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Solemne2

Tcnicas en biologa molecular


Cap12
- Dolly: 1 mamfero clonado
- Celulas Knock-out: inactivacin de un gen mediante su reemplazo por un alelo mutante.
- Para comparar dos ADN, no se puede usar microcopia ptico(FISH muestra cromosomas y
mutaciones grandes) se usa: secuenciador que amplifica el ADN.
Clonacin y amplificacin usando bacterias
1.- se usa un vector o plsmido mas fragmentos de ADN para clonar.
2.- plsmido recombinante: permite la transcripcin
3.- en bacterias permite mas transcripcin
-Eritermalgia se usa canal de Na para enfermedades graves en nios con virus amplificados
Clonacin
1.- Aislar las clulas : sangre, piel, pelo, saliva, etc
2.- Extraccin de ADN
3.-Amplificacion del material gentico por PCR (amplificacin parte promotor y el gen de inters,
sin amplificar todo el genoma)
4.- Clonar el gen: cortar con enzimas de endo-nucleasa desde el inicio (ATG) del gen, aislar el
fragmento de ASN, y clonarlo en un vector o plsmido que contiene promotor.
5.- Traduccin: incorporar el plsmido que contiene promotor y el gen de inters en una clula
donde ocurre transcripcin y traduce para la sntesis de protenas.
6.- anlisis de actividad de la protena: es dependiente de la caractersticas de la protena: si en
una enzima (insulina), un canal/receptor (canales de sodio, TRPV1) o factor de transcripcin.
*no se puede amplificar el genoma, solo un gen.
Para que sirve amplificar un gen en PCR?
R.-
*PCR: Reaccion en cadena de la polimerasa
*puede amplificar mas de 1 millon de veces
* En pcr no hay helicasa
*en pcr se ocupa polimerasa de bacterica (arqueobacterias )
Manipular Gen
Exonucleasa: Cortan los enlaces fosfodiester en los extremos (ADN)
Endonucleasa: cortan los enlaces fosfodiester intermedios (ADN)
Endonucleasa de restriccin: reconoce secuencias especificas de nucletidos y rompe el adn
dentro o cerca del sitio de reconocimiento.
Extremos romos: corta
Extremos cohesivos: corta
Cmo eliminar un gen del genoma?
R.- se puede interferir el mensajero, el arn corta el arnM.


Control de expresin gnica
Cap. 11
El genoma debe dejar una marca para que inicie la transcripcin: TATA BOX debido al alto n de
timinas y adeninas.
La polimerasa se une a TATA box, pata tener alta transcripcin, necesita un factor de
transcripcin.
El n de factores se unen a la clula.
El azcar llega un receptor de mb, luego ocurre una cascada de RX, en el ncleo hay una
transcripcin.
Reguladores de la trancricpion :co- activadores
Los enlaces pueden estar muy lejos del tata box, el adn se puede plegar para lograr regular la
trancripcion.
Por qu no se expresa el gen de insulina en el cerebro?
R.- no hay receptores
Organizacin cromosomal: adn enrollado, factores de transcripcin no llegan, los genes que no
sirven en el cebebro estn plegados.
- Arn polimearasa se une con una hebra de tata y forma el marn.
- 25 mil genes tiene tata. Y el promotor define en que contexto la polimerasa debe expresarse.
- No hay receptor no hay como hacer trancripcion ya que no hay reguladores.
- E.g metilacin: cambia el adn o las listomas.
Organizacin de la membrana celular, lpidos
Cap.5
- Cada celula tiene el mismo genoma.
- Celula: 70% de agua
- Mielina: es un liquido especial, un axn enva iones.
- Lpidos: son solubles en agua, solubles en grasa y disolventes orgnicos como el benceno.
Funcin mas importante construccin de las membranas celulares.
- Fosfolipido = fosfoglicerido (carbono + hidrogenp) + cola
- Acidos grasos saturados: sus atomos de C tienen saturados sus lugares de unin por atomos de
H. forman grupos compactor y rigidos.
- Acidos grasos mono-insaturados: dos de sus atomos de C tienen cada uno un enlace sin saturar
con H. se forma un doble enlace.
- Acidos grasos poli-insaturados: mas de dos atomos de C tienen lugares no saturados con
atomos de H. formando dos o mas dobles enlaces.
*No saturado falta H.
-Bicapa no permite la interaccion con agua.
- Micela unidades con forma de cua, se forman esferas para no tener contacto con h2O.
Ensamblajes de fosfolipidos anfipaticos en soluciones acuosas
- Liposoma : estructura esfrica hueca con pared de bicapa lipidica y cavidad interior acuosa.
vehculo para absorber, no pasa h2o, no puede salir, no puede entrar.
- Necesita protena para que pase algo: aguapurina: transportador hacia la celula agua
- Glucosa: transportador
- Solo para oxigeno y co2 no se necesita transportador.
- Etanol muy rpido
- Urea pasa

Aprender:
Fosfogliceridos son lpidos.
Segn el alcohol que se una al cido fosfatdico, se tienen diferentes fosfoglicridos:
Fosfatidilcolina : Posee el aminoalcohol colina.
Fosfatidiletanolamina : Posee el aminoalcohol etanolamina.
Fosfatidilserina. Posee el aminoalcohol serina.
Fosfatidilinositol. Posee el alcohol inositol.
Fosfatidilglicerol. Posee el alcohol glicerol; si el grupo OH esterifica otra molcula de cido
fosfatdico se origina el difosfatidilglicerol o cardiolipina (caracterstico de las mitocondrias de
las clulas muscularescardacas).

Esfingolipidos
lpido de las membranas de las clulas animales y vegetales contiene una sustancia llamada
esfingosina. poseen tres componentes bsicos caractersticos: una molcula de un cido graso,
una de esfingosina y un grupo de cabeza polar. Se encuentran presentes en cantidades
especialmente grandes en los tejidos nervioso y cerebral.
Se hallan presentes en las membranas plasmticas de las clulas animales, otra fuente
importante, es la vaina de mielina que recubre y asla los axones de las neuronas mielinadas
Esfingomielina: forma mielina es un fosfolipido. grupo fosfato, unido al grupo hidroxilo 1
de la ceramida, que se esterifica con la colina (fosfocolina)
o etanolamina (fosfoetanolamina) para formar el grupo o "cabeza" polar de la molcula.
Es el nico esfingolpido que contiene fsforo y puede, por tanto, considerarse
un fosfolpido, pero se acostumbra a clasificar como esfingolpido por sus componentes
estructurales.
Glucosilcerebrosido: glucolipido. Carece de fosforo l grupo hidroxilo 1 de la ceramida se
une, mediante un enlace glucosdico a un monosacrido o a un oligosacrido, que
normalmente se proyectan hacia afuera en la cara externa de la membrana plasmtica.
Los monosacridos ms frecuentes son la D-glucosa, D-galactosa y N-
acetilgalactosamina

Colesterol : oh cabeza y es hidrofilico. No necesita transportador.

Adeno leucodistrofia (ALD)
Tengo dos genes para tener a_LD, los hombres tienen 1 gen,si soy mujer y tengo un gen
infectado soy portadora. mama portadora : 25% hijo enfermo.
50% de desarrollar la enfermedad.
ALD: no hay sntesis de acidos grasos. El transportador que lleva los acidos grasos al
peroximosa no funciona . peroxisoma degrada. Enfemedad asociada al cromosoma x
TRATAMIENTOS:
Aceite de Lorenzo a tenido xito pero no a sido aprobado por la FDA.
Terapia Genica: transplante de clulas madre.
Problemas: compatibilidad: los ag. Leucocitarios humanos (HLA) son ag formados por moleculs
que estn en la superficie de casi todas las clulas de los tejidos de un individuo y tambin por
en globulos blnacos de la sangre.
Ag: antgeno
Se han identificado los 3 antigenos importantes que se deben operar cuando recibimos por
ejemplo un rgano de donacin.
Adeno-associated virus: frecuentemente usado en terapia gnica (AAV)
Se incorpora en el cromosoma 19 del humano, entonces se ua expresin del gen cuado se hace
transcripcin, traduccin (no causa patologas)
Permeabilidad celular, diferenciacin de la superifice celular y comunicaciones intercelulres.

CAP.7
-Funcion de la memabrana plasmtica: aislar y permitir intercambio selectivo.
Permeabilidad de una bicapa de fosfolipidos a varios tipos de molculas.
-gases, c02,nh2,o2 PERMEABLE
-pequeas molculas polares cin carga (etanol,urea,agua) SEMIPERMEABLE
-moleculas grandres sin carga (glucoda, furctosa) IMPERMEBLE
- IONES K+, MG+,CA2+,CL- ,HCO3-,HP042+ IMPERMEABLE
Proteinas transportadoras de la membrana
1.- Canales inicos: para cada ion hay un canal especial, transporte pasivo. Los iones van afuera o
adentro y al revs, esto no permite pasar algo en contra de la corriente, si fuese asi seria una
bomba.
Equipo whole-cellpatch-clamp para medir corrientes (cuanta entrada y salida hay de iones),
estructuras de los canales inicos.
-Toxinas de bacteria S. aureus virus muy peligroso. Si las concentraciones son altas afuera, los
iones entran.
2.- Bomba impulsado por atp: en contra de la corriente (transporte activo) atp define la aceleracin.
3.- Transportadores: la glucosa necesita de ellos (entra- es encapsulada-sale)
-glucosa 12 isoformas : D-glucosa, D-manosa,D-galactosa, aminocidos, iones ,sacarosa. Ej:
Glut1.
TRANSPORTADORES
- Uniporter: 1 molecula
- Symporter: 2 moleculas diferentes, misma direccin.
- Antiporter: 2 moleculas direccin opuesta. (bomba NaCl)

INSULINA
Secrecin por clulas B-pancreaticas en respuesta a una elevacin de glicemia
Insluina induce translocacion de glut 4 desde vesculas intracelulares a la membrana plasmtica
en las clulas adiposas
-repectores

} en la membrana
-transportadores

}e n la memraban
-canales ionicos}en la membrana
SEALIZACION
Si hay un factor extracelular y no ocurre la cascada de rx puede haber muerte celular. Tambin
pasa que no hay repector pero si hay cascada (ej: cncer de celula se multiplica sin param como
una neoplasia)
Hay transportadores para cada especialidad, cada caso tiene su receptor.
-receptor : recibe seales
Ejemploes de receptores de canales:
Respuesta negativa al estrs flight o fight , adrenalina, cardiaco respiratorio, circulatorio etc.
Canal de sodio para percibir dolor . hay tres familias en el mundo q no lo tienen.
Transgnicos eliminan repectores (dolor)

Sealizacin intracelular y reconocimiento celular
Cap. 13
Modelo de aprendizaje
Rol de repectores de NMDA y AMPA
- Hay vesculas presinapticas, cuando se presenta un estimulo, se libera glutamato, abre los
canales y entran iones (ca+) este CA aumenta el numero de receptores, adems ocurre una
sealizacin intracelular.
- En los primeros aos de edad recibimos muchos estimlos donde se desarrolla la corteza
cerebral.
- Sealizacin extracelular, activa receptor, luego seales intracelulares.

Efector de alcohol, morfina y cocana sobre el sistma nervioso central.
Dopamina:
- La dopamina se porude en la area tegmental vertical. (bienestar)
- Hay transportadores que reciclan la cocana
- Si hay drogras efectos agudos se bloquean los transportadores que receptan dopamina-
- Ingesta de cocana muchos transportadores y pocos receptores.
- Abuso de antidepresivos : aumentan los transportadores y disminuyen los repectores.

Las clulas tienen que ser reemplazadas cada 3 semanas y necesitan siempre! CRECER,
PROLIFERAR,DIFERENCIAR Y MORIR (apoptosis).

Apoptosis : dos formas de que la celula muera
1.- Necrosis no necesita atp, cambios en la morfologa inflamacin.
2.- apoptosis necesita atp la celula se absorbe no deja evidencia se le dice suicidio.
3.- protenas enzimas caspases van al nucleo y cortan el adn. Muy importantes para apoptosis.
4.- todos los factores son protenas.
5.- mitocondria atp transporte de iones , activa caspasas
FORMAS DE SEALIZACION
1.- contacto dependiente en que la membrana tenemos receptores
2.- paracrina: se produce entre clulas que se encuentran relativamente cercanas (clulas
vecinas), sin que para ello exista una estructura especializada como es la sinapsis, siendo una
comunicacin local. La comunicacin paracrina se realiza por determinados mensajeros
qumicos peptdicos como citocinas, factores de crecimiento, neurotrofinas o derivados del cido
araquidnico como prostaglandinas, tromboxanos y leucotrienos.
3.-sinapsis : neurotransmisor
4.- endrocrina: s molculas sealizadoras (hormonas) son secretadas por clulas endocrinas
especializadas y se transportan por el sistema vascular sanguneo o linftico, actuando sobre
clulas diana localizadas en lugares alejados del organismo. En los animales se producen ms
de 50 hormonas distintas por las glndulas endocrinas. La comunicacin endocrina se lleva a
cabo en las clulas somticas.

NEUROTRANSMISORES
-Acetilcolina (ACh). Se localizan en:
Neuronas motoras en mdula espinal unin neuromuscular
Proscencfalo basal numerosas reas de la corteza
Interneuronas en el cuerpo estriado
Sistema nervioso autnomo neuronas preganglionares del SNA simptico y
parasimptico, y postganglionares del parasimptico.
Dopamina. Se localizan en:
Sustancia negra va nigroestriada del cuerpo estriado, sistema lmbico y numerosas
reas de la corteza)
Ncleo arcuato del hipotlamo hipfisis anterior a travs de las venas portales
Noradrenalina (NE). Se localizan en:
Locus Ceruleus de la protuberancia sistema lmbico, hipotlamo, corteza
Bulbo raqudeo locus coeruleus, mdula espinal
Neuronas posganglionares del sistema nervioso simptico
Serotonina. Se localizan en:
Ncleos del rafe protuberancial mltiples proyecciones
Bulbo raqudeo/Protuberancia asta posterior de la mdula espinal
cido -aminobutrico (GABA). Se localizan en:
Principal neurotransmisor inhibidor del cerebro; interneuronas corticales muy extendidas y
vas de proyecciones largas.
Glicina. Se localizan en:
Principal neurotransmisor inhibidor de la mdula espinal
Glutamato. Se localizan en:
Principal neurotransmisor excitador; localizado por todo el SNC, incluso en clulas
piramidales corticales.
Factores de crecimiento.
- Factores en la sangre que hacen crecer las clulas
- - factores que unen 2 receptores y ocurre la sealizacin intracelular.
- Tres clases de receptores ubicados en la membrana para traduccin de seales:
- Canal de iones : factor abre canal por ejemplo: iones ca + que son mensajeros
- Enzimticas se activ cuando 2 dominios se activan acoplado intracelular.
- G- protena : receptor recibe seal donde la protena g se activa activando la enzima y activando
como una protena kincesa A.
- Algunas molculas de sealizacin que activan receptores nucleares: testorenoa, estradiol,
progesterona, cortisol, hormona tiroidea, vitamina D3, acido retinoico.
MICROFILAMENTOS Y MICROTUBULOS
- Hay q estimular a los nios de pequeos para aumentar el numero de conexiones

Citoesqueleto:
Red compleja de distintos filamentos proteicos que se extienden a traves del
citoplasma en celulas eucariontes.
Funcion: mantener estructura interna celular, organizacion de componentes
intracelulares, movimientos celulares coordinados, forma especifica de la
celula.
Componentes: microtubulos, filamentos intermedios y filamentos de actina
1. Filamentos intermedios: estan anclados a los Desmosomas. Su funcion
es de resistencia al estres mecanico, especialmente en celulas como las
neuronas, celulas musculares y de los epitelios.
Caracteristicas: compuestos por proteinas fibrosas. Son rigidos y
altamente resistentes. Su diametro es de 10 nm. Unicos componentes
- del Citoesqueleto con ubicacion intracelular (dentro del nucleo)
- formando la lamina nuclear con forma de red por debajo de la envoltura
- nuclear.
- Proteinas fibrosas: alfa helice y estructuras globulares en ambos
- extremos. Dimerizan y luego forman tetrameros (fuertemente entre
- extremos aminos y carboxi) que se unen formando octameros los cuales
- se siguen enrollando formando un cordon.
- Clasificacion:
- a) Citoplasmaticos:
- - Epitelios: queratinas
- - Tejido conectivo, celulas musculares y celulas de la neuroglia:
- vimentinas y proteinas relacionadas
- - Celulas nerviosas: proteinas de neurofilamentos
- b) Nucleares:
- - Celulas nucleadas: laminas nucleares.
- Epidermolisis bullosa: mutacion genetica o ausencia de filamentos intermedios
- (existen las proteinas pero no forman filamentos) que debilita la union celular,
- rompiendose los tejidos.
- En las laminas nucleares, ayudan al soporte de la envoltura nuclear para
- mantener el nucleo. Ademas participan activamente en el ensamblaje y
- desensamblaje del nucleo. Se fosforilan las laminas y se desarman
- desensamblando el nucleo tambien. Luego en la telofase las proteinas se
- desfosforilan revistiendose el proceso. Presentan dinamismo, al contrario de los
- filamentos intermedios del citoplasma.
- 2. Microtubulos: diametro de hasta 25nm. Formados por tubulina que
- adopta una conformacion hueca, rigida pero dinamica. Constantemente
- se polimerizan y despolimerizan. Nacen de un centro organizador y se
- encargan del transporte intracelular (como vesiculas) y organizacion
- celular.
- Adoptan distinta orientacion dependiendo de la celula y de la etapa en la
- que este la celula. Durante la division celular forman el huso mitotico y
- en una celula nerviosa se ubican en el centrosoma y desde centros
- organizadores pequenos, cambiando incluso de orientacion en el axon y
- las dendritas. En celulas vegetales se ubican a lo largo de la membrana
- celular (paralelamente). Forman cilios, flagelos y microtubulos.
- Los centriolos se encuentran rodeados por una superficie de Tubulina gama
- que actua como sitio de nucleasion, llega la tubulina y se une con otra para
- formar el microtubulo. Posee un extremo menos asociado a la tubulina gama.
- extremo mas estable). El crecimiento se realiza por el extremo mas =
- Dinamismo
- Tubulina: alfa + beta tubulina. Forman los dimeros de tubulinas formando un
- cilindro hueco. Cada hilera es denominada protofilamento. Un microtubulos en
- interfase posee 13 protofilamentos. Los cilios y flagelos son el doble de gruesos
- que los del citoplasma
- La tubulina unida GTP tiene alta afinidad por mas tubulinas = polimerizacion.
- Es union transitoria. Luego la misma tubulina se hidroliza transformando el GTP
- a GDP, despolimerizandose. La hidrolisis regula el crecimiento, mientras haya
- GTP y la velocidad de union sea mayor a la velocidad de hidrolisis de GTP el
- microtubulo se mantendra polimerizacion. El casquete (tubulinas unidas a GTP)
- mantendra la estabilidad. La cantidad de tubulina tambien regula la
- polimerizacion.
- Colchicina y taxol: inhiben la polimerizacion de microtubulos. Impiden division
- celular. Taxol estabiliza microtubulos en forma inespecifica.
- Efecto de la tempreratura: al enfriar los microbutbulos despolimerizan (baja la
- masa del microtubulo)
- Concentracion de dimeros de tubulina: mientras mas tubulina mayor velocidad
- de polimerizacion. Existe una concentracion critica (minima) para que se
- puedan formar microtubulos.
- Estabilizacion selectiva de microtubulos: proteinas (formadoras de casquetes o
- caping) se unen al extremo mas para estabilizarlo (pierde dinamismo)
- Celulas plasmaticas: secretan anticuerpos. Diferenciacion de linfocitos B.
- cuando recibe la senal de un antigeno cambia transformandose en celula
- plasmatica. El Citoesqueleto se reorganiza estabilizandose los microtubulos. El
- RE se expone para liberar anticuerpos.
- Microtubulos transportan organelos por proteinas motoras asociadas a
- microtubulos del extremo menos al mas (anteroposterior) y del mas al menos
- (retrogrado).
- Virus herpe: lesion en el epitelio. Va al soma a infectar la celula, y luego vuelve
- para seguir infectando.
- Existen dos proteinas motoras:
- - Kinesinas: del extremo menos al mas.
- - Dineinas: del extremo mas al menos.
- Movimiento activo (dependiente de ATP) son capaces de hidrolizar ATP, de
- donde sacan la energia.
- Poseen dos cadenas pesadas y dos livianas. Pesadas: forman dominios
- asociados al microtubulos. Los que caminan
- Cadenas livianas: dominio de union a la carga que transportan.
- Transportan cargas especificas que difieren entre proteinas de la misma
- familia. Ademas avanzan a distintas velocidades.
- Los neurotransmisores pueden llegar al terminal sinaptico en vesiculas ya
- formadas o llegar las enzimas al terminal para formarlos. Los
- neurotransmisores pueden ser degradado o volver y servir como precursores.
- Las kinesinas mantienen al RE extendido en el citoplasma. El golgi (cercano al
- centrosoma) esta asociado a Dineinas, las que lo mantienen compactado.
- Cilios y Flagelos: haz estable de microtubulos que se mueven pro accion de la
- dineina. Conformacion 9 (dimeros) + 2 (centrales). Estan asociados por
- proteinas adaptadoras (puentes) al igual que en los 2 centrales. Esta presente
- la dineina que tienen sus dominios globulares y el dominio de union unido al
- microtubulo. Al avanzar la dineina arrastra un haz de microtubulo (golpe de
- potencia) pero se fuerza no es mayor que la de las proteinas puentes, por lo
- que el flagelo se dobla. Asi produce el movimiento, cuando la dineina no puede
- avanzar mas suelta el microtubulo y se recupera. (Golpe de recuperacion)
- 3. Filamentos de Actina
- Filamentos mas delgados de 7nm formados por actina. Estructura terciaria
- globular que al polimerizar forma actina en forma de helice. Son flexibles y
- dinamicos.
- Funcion: desplazamiento celular, fagocitosis, division, contraccion. Forma que
- va a adoptar la celula.
- Forman: microvellosidades, haces contractiles, protrusiones de movimiento y
- anillo contractil
- No requieren un centro organizador.
- Polimerizacion dependiente de ATP. Al unirse el ATP a la actina se unen mas
- actinas. Cuando el ATP pasa a ADP pierde afinidad y se despolimeriza.
- Faloidina: inhibe despolimerizacion (estabiliza)
- Citocalasina: bloque la polimerizacion induciendo la despolimerizacion
- Poseen proteinas que se unen que no necesariamente son motoras:
- Timosina y profinina: regulan polimeracion. Secuestran monomeros de actina
- impidiendo que formen filamentos. La senal que induce la produccion de
- filamentos de actina hace ue la timosina y profinina suelten los monomeros.
- Proteinas que actuan como centros de nucleasion (integrinas): dirigen la
- polimerizacion de la actina en puntos de la membrana. Se une por el extremo
- mas y se van uniendo los monomeros, empujando el filamento.
- Gelsolina: fragmenta filamentos de actina.
- Proteinas puente (cross-linking): puntos de anclaje.
- Proteinas capping: estabilizan extremo mas
- Tropomiosina: estabiliza filamento a lo largo de toda la helice
- Proteinas motoras: haces contractiles
- Proteinas organizadoras: mantienen ordenados los filamentos, por ejemplo en
- paralelo.
- Protrusiones: polo de avance. Cambios en la formacion en puntos especifico
- (centros de nucleasion) que se disponen de forma paralela.
- Los lamenopodios se anclan al sustrato a traves de proteinas. Los filamentos
- de actina permiten que el resto de la celula avance por un movimiento de
- retraccion
- Proteinas motoras: miosinas. Requieren ATP y se desplazan del extremo menos
- al extremo mas
- - Miosina I: la mas pequena, con un dominio globular. 70 nm. Funcion:
- desplazamiento de organelos. En sectores de la celula donde no hay
- microtubulos pueden desplazar vesicuas.
- - Miosina II: dimero. Posee dos dominios globulares. 150 nm. Puede
- relacionar dos filamentos de actina para desplazarlos u organizar
- estructuras contractiles o desplazar la miosina con respecto a la
- membrana. (desplazamiento celular)
- - Fiamentos de miosina II: miosina II que polimeriza para formar un
- filamento. 1m. forman haces contractiles en los sarcomeros (filamentos
- de actina estabilizados y de miosina II. Unidad funcional y estructural de
- la contraccion) proteina linea Z estabiliza el extremo mas, ademas de la
- asociacion a la tropomiosina (se enrolla a la actina) y la troponina, que
- se une a la tropomiosina. Entre los fiamentos de actina se encuentra la
- miosina
- Contraccion muscular: cuando se activa la contraccion los filamentos de
- miosina desplazan al filamento de actina, acercandose y contrayendo el
- musculo. La contraccion de inicia al aumentar a contraccion de calcio. Cuando
- llega una sena electrica la celula abre el canal de calcio, el que se une a
- troponina (semejante a la calmodulina). La troponina se une al sitio de union
- de la actina con la cabeza globular del filamento de miosina. Asi a tropomiosina
- se desplaza despejando el sitio de union de la actina a la miosina. Cuando llega
- el calcio sale un ADP (golpe de potencia = estado de rigor: union mas fuerte
- entre miosina y actina) y entra un ATP que hace que se pierda la afinidad por la
- union con actina. Luego se hidroliza y el dominio de miosina queda unido a
- ADP.
- Compartimientos celulares
- Ventajas: pueden ocurrir procesos celulares antagonicos (degradacion y
- sintesis de proteinas). Existen complejos multiproteicos (bateria de enzimas)
- en lugares especificos. Estas proteinas deben llegar a los organelos desde los
- lugares de sintesis (transferencia proteica)
- Transferencia proteica: con costo energetico
- 1. Proteinas al nucleo a traves de los poros nucleares. Paso selectivo.
- Las proteinas pueden entrar al nucleo de manera plegada.
- 2. A traves de la membrana del organelo (cloroplasto, mitocondrias y
- Peroxisomas) necesita proteinas transportadoras para ingresarlas.
- Las proteinas deben entrar de manera desplegadas (costo ATP),
- gracias a proteinas chaperonas.
- 3. A traves de vesiculas (resto de organelos, matriz extracelular y
- membrana citoplasmatica) se inicia en el RE. Permite llevar proteinas
- plegadas.
- Transporte especifico. Necesita de un proceso de reconocimiento. Depende de
- a secuencia senal: trozo de la estructura primaria de la proteina que indica que
- proteina es y a que lugar debe ser llevada.
- 1. Transporte al nucleo: el poro permite el paso en ambos sentidos. Es
- altamente selectivo.
- Complejo del poro nuclear: forma un poro hidrofilico. Fibrillas actuan en
- el reconocimiento hacia el citoplasma y un canastillo hacia el interior
- que tambien participa en el reconocimiento.
- Pasan iones y pequenas moleculas hidrofilicas por difusion pasiva (el
- poro no cambia su conformacion, no actua como canal). Y particulas de
- mas de 9 nm por transporte activo (ARN, riboproteinas y proteinas
- nucleares). Tienen secuencia senal de importe y exporte rica en
- aminoacidos de lisina y glicina. Tanto en el importe como el exporte el
- receptor se recicla.
- - Receptores de importacion nuclear: (importinas o transportina o de
- union a proteina Ran) el receptor posee dos sitios uno donde se une la
- proteina y otro para la porteina Ran unida a GTP. El receptor se une a su
- proteina y es reconocido pro las fibrillas. Entra al nucle y dentro la
- proteina Ran-GTP se une a su sitio de union lo que provoca que el
- receptor suelte a la proteina. El receptor sale del nucleo y la Ran-GTPasa
- hidroliza el GTP y el receptor pierde afinidad por la proteina Ran.
- Proteinas de importe: cromosomales, ribosomales, involucradas en el
- procesamiento de ARN, factores de transcripcion como receptores
- esteroidales)
- - Receptores de exportacion nuclear: (exportinas) el receptor tiene
- afinidad por la proteina cuando esta unido a Ran-GTP. Sale del nucleo y
- la Ran-GTPasa hidroliza el ATP, el receptor pierde afinidad por la
- proteina Ran y por la proteina a exportar. Proteinas de exporte:
- subunidades ribosomales, complejos ARNm, ARNt.
- 2. Importacion a organelos (mitocondrias: proteinas de translocacion son
- sensillas por lo que la proteina debe ser deplegada (gasto de ATP). Las
- proteinas chaperonas se unen para mantenerla desplegada. La
- secuencia senal es reconocida por un receptor de membrana que la
- traslada al canal de translocacion. La proteina es transferida a proteinas
- translocadoras que la tiiran hacia el interior (gasto ATP). Cuando las
- proteinas chaperonas del interior sueltan la proteina, esta vuelve a su
- conformacion original. Una peptidasa especifica degrada la secuencia
- senal dejando expuesta una segunda secuencia senal (si es el caso) que
- la lleva al lugar especifico dentro del organelo.
- 3. A traves de vesiculas: se inicia en los ribosomas citoplasmaticos, puede
- continuar ahi o el ribosoma unirse al RE, dependiendo de la proteina que
- estan sintetizando: si es mitocondrial, del nucleo, de cloroplastos o
- Peroxisomas se sintetizan completamente en el citosol. Pero si es del
- golgi, de la membrana, de los endosomas, de secrecion extracelular,
- lisosomas o del RE va tener una secuencia senal que lo llevara a la
- membrana del RE, donde terminara la sintesis de la proteina.
- - RER: el peptido senal es lo que primero se sintetiza para poder definir
- donde se termina la sintesis. El receptor es el SRP que reconoce la
- secuencia senal y se une al peptido y al ribosoma, que bloque la sintesis
- de la proteina. El tercer sitio de union es para el receptor de SRP que
- esta en la membrana del RER. Junto a este receptor esta el receptor del
- ribosoma, donde queda anclado. Este anclaje desestabiliza la union del
- SRP y se suelta. La secuencia senal abre el canal de translocacion y la
- sintesis continua, quedando la proteina al interior del RER. Cuando
- termina la sintesis el ribosoma sale y la secuencia senal hace que el
- complejo se abra en el otro sentido permitiendo que la secuencia
- difunda a traves de la membrana. Si la proteina es soluble una peptidasa
- corta la secuencia senal y queda solo la proteina plegada al interior.
- - Las proteinas Transmembranas: poseen secuencias senales que
- bloquean el paso (de termino) al interior del RER por lo que el resto de la
- proteina queda fuera. Luego, otra secuencia senal (si la hay) de inicio
- hace que la proteina sintetizada quede al interior del RER. Asi se van
- formando dominios Transmembranas.
- - Proteinas integrales: la secuencia senal provoca que una enzima
- transfiera a la proteina a un fosfolipidos (glucosil fosfatidilinositol)
- uniendola covalentemente.
- Modificacion quimicas de lipidos y proteinas: adicion de grupos de
- carbohidratos y formacion se puentes disulfuro en el caso de proteinas. No solo
- se transportan proteinas soluble, si no tambien las que van en la membrana.
- Debe existir un compratimento dador, donde se forma la vesicula y un
- compartimento diana donde se fucionan.
- Formacion de vesiculas: existen proteinas asociadas al compartimento dador
- que van a formar la vesicula al polimerizar. La membrana de la vesicula debe
- saber que llevar y donde llevarlo.
- Las clatrinas y las COP son proteinas que participan en la formacion de la
- vesicula. Se diferencian en los tramos en que actuan. Las vesiculas recubiertas
- pro clatrinas se forman en el golgi y viajan a lisosomas y endosomas o se
- forman en la membrana y viajan al interior de la celula. Cuando la clattrina
- polimeriza forma un enrejado que encierra a la vesicula. Cuando la vesiculula
- se va a liberar la dinamina extrangula el sector de la membrana (depende de
- GTP) y se libera la vesicula.
- Las COP llevan vesiculas del golgi al RE o viceversa.
- Cuando la vesicula esta en el medio las proteinas se liberan (clatrina y COP) y
- la vesicula se une a la membrana del compartiemento diana.
- Los receptores de carga definene que proteines va a llevar la vesicula.
- Reconocen las glicosilaciones de las proteinas.
- Acoplamiento de vesiculas
- - Corta distancia (ER-Golgi): difusion simple. Difunde libremente por el
- medio intracelular
- - Larga distancia (golgi-final neuronal): necesitan proteinas motoras (ej:
- microtubulos-actina)
- La vesicula posee receptores SNEAR (V-SNEAR) que tienen la informacion de lo
- que lleva y de donde viene la vesicula, que es reconocido por el (T-SNEAR) en
- la membrana del compartimento diana. Luego se fusionan las membranas,
- gracias a las proteinas de fusion que acercan la vesicula a la membrana a una
- distancia de 1,5nm, desplazando moleculas de agua. (gasto de energia)
- Cuando el destino de las vesiculas es la membrana se denominas rutas de
- secrecion. (exocitosis)
- Van CH, lipidos y proteinas.
- Modificaciones: ER: puentes de sulfuro, plegamiento adecuado, revision,
- ensamblaje de subunidades. Glucosilaciones (proteccion, retencion en el RE,
- senal de transporte) y escisiones proteoliticas especificas (corte de un
- segmento de la proteina)
- Diolicol: fosfolipido dador del primer oligosacarido de la glucosilacion.
- Golgi: sacar o poner residuos, modificaciones, etc.
- La salida de las proteinas desde el RE es altamente selectiva. Si su
- plegamiento no es correcto, no es liberada y el degradado.
- - Fibrosis quistica: enfermedad multisistemica debida a la ausencia de un
- transportador de cloro, que no se logra plegar bien, por lo que es
- degradada y no llega a la membrana.
- Aparato de Golgi: cara Cis: fusion de vesiculas. Cara Trans: eventos de
- formacion de vesiculas. (regiones recubiertas pro proteinas)
- Modificacion de proteinas, escisiones proteoliticas especificas y clasificacion
- de las proteinas para luego organizarlas en vesiculas.
- Rutas de secrecion:
- - Constitutiva: permanente. Existe en todos los tipos celulares porque asi
- recuparan su membrana mientas transportan las proteinas (perifericas,
- matriz extracelular, fluido extracelular)
- - Controlada: vesiculas provisorias con mayor concentracion de las
- proteinas que llevan. No se fucionan con la membrana hasta que reciben
- una determinada senal. Si no, se acumulan en el citoplasma.
- Endocitosis:
- Pinocitosis: fluido y moleculas en pequenas vesiculas
- Fagocitosis: grandes particulas en fagosomas (vesiculas grandes). Celulas,
- becterias, etc.
- Endocitosis mediada por receptores: el lugar donde se encuentra la clatrina
- posee receptores que concentra las moleculas que se van a endocitar.
- Endocitosis de LDL: el receptor reconoce la particula de LDL y la concentra. La
- clatrina polimeriza, se fomra la vesicula y luego entra a la celula. El material
- endocitado es clasificado por el endosoma, que lo fagocita. El Ph desestabiliza
- el receptor de LDL que se va en una vesicula a la membrana y la LDL es
- llevada a los lisosomas que la degradan dejando disponible solamente el
- colesterol.
- Arterosclorosis: no existe la clatrina y se acumula la particula de LDL.
- (hipercolesterolemia)
- Endocitosis de transferrina: el receptor reconoce la transferrina. Se forma la
- vesicula gracias a la clatrina. El receptor es transportado a la membrana junto
- con el transportador que libero el hierro.
- Transcitosis (clasificacion en el endosoma): llevar el material que entro por un
- dominio de la celula hacia otro dominio celular. Redistribuye componentes de
- membrana. (si se fabrican en un puro sector de la celula se distribuyen por
- transcitosis)
- Digestion celular: degrada moleculas y separa nutrientes aprovechables
- (aminoacidos, glucidos, nucleotidos) contiene una gran cantidad de enzimas
- hidroliticas. Si se endocita una bacteria se fomra un fagosoma, si un organelo
- se denomina autosoma y si son particulas se llama endosoma (temprano y
- tardio). Luego van al lisosoma para digerirse.