Está en la página 1de 13

AREA DE

SEROLOGIA














SEROLOGIA

1.- INTRODUCCION.-

La serologa estudia las respuestas inmunolgicas o alrgicas en el
organismo, por lo que en el suero sanguneo, existen anticuerpos, que cumplen una
funcin de proteccin (mecanismo humoral). Siendo especficos en la reaccin
antgeno-anticuerpo.

Estas reacciones inmunolgicas, estn dadas por sustancias que se forman
en el tejido linftico (anticuerpo), como consecuencia de sustancias extraas
(antgeno) excretado por agentes microbianos nocivos por consiguiente se forma la
reaccin antgeno-anticuerpo.
La serologa es el tratado de las relaciones entre los antgenos y los
anticuerpos e intenta cuantificar stas reacciones conservando constante la
concentracin de un reactivo y diluyendo el otro. Algunas mediciones serolgicas
pueden ser absolutamente cuantitativas utilizando tcnicas inmunoqumicas.
En la seccin de serologa se realizan exmenes rutinarios en muestras de
sangre (suero. Para enfermedades como:
- Fiebre tifoidea (reaccin de Widal).

- Sfilis (V.D.R.L.)
- Factor reumatoideo.
- Protena C Reactiva (PCR).

2. - MATERIALES Y EQUIPOS UTILIZADOS.-

- Microscopio.
- Bao Mara.
- Rotador elctrico.
- Incubadora (estufa).
- Lmina excavada.
- Varilla.
- Micropipeta.
- Tubos de ensayo.
- Gradilla porta tubos.
- Reloj.
- Placas de fondo oscuro.
- Algodn.
- Agujas descartables.
- Jeringas descartables.
- Pipetas de diferentes medidas: 5 ml, 2 ml, 1 ml, 0.2 ml, 0.1 ml.




3. - OBTENCION DE LA MUESTRA.-

Utilizar:
- Jeringas de 5 10 ml descartables con aguja.
- Tubos de 13 x 100 esterilizados en seco.

Condiciones de la persona a quien se extrae la sangre:
- No debe haber ingerido alimento 4 horas antes.


Cantidad de la sangre o muestra:
- Extraer por puncin venosa 5 a 10 cc. de sangre sin anticoagulante.

Procedimiento:
- Cuando la sangre ha coagulado, trasvasar el suero y centrifugar a
3000 rpm. Durante 5 minutos.
- Decantar para obtener el suero libre de fibrina e inactivar a 56
o
C por
30 minutos.
- Todo suero ser sometido primeramente a una prueba estndar con
antgenos.
- Deber practicarse una reaccin cuantitativa en todo suero de
resultado positivo o reactivo.

3.1. - Reaccin de V.D.R.L.-
3.1.1. - Fundamento.-
Se llama reaccin de V.D.R.L. a la reaccin de floculacin adaptada por
la Venereal Diseare Research Laboratory de Estados Unidos en la que se utiliza
como antgeno cardiolipina. En el paciente con sfilis, existe en su suero un
anticuerpo denominado reagina, que reacciona con el antgeno produciendo un
fenmeno de floculacin.

3.1.2. Reactivos.-
- Solucin de suspensin de antgeno V.D.R.L.
- Solucin Buffer.

3.1.3. Procedimiento.-
Mtodo cualitativo.
- Colocar una gota de suero en la lmina excavada.
- Luego agregar una gota de antgeno V.D.R.L.
- Llevar al agitador unos 8 minutos a 1180 rpm.
- Leer en el microscopio de campo oscuro (10x).



3.1.4. Resultados.-
- Reactivo : Presencia de floculacin.
- No reactivo : Ausencia completa de floculacin.
- Prueba cuantitativa : El ttulo estar dado por la inversa de la ltima
dilucin que se observe reactiva. Leer atentamente.

3.1.5. - Significacin clnica.-
La sfilis es una de las enfermedades venreas ms antiguamente
conocidas. Su agente etiolgico, el Treponema pallidium, posee la
capacidad de invadir las mucosas intactas o la piel en reas de
abrasiones. El contacto sexual es la forma ms comn de transmisin.
Luego de la invasin los microorganismos se multiplican y diseminan
rpidamente.
La deteccin y tratamiento de la enfermedad en sus estadios tempranos
es fundamental a fin de evitar complicaciones graves como son las
neurosfilis, sfilis cardiovascular y sfilis congnita, producida por la
infeccin transplacentaria del feto en desarrollo.



Esta prueba es muy sencilla, pero no especfica, la infeccin natural con
Treponema pallidium es exclusiva del hombre se transmite
generalmente por contacto sexual y la lesin infecciosa se localiza en la
piel o las mucosas de los rganos genitales pueden presentarse en
cualquier parte del cuerpo.

Reactivos:
Solucin salina amortiguada:
Cloruro de sodio 10g.
Formol neutro, grado reactivo 0,5 ml.
Fosfato disdico hidratado 8,93 g.
Fosfato monopotsico anhidro 0,17 ml.
Agua destilada 1000 ml.

Antgeno VDRL:
Es una solucin alcohlica con 0,3 de cardiolipina; 0,9% de colesterol y
0,21 y 0,001% de lecitina. Se conserva a temperatura ambiente y en frasco
mbar de tapa rosca.




PROCEDIMIENTO DE V.D.R.L.
Coagular la sangre y llevar a centrifugacin a 3000 rpm durante 5 minutos y
acogerse a tcnicas y mtodos.

REACCION CUALITATIVA DEL VDRL EN LMINA CON SUERO.-
1. Tener el suero preparado
2. Llevar el suero a bao mara a 56 C por 30 minutos (procesados 4
horas antes).
3. Depositar en el anillo o cava 0,05cc de suero calentado.
4. Con una aguja calibre 18 despuntada, colocar una gota de antgeno
1/16.
5. Hacer girar la lmina durante 4 min. Usando la mquina rotatoria a
180 rpm, o con la mano describiendo un crculo de 2 pulgadas de
dimetro 120 veces por minuto.
6. Despus de la rotacin leer la reaccin al microscopio con el objetivo
de menor aumento.






RESULTADOS.-
Modo de informar los resultados:
Se usar los trminos:
- Reactivo (R): Presencia de floculacin.
- Dbilmente reactivo (DR): Floculacin no muy visible.
- No reactivo (NR): Ausencia completa de floculacin.

PRUEBA CUANTITATIVA : El ttulo estar dado por la
inversa de la ltima dilucin que se observe reactiva. Leer atentamente.

PRUEBA DE RPR. (DILUCIN).-
Es una prueba para la deteccin cualitativa y semicuantitativa de anticuerpos
anti treponema pallidium en suero o plasma humano mediante una prueba de
floculacin en portaobjeto.
MATERIALES Y EQUIPOS.-
- Lmina oscura con cinco excavaciones.
- Micropipetas.
- Pipetas de Thoma.
- Frascos gotero.
- Agitadores o rotadores.
- Solucin de cloruro de sodio.
- Antgeno.

3.2. - REACCIN DE WIDAL.- (PRUEBA DE SALMONELOSIS)

FUNDAMENTO.-
Reaccin serolgica que se emplea para el diagnstico de las infecciones
tifoideicas y paratifoideas A y B, basada en la presencia de anticuerpos en el
suero del paciente, hacia los antgenos somticos y flagelares de la salmonella
tifosa: O, H y la salmonella paratyphi A y B.
El suero del paciente se pone en contacto con antgenos especficos. En este
caso se utiliza suspensiones de Salmonella muerta.
Si la muestra contiene los anticuerpos correspondientes se producir una
aglutinacin visible macroscpicamente. Esta prueba consiste en la deteccin de
anticuerpos formados en la enfermedad de la fiebre tifoidea.

REACTIVOS.-
- Antgenos febriles salmonella: Suspensin de antgenos bacterianos.
- Antgenos paratyphi A : Salmonella, antgeno flagelar a.
- Antgenos paratyphi B : Salmonella, antgeno flagelar b.
- Antgenos typhi H : Salmonella, antgeno flagelar d.
- Antgenos typhi O : Salmonella, antgeno somtico D.


MTODO CUALITATIVO.-
- En una lmina con cuatro excavaciones colocar una gota de suero en
cada excavacin.
- En la primera y la segunda gota de suero aadir una gota de tfico O y
H.
- En la tercera y cuarta gota de suero agregarle una gota de antgeno
paratfico A y B.
- Luego se mezcla con un aplicador y se rota durante 5 minutos y se
efecta la lectura, en caso que presente la aglutinacin proceder con el
mtodo cuantitativo.

MTODO CUANTITATIVO.-
- Se coloca en la placa de vidrio con una pipeta adecuada, el suero
problema en cantidades de: 0.08, 0.04, 0.02, 0.01, 0.005 ml.
- Despus de agitar los antgenos se aade a cada muestra de suero una
gota de antgeno.
- Se mezcla completamente cada grupo de antgeno - suero, con aplicador
diferente para cada uno, despus de un movimiento de rotacin a la
placa de vidrio a los 5 minutos se procede la lectura las diluciones
obtenidas son:



0.08 corresponde 1:20 diluciones.
0.04 corresponde 1:40 diluciones.
0.02 corresponde 1:80 diluciones.
0.01 corresponde 1:160 diluciones.
0.005 corresponde 1:320 diluciones.

INTERPRETACIN.-
Se debe informar para cada antgeno la dilucin ms alta que ocasiona una
aglutinacin franca.
Por Ej. Si en la excavacin conteniendo el antgeno tfico H de salmonella tfica
comprueba que se tiene un caso de fiebre tifoidea.
Una reaccin netamente positiva es aquella en la cual la aglutinacin se
presenta en una dilucin de 1:80 o mayor tiene tifoidea o fiebre tifoidea, una
reaccin negativa no excluye el diagnstico.

SIGNIFICACIN CLNICA.-
Las salmonellas se consideran patgenos entricos obligados y su aislamiento
en un individuo implica enfermedad o estado de portador. Los alimentos y el
agua contaminados son los mecanismos de transmisin.
La enfermedad puede presentarse en 3 formas distintas gastroenteritis,
septicemia con lesiones en diversos rganos o fiebre tifoidea.

La brucelosis se presenta en la mayora de los casos con anorexia, fiebre,
decaimiento y escalofros pudiendo aparecer luego complicaciones importantes
como son las seas y neuropsquicas.
El periodo de incubacin puede extenderse desde algunos das hasta varios
meses siendo lo ms frecuente un lapso de 3 semanas entre la exposicin a los
microorganismos y el comienzo de los sntomas.

3.3. - FACTOR REUMATOIDEO (ANTI-GAMMAGLOBULINA).-
FUNDAMENTO.-
El factor reumatoideo es un anticuerpo Ig M dirigido contra un anticuerpo Ig G
por lo tanto es un anti anticuerpo y se encuentra en el 80% de los sueros de
pacientes con artritis reumatoidea.
Se determina con una prueba de ltex utilizando glbulos rojos o partculas de
ltex cubiertos de Ig G que al reaccionar con el factor reumatoideo (anti Ig G) del
suero problema se produce un fenmeno de aglutinacin.
Entre los auto-anticuerpos conocidos, es de especial inters clnico los
anticuerpos, anti-gammaglobulinas, descritos en primer lugar en la artritis
reumatoide que se detectan mediante distintas pruebas serolgicas.

Los antgenos del Test de Ltex RF detectan los anticuerpos de estas inmuno-
gammaglobulinas sobre una placa de fondo oscuro, demostrando la reaccin
macroscpica (aglutinacin).

REACTIVOS.-
- RF ltex reactivo.
- RF suero control positivo.
- RF suero control negativo.
- Glicina - salina Buffer diluyente concentrado.

MUESTRA.-
- Suero humano.

MATERIAL Y EQUIPO.-

- Tubos de prueba.
- Placas planas con fondo oscuro.
- Pipetas de dilucin.
- Goteros o aplicadores.
- Centrfuga.
- Aparato mezclador de tubos.



MTODO CUALITATIVO.-
- Preparar una parte de buffer Glicina para 19 partes de agua
destilada el cual es la solucin de Buffer de trabajo.
- Preparar una dilucin de 1:20, con el suero del paciente y el
Buffer de trabajo (0.1ml de suero paciente en 1.9ml de Buffer
de trabajo).
- Sobre la placa plana coloque una gota de esta solucin del
paso 2.
- Agregar una gota de reactivo Ltex RF y mezclar
uniformemente.
LECTURA.-
Observar la presencia de aglutinacin:
* Positivo: cuando hay aglutinacin o reaccin de floculacin.
* Negativo: cuando no hay aglutinacin o reaccin.

INTERPRETACIN.-

La aglutinacin o reaccin positiva demuestra un incremento alto de
gammaglobulinas, por causa posible de una artritis reumatoidea.


3.4. - DETERMINACIN DE ANTIESTREPTOLISINA (ASO).-
FUNDAMENTO.-
Esta prueba a menudo se designa con el nombre de ASO, es til para el diagnstico
y el tratamiento de la fiebre reumtica, la glomrulo nefritis aguda y otras infecciones
por estreptococos beta hemolticos.

REACTIVOS.-
- Suspensin de eritrocitos.
- Buffer de ASO cloruro de sodio 7,40 g, fosfato monopotsico 3,17, fosfato
disdico anhidro 1,81g o bien hidratado con perxido de hidrgeno.
- Antgeno de estreptolisina O.
- Suero del paciente, sin hemlisis ni contaminacin.

PROCEDIMIENTO.-
Existen en el comercio conjuntos de reactivos preparados (seguir las
instrucciones del fabricante) usualmente se sigue los siguientes pasos:
- Usar suero del paciente fresco sin hemlisis ni contaminacin alguna.
- Colocar una gota de suero en uno de los crculos de la placa serolgica,
agregar 1 gota de reactivo antgeno estreptolisina.


- Mezclar con un palillo y balancear la placa circularmente por dos minutos.

RESULTADOS.-
Observar la presencia de aglutinacin.
Suspensin homognea y lechosa : Negativo.
Aglutinacin franca : Positivo.

3.5. - PROTENA C REACTIVA. (PCR). -

FUNDAMENTO.-
La protena C reactiva (PCR) es una protena termolbil que no atraviesa la barrera
placentaria y cuya movilidad electrofortica se encuentra entre las zonas alfa y beta
globulina, su nombre se debe a la capacidad para precipitar los polisacridos C de
los neumococos.
Es una de las llamadas protenas de fase aguda y se incrementa en suero en una
gran variedad de enfermedades inflamatorias o como respuesta o necrosis tisular.
La PCR se encuentra comnmente aumentada en artritis reumatoidea activa,
infecciones virales, tuberculosis, fiebre reumtica activa, infarto agudo del
miocardio, etc.



PROCEDIMIENTO.-
Existen en el comercio conjunto de reactivos preparados con formatos incluyendo el
procedimiento especfico.
Llevar los reactivos y las muestras a temperatura ambiente. Agitar el reactivo de
ltex antes de usar vaciando previamente la pipeta del gotero.

TCNICA CUALITATIVA.-
1. Preparar muestra diluida 1:20 mezclando 1 gota (50 ul) de suero con 1 ml de
buffer.
2. En uno de los crculos de la placa, adjunta al equipo.
3. Mezclar con los palillos y realizar movimientos rotatorios hasta lograr alguna
aglutinacin.

RESULTADOS:
Observar la presencia de aglutinacin.

DETERMINACIONES ESPECIALES.-
Entre las pruebas especiales que se encuentran y que se realizan se tiene:

- DETERMINACIN DE (HBC) CORE.- Equipo para la deteccin de
hepatitis B en suero o plasma humano.

- DETERMINACIN DE (HCV Ab-Tv).- Equipo para la deteccin de
hepatitis C en suero o plasma humano.

- DETERMINACIN DE HTLV.- Es una prueba de inmunoensayo para la
deteccin de anticuerpos contra el virus T linfotrpico humano tipo I y II
(HTLV I y HTLV II).

- DETERMINACIN DE HIV.- Prueba que nos permite descartar la
presencia del retrovirus de HIV causante del Sndrome de
Inmunodeficiencia Adquirida (SIDA).

- DETERMINACIN DE CHAGAS.- Prueba realizada para la deteccin de
anticuerpo anti Tripanosoma cruzii en muestras de suero o plasma
humano.

NOTA.- Las pruebas mencionadas se realizan basadas en el mtodo
indirecto para la deteccin de anticuerpos presentes en el organismo que
dan respuesta a la presencia de antgenos presentados por diferentes
equipos de determinacin (IN VITRO).