Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
MICROORGANISMOS ANAEROBIOS
Profesora Martha Murcia Aranguren
INTRODUCCION:
Los microorganismos anaerobios obligados son aquellas bacterias que crecen en
ausencia de 0
2
libre. No crecen en la superficie de medios cuando se incuban en
aerobiosis (21 % O
2
) o en incubador de CO
2
(5% al 10% de CO
2
), o en jarras con vela
ya que la cantidad de O
2
es del 18% - 19%. Los anaerobios han dividido en
anaerobios obligados, los cuales se subdividen en 2 grupos: anaerobios obligados
estrictos que son los que no son capaces de crecer en agares expuestos a niveles de
O
2
mayores al 0.5 %, por ejemplo Clostridium haemlyticum, Clostridium novy tipo B
Selenomonas ruminatium, Treponema dentcola y el grupo de los anaerobios
obligados moderados, que son bacterias que pueden crecer cuando se exponen a
niveles de O
2
del 2% al 8 %, por ejemplo: Bacteroides fragilis, Prevotella y
Porphyromonas (pigmentadas), Clostridium perfringes, Fusobacterium nucleatum. Los
llamados anaerobios aerotolerantes corresponden a aquellos anaerobios que pueden
crecer pobremente en agares expuestos al aire o en incubadores de CO
2
, pero que
crecen abundantemente en condiciones anaerobias, por ejemplo: Clostridium carnis,
Clostridium histolyticum y Clostridium tertium. La mayora de anaerobios aislados de
muestras clnicas en humanos son anaerobios obligados moderados, aunque son ms
resistentes al O
2
que los anaerobios obligados estrictos, tambin son destruidos por
O
2
, por lo que deben mantenerse las condiciones anaerobias en la toma, transporte y
procesamiento de la muestra, para poder recuperarlos.
Los microorganismos microaerfilos requieren O
2
como aceptor final de electrones,
pero no crecen en aerobiosis y crecen mnimamente en anaerobiosis, para su
desarrollo se agrega una mezcla de gases (5% O
2
, 10 % C O
2
y 85% NO), por ejemplo
Campylobacter jejuni.
Se cree que en los microorganismos anaerobios aerotolerantes, su aerotolerancia se
deba a la produccin de superxido dismutasa, catalasa y posiblemente enzimas
peroxidasas, que las van a proteger contra las formas txicas de reduccin del O
2
,
como el radical superxido (O
2
-) y el perxido de hidrgeno (H
2
O
2
), los cuales pueden
reaccionar ambos para producir radicales hidroxilo libres (OH), que son los oxidantes
ms poderosos conocidos, tambin pueden producir formas txicas solas de (-0
2
). La
superxido dismutasa cataliza la conversin de radicales superxido a formas
menos txicas de perxido de hidrgeno y a O
2
molecular. La catalasa cataliza la
conversin de perxido de hidrgeno para formar H
2
O y O
2
.
Los microorganismos anaerobios estn ampliamente distribuidos en suelos,
pantanos, aguas residuales, ros, ocanos, alimentos, animales. Constituyen el
mayor nmero de microorganismos que hacen parte de la flora normal humana,
predominando en cavidad oral alrededor de los dientes (especies de Prevotella
pigmentadas y no pigmentadas, Porphyromonas spp, Bacteroides spp,
Fusobacterim spp, Peptpstreptococcus sp, Veillonella sp, Actinomyces y
Propionibacterium) en tracto gastrointestinal (Lactobacillus y Streptococcus)
especialmente en colon (Bacteroides fragilis, Porphyromonas sp,
2
Fusobacterium sp, Clostridium sp, Eubacterium sp, Bifidobacterium sp,
Propionibacteium sp, cocos anaerobios de diferentes especies) donde estn en
una relacin 1000:1 con los coliformes, tambin en tracto genitourinario vagina
y cervix (Prevotella pigmentada y no pigmentada, Porphyromonas spp,
Bacteroides, Peptostreptoccus sp, Clostridium sp) en uretra masculina y
femenina (Peptpstreptococcus sp, Propionibacteium sp, Fusobacterium sp
Prevotella sp) y en piel (Peptpstreptococcus sp, Propionibacterium sp). La
mayora de estos habitats anaerobios tienen baja tensin de O
2
y bajo
potencial de oxidorreduccin a causa de la actividad metablica de los
microorganismos que consumen O
2
en la respiracin y al no haber restitucin
de O
2
el microambiente permanece anaerbico.
Los anaerobios pueden producir infeccin en cualquier sitio del organismo,
cuando se disminuye la tensin de oxgeno y el potencial de oxido reduccin en
el tejido (traumatismo, necrosis tisular, stasis vascular, etc.. La mayora de
abscesos profundos y de lesiones necrticas que involucran anaerobios son
polimicrobianas, e incluyen bacterias aerobias y anaerobias facultativas tales
como coliformes o enterococos.
CLASIFICACIN:
Se han producido numerosos cambios en la clasificacin toxommica de los
anaerobios, agrupando numerosas especies. En base a su capacidad para formar
esporos y sus caractersticas morfolgicas con la tincin de Gram se clasifican en:
BACILOS GRAM POSITIVOS ESPORULADOS: (Clostridium sp)
BACILOS GRAM POSITIVOS NO ESPORULADOS: Actinomyces,
Bifidobacterium, Eubacterium, Lactobacillus, Propionibacterium, Arcanobacterium.
BACILOS GRAM NEGATIVOS (Formas curvas y espiriladas): Bacteroides,
Borrelia, Butyrivibrio, Campylobacter, Fusobacterium, Selenomonas, Succinivibrio,
Treponema, Mobiluncus, Porphyromonas, Prevotella, Sutterella.
COCOS GRAM POSITIVOS: Peptostreptococcus, Peptococus, Ruminococcus,
Sarcina, Streptococcus, Straphylococcus, Gemella.
COCOS GRAM NEGATIVOS: Acidaminococcus, Veillonella.
Entre los gneros y especies de inters mdico ms frecuentemente aislados estn:
Bacteroides fragilis, Prevotella melaninogenica, Fusobacterium nucleatum,
Peptostreptococcus magnus, Peptostreptococcus anaerobius, Peptostreptococcus
asaccharolyticus, Peptostreptococcus prevotii, Peptostreptococcus, micros,
Propionibacterium acnes, Eubacterium lentun, Actinomyces israelli, Arachnia
propionica, Clostridium perfringes, Clostridium ramosum, Clostridium septicum,
Clostridium difficile, Clostridium tetan, Porphyromonas asaccharolytica, Streptococcus
constellatus, Streptococcus intermedis, Straphylococcus saccharolyticus, Veillonella
sp, Bifidobacterium sp. Lactobacillus sp
El Clostridium perfringens cada da tiene mayor importancia como agente productor de
3
intoxicacin alimenticia. Es un microorganismo que normalmente se encuentra en el
suelo, agua, tracto intestinal del hombre y animales. Tambin se le puede encontrar en
enlatados, La mayora de los casos de intoxicacin por. C perfringes, son causadas
por comidas que han sido cocinadas y luego enfriadas lentamente durante la noche y
luego consumidas despus de ser calentadas inadecuadamente.
Los microorganismos anaerobios durante su crecimiento y proliferacin producen
enzimas, toxinas, cidos grasos voltiles de cadena corta y no voltil, que adems de
ser factores de virulencia sirven para diagnstico.
DIAGNOSTICO:
Existen ayudas clnicas acerca de la presencia de las infecciones anaerbicas que
permiten al mdico hacer un diagnstico tentativo: por sus antecedentes, factores
predisponentes (disminucin del riego sanguneo), presencia de abscesos, tejido
necrtico con formacin de gas, olor ftido, lesiones adyacentes a superficies que
alojan anaerobios como flora normal.
Debe hacerse el diagnstico tentativo de infeccin por anaerobios para obtener una
buena seleccin, recoleccin, transporte de los especmenes clnicos para tener un
adecuado aislamiento de bacterias anaerobias, evitando la contaminacin con flora
normal, y que el oxgeno sea letal para ellas; dando resultados equivocados y creando
el riesgo de suministrar informacin errnea. Siempre que sea posible debe usarse
una jeringa y una aguja para recolectar las muestras para cultivo, anaerobio, la cual
debe taponarse con un corcho para llevarla inmediatamente al laboratorio.
Son MUESTRAS INADECUADAS PARA EL AISLAMIENTO DE ANAEROBIOS:
escobillados farngeos, nasofarngeos y gingivales, esputo, contenido gstrico,
contenido intestinal, materia fecal, escobillado rectal, lceras superficiales de decbito,
piel mucosa, orina escobillados vaginales o cervicales.
Son MUESTRAS ADECUADAS PARA EL AISLAMIENTO DE ANAEROBIOS:
material de aspiracin de pus de abscesos, orina por puncin suprapbicas, muestras
transtraqueales, etc. Biopsias, muestras quirrgicas, material de autopsia, lquido
asctico, lquido cefalorraqudeo, lquido pericrdico, lquido pleural, lquido sinovial.
DIAGNOSTICO DE LABORATORIO:
El espcimen clnico debe ser procesado con prontitud. La tincin de Gram es
importante porque puede brindar evidencia presuntiva inmediata sobre la presencia de
anaerobios, los medios de cultivo deben incluir tipos no selectivos y enriquecidos.
Durante su proceso debe evitarse su exposicin al oxgeno atmosfrico.
La incubacin debe hacerse en atmsfera de anaerobiosis; el mtodo ms usado en
nuestro medio es la jarra anaerbica de GASPAK que tiene un catalizador el paladio,
un sistema de sobres generadores de gases (H
2
-CO
2
) los cuales se obtienen al
agregar agua destilada, reducindose el oxgeno presente en la jarra al combinarse
con el H
2
generado, segn la reaccin: H
2
-CO
2
+O
2
= H
2
O+CO
2
. Se debe incorporar un
indicador de anaerobiosis. Tambin se puede utilizar la cmara de guante. Los medios
de cultivo empleados son: agar sangre anaerbico con vitamina K y hermina
(medio selectivo anaerobios Gram + y Gram -, inhibe anaerobios facultativos), caldo
4
tioglicolato (medio de enriquecimiento), agar sangre con fenil etil alcohol (selectivo
inhibe el crecimiento de anaerobios facultativos), agar sangre con Kanamicina,
vancomicina (selectivo para el aislamiento de anaerobios: Bacteroides spp, Prevotella
sp, Fusobacterium sp y Veillonella sp, inhibe anaerobios Gram + y anaerobios
facultativos), agar frustuosa con cicloserina cefoxitina (selectivo aislamiento de
Clostridium perfringes), agar sangre con paromomicina- vancomicina (selectivo
inhibe anaerobios facultativos, til para el aislamiento de Bacteroides; Fusobacterium y
Veillonella) .
Se deben practicar pruebas de aerotolerancia a cada tipo de colonia (para detectar las
bacterias anaerobias facultativas y para la identificacin de especies anaerbicas,
adems pruebas bioqumicas, crecimiento en bilis al 20%, etc. Otro mtodo
diagnstico de especies de microorganismos anaerbicos es la identificacin de
cidos grasos, que son metabolitos de los anaerobios, este estudio se hace por
cromatografa de gases comparndolos con patrones previamente establecidos.
IMPORTANCIA CLINICA
Los microorganismos anaerobios son responsables de una gran variedad de cuadro
clnicos de origen exgeno tales como: diarrea nasocomial por Clostridium perfringes,
botulismo, gangrena gaseosa, ttanos, celulitis crepitante, infecciones benignas
superficiales, aborto sptico infecciones post mordeduras. De origen endgeno:
abscesos cerebrales, infecciones dentales y periodontales, sinusitis crnica, abscesos
pulmonares, neumona necrotizante, empiema, bacteremia, septicemia, endocarditis,
abscesos hepticos y subhepticos subdiafragmticos, infecciones abdominales,
abscesos plvicos en mujeres, endometritis, abscesos tuboovricos, celulitis
necrotizante, meningitis, osteomielitis, otitis media, peritonitis, artritis sptica, empiema
subdural, ttanos, etc.
OBJETIVOS DE LA PRCTICA
Familiarizar al estudiante con los grmenes anaerobios.
Conocimiento y manejo del Sistema GaspaK.
Conocimiento de los medios de cultivo empleados para su aislamiento.
Observacin de la morfologa, reaccin al Gram. agrupacin celular, morfologa
colonial, etc., para lograr una identificacin presuntiva.
MATERIALES
Jarras anaerbicas,
Sobres generadores GaspaK,
Agua destilada,
Catalizadores,
Indicadores de anaerobiosis,
Cepas de anaerobios en caldo tioglicolato,
Agar sangre anaerbico,
Caldo de carne glucosa,
Medio de leche,
5
Aceite mineral
Colorantes de Gram
Colorantes de SHAFFER-FULTON
Frotis con bacilos esporulados,
Pipetas pasteur estriles,
Lminas.
MTODOS
1. Coloree el frotis entregado con colorantes de SHAFFER-FULTON.
2. Siembre la capa asignada con pipeta Pasteur en: agar sangre anaerbico, caldo
de carne glucosa, medio de leche.
3. A los medios lquidos sembrados agregue aceite mineral.
4. Las cajas colquelas invertidas en la jarra de anaerobiosis
5. Agregue al sobre generador GASPAK 10 ml de agua destilada y colquelo
dentro de la jarra.
6. Coloque dentro de la jarra el indicador de anaerobiosis.
7. Tape la jarra e incube de 48 a 72 horas, a 37C.
8. Observe las caractersticas de las colonias
9. Haga frotis a partir de medios lquidos y slidos. Coloree con Gram. Describa lo
observado.
10. Observe el medio de leche y describa sus cambios.
BIBLIOGRAFA
Garca J : Clostridium en Pumarola A. Microbiologa y Parasitologa Mdica 2
edicin, Barcelona : Salvat editores, 1.987:387-400
Garca J : Anarobios no esporulados en Pumarola A. Microbiologa y Parasitologa
Mdica 2. Edicin, Barcelona : Salvat editores, 1.987: 403-412
Koneman E, Allen SD, Janda W, et al: The anaerobic bacteria in Koneman E. Allen
SD, Janda W, et al : Diagnostic, Microbiology. 5
th
ed, New York Lippincott, 1.997:
709-777
Baily Scott. Diagnstico Microbiolgico. 6. Edicin, Buenos Aires: Panamericana,
1.983 :317-339Allen Sd. Gram- positive, nonsporeforming anaerobic bacilli. In
Lenette EH, Ballows A, Hausler UJ Jt, et al (eds) : Manual of Clinical Microbiology,
4
th
ed, Washington DC. American Society For Microbiology, 1.985:461-472