A cien aos de Dunaliella de

investigacin: 1905-2005
BioMed Central
Aharon Oren (orena@shum.cc.huji.ac.il) [1]
[1] The Institute of Life Sciences, The Hebrew University of Jerusalem, 91904 Jerusalem,
Israel
[2] the Moshe Shilo Minerva Center for Marine Biogeochemistry, The Hebrew University of
Jerusalem, 91904 Jerusalem, Israel
Copyright 2005 Oren; licenciatario BioMed Central Ltd
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Resumen
Cien aos han pasado desde la descripcin del gnero Dunaliella, las algas verdes
unicelulares que se encarga de la mayor parte de la produccin primaria en los ambientes
hipersalinos y en todo el mundo. En el presente documento se ofrece un estudio histrico de la
investigacin sobre Dunaliella, de los comienzos en el
siglo
19 para el fondo de los estudios
taxonmicos Teodoresco, Hamburger, Lerche y otros desde el principio del
siglo
20 en
adelante. Trata de rastrear el origen de algunos de los ms importantes avances que han
contribuido a nuestra comprensin actual de esta alga que desempea un papel fundamental
en muchos ambientes hipersalinos.
1. Introduccin
Cien aos han pasado desde la descripcin del gnero Dunaliella, las algas verdes
unicelulares que se encarga de la mayor parte de la produccin primaria en los ambientes
hipersalinos y en todo el mundo. Primera avist en 1838 en saltern estanques de evaporacin
en el sur de Francia por Michel Felix Dunal [1], es el nombre de su descubridor por
Teodoresco en 1905 [2].
En el siglo que ha transcurrido desde su descripcin formal, Dunaliella se ha convertido en un
organismo modelo conveniente para el estudio de la sal en la adaptacin de algas. La
creacin del concepto de solutos orgnicos compatibles para proporcionar equilibrio osmtico
se basa en gran medida en el estudio de especies de Dunaliella. Adems, la acumulacin
masiva de -caroteno por algunas cepas bajo condiciones adecuadas de crecimiento ha dado
lugar a interesantes aplicaciones biotecnolgicas.
En el presente documento se ofrece un estudio histrico de la investigacin
sobre Dunaliella, de los comienzos en el
siglo
19 para el fondo de los estudios taxonmicos
Teodoresco, Hamburger, Lerche y otros desde el principio del
siglo
20 en adelante. Intenta
localizar - a menudo a travs de citas de los artculos originales - el origen de algunos de los
ms importantes avances que han contribuido a nuestra comprensin actual de esta alga que
desempea un papel fundamental en muchos ambientes hipersalinos.
Amplia informacin adicional sobre el alga se puede encontrar en un examen por Ginzburg [3],
en la revisin de varios autores editado por Avron y Ben-Amotz [4], y, en mi monografa sobre
microorganismos halfilos y su medio ambiente [5].
2. Informes sobre Dunaliella Antes de 1905
La primera descripcin de un unicelulares biflagellate alga de color rojo-viven en salmueras
concentradas (Fig. 1] se dio en 1838 por Dunal [1], en la que inform de la aparicin del
organismo que hoy conocemos como la Dunaliella salina en el salterns de Montpellier, en la
Costa mediterrnea de Francia. El la llam los organismos observ Haematococcus
salinus y Protococcus. El descubrimiento de estas algas se hizo en el marco de una
investigacin, invitados por la Academia de Ciencias, Pars, de la causa de la coloracin roja
de saltern salmueras. En el momento se dio por sentado que los parmetros qumicos y fsicos
son los responsables de la coloracin de estas salmueras. Dunal refut una anterior
afirmacin de que el color se debe al camarn de salmuera Artemia salina. La Academia
entonces nombr una comisin para reexaminar la cuestin, y esta comisin confirm el
hallazgo Dunal [6], vase tambin [7]. Otra de las ideas presentadas en ese perodo fue que
contribuye a la Artemia de color debido a la descomposicin y parcialmente digeridas rojo
flagelados ( "Monas Dunalii" Dunalii ") presentes en su intestino [8]. Hoy en da es evidente
que, a pesar de -caroteno-ricos Dunaliella salina son realmente presente en la saltern
estanques, la mayora de la coloracin de la cristalizador salmuera no es causada por las
algas rojas, pero por Archaea halfilas lugar [9, 10].
En el curso del
siglo
19, Dunal del flagelado algas rojas ha sido observado por otros bilogos y
la sal en los lagos hipersalinos y otros sitios en Crimea [11, 12], [13] Argelia, Lorena, Francia
[14] y Rumana [ 15]. Diferentes nombres se adjunta al organismo investigador por cada
[1, 8, 11, 13, 15 - 20] (Tabla 1].
3. La Descripcin de la Dunaliella Gnero
El ao 1905 vio la publicacin de dos documentos en profundidad la presentacin de las
descripciones de Dunaliella como un nuevo gnero, uno por Teodoresco de Bucharest CE [2],
y el segundo escrito por Clara Hamburger de Heidelberg [7]. Teodoresco precedida de la
publicacin que por Hamburger, que slo se enter de la Teodoresco documento al ultimar la
redaccin de su propio artculo [7]:
"Anfang Mrz un wollte ich die Ausarbeitung meiner Notizen gehen, als ich am 10. Mrz von
Herrn Prof Lauterborn eine von Teodoresco Arbeit mit dem Titel: "Organisation et
dveloppement du Dunaliella, nouveau gnero de Volvocaceae - Polyblepharide erhielt,
welche como Separatdruck aus dem botanischen Centralblatt soeben versendet
guerra. Dunaliella ist der von mir untersuchte Organismus, den Ich schon als Vertreter einer
neuen Gattung erkannt hatte. Unsere Resultaten stimmten en vielen Punkten berein, en
anderen mssen meiner Ansicht erst nach weitere Untersuchungen mueren entgltige
Entscheidung bringen. Da meine jedoch Studien, besonders bezglich des innern Baues
eingehender sind (Teodoresco sombrero nur lebendes Material untersucht) und ich auch
einige noch bestehende Lcken ausfllen kann; da ferner alle meine Resultate unbeinflut von
denen Teodoresco del erhalten wurden, por lo mchte ich sie dennoch verffentlichen. " ;
[A principios de marzo [1905] que quera empezar a trabajar en mis notas, cuando el 10 de
marzo recib de Prof Lauterborn por Teodoresco un documento titulado: "Organizacin y
desarrollo de Dunaliella, un nuevo gnero de la Volvocida -- Polyblepharidae ", que acaba de
enviarse como separata de la Botanisches Centralblatt. Dunaliella es el organismo que yo
haba estado investigando, y que yo ya haba reconocido como representante de un nuevo
gnero. Nuestros resultados corresponden, en muchos aspectos, mientras que en otros
aspectos soy de la opinin de que nuevas investigaciones tendr que decidir. Sin embargo,
debido a mis estudios, en particular con respecto a la estructura interna, estn ms a fondo
(Teodoresco ha estudiado slo viven material) y tambin se pueden llenar en algunos todava
las lagunas existentes en los conocimientos, y tambin porque mis resultados se obtuvieron
con independencia de los de Teodoresco, todava me gustara publicar.]
Teodoresco estudiado el material extrado de una rumano lago salado, mientras Hamburger
trabajado con muestras enviadas a la de su salterns de Cagliari, Cerdea. Ambos autores
presentaron dibujos detallados de los organismos (Fig. 2 y 3] y proporcion amplia informacin
sobre su morfologa, la estructura de la clula, la reproduccin, comportamiento y ecologa.
Una descripcin formal del gnero Dunaliella, nombrado en honor de Dunal que haba visto en
estos organismos salterns en Francia casi setenta aos antes, y de las dos primeras especies
del gnero, D. Salina y D. Viridis, fue publicado en 1906 [20].
Los documentos por Teodoresco Hamburger y fueron seguidos pronto por otros. Cabe hacer
especial mencin de los estudios en los primeros aos de Dunaliellainvestigacin son los
artculos por Cavara [21], que prorrog el estudio del organismo en el Cagliari, Cerdea
salterns, un estudio de las algas en el Mar de Salton, California [22], una serie
de ecolgicos Labb por documentos basados en observaciones hechas en el salterns de Le
Croisic, en la costa atlntica de Francia [23 -25], por los artculos Baas Becking y compaeros
de trabajo, que especmenes recolectados de todas partes del mundo [26 - 28], y los estudios
taxonmicos Por Hamel [29] y Lerche [30].
4. La taxonoma del gnero Dunaliella
Dunaliella es un gnero de algas unicellar pertenecientes a la familia Polyblepharidaceae. Sus
clulas carecen de una rgida pared celular, y se reproducen por divisin longitudinal de la
movilidad de clulas o por la fusin de dos clulas mviles para formar un zigoto.
Teodoresco [2, 20] se describen dos especies: D. Salina y D. Viridis. D. Salina tiene un poco
ms grandes clulas, y en condiciones adecuadas que sintetiza grandes cantidades de
pigmentos carotenoides, colorear las clulas rojas brillantes. D. Viridis nunca produce tales
clulas rojas. Es interesante observar que en los primeros aos se han producido amplios
debates si en realidad son dos especies presentes o si el rojo y el verde clulas representan
las diferentes formas de la misma especie. Por ejemplo, Blanchard [13] y [7] Hamburger
examinado el verde como clulas de las etapas juveniles de los rojos. Labb [23, 24] es de la
opinin de que las diferencias en la concentracin de sal del medio ambiente son
responsables de los diferentes colores de las celdas. Tras la transferencia de saltern salmuera
muestras a un menor salinidad, se vio una forma de Dunaliella adaptados al agua dulce y los
que carecen de pigmento rojo-marrn. Sus declaraciones de que:
"En ce qui concerne les facteurs de la transformacin, l'hypothse simpliste de Teodoresco ne
peut tre conserve et que ne s'agit pas l de deux espces distinctes (D. salina et D.
viridis). Il s'agit d'une alternancia de forman debido aux cambios de entorno ".
[En cuanto a los factores de la transformacin, la simplista hiptesis de Teodoresco no se
puede mantener, y que no tenemos aqu dos diferentes especies (D. salina y D. viridis). Nos
ocupamos de una alternancia de las formas debido a los cambios ambientales.]
Y:
"L'organisme qui colore en rouge les marais salants et qui nous pouvons conserver le nom
de Dunaliella salina n'est que ultime la fase de l'volution d'un flagell chlorophyllien voisin de
Volvocines, trs eurihyalin, qui en eau sursale Donne les forman stnohyalines no
rversibles aux forman chlorophylliennes, colores et par un hmatochrome ".
[El organismo que salterns los colores rojo y de la que podemos conservar el
nombre Dunaliella salina es nada ms que la ltima fase en el desarrollo de una muy
euryhyaline clorofila que contienen flagelado relacionadas con la Volvocinae, en la que
produce el agua hipersalinos stenohyaline foms que no pueden volver A la clorofila que
contienen formas, y son de color por un hematochrome.]
No han resistido la prueba del tiempo. Ahora sabemos que no todas las especies
de Dunaliella producir grandes cantidades de caroteno, y los que pueden, que lo hagan slo
bajo las condiciones adecuadas (la exposicin a altas intensidades de luz, limitacin de
nutrientes, etc, ver tambin la seccin 6). Lerche [30] por lo que vio en condiciones adecuadas
todos los clones se convirti en verde rojo, pero despus de varias semanas de que se
conviertan de oliva a amarillo-verde y despus de varios meses en que se vuelva de color rojo.
Especies adicionales se aadirn ms tarde al gnero, sobre todo gracias a los estudios a
fondo por Lerche [30] y [31] Butcher (Tabla 2]. Lerche investigado material recogido de la sal
en los lagos y Rumania en California, as como los mencionados Cagliari salterns. Ella lleg a
la conclusin de que la antigua especie D.Viridis es heterogneo y se divida en varias
especies nuevas. As, la especie D. Medios de comunicacin, D. Euchlora,
D. Minuta, y D. Parva fueron creados. Cabe sealar en este punto que no todas las especies
mencionadas tolerar la extremadamente alta concentracin de sal en el
que D. Salina y D. Viridis se encuentra en la naturaleza. Algunos son normalmente
organismos marinos que nunca se inform de que se produzca en los ambientes hipersalinos.
En profundidad tratamiento taxonmico del gnero se dio en Massyuk la monografa de 1973
[32]. Ella divide el gnero en dos subgenera, Dunaliella (23 especies) y Pascheria (5
especies), este ltimo compuesto slo de las especies de agua dulce. Algunas de las especies
reconocidas por Massyuk, que eventualmente puede ser encontrado formas polimrficas de
un solo taxn [33].
Una especie de gran inters es Dunaliella acidophila, aislado de las aguas y los suelos cidos
en la Repblica Checa y en Italia [34, 35]. Esta no es una verdadera halophile acidfilas sino
un alga que crece en forma ptima los valores de pH entre 0,5 y 2. En los ltimos aos se ha
convertido en un popular objeto de investigacin para el estudio de la adaptacin de la vida a
pH bajo ambientes [36]. Su taxonmica y filogentica afiliacin a la Dunaliella especies
halfilas tiene que yo sepa nunca se ha verificado.
Filogenia molecular, las tcnicas se han aplicado al estudio taxonmico de Dunaliella a partir
de 1999. Estos estudios han abarcado el 18S rRNA genes y el espaciador transcrito interno de
las regiones, y se han basado en la comparacin de secuencias de genes, as como en la
longitud de los fragmentos de restriccin polimorfismo de estudios. Poco se encontr
correlacin entre los datos moleculares y morfolgicos de los atributos fisiolgicos utilizados
en los mayores estudios para delimitar las especies dentro del gnero [37, 38]. Sobre la base
de secuencias de genes 18S rRNA, Olmos et al. [39] podra diferenciar entre D. Salina,
D.Parva y D. Bardawil como las especies que contienen uno, dos y tres intrones,
respectivamente, en el gen 18S rRNA. Los estudios moleculares han puesto de manifiesto que
muchos coleccin de cultivos de cepas son, probablemente, mal llamadas, y que algunas
especies pueden ser innecesarios que se han propuesto en el pasado.
5. Etapas de la vida sexual y la reproduccin de
la Dunaliella
Dunaliella salina y algunas de las otras especies se someten a los ciclos de vida complejos
que abarcan, adems de la divisin de mviles de clulas vegetativas, la posibilidad de la
reproduccin sexual. La fusin de dos gametos de igual tamao para formar un zigoto fue
documentado en muchos de los primeros estudios [7,20, 29]. Damos las gracias muy detallado
estudio de la reproduccin sexual en Dunaliella a Lerche [30], quien inform zigoto sexual en
la formacin de cinco de las seis especies estudiadas (D. salina, D. parva, D. peircei, D.
euchlora, y D. minuta ). Inform zigoto formacin en D. Salina a ser inducido por una
reduccin de la concentracin de sal del 10 al 3%. En el proceso en primer lugar, el toque
flagelos, y luego los gametos forman un puente citoplsmico y fusibles. El zigoto tiene una
gruesa capa exterior. Puede soportar la exposicin a agua dulce y tambin sobrevivir largos
perodos de sequedad. Estos cigotos germinar con la puesta en libertad de hasta 32 clulas
haploides hija a travs de un desgarro en la dotacin de clulas [30]. Es bien posible que el
quiste-como las estructuras observadas por Oren et al. [40] al final de una flor de color
verde Dunaliella clulas en el Mar Muerto en 1992 fueron en realidad esos cigotos. En este
caso, sin embargo, la formacin de estas redondeadas, de paredes gruesas clulas se llev a
cabo en un momento de un aumento de la salinidad del agua. Lerche [30] realiz una serie de
experimentos en los que elegante carotenoides rica en glbulos rojos verdes se cruzaron con
las clulas, lo que permite al investigador seguir la fusin de las dos clulas de los padres para
formar un zigoto. Algunos de sus dibujos para ilustrar el proceso se reproducen en la Fig. 4. La
posibilidad de formacin de quistes de reposo asexual por D. Salina fue indicado por
Hamburger [7], un hallazgo que fue impugnada por Lerche. Sin embargo, ms recientemente,
Loeblich [41] ha informado de la formacin de quistes en dichos medios de comunicacin de la
reduccin de la salinidad (para una discusin ver tambin [42]].
Dunaliella Algunas especies tambin pueden desarrollar una etapa vegetativa palmelloid
ronda consistente de clulas no mviles. Lerche [30] ha documentado este fenmeno en
el D. Salina culturas reducido en salinidades, y Brock [43] observaron tales palmelloid formas
de Dunaliella en esteras de algas bentnicas de Gran Salt Lake, Utah.
6. Pigmentos carotenoides de Dunaliella
El pigmento responsable de la brillante coloracin roja mostrada por D. Salina, a menudo
designado en la literatura de mayor edad como "hematochrome", que ya fue reconocido muy
pronto como un carotenoide. Como tal, fue identificado por Blanchard [13], y Teodoresco [20],
Lerche [30] y [44] Ruinen confirmar esta identificacin basado en la solubilidad de los
pigmentos en el alcohol y en el ter y en el color azul formado en la presencia De cido
sulfrico concentrado.
Antes de que el moderno microscopio electrnico mostr la -caroteno como entre los
grnulos de la clula thylakoids nico cloroplasto, considerables diferencias de opinin
existentes con respecto a la ubicacin intracelular de este pigmento carotenoide de color rojo.
As, tanto Teodoresco [2, 20] y [23] Labb declar que el pigmento rojo se distribuy en todo el
clulas de citoplasma. Relativa a una reclamacin por diferentes Hamburger [7], Teodoresco
[20] escribi:
"Je n'hsite pas croire que ce pigmento imprgne tout le corps des zoospores, except, bien
entendu, l'extrmit antrieure, l'endroit des de l'insercin flagellums".
[No vacilo en creer que el pigmento impregna todo el cuerpo de la zoospores, excepto, por
supuesto, la extrema parte anterior, en el lugar donde se insertan los flagelos.]
Asimismo, Hamel [29] afirm que a altas concentraciones de sal, D. Salina formas
"hematochrome" que penetra no slo la "cromforo" (= cloroplasto), pero todo el citoplasma
tambin. Por otra parte, considera el Hamburger pigmento rojo que se encuentra en pequeas
gotitas (que es el caso, por ejemplo, ver [45, 46]], pero estaba equivocado acerca de la
localizacin de los pigmentos:
"Er tritt en Forma kleiner Trpfchen auf, und ist, wie mir sicher scheint, nur der ueren
Alveolarschicht des Plasmas eingelagert, whrend das Chromatophor Trger des grnen
Farbstoffes ist. Die Bemerkung Teodoresco "hmatochrome imprgnant no seulement le
chromatophore, mais encore tout le corps des individus gs", stimmt mit meinen
Beobachtungen nicht berein. "
[Se manifiesta en forma de pequeas gotas, y es, como parece seguro de que a m, slo
depositados en el exterior alveolar de la capa de plasma, mientras que el chromatophore es
portador de la pigmento verde. Teodoresco por la observacin de que "el hematochrome que
impregna no slo la chromatophore, sino tambin a todo el cuerpo de los individuos adultos"
no se corresponde con mis observaciones.]
Baas Becking [27] correctamente ubicado el pigmento rojo-anaranjado en el cloroplasto, y
Leche [30] se dio cuenta de que el caroteno mscaras de la clorofila, de forma que el
cloroplasto puede asumir todos los tonos de color rojo-naranja a amarillo-verde, y verde oliva:
"Der ist memorizacin Farbstoff en Forma liger Trpfchen zwischen den Wabe des
Chloroplasten eingelagert und nicht wie Hamburger (1905) annimmt, in der ueren
Alveolarschicht des Protoplasmas".
[El pigmento rojo se encuentra en forma de gotas oleosas entre la estructura de nido de abeja
de la cloroplasto y no, como Hamburger (1905) asume, en el exterior de la capa citoplsmica
protoplasto.]
-Caroteno, los principales carotenoides acumulados por D. Salina y D. Bardawil, es un
valioso qumicos, de alta demanda como un agente colorante natural de alimentos, como pro-
vitamina A (retinol), como aditivo a los cosmticos, como la salud y la alimentacin [47].
Algunas cepas de Dunaliella puede acumular grandes cantidades de este carotenoide. De
este modo, tanto como el 13,8% de la materia seca total de la materia orgnica en
el D. Salina comunidad en el Lago Rosado, Victoria, Australia, se estim en -caroteno [48].
Tambin en la cultura algunas cepas pueden contener hasta un 10% y ms de -caroteno en
su peso seco, incluyendo un gran porcentaje de la 9 - ismero cis [46]. Por lo tanto, el
potencial biotecnolgico de Dunaliella como fuente de -caroteno se investig ya
relativamente temprana. La primera planta piloto para el cultivo de Dunaliella para la
produccin de -caroteno se estableci en la URSS en 1966 [49, 50]. El cultivo comercial
de Dunaliella para la produccin de -caroteno en todo el mundo es ahora una de las historias
de xito de la biotecnologa halophile [51 - 53]. Las diferentes tecnologas se utilizan, de baja
tecnologa en el cultivo de extensas lagunas de cultivo intensivo en altas densidades de
clulas bajo condiciones cuidadosamente controladas [54].
Uno de los mtodos utilizados en esas operaciones biotecnolgicas para inducir la
acumulacin masiva de carotenoides es la reduccin de la tasa de crecimiento de privacin de
nutrientes. Que un alto contenido de carotenoides de las clulas puede ser causada por la
limitacin de nutrientes, as como por la alta intensidad de la luz ya estaba informado por
Lerche [30]:
"Da Rotfrbung besonders die alten Kulturen en auftrat, die Annahme desfase nahe, sie en
Zusammenhang mit den Ernhrungsbedingungen und speziell mit dem Fehlen eines oder
mehrerer Stoffe zu bringen. Da Fsforo Stickstoff und bei der pflanzlichen Ernhrung hufig
die Stoffe sind, die im mnima vorhanden sind, wurde das Augenmerk zunchst auf diese
Stoffe gerichtet. "
[A medida que la coloracin roja se produjeron sobre todo en las culturas antiguas, es
razonable suponer una correlacin con las condiciones nutricionales y, en particular, con la
ausencia de uno o ms compuestos. Como el fsforo y el nitrgeno en la nutricin de las
plantas son a menudo las sustancias presentes en la limitacin de las cantidades, dirigimos
nuestra atencin en primer lugar a estas sustancias.]
7. Dinmica de la Poblacin de Dunaliella en Salt Lagos
y Salterns
Slo unos pocos estudios se han dedicado a la evaluacin cuantitativa de las poblaciones
de Dunaliella en los lagos de sal y salterns, la dinmica de su aparicin y declive, y su
contribucin a la produccin primaria en sus hbitats. Stephens y Gillespie (1976) inform de
las mediciones de la produccin primaria en el brazo sur del Gran Salt Lake, Utah, realizada
en 1973 (en torno a la salinidad de 135 g / l). Post [56] inform de que en la temporada fra,
ronda quiste-como las clulas de D.Salina aumentado en nmero en el Gran Lago Salado, en
especial en la parte inferior del lago. En el Mar Muerto, verde Dunaliella clulas se han
notificado desde el decenio de 1940 [57]. Las primeras estimaciones cuantitativas de
la Dunaliella poblacin en el lago se hicieron en 1964, y se mostr muy altos nmeros: hasta 4
10
4
clulas por ml de agua de la superficie (poca de muestreo no especificado) [58].
Vigilancia sistemtica de la densidad de poblacin en las diferentes estaciones y
profundidades en el mar Muerto a partir de 1980 han dado una imagen clara de los factores
que determinan el desarrollo de la alga en este inusual medio ambiente. Las altas
concentraciones de iones de calcio y magnesio son conocidas por ser inhibidor
de Dunaliella desde Baas-Becking de estudios anteriores [27]. Dunaliella flores, por lo tanto,
se producen en el Mar Muerto slo cuando excepcionalmente hmedos inviernos durante la
parte superior de las capas de agua del lago convertido suficientemente diluida para que
Crecimiento, y cuando el fosfato, el nutriente limitante, est disponible. Este tipo de
acontecimientos se han observado en 1980 y de nuevo en 1992 [40, 59].
Sorprendentemente, se sabe muy poco sobre los factores que determinan la dinmica
de Dunaliella en saltern estanque sistemas. Por lo tanto, es interesante observar que algunos
de los ms estudios en profundidad sobre este tema se realizaron a principios de los aos
1920 en el salterns de Le Croisic, en la costa atlntica de Francia, donde la sal es una
operacin de temporada. Labb [23, 25] mostraron cambios en la estructura de la comunidad
de algas y estas relacionadas a los cambios en la salinidad ( "presin osmtica; viscosidad")
de la salmuera, pero reconoci tambin la funcin de la intensidad de la luz y la temperatura
del agua, as como Como la del pH. En base a la errnea suposicin de que los ms
pequeos y los ms grandes verde Dunaliella clulas rojas son las etapas en el desarrollo de
un nico organismo (ver seccin 4 supra), describi un ciclo anual en el que en el inicio del
invierno, pocos mviles clulas rojas ( " ; rythrospores ") y pequeas clulas mviles verde ("
chlorospores ") estn presentes [24]. Dilucin de las aguas por las lluvias invernales provoca
la formacin de quistes de color rojo ( "rythrocystes"), pero el "chlorospores" se desarrollan
rpidamente, conjugado, y el formulario de "chlorocystes". Cuando aumenta la concentracin
de sal en la temporada de verano, de color rojo mviles clulas empiezan a aparecer, siempre
acompaado por verdes clulas:
"Peu peu, les rythrospores provenant de chlorospores prolifrent, et leur dominio est
fonction de la concentracin salina".
[Poco a poco el "erythrospores" que se forman a partir de "chlorospores" proliferan, y su
dominio es una funcin de la concentracin de sal.]
8. La sal y el cultivo de Dunaliella Tolerancia
Los primeros experimentos controlados para evaluar el efecto de la salinidad sobre la tasa de
crecimiento de Dunaliella diferentes aislamientos se registraron en la dcada de 1930. - Baas
Becking [27] observ que D. Viridis prospera igualmente bien en toda la gama de 1-4 M (6-
23%) y ms de NaCl intervalo de pH 6-9. Encontr los iones de calcio y magnesio en altas
concentraciones a ser inhibitoria. Ms detallada y bien documentada de los experimentos,
usando una variedad de especies y de los aislamientos, se inform por Lerche [30]. Ella
encontr a la mayora de cepas crecen ptimamente entre el 2 y el 8% de sal, con un
crecimiento muy lento, en su caso, a las concentraciones de sal por encima del 15% (Fig. 5].
Entre 0,47 y 1,22 por da divisiones se registraron en condiciones ptimas.
Las necesidades nutricionales de las diferentes cepas de Dunaliella fueron investigados en
profundidad por Gibor [60], Johnson et al. [61], Van Auken y McNulty [62], y otros, que
permitan la optimizacin de los medios de comunicacin a crecer el alga. Concentraciones de
sal ptima para el cultivo vara segn la cepa, con valores reportados por D. Viridis alrededor
del 6%, por D. Salina en torno a un 12% [42], mientras que Gran Lago Salado diferentes
tenan la optima de 10-15% o incluso el 19% de sal [43, 62]. Una tendencia general,
observada en todos estos estudios, es que la salinidad de los ambientes de las cepas que se
han aislado fue siempre muy superior a la concentracin de sal que se encuentran en ptimas
experimentos de laboratorio. Esto bien puede reflejar el hecho de que el crecimiento de un
organismo se produce en un determinado entorno no necesariamente significa que ese medio
es ptima para su desarrollo, sino ms bien de que el organismo lleva a cabo all mejor que
todos sus competidores.
9. Osmtica comportamiento de las clulas de Dunaliella
Dunaliella clulas carecen de una rgida pared celular, y las clulas se adjunta nicamente por
una fina membrana plasmtica elstica. Como resultado, las clulas de morfologa est
fuertemente influenciada por los cambios osmticos. Esto fue documentado ya en los primeros
das. Las descripciones por Teodoresco [2] son muy exacto aqu, y ellos merecen ser citados
ntegra:
"Ces zoospores sont dpourvues de membrana cellulosique; celle-ci est reprsente par une
enveloppe qui possde une certaine souplesse et une certaine extensibilit, qui permite au
cuerpo de prendre les forman assez varies, suivant la concentracin de l'eau. Ce un punto de
vue, le gnero Dunaliella diffre totalement de toutes les espces de Chlamydomonas ... "
[Zoospores Estos carecen de una pared celular de celulosa, en lugar de clulas hay una
dotacin que posee una cierta flexibilidad y una cierta elasticidad, que permite que el cuerpo a
tomar formas muy diferentes, de acuerdo con la [sal] concentracin de la agua. En este
sentido, el gnero Dunaliella difiere por completo de todas las especies
de Chlamydomonas ...]
Y:
"As, si nous plaons une goutte d'eau sale, contenant des zoospores, sur le porte-objet, en
constate, au microscopio, qu'elles se prsentent sous la forme mentione plus haut. Mais si
nous laissons la goutte s'vaporer un peu, en observar que le corps comenzar s'allonger et
se difformer ... ; Si nous ajoutons alors la prparation une goutte d'eau douce, les zoospores
s'arrondissent brusquement .... Cette exprience, que j'ai rpte un trs grand nombre de
fois, m'a toujours donn les mmes rsultats ".
[As, cuando ponemos una gota de agua salada que contiene zoospores [= movilidad de
clulas vegetativas] sobre un portaobjetos de microscopio, se detecta en el microscopio de
que estos se presenten en la forma antes descrita. Sin embargo, cuando dejamos que la cada
evaporar un poco, se observa que el cuerpo comienza a alargar y perder su forma. ... ;
Cuando luego aadir a la preparacin una gota de agua dulce, de repente la zoospores ronda.
.... Este experimento, que he repetido un gran nmero de veces, me ha dado siempre los
mismos resultados.]
Los fenmenos antes descritos se ilustran en la Fig. 2, dibujos 9-29 y 30-31, respectivamente.
Teodoresco adems escribe:
"Si une goutte d'eau sale sobre ajoute une plus grande goutte d'eau douce, ce qui amne
une abaissement brusco de la concentracin, les zoospores no seulement s'arrondissent, mais
encore cessent leurs movimientos; volumen le corps du augmente Et devient parfois deux fois
plus grand et la fin la zoospore clate. La causa de cet clatement n'est pas difficile
comprendre: c'est l'mchanique accin de la pression osmotique trop leve par rapport la
densit diminue du milieu ambiant. "
[Si a una gota de agua salada se aade una gran gota de agua dulce, lo que lleva a una
repentina disminucin de la concentracin, no slo la zoospores ronda, pero adems cesar
sus movimientos; el volumen del cuerpo aumenta y, en ocasiones, se convierte en dos veces
Tan grande, y, finalmente, el zoospore rfagas. La causa de esta explosin no es difcil de
entender: es la accin mecnica de la presin osmtica demasiado alta en comparacin con la
disminucin de la densidad del medio ambiente.]
Lerche [30] Asimismo, observ la osmtica cambios que se producen cuando la concentracin
de sal es cambiado. Seal que cuando una gota de D. Salinaclulas en suspensin en un
20% de sal se inunda con agua destilada, una gran fraccin de las clulas rfaga, pero
algunas clulas sobrevivieron al tratamiento.
10. Intracelular de la sal y la concentracin de
soluto Dunaliella
Marr y Servetta ([63], como se cita en [61]] describe las mediciones del punto de congelacin
del fluido frente al citoplasma de D. Salina para obtener informacin sobre la concentracin
intracelular de la sal. Los resultados indican una aparente "sal" de concentracin que superen
los 3,9 M de sal en las clulas que se cultivaron. En el momento en que se postula que NaCl,
se ha recogido a travs de la supuestamente muy permeable membrana celular durante la sal
upshock, seguidas de un flujo de agua para igualar intracelular y extracelular presin osmtica
[63 - 65].
Que la concentracin de sal Dunaliella dentro de las clulas que no pueden ser de alta, fue
demostrado fehacientemente por la enzymological estudios por Johnson et al. (1968), que
demostraron que algunas de las principales enzimas del metabolismo de las algas como la
pentosa fosfato isomerasa, ribulose bisphosphate carboxylase, glucosa-6-fosfato
deshidrogenasa y phosphohexose isomerasa, se inhibi por NaCl. Ahora sabemos que las
concentraciones intracelulares de Dunaliella inicos son muy bajos en verdad. El uso de iones
de litio como marcador para el espacio extracelular de agua para estimar el volumen
intracelular, la concentracin intracelular de Na
+,
tanto en las clulas cultivadas en 0,5 M y en
4 M NaCl, se encontr no superior a los 100 mM [66]. Los bajos niveles intracelulares de
Na
+
se logran por la actividad de la Na
+
/ H
+
antiporter en la membrana citoplasmtica [67],
as como por el transporte directo de electrones-junto Na
+
extrusin [68].
El enigma de la aparente incompatibilidad entre la baja concentracin inica intracelular y la
necesidad de equilibrio osmtico de las clulas de los contenidos con el medio externo se
resolvi con el descubrimiento de que las clulas se acumulan fotosintticamente producido
glicerol como osmtica, "compatible" soluto. Es interesante observar que las primeras
experiencias en que los efectos de glicerol en Dunaliella se pusieron a prueba ya haba sido
realizada por Teodoresco [20], casi cien aos atrs. Se examin el efecto de glicerol y otros
compuestos no inicos que normalmente causa plasmolysis. Seal que D. salina cells
temporarily lose their motility when suspended in 50% glycerol, but that motility is rapidly
restored when the glycerol concentration is then slightly lowered in a humid environment. With
75% glycerol results were largely similar, except that a large fraction of cells died, and in 100%
glycerol only few cells survived.
The first indications that glycerol is accumulated by Dunaliella to provide osmotic balance can
be found in a short paper published in 1964 by Craigie and McLachlan [ 69 ]. They
incubated D. tertiolecta with
14
CO
2
, then extracted the cells with ethanol, separated the
neutral fraction containing soluble carbohydrates and related compounds using ion exchange
procedures, and characterized the compounds by two-dimensional paper chromatography and
autoradiography. When the salinity of the medium was increased 100-fold from 0.025 to 2.5 M,
94-fold more radioactivity was found in the neutral fraction. Glycerol amounted to 56, 76, and
81% of the radioactivity of the neutral fraction extracted from cells incubated in 0.025, 0.5, and
2.5 M NaCl, respectively, most of the remainder probably consisting of soluble
polysaccharides. In a subsequent study, Wegmann [ 70 ] confirmed that the proportion of the
radiolabel from
14
C-bicarbonate that ends up as glycerol increases with increasing salt
concentration up to 2.8 M. He postulated that "The glycerol formation is considered to be
a protective mechanism for the survival ofDunaliella in its natural habitat".
The role that glycerol plays in the salt adaptation of Dunaliella was firmly established by the
studies of Ben-Amotz and Avron [ 71 ] and Borowitzka and Brown [ 72 ]. The concept of
"compatible solutes", a term coined by Duncan Brown to indicate solutes that not
only contribute to the osmotic status of the cell but also maintain enzyme activity under
conditions of low water activity, was largely based on the study of the function of glycerol
in Dunaliella .
Intracellular glycerol concentrations in Dunaliella can be very high indeed: cells grown in 4 M
NaCl were reported to contain approximately 7.8 M glycerol inside, equivalent to a solution of
718 gl
-1
glycerol in water [ 73 ]. Maintenance of such a high concentration requires special
properties of the cell membrane in view of the fact that most biological membranes are
relatively permeable to glycerol. It has been established that Dunaliella possesses a
membrane with an unusually low permeability for glycerol [ 74 , 75 ], and this enables the cells
to keep the glycerol inside the cell. The causes of the low glycerol permeability of
the Dunaliellamembrane are still not fully understood.
Attempts have been made to exploit the high concentrations of glycerol accumulated
by Dunaliella as the basis for the commercial production of this compound. Although
technically the production of glycerol from Dunaliella was shown to be possible [ 51 , 52 , 76 ]
economic feasibility is low, and to my knowledge no biotechnological operation presently exists
that exploits the alga for glycerol production.
11. Proteomics Approaches to the Understanding of Salt
Tolerance in Dunaliella
A versatile organism such as Dunaliella that can adapt to a wide variety of salt concentrations
can be used as a convenient model to study the formation of specific proteins as a function of
changes in medium salinity. Such proteomic approaches have led to some interesting
observations in recent years.
A number of such studies were directed to the detection of changes in the protein content of
the cytoplasmic membrane, whose outer side is exposed to the medium salinity, when the cells
are shifted from low to high salinity. Two membrane proteins were strongly induced by salt
upshock, one with an apparent molecular mass of 60 kDa [ 77 ] and one of 150 kDa [ 78 ].
These proteins have been purified and characterized. The 60 kDa protein is a carbonic
anhydrase that apparently helps the cell to take up carbon dioxide in concentrated brines in
which the solubility of gases is decreased [ 79 ]. The 150 kDa protein is an unusual transferrin-
like protein, involved in the transport of iron into the cell [ 80 ].
With a study published in 2004 by Liska et al. [ 81 ], Dunaliella research has entered the era of
modern proteomics. Comparison of protein patterns of low-and of high-salt-grown cells were
compared on two-dimensional gels led to the identification of 76 salt-induced proteins. Among
the proteins up-regulated following salinity stress were key enzymes in the Calvin cycle,
enzymes involved in starch mobilization and in redox energy production, regulatory factors in
protein biosynthesis and degradation, and a homolog of bacterial Na
+
-redox transporters. The
results indicate that Dunaliella responds to transfer to a high salinity by enhancement of
photosynthetic CO
2
assimilation and by diversion of carbon and energy resources for
synthesis of glycerol. This beautiful study is a worthy conclusion of the first century
of Dunaliella research, and provides us with a preview of the kind of information that may be
expected to be obtained in the coming years, using approaches of genomics, proteomics and
systems biology.