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DETERMINACIN DE VITAMINA C,

POR EL MTODO
ESPECTROFOTOMTRICO
"Ao De La Promocin De La Industria Responsable y Del Compromiso Climtico

UNIVERSIDAD NACIONAL
HERMILIO
VALDIZN

FACULTAD DE
CIENCIAS AGRARIAS

ESCUELA ACADMICO
PROFESIONAL:
INGENIERA AGROINDUSTRIAL

Ingeniera que Produce, Transforma y Conserva
al Servicio de la Comunidad










CURSO: Anlisis por Instrumentacin

DOCENTE: Ing. ASTETE TEVES, Ronald


AO: 3 CICLO: V


ALUMNOS:
CECILIO GAVINO, Lidia.
FLOREZ ARIAS, Lidiana
GMEZ ANTONIO, Rocio del Pilar
TOMS VICENTE, Jose



HUNUCO PER
2014

I. INTRODUCCIN
El cido ascrbico, comnmente llamado vitamina c, presenta un aspecto de cristales
blancos, con sabor acido, sensible a la luz y a ciertos metales pesados, es un tipo de
vitamina hidrosoluble y esencial, es sintetizado naturalmente por las plantas superiores y
algunos animales, con acepcin del seres humanos, y tambin puede ser sintetizado
qumicamente a partir de glucosa, mediante una serie de reacciones catalizadas por
enzimas, es considerado uno de los ms potentes agentes antioxidantes del organismo; en
humanos se encuentra concentrado en cierto rganos como: ojos, hgado, vaso, cerebro,
glndulas suprarrenales y tiroideas.
El cido ascrbico tiene caractersticas reductoras por sus dos grupos donadores de
protones, es termohbil y se en el aire con gran facilidad, interviene en muchas reacciones
metablicas importantes, como por ejemplo, acta como cofactor en las reacciones de
hidroxilacin en la sntesis del colgeno. Este es esencial para la formacin normal de
huesos y dientes y para reforzar paredes capilares. Inhibe inflamacin de las encas,
anemia, deficiencia en la cicatrizacin de heridas y susceptibilidad a las infecciones,
tambin es importante en el metabolismo de carbohidratos y en controlar procesos
infecciosos, la mayora de las reacciones metablicas el cido ascrbico se deben u fuerte
potencial reductor, su actividad antioxidante deriva del desplazamiento de cido l-
ascrbico a su forma oxidada L-dehidroascorbico, esto tambin habilita la molcula para
combatir radicales oxidativos y los radicales acuosos
Una deficiencia de esta vitamina puede ocasionar una enfermedad llamada escorbuto, que
es un sndrome que refleja en piel, mucosas y anexos la inestabilidad y debilidad del
colgeno no hidrolizado.
Para la determinacin de esta vitamina se utiliza un mtodo conocido como el mtodo de
Mohr, el cual consiste en un proceso de doble precipitacin en donde se presenta la
formacin de un primer slido, que es la especie a cuantificar, y alcanzado el punto
estequiomtrico se forma otro precipitado que corresponde a la especie que seala el
punto final de la valoracin, este en un mtodo espectrofotomtrico, es decir que se basa en
la absorcin de radiacin ultravioleta y visible por el analito, como consecuencia de lo cual
se origina un estado activado que posteriormente elimina su exceso de energa en forma de
calor.

II. OBJETIVOS:
Determinacin cuantitativa cido Ascrbico, por el mtodo de espectrofotomtrico.
Aprender a manejar correctamente el espectrofotmetro.



III. REVISIN BIBLIOGRFICA:
3.1. NARANJA. Generalidades
La naranja es un hesperidio, que es una variante de la baya. Consta de varios
carpelos o gajos fciles de separar, cada uno de los cuales contiene una pulpa, de
color variable entre el anaranjado y el rojo, jugosa y suculenta, varias semillas y
numerosas clulas jugosas cubiertas por un exocarpo coriceo o cscara de color
anaranjado cuyo interior es blanco, que contiene numerosas glndulas llenas de
aceites esenciales. Entre las variedades ms comunes se encuentran las naranjas
amarga y dulce y el mandarino. La naranja forma parte del gnero Citrus, de la
familia de las Rutceas (Rutaceae). El naranjo dulce es Citrus sinensis; el amargo,
Citrus aurantium, y el mandarino, Citrus reticulata (Kimball, 1991).
3.1.1. COMPOSICIN NUTRICIONAL
Las caractersticas nutricionales de la naranja ayudan al fortalecimiento de las
defensas del organismo, debido a su contenido de vitaminas C, B1, B2, B3, B5,
B6 y E; sales minerales, cidos orgnicos, pectina, componentes que fortalecen a
la circulacin y propiedades anticancergenas en el estmago (Espinal, 2005).
Caloras. Contiene un alto nivel de caloras, la mitad de las caloras son
provenientes de la sacarosa y oligosacridos (Kimball, 1991).
Protenas. El contenido de nitrgeno se ha reportado que puede ser de
60 a 120 mg por 100 ml de jugo de naranja (Ting, 1967). En general los
productos ctricos se consideran bajo en protenas.
Carbohidratos. Carbohidratos complejos o polisacridos como la
pectina, hemicelulosa, y celulosa ocurre en significantes proporciones
en los productos ctricos, en comparacin con los carbohidratos
mayoritarios como son la sucrosa, los oligosacridos (Kimball, 1991).
Sodio y Potasio. Los productos ctricos contienen cantidades
insignificantes de sodio. Sin embargo niveles altos de potasio son
comunes, van de 200 mg a 2000 mg por porcin, y se pueden encontrar
estos niveles en productos como jugos comercializados (Harding y
Lewis, 1940).
Vitamina C. Contiene niveles altos de cido ascrbico, es muy estable
en productos como jugos y se degrada con el almacenamiento. Los
grandes cambios, especialmente en color y sabor, que tienen lugar
durante el almacenamiento de las frutas y hortalizas corren paralelos
con la disminucin progresiva del cido ascrbico que poseen
(Braverman, 1967).
Por ejemplo, el oscurecimiento de los jugos ctricos durante su
almacenamiento, se ha visto que se produce despus de que todo el
cido ascrbico ha sido irreversiblemente oxidado. Para prevenir la
oxidacin de la vitamina C al manipular los alimentos, deben observarse
algunas precauciones. Debe inactivarse la enzima ascorbinasa, lo que es
muy importante en la deshidratacin de frutas y hortalizas que suele
realizar escaldando. Tambin deber evitarse el oxgeno tanto como sea
posible, y se debern eliminar vestigios de cobre en el equipo de
elaboracin del producto final (Braverman, 1967).

3.2. VITAMINA C O CIDO ASCRBICO
El cido ascrbico tiene una estructura de
lactosa. La acidez no se debe a un grupo
carboxlico, sino a la posibilidad de que se inice
el hidroxilo situado sobre el carbono 3,
formando un anin que queda estabilizado por
resonancia.
Se sabe que es un compuesto polar con gran
masa molecular 140 000, que le impide atravesar
la membrana celular por simple difusin (Duran, M.H. 2000).
Las propiedades del cido ascrbico o vitamina C, que junto a las vitaminas B
pertenecen al grupo de hidrosolubles, son variadas y complejas, pues los
investigadores informan, desde su descubrimiento en 1936, casi peridicamente
sobre nuevas aplicaciones del cido ascrbico, un alimento funcional, porque ms
all de nutrir tienen efectos benficos para la salud, tales como, su utilidad en la
prevencin de la formacin de cataratas y en el riesgo de desarrollar degeneracin
macular en personas mayores o ancianas, al servir de coadyuvante en la fecundidad
masculina, al apuntalar al sistema inmune contra los efectos del resfriado, asma,
tabaco y contaminantes areos, tambin suprime la aparicin de clulas leucmicas
y el crecimiento del tumor rectal y cncer de crvix; en los diabticos potencia la
accin de la insulina y en el metabolismo de los carbohidratos y acelera la curacin
de los heridas, ayuda en la formacin de colgenos, puede reducir edemas, por su
efecto de estimulacin de la diuresis, es un potente neutralizador de venenos
(mercurio, arsnico y toxinas bacterianos) y retarda el envejecimiento de la piel
(Duran, M.H. 2000).
3.2.1. DISTRIBUCIN DE VITAMINA C EN LOS ALIMENTOS
La vitamina C o cido ascrbico se encuentran en las frutas ctricas en mayor
porcentaje y vegetales como las hortalizas y legumbres (Duran, M.H. 2000).
3.2.2. IMPORTANCIA DE VITAMINA C EN LA DIETA
La importancia de la vitamina C o cido ascrbico es tal que la mayora de los
mamferos son capaces de sintetizarla, pero algunas especies, entre ellas el
hombre, dependen de fuentes exgenas para obtenerla (Duran, M.H. 2000). El
humano adquiere, de forma natural, vitamina C de los alimentos, el organismo
no lo almacena, por tanto la biodisponibilidad serca del cido ascrbico este
ceida por la interaccin entre absorcin intestinal y excrecin renal.
Las propiedades del cido ascrbico son variados y complejos referidos la
mayora de ellas al papel como antioxidante de las especies de oxgeno
reactivos que se generan durante la respiracin mitocondrial, que afecta
irremediablemente al sistema inmunitario, circulatorio y respiratorio, visin,
metabolismo, piel y a todos los clulas del organismo. De la complejidad
funcional de la Vitamina C deriva la necesidad de mantener al da lo que se
conoce de este nutriente.
El hombre que no consuma vitamina C, pues el cuerpo no la puede producir,
sufre irremediablemente de escorbuto, patologa caracterizada por fragilidad
de los vasos sanguneos, dao del tejido conectivo, fatiga y finalmente muerte.
Por otro lado, la toxicidad del cido ascrbico no es comn porque el organismo
no lo almacena, sin embargo no es prudente consumir suplementos liposolubles
en cantidades superiores a 2000mg/da debido a que puede provocar malestar
estomacal, diarrea, ataques de gota, empeorar la litiasis renal por clculo de
oxalato, generar daos genticos (efecto oxidante en el cido
desoxirribonucleico ADN), e incluso provocar deterioro al corazn y otro
rganos, debido a que el cido ascrbico de los suplementos moviliza el hierro
almacenado en el organismo (frrico) y lo convierte en la forma daina
(ferroso), que daa los rganos (Duran, M.H. 2000).
3.3. MTODO DE CUANTIFICACIN DE CIDO ASCRBICO POR EL
MTODO DE ESPECTROFOTOMETRA

3.3.1. ESPECTROFOTOMETRA
La espectrofotometra es el conjunto de procedimientos que utilizan la luz para
medir concentraciones qumicas (Harris, 2001). Harris (2001) menciona que
la luz puede describirse en trminos de partculas y ondas; la longitud de onda
, es la distancia entre las crestas de dos ondas y la frecuencia , es el nmero
de oscilaciones completas de una onda en un segundo. La Siguiente ecuacin
describe la relacin entre frecuencia y longitud de onda:
c
La mayora de las sustancias en el visible tienen n>1, lo que significa que la luz
visible atraviesa la materia ms lento que en el vaco; por lo que es conveniente
concebir la luz como fotones (Harris, 2001), cada uno de stos transporta
energa, con lo que se obtiene una relacin como la siguiente:
E h
Cuando una molcula absorbe un fotn, su energa aumenta y pasa a un estado
excitado; sin embargo cuando emite un fotn, disminuye su energa
mantenindose en su estado fundamental (Harris, 2001).
Las mediciones espectrofotomtricas son realizadas por medio de
espectrofotmetros, que tiene una serie de componentes para identificar la
absorbancia de la muestra a analizar.
Figura 1.2. Diagrama esquemtico de una medida espectrofotomtrica
(Harris, 2001).

La absorbancia es importante porque es directamente proporcional a la
concentracin de la especie que absorbe la luz de la muestra (Harris, 2001).
3.3.2. MTODO
Martisseck et al. (1998), mesiona que el mtodo se fundamenta que el acido L-
ascorbico (AA) se extrae del correspondiente material a investigar con una
disolucin de acido axalico, transformndose a continuacin con 2,6-
diclorofenolindofenol (di) en acido dehidroascorbico (ADA).
Por otro lado Briceo (2008) menciona que la determinacio del acido ascrbico
en frutas y vegetales puede realizarse por diversos mtodos, siendo uno de ellos
el espectrofotomtrico propuesto por el departamento de Agricultura en
Canada. Se en la reduccin del colorante 2-6 Diclorofenolindofenol por efecto de
la solucin del acido ascrbico es diretamente proporcional a la capacidad de
un extracto de la muestra para reducir una solucin estndar de colorante; esta
capacidad es determinada espectofotometricamente.
Asimismo Duran (2002) que la longuitud de onda de traajo es 518 nm
recomendado por AOAC (1997); citado por Ramos (2010).
la determinacin del cido ascrbico el mtodo espectrofotomtrico de Mohr,
funciona de la siguiente manera: el cido ascrbico presenta un mximo de
absorcin a 260 nm, en este se utiliza como reactivo principal la 2 nitroanilina,
y cuyo mximo de absorcin se lee a 540 nm, para la determinacin de la
vitamina c total se precisa la conversin del cido ascrbico en deshidro-
ascrbico. Es relativamente especfico y aceptable.
IV. MATERIALES Y MTODOS:

4.1. MATERIALES
a) Materia prima: Naranja (zumo)
b) Materiales:
Probeta
Cuchillo
Vaso precipitado de 100ml. y otro de 250ml.
Embudo de cuello delgado
Matraz 150ml.
Papel filtro.
fiolas
c) Reactivos:
cido oxlico0.4 %
decolorante
d) Equipos:
Espectrofotmetro

4.2. METODOLOGA

4.2.1. Preparacin de la solucin de Acido oxlico 0,4 %.
Preparar una solucin con 4gr. De cido Oxlico a 0.4%, en 1 litro de
agua destilada.

4.2.2. Colorante 2,6 Dicloroindofenol
En una fiola de capacidad 1L., mezclar 12mg. De colorante 2,6
dicloroindofenol con agua caliente.

4.2.3. Preparar la muestra

Separar en una probeta 175ml. de la solucin de cido oxlico preparado.
Exprimir 25ml. de zumo de naranja.
Diluir en un vaso precipitado, los 25ml. de zumo de naranja y los 175ml.
de la solucin de cido oxlico. Dejar reposar por 5 min.
Filtrar la mezcla. Ayudado por un papel filtro.
Al finalizar el filtrado llevar al espectrofotmetro.

4.2.4. Medicin de Vitamina C:

a) Tomamos 4 tubos de prueba y enumerarlos del I al IV y agregamos lo
siguiente:
I. 10 ml de agua destilada
II. 1 ml de cido oxlico al 0,4% + 9ml. de colorante.
III. 1 ml de solucin estndar + 9 ml de agua destilada.
IV. 9ml. de coloran + 1 ml de solucin estndar.

b) Ajustamos a cero la absorbancia usando 1 y una longitud de onda de
520 nm.
c) El tubo II agitar por 1 min. y exactamente despus de 15 segundos,
leer la absorbancia (L 1).
d) Ajustamos a cero la absorbancia con la solucin del tubo III.
e) Al tubo IV agitar por 1 min. y exactamente despus de 15 segundos,
leer la absorbancia (L 2)
f) Registramos los correspondientes valores de L 1 y L2. Construimos la
curva estndar con las concentraciones se cido ascrbico (mg /
100ml) en la abscisa y en la ordenada la absorbancia (L 1- L2) para
cada estndar del trabajo.
V. RESULTADOS Y DISCUSIN

5.1. RESULTADOS

a) PREPARACIN DELA CURVA ESTNDAR
Cuadro1. Lecturas de absorbancia a un de 520 nm.









5.2. DISCUCIONES
La vitamina C es la ms sensible de las vitaminas, es lbil en presencia de
humedad y oxgeno, pH, agentes oxidantes, temperatura y presencia de,
iones metlicos especialmente cobre y hierro, es soluble en agua, y se pierde
fcilmente en procesos hmedos.
La vitamina C se encuentra de dos formas, como cido ascrbico y cido
dehidroascorbico, se utiliza el mtodo de la transformacin del cido
ascrbico, este mtodo se utiliza colorante 2,6 dicloroindofenol, y es este la
que muestra un mximo de absorcin a 540nm. La tcnica de anlisis,
espectrofotometra, es un mtodo muy aceptable, y nos permite determinar
con un buen grado de exactitud las absorbancias en las muestras preparadas,
as trabajar con curva de calibracin para calcular concentraciones de la
naranja y otros.

Por otro lado, se sabe que las enzimas de numerosas plantas transforman la
Estndar
Trab.
Concentracin L1 L2 L1-L2 Absorbancia
E1 0,4
0,255 0,05 0,205
0,197
0,250 0,06 0,19
Concentracin Absorbancia
0,4 0,056
glucosa en vitamina C. Los ctricos son los frutos que concentran una mayor
cantidad de esta sustancia. La naranja contiene 60 mg por cada 100 mL,
Frente a esto y segn los resultados obtenidos, las muestras de naranja, no
llegan a ser semejantes a la bibliografa encontrada, la razn es que las
muestras tomada de 1 mililitro no fue trascendente y se extrajeron de frutos
verdes, es decir no maduras, (poco contenido) y a pesar que el cido oxlico
tratara de resaltar el contenido de vitamina C, no fue suficiente. Tambin se
puede afirmar que la manipulacin de las muestras no fue la ms adecuada,
sobretodo en el momento del filtrado.
Tras llevado el procedimiento se analiza que as las muestras no fueran las
ms aptas para el procedimiento, si presentan contenido de vitamina C y se
demuestra que es posible determinar dicho contenido,
espectofotomtricamente y no con mtodos volumtricos convencionales
como la valoracin con disolucin de Yodo, o como el azul de metileno.
Por ltimo, la naranja es fuente natural de vitamina C, depende de la especie,
rea geogrfica en las que son cultivados, las condiciones de almacenamiento
una vez recogidos y del estado de maduracin.
VI. CONCLUSIONES:

Como futuros ingenieros agroindustriales para obtener una buena calidad
nutritiva de un producto debemos evitar la degradacin de la vitamina C; que
es muy importante para nuestro organismo.
Se complement satisfactoriamente nuestros conocimientos en clase con la
prctica ejecutada; y podemos ver cun importante es las propiedades de un
recurso natural.

VII. RECOMENDACIONES

Trabajar con precisin al momento de manipular los reactivos indicados en la
prctica.
Estar al pendiente de los tiempos en que se est realizando este estudio.
No exponer a la luz el colorante.
Calibrar antes de utilizar el equipo del espectrofotmetro, y enjuagar primero
los tubitos.







VIII. BIBLIOGRAFA

Departamento de Bioqumica y Biologa Molecular, Campus Universitario de
Rabanales, Edificio Severo Ochoa, 14071-Crdoba, Facultad de Medicina, Avda.
Menndez Pidal s/n, 14004-Crdoba.
HUAPAYA.E .1995Evaluacion de la perdida de la vitamina C durante el
procesamiento y almacenamiento de la pulpa de camu camu. Tesis para optar el
grado de ingeniero en industrias alimentarios UNALM.
KIRK.S, SAWYER R, EGAN, H 1996.Composicin y anlisis de los alimentos de
Pearson Compaa Editorial continental S.A,de C.V. Mxico.
LEE.H.S.and Chin.S.C.1998 Rates of Vitamin C loss and discoloration in clear orange
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SELEN, H, NURAY, K y FERY AL .K.2005. Degradation of vitamin C in Citrus Juice
concentrates during storage .Journal of Engineering.
http://med.unne.edu.ar/revista/revista177/4_177.pdf
http://catarina.udlap.mx/u_dl_a/tales/documentos/meiq/celis_c_a/capitulo4.pdf











IX. ANEXOS