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Nahin Rodrguez Castillo

PRACTICA 6. CROMATOGRAFIA EN COLUMNA. TECNICA DE MICROESCALA


1. Fundamentos de una cromatografa en columna. en qu consiste?, usos, diferencias o
semejanzas con la c.c.f.
Es una tcnica de purificacin, puesto que permite aislar los compuestos deseados de una mezcla.
La cromatografa en columna utiliza una columna de vidrio vertical que se llena con un soporte
slido adsorbente (fase estacionaria: los ms utilizados son gel de slice (SiO2) y almina (Al2O3))+.
La muestra que se quiere separar se deposita en la parte superior de este soporte. El resto de la
columna se llena con el eluyente (disolvente que constituye la fase mvil) que, por efecto de la
gravedad, hace mover la muestra a travs de la columna.
Se establece un equilibrio entre el soluto adsorbido en la fase estacionaria y el disolvente eluyente
que fluye por la columna. Debido a que cada uno de los componentes de una mezcla establecer
interacciones diferentes con la fase estacionaria y la mvil, sern transportados a diferentes
velocidades y se conseguir su separacin.
Es uno de los principales mtodos para la separacin de especies qumicas. Adems, se puede
emplear para la identificacin tanto cualitativa como para la determinacin cuantitativa de las
especies separadas.
2. Cual es la fase estacionaria en una columna de cromatografa? Que tipos de fase
estacionaria hay? Y en que casos se usa cada una?

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Fase estacionaria: los ms utilizados son gel de slice (SiO2) y almina (Al2O3)
3. Cmo son las Interacciones de la fase estacionaria con los compuestos a separar?
Si se agrega polvo o tierra fina de almina (o slica gel) a una solucin que contenga un compuesto
orgnico, algo del compuesto orgnico ser adsorbido o se pegar a las partculas finas de
almina. Muchos tipos de fuerzas intermoleculares provocan la unin de las molculas orgnicas a
la almina. Si un compuesto es sensible al cido, se debe usar ya sea almina bsica o neutra.
Las fuerzas de interaccin varan en fuerza de acuerdo a su tipo. Las interacciones ms
importantes son aquellas tpicas de los compuestos polares (orgnicos). Ya sea que estas fuerzas
sean del tipo dipolo dipolo involucren otro tipo de interaccin (coordinacin, puentes de
hidrgeno, formacin de sales).
Las fuerzas de interaccin obedecen el siguiente orden:
Formacin de sales > coordinacin > puentes de hidrgeno > dipolo dipolo > Van der Waals
Se puede utilizar la siguiente regla para predecir:
Entre mas polar sea el grupo funcional del compuesto, ms fuerte es la unin a la almina ( slica
gel)
4. Qu es un adsorbente: clases y usos en cromatografa en columna
Es un proceso fsico o qumico por el cual una especie qumica (tomos, iones o molculas) es
retenida en puntos activos de la superficie de un material.
El fenmeno queda limitado a la superficie que separa las fases (superficie interfacial)
Adsorbentes slidos para cromatografa en columna (en orden ascendente de fuerzas de
interaccin hacia compuestos polares).
Es un proceso fsico (absorcin pura) o qumico (absorcin con reaccin qumica) en el cual una
especie qumica se traslada de una primera fase a otra, incorporndose a la masa de la segunda
fase. Ambos son fenmenos msicos (no superficiales)
Tabla 1. Adsorbentes slidos para
cromatografa en columna (en orden
ascendente de fuerzas de interaccin
hacia compuestos polares)
Papel
Celulosa
Almidn
Azucares
Silicato de magnesio
Sulfato de calcio
Acido silcico
Slica gel
Florisil
Oxido de magnesio
Oxido de aluminio (almina)*
Norita (carbn activado)
*Bsico. Lavado cido y neutro
Tabla 2. Solventes (eluyentes) para
cromatografa
ter de petrleo
Ciclohexano
Tetracloruro de carbono*
Benceno*
Cloroformo*
Cloruro de metilo
ter etlico
Acetato de etilo
Acetona
Piridina
Etanol
Metanol
Agua
Acido actico
* Se sospecha carcingeno
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5. Cules son los solventes ms comunes para cromatografa por orden de polaridad?



6. Cmo es la secuencia de elusin de los diferentes tipos de compuestos orgnicos en
una columna cromatografca?
La polaridad del eluyente afecta las velocidades relativas con las que los diferentes componentes
de la mezcla se mueven en la columna. Los disolventes polares compiten ms eficientemente con
las molculas polares de una mezcla por los lugares polares del adsorbente. Por lo tanto, un
disolvente polar desplazar las molculas, incluyendo las ms polares, rpidamente a travs de la
columna. Si el disolvente es muy polar la elucin ser muy rpida y generalmente habr poca
separacin de los componentes de la mezcla. Si por el contrario el disolvente es muy apolar, no
eluirn los compuestos de la columna. Por lo tanto, la eleccin del eluyente es crucial para el xito
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de la cromatografa en columna. A menudo se utiliza un gradiente creciente de polaridad para la
elucin. La CCF se utiliza para determinar y elegir el sistema solvente adecuado para cada
separacin.

El orden aproximado de elucin de compuestos es aproximadamente el que se indica y la
polaridad de los disolventes se recoge en el grfico de la izquierda

7. Existe alguna relacin entre el tamao de la columna y la cantidad de adsorbente
utilizado?

8.

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8. Qu problemas se pueden presentar en el empaquetamiento de una columna?
Se generaran canales o zonas de empaquetamiento irregular, por lo que el frente de elucin
estara modificado, y se obtendra una mala resolucin, es decir, una mala separacin de los
componentes a separar.
El tiempo de retencin es un parmetro importante para caracterizar (con ayuda de un estndar
claro) el analito en cuestin. Si hay burbujas, el tiempo de retencin variara, entonces nunca
podramos compararlo con el estndar.

9. Fundamentos y breve descripcin de la cromatografa de lquidos de alta Resolucin.
es un sistema compuesto de un reservorio de fase mvil, bomba, inyector, columna deseparacin
y detector.
El analito se pasa a travs de una columna de la fase estacionaria bombeando la fase mvil liquida
con alta presin. La muestra se introduce en pequeos volmenes a la corriente de la fase mvil y
all se retarda por medio de interacciones qumicas con la fase estacionaria mientras atraviesa la
columna. El retardo se conoce como tiempo de retencin, nico para analito. Depende de la
naturaleza del analito, de la fase estacionaria y de la composicin de la fase mvil. Los solutos mas
comunes usados en la fase mvil son combinaciones de agua purificada con lquidos orgnicos, los
ms comunes son Metanol y Acetonitrilo, tambin suelen usarse sales y bufferes para contribuir a
la separacin de componentes. Tambin se usa el cido Trifluoroacetico para actuar como
formador de pares inicos. Estas combinaciones introducen el concepto de gradiente de elucin.
Consiste en la variacin de la composicin de la fase mvil, para adaptarse a los diferentes analitos
y conseguir mejores resultados. El gradiente separa la matriz del analito en funcin de la afinidad
del analito por la composicin de la fase mvil. Cada analito tiene un gradiente de elucin ptimo
para obtener la mxima separacin de picos en el detector.

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PRACTICA 7. PUNTO DE EBULLICION

1. Defina punto de ebullicin.
Punto de ebullicin Es la temperatura a la cual se produce la transicin de la fase lquida a la
gaseosa. En el caso de sustancias puras a una presin fija, el proceso de ebullicin o de
vaporizacin ocurre a una sola temperatura; conforme se aade calor la temperatura permanece
constante hasta que todo el lquido ha hervido.
2. Cmo afecta la presin atmosfrica el punto de ebullicin?
El Punto de Ebullicin se alcanza cuando la presin de vapor del lquido iguala la presin
atmosfrica. Consecuentemente si se aumenta dicha presin. La presin de vapor tambin deber
aumentar, y para lgralo se necesita incrementar la temperatura.
EL Punto de Ebullicin, es DIRECTAMENTE proporcional al AUMENTO de la presin. O sea a mayor
presin ms alto el Punto de Ebullicion.
3. En qu consiste la grfica llamada nomograma de presin temperatura?

El nomograma representa simultneamente el conjunto de las ecuaciones que definen
determinado problema y el rango total de sus soluciones.
4. Qu es la tensin de vapor de un lquido?
La tensin de vapor mide la tendencia de las molculas a dispersarse de una fase lquida para
generar una fase vapor en equilibrio termodinmico. Es una funcin creciente de la temperatura y
especfica de cada cuerpo puro. Esta caracterstica es muy significativa ya quede una manera
indirecta indica el contenido en productos livianos que determinan la seguridad durante el
transporte; las prdidas en el almacenamiento, en el transporte y la volatilidad de las naftas.
Representa el factor clave en la emisin de compuestos Voltiles
5. Puntos de ebullicin como constante fsica.
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Sustancia Punto de fusin (C) Punto de ebullicin (C)
Agua
Alcohol
Hierro
Cobre
Aluminio
Plomo
Mercurio
0
-117
1539
1083
660
328
-39
100
78
2750
2600
2400
1750
357

6. Escalas de temperatura.
A veces hay que convertir la temperatura de una escala a otra. A continuacin encontrar cmo
hacer esto.
Es una graduacin de mercurio cuando se dilata para distintos estados trmicos. La temperatura
es una magnitud referida a las nociones comunes de calor o fro. Por lo general, un objeto ms
caliente tendr una temperatura mayor. Fsicamente es una magnitud escalar relacionada con la
energa interna de un sistema termodinmico.
Existen tres tipos de escalas de temperatura:
a) Escala de Celsius: Esta escala fue creada por Anders Celsius en el ao 1742, construyo un
termmetro basndose en la propiedad de dilatacin del mercurio con la temperatura y fijo como
puntos extremos el 0 para la fusin del hielo y el 100 para la ebullicin del agua a nivel del mar. La
ecuacin de esta en relacin a F es C=5/9(F-32)
b) Escala de Fahrenheit: Esta escala fue propuesta por Gabriel Fahrenhit en el ao 1724 el
encontr un estado trmico ms fro que la solidificacin del agua consisti en una mezcla de sal
(cloruro de amonio) con agua y ese punto coloco el 0 (cero). Al hervir esta mezcla tambin alcanza
un valor superior a los 100 C.
Al establecer la correspondencia entre ambas escalas, se obtiene la ecuacin siguinte : F=
9/5C+32
c) Escala Kelvin: Lord Kelvin estudiando la relacin entre volumen y temperatura para un gas
cualquiera propone que el cero absoluto o sea el valor ms bajo en C que se lo poda lograr seria
la desaparicin de un gas al enfriarse, sabemos que esto no es posible; el menor volumen al que
poda llegar un gas al enfriarse y sus molculas se encuentran en estado de reposo. Tiene la
siguiente ecuacin: T K= C + 273
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1. Para convertir de C a F use la frmula: F = C x 1.8 + 32.
2. Para convertir de F a C use la frmula: C = (F-32) 1.8.
3. Para convertir de K a C use la frmula: C = K 273.15
4. Para convertir de C a K use la frmula: K = C + 273.15.
5. Para convertir de F a K use la frmula: K = 5/9 (F 32) + 273.15.
6. Para convertir de K a F use la frmula: F = 1.8(K 273.15) + 32.