTIVIDAD ENZIMTICA




Es bien conocido el hecho de que al aumentar la temperatura aumenta la energa
cintica de las molculas reaccionantes, y por consiguiente es mayor la
probabilidad de que ocurran colisiones efectivas para que la reaccin se lleve a
cabo. Como las reacciones enzimticas no son unas excepciones a esta regla, su
velocidad aumenta con la temperatura. Pero cuando la temperatura llega a cierto
valor, variable segn la enzima de que se trate, esta empieza a desnaturalizarse y
la velocidad de la reaccin comienza a disminuir. La resultante de estos dos
factores es la curva mostrada anteriormente. Se habla de una temperatura ptima
que es aquella en la que la velocidad de reaccin es mayor.











28

EFECTOS DEL PH EN LA ACTIVIDAD ENZIMTICA




Si tomamos en cuenta que las enzimas son protenas, y por tanto polielectrolitos,
no nos ser difcil entender que el pH tiene un efecto importante sobre la velocidad
de las reacciones enzimticas.
La carga neta de una protena vara con el pH. Por esta razn, a cierto pH las
cargas de los residuos de los aminocidos que participan en el sitio activo estn
en condiciones ptimas para la actividad cataltica sobre el sustrato
correspondiente. Por lo tanto, a ese pH la velocidad de la reaccin ser mxima
(slo si suponemos que la nica variable a estudiar es el pH). A ese pH le
llamamos pH ptimo de la enzima. Por supuesto, en valores de pH demasiado
cidos o alcalinos, no solamente podr estar modificado el sitio activo sino que
podr llevarse a cabo la desnaturalizacin de la protena (estructura terciaria
alterada) y no ocurrir actividad enzimtica.


















29

DIAGRAMA DE FLUJO PARA IMPLEMENTAR UN PROCESO DE
BIOCATLISIS A NIVEL INDUSTRIAL



ALGUNOS REACTORES






30

FUNCIN BIOLGICA DE LAS ENZIMAS

Las enzimas presentan una amplia variedad de funciones en los organismos vivos. Son
indispensables en la transduccin de seales y en procesos de regulacin, normalmente
por medio de quinasas y fosfatasas.
69
Tambin son capaces de producir movimiento,
como es el caso de la miosina al hidrolizar ATP para generar la contraccin muscular o el
movimiento de vesculas por medio del citoesqueleto.
70
Otro tipo de ATPasas en
la membrana celular son las bombas de iones implicadas en procesos de transporte
activo. Adems, las enzimas tambin estn implicadas en funciones mucho ms exticas,
como la produccin de luz por la luciferasa en las lucirnagas.
71
Los virus tambin pueden
contener enzimas implicadas en la infeccin celular, como es el caso de la integrasa del
virus HIV y de la transcriptasa inversa, o en la liberacin viral, como la neuraminidasa del
virus de la gripe.
Una importante funcin de las enzimas es la que presentan en el sistema digestivo de los
animales. Enzimas tales como las amilasas y las proteasas son capaces de degradar
molculas grandes (almidn o protenas, respectivamente) en otras ms pequeas, de
forma que puedan ser absorbidas en el intestino. Las molculas de almidn, por ejemplo,
que son demasiado grandes para ser absorbidas, son degradadas por diversas enzimas a
molculas ms pequeas como la maltosa, y finalmente a glucosa, la cual s puede ser
absorbida a travs de las clulas del intestino. Diferentes enzimas digestivas son capaces
de degradar diferentes tipos de alimentos. Los rumiantes que tienen una dieta herbvora,
poseen en sus intestinos una serie de microorganismos que producen otra enzima,
la celulasa, capaz de degradar la celulosa presente en la pared celular de las plantas.

Varias enzimas pueden actuar conjuntamente en un orden especfico, creando as
una ruta metablica. En una ruta metablica, una enzima toma como sustrato el producto
de otra enzima. Tras la reaccin cataltica, el producto se transfiere a la siguiente enzima
y as sucesivamente. En ocasiones, existe ms de una enzima capaz de catalizar la
misma reaccin en paralelo, lo que permite establecer una regulacin ms sofisticada: por
ejemplo, en el caso en que una enzima presenta una actividad constitutiva pero con una
baja constante de actividad y una segunda enzima cuya actividad es inducible, pero
presenta una mayor constante de actividad.
Las enzimas determinan los pasos que siguen estas rutas metablicas. Sin las enzimas,
el metabolismo no se producira a travs de los mismos pasos, ni sera lo suficientemente
rpido para atender las necesidades de la clula. De hecho, una ruta metablica como
la gluclisis no podra existir sin enzimas. La glucosa, por ejemplo, puede reaccionar
directamente con el ATP de forma que quede fosforilada en uno o ms carbonos. En
ausencia de enzimas, esta reaccin se producira tan lentamente que sera insignificante.
Sin embargo, si se aade la enzima hexoquinasa que fosforila el carbono 6 de la glucosa
y se mide la concentracin de la mezcla en un breve espacio de tiempo se podr
encontrar nicamente glucosa-6-fosfato a niveles significativos. Por tanto, las redes de

31

rutas metablicas dentro de la clula dependen del conjunto de enzimas funcionales que
presenten.

APLICACIONES INDUSTRIALES

Las enzimas son utilizadas en la industria qumica, y en otros tipos de industria, en donde
se requiere el uso de catalizadores muy especializados. Sin embargo, las enzimas estn
limitadas tanto por el nmero de reacciones que pueden llevar a cabo como por su
ausencia de estabilidad en solventes orgnicos y altas temperaturas.
Diversas aplicaciones industriales de las enzimas:
LA AMILASA DE HONGOS Y PLANTAS: cataliza la degradacin del almidn en
azucares sencillos uso produccin de azucares desde el almidn, como por ej. en
la produccin de jarabe de maz. En la coccin al horno, cataliza la rotura del
almidn de la harina en azcar. La fermentacin del azcar llevada a cabo por
levaduras produce el dixido de carbono que hace subir la masa.
PROTEASAS: Los fabricantes de galletas las utilizan para reducir la cantidad de
protenas en la harina.
TRIPSINA: Para pre-digerir el alimento digerido a bebs.
CELULASAS, PECTINASAS: Aclarador de zumos de frutos.
RENINA, derivado del estmago de animales rumiantes jvenes (terneros y
ovejas): Produccin de queso, usada para hidrolizar protenas.
ENZIMAS PRODUCIDAS POR BACTERIAS: Actualmente, cada vez ms usadas
en la industria lctea.
LIPASAS: Se introduce durante el proceso de produccin del queso roquefort para
favorecer la maduracin.
LACTASAS: Rotura de la lactosa en glucosa y galactosa.
PAPAINA: Ablandamiento de la carne utilizada para cocinar.
AMILASAS, AMILOGLUCOSIDASAS Y GLUCOAMILASAS: Conversin del
almidn en glucosa y diversos azucares invertidos
GLUCOSAS ISOMERASA: Conversin de glucosa en fructosa durante la
produccin de jarabe de maz partiendo de sustancias ricas en almidn. Estos
jarabes potencian las propiedades edulcorantes y reducen las caloras mejor que
la sacarosa y manteniendo el mismo nivel de dulzor.
CELULASAS: Utilizadas para degradar la celulosas en azucares que pueden ser
fermentados.
LIGNINASAS: Utilizada para eliminar residuos de lignina.










32


CONCLUSIN


La catlisis enzimtica est presente hasta en el ms simple de los organismos y
en su actividad metablica diaria. Este proyecto ampli de gran manera la visin
que se tena acerca de este bioproceso y permiti reconocer que su
implementacin en la industria tiene mltiples ventajas.










































33




BIBLIOGRAFA.


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tecnolgicos. Huerta Leonor(Trad.); Dr. A.H. Scragg, Dr. S.L.Kelly, Prof. M.W.
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