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ALQUENOS AISLAMIENTO DE CAROTENOS DE SU

FUENTE NATURAL
(LABORATORIO N 7)
1. Objetivos de la Practica
Extraccin de los pigmentos de la Espinaca (Cloroilas ! Carotenos)
"eparacin (#$todo Cromatogr%ico) de los al&'enos o(tenidos por
cromatogra)a en capa ina*
2. Propiedades fisicoqumicas de los solventes utilizados y
otros mencionados en la gua de tcnicas fundamentales;
O!"#$ %O#!&'(
M

)g*mol
+
,$-.,(
,
)g*cm
/
+
P.f.
)01+
P.e.
)01+
-olubilidad en
122 partes de
32o
Etanol C+,-O, .-*/7 /*701.
+/
2
33.*/
70*. misci(le
4ter de
5etrleo
#e6cla de
,idrocar('ros
7 /*8.//
+/
9 7 :-;0/ Inmisci(le
Acetona C,:COC,: 3*+/3- 3*/+:0
+-
31*8+ +/+*/0 /*--
+/
#etanol C,:O, :+*/. /*713:
+/
2 17*7 8.*7 misci(le
Clor'ro de
"odio
NaCl -0*.- +*38. 0/3*/ 3.8- :-*1
+/
"'lato de
sodio
Na+"O. 3.+*/8 +*88. 00.*/ 2 31*-
+/
Ag'a
,+O
30*// 3*////
.
/ 3// 3//
/. ,iagrama de 4rabajo
Extraccin de las <o=as de Espinaca


>ase ac'osa?
ag'a ! etanol
@ Ag'a Caliente
T 1/ 23// C
A B 3// ml*
,o=as de Espinacas
sancoc<adas
2 >ase l)&'ida? sol'cin org%nica
de color Cerde
2 >ase "lida? ,o=as de Espinaca
sin color
>ase "lida? ,o=as
de Espinaca sin
color
2 >ase Org%nica? 5igmentos
(CloroilaD Carotenos)D etanolD $ter
et)lico ! $ter de petrleo
2 >ase ac'osa? ag'a ! etanol
$54#(11.6 -6'.,O 7 '.8&.,O
9 $tanol: ; < =2 ml
9 >ter $tlico: ; < =2 ml
agitaci?n
%.'4#(1.6
$54#(11.6 '@8&.,O 7 '@8&.,O
9 >ter de petr?leo: ; < 2= ml.
9 32O: ; < 2= ml.
,$1(4(1.6
,o=as >rescas de espinacas en
pe&'eEos tro6os (color Cerde)
Fos <o=as
BaEo en <ielo
T - C

,$1(4(1.6 )-$P(#(1.6+
,+O
T - 23/ C
-$A&,( $54#(11.6
>ase ac'osa? ag'aD
etanol ! pigmentos
9 >ter de petr?leo:
; < 2= ml.
2 >ase Org%nica? 5igmentos
! $ter de petrleo
2 >ase ac'osa? ag'a ! etanol
%.'4#(1.6
>ase Org%nica?
5igmentos ! $ter de
,$-$1(1.6
@Na+"O. an<idro

>ase Org%nica? 5igmentos (CloroilaD
Carotenos)D etanolD $ter et)lico ! $ter
de petrleo
2 >ase Org%nica? 5igmentos
(CloroilaD Carotenos)D $ter et)lico !
$ter de petrleo
2 >ase ac'osa? ag'a ! etanol
>ase Org%nica? 5igmentos (CloroilaD
Carotenos)Den $ter et)lico ! $ter de
petrleo
"ol'cin concentrada de Cloroila !
Carotenos (m'estra madre 'sada en
la cromatogra)a
2 >ase Org%nica? 5igmentos
(CloroilaD Carotenos)D en sol'cin
de $ter et)lico ! $ter de petrleo
2 >ase ac'osa? ag'a ! Na+"O.*n,+O
>ase Org%nica? 5igmentos (CloroilaD
Carotenos)D en sol'cin de $ter et)lico
! $ter de petrleo ! tra6as de ,+O
%.'4#(1.6
,$1(4(1.6
,$-4.'(1.6
'(;(,OB
+ NaCl (ac), V = 10 ml..
>ase ac'osa?
ag'a ! etanol
>ase ac'osa? ag'a !
Na+"O.*n,+O
$ter et)lico ! $ter
de petrleoD
resid'os
5reparacin ! aplicacin de Cromatogra)a en Capa >ina (CC>)?


Aplicacin de la m'estra madre (Carotenos ! Cloroila)
DISOLUCIN
@ ,+OD A B 3: ml*
5apilla de ")lica de gel
Aplicacin de la m'estra en la
placa Cromatog%ica a 3 cm* del
(orde inerior
Retirar la 5laca c'ando este el
solCente a 3 cm* Fel (orde s'perior
#$;$-4.!.$4O ,$ '(- P'(1(-
ReposarG t B - ; 3/ mim*
SECADO:
T 3// C 233/ C
T +/ ; :/ mim*
,$-P'(C(!.$4O
La placa dentro 'n Caso con solCente
$;(PO#(1.6 ,$' -O';$4$
A medio am(iente (reposar 3 2 + min*)

5reparacin de la capa
")lica gel en polCo
H B - gr*
Toma de datos
Experimentales ID $ J
Calc'lo de R
5lacas Cromatogr%icas
Y
X
R
f
=
I ? Fistancia recorrida de la m'estra
J ? Fistancia recorrida del "olCente
D. Observaciones $Eperimentales
FKRANTE LA EITRACCILN
La extraccin se parte a partir de las <o=as rescas de EspinacasD los c'ales
son tro6ados ! s'mergidas en ag'a <erCida por 'no tres min'tos aproximadamenteD
se de= enriar para l'ego decantar el ag'a*
L'ego se procedi a la extraccin de los pigmentos de las <o=as de espinacas
'sando para ello los solCentes polares etanol ! $ter et)licoD la extraccin es slido ;
L)&'idoD agitando d'rante 'nos 3/ min'tos se apreci &'e las <o=as de las Espinacas
empe6aron a perder s' colorD &'edado pr%cticamente (lancasD toda la operacin se
<i6o en la campana extractora* La sol'cin org%nica ormada de coloracin Cerdosa
es decantada de las <o=as de Espinacas decoloreadas* En esta etapa de la Extraccin
el solCente adec'ado es el #etanolD pero de(ido a s' Colatilidad ! alta toxicidad se
'tili6a el etanol con el c'al tam(i$n se o(tiene res'ltados satisactorios*
La sol'cin Org%nica o(tenida es iltrada con 'n papel de iltro r%pido
directamente <acia el em('do de separacinD pero de(ido a las imp're6as extra)das
='ntos con los pigmentos el papel de iltro era sat'radoD <aciendo el proceso de iltrado
demasiado lento*
O(tenido la "ol'cin org%nica se procedi con la extraccin L)&'ido ; L)&'idoD
para lo c'al se ('sca cam(iar la polaridad de la sol'cin introd'ciendo en ella 'na
sol'cin de poca polaridad o apolar como es el caso del $ter de petrleo (me6cla de
<idrocar('ros)D se le adiciona a la sol'cin +- ml de $ter de petrleo ! 3- ml de ,+O
de manera &'e los solCentes polares &'eden retenidos en la ase ac'osaD la #e6cla
de(e reali6arse con s'mo c'idado a in de eCitar la ormacin de em'lsionesD algo &'e
paso en n'estro caso se agito con cierta ligere6a la sol'cin &'e dio paso a 'na
em'lsinD pro(lema &'e se s'pero aEadiendo a la sol'cin otra sol'cin ac'osa de
NaClD o(serC%ndose de inmediato la separacin de las dos ase* En la parte inerior de
la pera de decantacin encontr%(amos a la capa ac'osa etanlicaD ! en la parte
s'perior la ase org%nica de coloracin Cerdosa de(ido a la presencia de los pigmentos
en sol'cin de $ter de petrleo ! $ter et)lico* La ase ac'osa es decantada para l'ego
reali6ar n'eCamente so(re esta 'na seg'nda extraccinD o(teni$ndose 'na aprecia(le
cantidad de sol'cin org%nicaD ='nt%ndose con la anterior extraccin la sol'cin es
laCada con 'na sol'cin ac'osa de NaCl para eliminar las tra6as de etanol presenteD
para posteriormente eliminar la ase ac'osa ormada n'eCamente*
"e proc'ra &'e la sol'cin org%nica este a'sente de ag'a para ello se le
adiciona Na+"O. an<idro a in de desecar la sol'cin org%nicaD posteriormente es
iltrada la sol'cin org%nica directamente <acia el (aln de destilacinD destil%ndose
a)n de concentrar la sol'cin org%nica de color CerdeD rec'per%ndose de la destilacin
el $ter de petrleo ! el $ter et)lico &'e comien6a a destilar desde -- ;-8 C <asta los
33. ;33- C* O(teni$ndose inalmente 'na sol'cin concentrada de Carotenos !
Cloroila la c'al se 'tili6 en la cromatogra)a de capa ina*
FE LA 5LACA CRO#ATOMRN>ICA
Las placas cromatogr%icas se preparan a partir de la s)lica gel en polCoD para
ello se toma - gr* de esta para preparar 'na papilla con 3: ml de ag'aD papilla
(lan&'ecina la c'al es aplicada so(re la s'pericie de los portao(=etos 'na Ce6
aplicada es lleCada al <orno a 'nos 3// ; 33/ C*
O(tenidas las placas cromatogr%icas se 'tili6aron solamente tres de estas
colocando tres gotas de la sol'cin de los pigmentos (Carotenos ! Cloroila) a 3 cm*
Fel (orde inerior de la placaD para posteriormente introd'cirlas en 'n (aso con
solCenteD en los tres casos los solCentes 'eron distintosD siendo? Acetona al -OD
acetona al +/O ! 4ter de petrleoD en donde se p'do apreciar la di'sin del solCente
a traC$s de la placaD sac%ndose las placas de las sol'ciones ='sto c'ando estas al
llegado a 3 cm* Fel (orde s'perior*
"e p'do apreciar &'e los pigmento tam(i$n se di'ndieron a traC$s de la placa
en el caso dela acetona al -O se aprecio &'e los pigmento se di'ndieron en
sim'ltaneo a 'na misma posicinD o(serC%ndose claramente 'na manc<a Cerde en la
posicin de inicio ! otra amarilla en la posicin inal* El caso de la acetona al +/O se
aprecio 'n a gama de manc<as de tonos osc'rosD ca$sD Cerde osc'rasD Cerdes clarasD
Cerde amarillentas desde la posicin de inicio <asta casi la mitad de la placa ! 'na
manc<a amarilla (ien deinida al inalD En el caso del $ter de petrleo se Cio &'e la
di'sin de los pigmentos 'e mininaD o(serC%ndose 'na manc<a Cerde al inicio ! otra
amarilla casi cercana a esta* "e ensa!o tam(i$n con acetona p'raD donde se o(serCo
&'e la manc<a no logra di'ndirse permaneciendo en la misma posicin de inicio*
Fe la placas de toma las distancias alcan6ada por el solCente (J)D la de los
carotenosD manc<a amarilla la ma!or intensidadD (I) de los c'ales se calc'lo la
relacin R B IPJ*
=. #esultados
Fe la practica tenemos los sig'ientes datos?
"OLAENTE" J (cm) I (cm)
Acetona p'ra -*7 /*/
Acetona al -O -*1 .*8
Acetona al +/O -*0 -*3
4ter de petrleo -*7- /*0
Fe la relacin dada?
Y
X
R
f
=
I? Fistancia recorrida por la m'estra (medida en el p'nto de m%xima intensidad)
J? Fistancia recorrida por el solCente*
o(tenemos los sig'ientes res'ltados?
"OLAENTE" R
Acetona p'ra /*/
Acetona al -O /*7717
Acetona al +/O /*071:
4ter de petrleo /*3:13
F. (nGlisis de resultados y 1onclusiones
Fe las placas cromatogr%icas se p'ede decir entonces &'e en este caso para
los carotenos ! cloroilaD c'ando se 'tili6 la acetona se Cio 'na di'sin marcada de
los pigmentosD siendo ma!or c'ando se 'tili6 la acetona al -O (sol'cin polar) pero
la separacin entre los carotenos ! la cloroila no es notorio se di'nden ='ntosD ! en el
caso de la acetona al +/O se Ce 'na marca separacin entre los carotenos ! la
cloroila disting'i$ndoles <asta 'nas oc<o mac<as (sol'cin de menor polaridad) !
c'ando se 'tili6 La acetona p'ra no se o(serCo ning'na di'sin (solCente
relatiCamente polar)D c'ando se 'tili6o $ter de petrleo (solCente apolar) se Cio 'na
di'sin pe&'eEa pero no se logro separar la cloroila ! los carotenos* Ello tiene m'c<o
&'e Cer con la adsor(ancia de la silica de gel (a(sor(ente) ! la polaridad del solCente*
Q5ORRKE LA FI>ERENCIA FE RS
Los comp'estos no polares con (a=a ainidad por la s'pericie del a(sor(enteD
pasar%n la ma!or parte de s' tiempo en el solCente !D por lo tantoD se despla6ar%n
%cilmente ='nto a $l* CorrespondientementeD las mol$c'las polares ! polari6a(lesD con
alta ainidad por los adsor(entes polaresD ser%n adsor(idas 'ertemente so(re s'
s'pericie ! por lo tantoD se despla6ar%n lentamente o se despla6aranD como en el caso
de la acetona p'ra* (Lo &'e trae moco consec'encia las distintas constantes de R)* A
m%s polar el solCente de el'sinD m%s r%pidamente se despla6aran los componentes*
5or lo tantoD la seleccin del solCente estar% i=ada por la nat'rale6a de los
componentes a ser separados? solCentes polares para comp'estos 'ertemente
adsor(idos ! solCentes no polares para mol$c'las d$(ilmente adsor(idos*
QRK4 "OLAENTE K"ARTA 5ARA "E5ARAR CLORO>ILA J CAROTENO" EN
KNA COLK#NAS
En 'na cromatogra)a en col'mna los comp'estos de la me6cla son contin'os !
reCersi(lemente adsor(idos so(re el slidoD l'ego des adsor(idos por accin del
el'enteD mientras desciende lentamente a traC$s de la col'mna
El solCente <a 'sar en 'na cromatogra)a en col'mna ser)a el $ter de petrleo
por &'e los comp'estos no polares slo son d$(ilmente adsor(idos por el adsor(ente
! son %cilmente el')dos con solCentes no polares* 5or el contrarioD los comp'estos
polares son 'ertemente a(sor(idos ! solo p'eden el')dos con solCentes relatiCamente
polares* Kna Ce6 separado los pigmentosD para acelerar la el'sin de las cloroilas se
'sar)a la acetona al +/O de(ido a s' relatiCa polaridad permitiendo &'e el adsor(ente
li(ere r%pidamente a estos*
Otros aspectos &'e a tomarse en c'enta es la Celocidad de descenso del
solCente por la col'mnaD podr)a ser &'e en 'n momento se torne lenta o detenerseD a
consec'encia del empa&'etamiento del adsor(enteD esto podr)a s'perarse con 'na
s'ccin con Caci a in de acelerar el descenso del solCente*
H. #eferencia "ibliogrGfica
Re!na 5* A)ctorD Cromatogra)a D M')a de practicas de La(oratorio
>ac'ltad de Ciencias K*N*I* Lima ; 5erU
Ma'c<erD M* V* C<em* Ed* .8
5ag 781 ;7::D 3181* WAn Introd'ction To C<romatograp<!X*

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