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MICROSCOPIO: BASES Y APLICACIONES

FORMAS Y TIPOS CELULARES



OBJETIVOS

Conocimiento y manejo del microscopio ptico comn

Realizacin de preparaciones microscpicas sencillas.

Observacin de clulas procariotas y eucariotas (animales y vegetales)

La unidad de organizacin de los seres vivos es la clula. Esta puede ser estudiada bajos
distintos aspectos: morfolgico, qumico y fisiolgico.
A cada uno de estos aspectos le corresponden mtodos de estudios particulares.

METODOS DE ESTUDIOS MORFOLOGICOS

Los estudios morfolgicos se realizaron mediante el uso de instrumentos de aumento
denominados microscopios

El microscopio de luz es un sistema ptico de lentes convergentes que cumplen Ia funcin
de aumentar Ia irnagen de un objeto.


CARACTERISTICAS Y FUNCIONAMIENTO DEL MICROSCOPIO

Entre los instrumentos pticos conocidos con el nombre de microscopio se incluyen los
llamados microscopios simples o lupas, compuestos por una sola lente, o un solo sistema de
lentes convergentes; y los microscopios compuestos, cuya parte ptica consta de dos lentes,
o dos sistemas de lentes convergentes: ocular y objetivo.
El micoscopio simple da una imagen aumentada, derecha y virtual. El microscopio
compuesto da una imagen aumentada, invertida y virtual.

DESCRIPCIN DEL MICROSCOPIO COMPUESTO

En el microscopio distinguimos un sistema ptico, destinado a la iluminacin y obtencin de
una imagen muy aumentada del objeto examinado; y un sistema mecnico, cuya finalidad es
la de sostener convenientemente los elementos pticos y los preparados que se examinan.

Sistema mecanico

Recibe tambin el nombre de estativo o montura del microscopio. Consta de pie, columna,
tubo, mecanismo de movimiento y platina.


PIE Soporte sobre el cual se apoya el microscopio.
La COLUMNA es un vstago articulado con el pie.
TUBO Es un tubo hueco que separa los dos grupos de lentes (ocular y objetivo).


Mecanismo de movimiento:
TORNILLO DE ENFOQUE (MACROMTRICO)
Acerca o aleja rpidamente el objetivo a la preparacin para hacer un enfoque aproximado.
Se usa slo con los objetivos de menor aumento.

TORNILLO MICROMTRICO Permite enfocar con precisin, moviendo muy lentamente el
objetivo

REVLVER PORTAOBJ ETIVOS Permite colocar en posicin de trabajo a los distintos
objetivos con que cuenta el microscopio. Presenta unas ranuras que facilitan la fijacin del
objetivo en la posicin correcta.

PLATINA Es la superficie sobre la cual se colocan las preparaciones. Tiene un orificio en su
centro para permitir el paso de la luz. En algunos microscopios est dotada de un sistema
con dos tornillos que permiten el desplazamiento preciso de la preparacin.

PINZAS Sirven de sujecin de la preparacin sobre la platina.

TORNILLO DEL CONDENSADOR Permite subir o bajar el condensador respecto a la platina
para mejorar la iluminacin.
Parte Optica: esta parte consta de los siguientes elementos:
Dos sistemas de lentes convergentes centradas: Objetivo y Ocular.
Condensador.
Diafragma.
Fuente luminosa.
1. Objetivo: Llamado asi porque se halla prximo al objeto a examinar. Es un sistema de
lentes ubicadas en la parte inferior del tubo. Existen dos tipos de objetivos: los objetivos
secos y los objetivos a inmersin. Los objetivos secos son aquellos en los que entre la lente
y el objeto existe una pequea capa de aire. Este tipo de objetivos son los de menor
aumento. Los objetivos a inmersin son aquellos en los cuales se interpone entre Ia lente y
el objeto un liquido (aceite de cedro) el cual tiene un ndice de refraccin que es semejante al
del cristal de la lente.
2. Ocular: es llamado de sta forma porque se halla prximo al ojo del observador. Est
formado por un sistema de lentes convergentes. Los microscopios pueden tener dos
modelos de oculares: modelos de un solo ocular (monocular) o modelos con dos oculares
(binoculares). Su funcin es la de aumentar la imagen proyectada por el objetivo.
3. Condensador: recibe la luz y la intensifica, permitiendo una mayor claridad de Ia imagen.
4. Diafragma: su funcin es la de graduar la cantidad de luz que reciba el objeto.
5. Fuente luminosa: es una lmpara que se encuentra al pie del microscopio. Habitualmente
los microscopios la tienen incorporada. En el caso nuestro, la luz es provista por un foco, que
es captada por un espejo que posee una cara plana y otra cncava, que proyectan el haz de
rayos que iluminan el objeto, dirigindolo hacia el eje ptico.

Formacin de la imagen en el Microscopio

La imagen en un microscopio se forma por Ia transmisin de los rayos provenientes de una
fuente luminosa a travs del objeto. Los rayos luminosos atraviesan el diafragma, que a
manera de iris, delimita el dimetro del haz lumnico que penetra por el condensador. Este
ltimo, est formado por un sistema de lentes convergentes que concentra y proyecta el haz
lumnico sobre el objeto a examinar, a travs de la abertura de la platina. El objetivo recoge
la luz que atraves el objeto examinado y proyecta una imagen real, invertida y aumentada
que se forma dentro del tubo y que es recogida por el ocular que es la segunda lente, la cual
forma una imagen virtual, invertida y aumentada del objeto examinado.

Se tienen dos lentes: Objetivo y ocular y un objeto. Este objeto lanza un rayo paralelo
sobre el lente objetivo que pasa por el foco y un rayo que pasa por el foco y se refleja
paralelo, formando con el choque de estos 2 rayos la imagen 1, que entra a ser objeto para
el lente ocular (2do lente), esta imagen 1 que es "objeto" refracta un rayo por el centro del
lente y otro rayo paralelo que pasa por el foco formando asi con las prologanciones de estos
rayos la imagen 2, que es la imagen final observada por nosotros.
Aumento:
E s l a p r o p o r c i n e n t r e e l t a ma o d e l a i ma g e n
o b s e r v a d a a l microscopio y el tamao real del objeto. El aumento total puede
calcularse como el producto del aumento del ocular por el del objetivo.
Cada lente objetivo lleva inscripto su aumento: 5X, 10X, 40 X o 100X. (el signo X significa
aumento)
La imagen aumentada producida por el objetivo, es tomada por el ocular, y magnificada
nuevamente. La imagen definitiva (que es invertida, respecto a la original)
resulta del producto entre el aumento del objetivo por el aumento del ocular.

Por ej:
OCULAR 10x OBJ ETIVO: 40x

AUMENTO TOTAL: 1Ox40=400X

Profundidad de campo o de foco o poder de penetracin:

Es el espesor del preparado que se observa con nitidez, es decir, profundidad de
planos que estn en foco en un momento dado. Con aumentos medianos o
grandes, al mover el tornillo micromtrico, podemos observar slo pequeos
espesores con nitidez, mientras que por encima y por debajo de esta zona la imagen se
desvanece. La profundidad de foco guarda relacion inversa con el aumento: es menor cuanto
mayor es el aumento utilizado. Con aceite de inmersin la profundidad de campo es muy
escasa.

Poder de resolucin (PR):

E s l a capaci dad de l as l entes de di s ti ngui r o res ol ver (mostrar
separados) con nitidez dos puntos situados muy prximos entre s. Se expresa
como la distancia mnima que permite dar una imagen bien definida de dos puntos,
en vez de verlos como uno solo. Cuanto mayor es el poder de resolucin (PR), menor
es la distancia que separa los puntos entre s sin que estos se confundan. En
consecuencia, cuanto mayor sea el poder resolutivo del objetivo, ms finos sern los
detalles de la preparacin que puedan distinguirse. Puede determinarse en base a la
longitud de onda de la luz utilizada () y directamente proporcional a la apertura numrica
(AN) . El valor de AN varia con cada objetivo y esta inscripto con nmeros decimales
pequeos en cada uno de ellos. El PR se puede estimar indirectamente calculando el limite
de resolucin.

Limite de resolucion (LR) :

Es la distancia mnima que puede existir entre dos puntos para que puedan ser distinguidos
como tales. Nuestras posibilidades de estudiar los componentes de los distintos niveles de
organizacin de la materia viva estn limitados por el poder de resolucin del ojo humano,
que puede distinguir dos puntos separados por 0,1mm o mas, del microscopio ptico cuyo,
limite de resolucin es de 0,2 m y del microscopio electrnico que alcanza un lmite
resolutivo de aproximadamente 4 A. Por ejemplo: si fotografiamos con el microscopio ptico
dos lneas que estn a menos de 0,2mm de distancia entre si , la fotografa podra ampliarse
indefinidamente, pero las lneas siempre se veran como una soal.

LR=x0.61/AN

El lmite de resolucin es INVERSAMENTE PROPORCIONAL al poder de resolucin, es
decir que al aumentar el poder de resolucin se pueden diferenciar puntos que estan
separados entre si a distancias cada vez menores (a mayor PR, menor LR)











1 CENTMETRO (cm) =10
-2
METROS (metros) =1/100 m
1 MILMETRO (mm) =10
-3
METROS (m) =1/1000 m =1/10 cm
1 MICRMETRO (m) =10
-3
cm =1/1000 cm
1 NANMETRO (nm) =10
-9
(metros) m =1/1.000.000.000 m =1/1.000.000 cm
1 METRO =10
2
cm =10
3
mm =10
6
m =10
9
nm
1Anstrong =1 =1/10 nm =10
-8
cm



El nivel de observacin se halla limitado por el poder de resolucin del microscopio utilizado.
El poder de resolucin de cada microscopio, determina entonces, un limitado rango de
dimensiones dentro del cual deber estar la estructura biolgica en estudio para que pueda
ser discriminada.

Existen distintos tipos de microscopios en la actualidad entre los cuales podemos
nombrar:

MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA

Se basa en que una sustancia natural de las clulas o un colorante fluorescente
aplicado al corte es estimulado por un haz de luz, emitiendo parte de la energa absorbida
como rayos luminosos. Siendo escasas las molculas autofluorecentes, su aplicacin ms
difundida es para revelar una fluorescencia agregada, como en la deteccin de antgenos o
anticuerpos. Tambin se puede inyectar molculas fluorescentes especficas en un animal o
directamente en clulas y usarlas como marcadores.

MICROSCOPIO DE INTERFERENCIA (MI)

Permite determinar las diferencias pticas de las estructuras celulares. Adems se
calcula el peso seco de una clula o de una estructura observada. Tiene la ventaja de reflejar
cambios de color en las clulas vivas. El MI da imgenes tridimensionales (efecto 3D), lo
que con un procesador adecuado nos permite medir el grosor de las muestras observadas.

MICROSCOPIO DE FONDO CLARO

Para formar una imagen a partir de un corte histolgico usa luz visible, por esto la
muestra debe ser lo bastante fina como para que los haces de luz puedan atravesarla.
Tambin se usan mtodos de tincin, segn las necesidades, con el fin de aumentar los
detalles en la imagen. El campo del microscopio est intensamente iluminado, mientras que
los objetos observados aparecen ms oscuros. En general con este microscopio se pueden
alcanzar los 1000 aumentos.



MICROSCOPIO DE LUZ ULTRAVIOLETA

La imagen en el microscopio de luz ultravioleta depende de la absorcin de esa luz
por las molculas de la muestra. La fuente de luz ultravioleta tiene una longitud de onda de
200 nm, La muestra no se puede observar directamente a travs del ocular porque la luz
ultravioleta puede daar la retina. El mtodo sirve para detectar cidos nuclicos, y protenas
que contienen determinados aminocidos. Mediante longitudes de ondas especficas para la
iluminacin se puede obtener mediciones espectrofotomtricas para cuantificar el DNA y el
RNA de cada clula.

MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASE

Se utiliza cuando se necesitan ver objetos incoloros. Se usa una iluminacin por varios sitios
y se miden diferencias de fase para poder "ver" el objeto. Una muestra microscpica
normalmente se visualiza porque su densidad vara de unas zonas a otras. Con iluminacin
de campo claro es muy difcil ver detalles de una muestra completamente transparente,
(todas las zonas son de la misma densidad). Sin embargo, no todas tienen el mismo ndice
de refraccin.

MICROSCOPIA ELECTRONICA

El avance trascendental en la Biologa celular lo constituy el desarrollo del microscopio
electrnico.
El microscopio electrnico utiliza en lugar de un haz de luz (fotones), haces de electrones de
una longitud de onda (0.05 A).Esta longitud de onda resulta 100.000 veces inferior a la de la
luz empleada habitualmente (5500A) y logra un aumento y resolucin muy superior a la de
los microscopios comunes u pticos y permite estudiar la ultraestructura o morfologa
submicroscpica de la clula.



La microscopa electrnica de transmisin se basa en la dispersin de electrones que
inciden y pasan a travs del objeto de manera que la imagen refleja la falta de electrones
que fueron dispersados.
Es el instrumento indicado para el estudio de la ultraestructura de la clula, es decir la
morfologa detallada de los componentes de la misma. Esta capacidad es consecuencia de
su gran poder de resolucin, que resulta de su notable disminucin en la longitud de onda
que utiliza.
La microscopa electrnica de barrido (scanning) utiliza los electrones que se reflejan en
la superficie del objeto y producen una imagen tridimensional.
Una de sus mayores cualidades del ME de barrido es su capacidad de enfocar
simultneamente elementos ubicados en distintos planos, es decir, tienen mucha
profundidad de foco, con lo cual se logra la imagen tridimensional.

DIFERENCIAS ENTRE EL MICROSCOPIO OPTICO Y EL MICROSCOPIO ELECTRONICO
MO ME
Imagen dada por Interferencia de rayos
luminosos
Dispersin de electrones
Fuente Luz (fotones) Filamento de tungsteno
Elementos Lentes: ocular, objetivo,
condensador
Bobinas electromagnticas
Estudian clulas Vivas o muertas Muertas
Observacin de la
muestra
Coloreada o no Sin coloracin o con aumento
de contraste con tcnicas
especiales
Lmite de
resolucin
2500 A a 0.25 micrmetros 10 A a 2 A
Longitud de onda 5500 A (trmino medio) 0.056 A
Aumento 500X a 1500X 20000X a 160.000X con lente
intermedia. 1.000.000X o ms
con aumento fotogrfico
Nivel de
observacin
Estructuras Ultraestructura

La observacin por transmisin (de fotones o electrones) exige que los objetos a estudiar
respondan a ciertas condiciones de espesor y contraste.
Para que la luz o los electrones puedan atravesarlos, el espesor no debe exceder de 10
micrmetros y 0.1 de micrmetro respectivamente.

Nivel de
observacin
Instrumento Dimensin Nivel de estructura
biolgica
Macroscpico
Lmite inferior 0.1 mm
Ojo y lente simple Desde 0.2 mm rgano
Microscpico
Lmite inferior 0.1
micrmetro (m)
Microscopio comn
Varios tipos de
microscopios
Desde 100m hasta 0.2
Desde 1m hasta 0.1
Tejidos
Clulas
Bacterias
Submicroscpico
Lmite inferior 10 A
Microscopio de
polarizacin
Microscopio electrnico
Desde 1000 A hasta 10
A

Componentes celulares
Virus
Macromolculas
Microscpico
Lmite inferior 1 A
Difraccin de rayos X Desde 10 A hasta 1 A Molculas y tomos

Con el microscopio ptico se pueden observar:
La forma general de la mayora de las clulas procariontes
La forma general de las clulas eucariontes
Algunas organelas eucariontes: ncleo, nucleolo/s, cromosomas,
mitocondrias, cloroplastos, flagelos, cilios, centrolos, vacuolas, pared
celular. Estas estructuras se identifican con claridad utilizando alguna
tcnica accesoria de preparacin de la muestra.

No se pueden observar con el M.O.
Las bacterias ms pequeas
La estructura interna de las clulas procariotas
La estructura de las organelas eucariotas
La membrana plasmtica
Los conjuntos membranosos como retculo endoplasmtico rugoso
(RER) y aparato de Golgi, aunque por ciertas tcnicas puede revelarse
su ubicacin
Los ribosomas

ACTIVIDAD N1:
El area le proveer de un preparado fijo con una letra impresa en el portaobjetos, para su
observacin.

1) Ajuste preliminar e iluminacin del campo.
a) Usar el tornillo macromtrico para elevar el tubo o bajar la platina con el fin de que los
objetivos no la toquen al hacer girar el revlver.
b) Girar el revlver de modo que el objetivo de menor aumento (el ms corto) quede alineado
por el ocular.
c) Abrir el diafragma todo lo posible y seleccionar la iluminacin correcta. Para ello utilizar el
condensador y el diafragma, y mover el espejo de manera que capte la luz del foco que tiene
sobre la mesada.
2. Enfoque.
a) Usar el tornillo macromtrico y elevar el tubo o mover la platina hasta que haya un espacio
de aproximadamente 1 cm entre el objetivo de menor aumento y la superficie de la platina.
b) Colocar el portaobjetos sobre la platina y sostener con las pinzas. Mirar a travs del ocular
y elevar lentamente hasta obtener una visin clara.
c) Realizar un enfoque fino de la estructura con el tornillo micromtrico hasta observar con
total nitidez.
d) Hacer girar el revlver y el portaobjetivo de modo que el objetivo de gran aumento quede
alineado con el ocular (asegurndose que el extremo del objetivo no toque el cubreobjeto. Si
esto ocurre debe repetirse toda la secuencia).
e) Si el preparado no se observa con nitidez usar el tornillo micromtrico para el
enfoque final.
f) Si se va a usar el objetivo de inmersin (el ms largo) depositar una gota de aceite
de cedro sobre el portaobjeto. Bajar lentamente el objetivo hasta tocar el preparado y enfocar
con el micromtrico.
3. Prctica.
a) Observe el portaobjetos que presenta la letra A y describa tal coma lo ve a simple vista y
a travs del microscopio ptico.
b) Observe el preparado que posee la letra F. Describa su posicin tal como lo ve a simple
vista y a travs del microscopio ptico.
c) Mire a travs del ocular y mueva el portaobjetos hacia delante lentamente.
Hacia que lado se mueve la letra?
d) Mueva el portaobjetos hacia la derecha. En que direccin se desplaza la letra?
e) Como es la imagen que recibe su ojo con respecto al objeto?

..
..



Actividad N2: PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
Clula procaritica
Las clulas procariotas pertenecen al reino Monera.

Dentro de este reino encontramos a las bacterias que fueron las primeras clulas en
aparecer sobre la tierra , precediendo a las eucariotas
Pueden adoptar distintas formas y por ello tomar nombres particulares, estando en forma
solitaria o en agrupaciones.

Forma de las bacterias
- Cocos: tienen forma esfrica. Los cocos que forman racimos se conocen como
estafilococos.
Otros aparecen en cadena, son los estreptococos.
- Bacilos: tienen forma de bastones. La mayora de los bacilos aparecen en forma individual,
pero pueden aparecer en pares, diplobacilos, o en cadena, estreptobacilos.
- Espirilos: cuando tienen forma helicoidal.
- Vibrios: tienen forma de coma.



Finalidad:
Estudio de las formas y agrupaciones bacterianas

Materiales: cultivo bacteriano en suspensin.



Coloque una gota de la suspensin bacteriana directamente sobre el portaobjetos.
Aplique sobre ella con mucho cuidado un cubreobjetos, coloque en el microscopio y
luego utilice el tornillo micromtrico hasta enfocar.

b) Observe y dibuje los tres tipos morfolgicos fundamentales de bacterias: Cocos,
Bacilos, Espirilos, aislados o agrupados: Diplococos, Estreptococos,
Estafilococos, Sarcinas, Estreptobacilos.















Celula eucariotica


Final idad
Observacin de levaduras


Hemos elegido para esta parte del trabajo prctico las levaduras, hongos eucariontes
unicelulares que se utiliza para conseguir una fermentacin industrial (Saccharomyces
cerevisiae) y que es un organismo capaz de respirar aerbica o anaerbicamente
Pueden hallarse aisladas o en pequeos grupos. Algunas presentan brotes que han sido
originados por el proceso de gemacin (reproduccin sexual).

Materiales:
Levadura fresca de panadera
Tubo de ensayo
Porta y cubreobjeto

Mtodo
1. Tomar una pequea porcin de levadura y colocarla en un tubo de ensayo
2. Agregar agua tibia en cantidad suficiente como para conseguir una suspensin muy
diluida.
3. Colocar una gota de la suspensin en un portaobjeto y cubrir con el cubreobjetos.
4. Observar primero con bajo aumento y luego con el mayor, sin usar el de inmersin

Resultados:
1) Dibujar una parte del campo con las levaduras a pocos aumentos.

2) Dibujar a gran aumento, sealando, si lo observa, ncleo y brotes.


















Diagnostico:

Aumento; ... Aumento:..



Cuestionario:

1) Identifica sobre el siguiente dibujo cada uno de los componentes del microscopio
descritos ms arriba:

































2) Indica qu partes del microscopio estn relacionadas con cada una de las
siguientes funciones:

Sirven para aumentar el tamao aparente del objeto que estamos observando

__________________________________________________________________

Sirven para iluminar correctamente la preparacin

____________________________________________________________

Sirven para sujetar o mover otras partes del microscopio
__________________________________________________________________

3) Las preparaciones se montan empleando unos pequeos vidrios como los que
aparecen en los siguientes dibujos. Seala cmo se llama cada uno de ellos.













4) Determina el aumento total con el que ests observando si empleas la
combinacin de ocular y objetivo que aparece en el dibujo siguiente:



Aumento del ocular: _____________
Aumento del objetivo: ____________
Aumento total: __________________



5) Para observar una preparacin microscpica no basta con situarla en la platina y
poner los ojos en el ocular, sino que hay que seguir un procedimiento cuyos pasos se
deben seguir con meticulosidad.

A continuacin se indican estos pasos, pero estn desordenados; seala poniendo el
nmero que le corresponda delante, el orden en el que debe realizarse este
procedimiento.

____ Asegrate de que est puesto el objetivo de menor aumento y que ste est
suficientemente alejado de la platina.

____ Coloca la preparacin de tal manera que el objeto de observacin quede
situado en el centro del orificio de la platina y, por supuesto, con el cubreobjetos
hacia arriba.

____ Dibuja los objetos observados. El dibujo debe ser fiel a lo que observamos pero
podemos suprimir detalles innecesarios para simplificarlo (por ejemplo, si hay
muchas clulas semejantes en el campo de visin, no es necesario dibujarlas todas,
sino que bastar si nos fijamos en algunas y las dibujamos con precisin). J unto a
estos dibujos debe ir una indicacin de los aumentos con que se ha realizado la
observacin y el tipo de coloracin.

____ Mirando a travs del ocular, y con el objetivo de menor aumento puesto,
asegrate de que el campo de observacin est uniformemente e intensamente
iluminado. Para conseguirlo debers orientar correctamente el espejo hacia la fuente
de luz (o encender la lmpara del microscopio si la lleva incorporada) y abrir a tope el
diafragma.

____ Mirando lateralmente el microscopio acerca el objetivo de menor aumento (el
ms corto) a la preparacin para despus, mirando a travs del ocular, enfocar (con
el tronillo macromtrico) alejndolo

____ Moviendo muy lentamente la preparacin centra la zona ms interesante en el
campo de visin. Si no lo haces as, al cambiar a un aumento mayor puede que no
consigas ver nada ya que cuanto mayor es el aumento, menor es el campo de visin.

____ Pasa al objetivo siguiente girando el revlver y corrige ligeramente el enfoque
con el tornillo micromtrico. En todo momento tienes que asegurarte de que al girar
el revlver has anclado el objetivo perfectamente en su posicin (existe un pequeo
tope que te lo indica).

____ Vuelve a poner el objetivo de menor aumento, levanta el tubo y retira la
preparacin.


6-Teniendo en cuenta la escala de medidas que vimos anteriormente;
En qu unidades se medirn estructuras pertenecientes a cada uno de los
siguientes niveles?

-Nivel macroscpico
-Nivel microscpico
-Nivel ultramicroscpico

7-Qu instrumentos le permiten observar y estudiar estructuras en cada uno de
los niveles anteriores?

8-Cul es el lmite de resolucin de:
-ojo humano
-microscopio ptico
-microscopio electrnico

9 ) Con qu instrumento observara?
a) estructura interna del cloroplasto
b) los diferentes estratos de la piel
c) la forma de las neuronas
d) la membrana plasmtica en detalle
e) eritrocitos.

10.-Es posible observar presencia o ausencia de ncleo celular al microscopio
ptico?

11.- En la tabla que se dibuja ms abajo se detallan algunas caractersticas especficas de
los tipos de microscopios estudiados. Analice cada una y coloque una cruz en el casillero
apropiado al tipo/s de microscopio/s que corresponde
CARACTERISTICA M. ptico M E de
transmisin
ME de
barrido
Tiene el mayor poder de resolucin
Pueden observarse clulas vivas
Permite visualizar detalles de la superficie celular
Se pueden ver ribosomas aislados
Pueden observarse clulas enteras
Puede observarse la estructura interna de una clula
procariota

La observacin mejora con el uso de colorantes
Puede visualizarse una membrana plasmtica cortada
transversalmente

Trabaja en alto vaco
Su lmite de resolucin es de 0.25 micrones
Su lmite de resolucin es de 100 A aproximadamente
Su lmite de resolucin es de 10 A aproximadamente


12) En qu unidades se medirn estructuras tales como las siguientes (Expresa para cada una
de ella su tamao aproximado y luego ordnalas de mayor a menor dimensin) :

a- hgado
b- un paramecio
c- un glbulo rojo
d- un glbulo blanco
e- una bacteria
f- una mitocondria
g- un cloroplasto
h- una neurona
i- el espesor de una membrana
j- la molcula de ADN

13).- Qu instrumentos permitiran observar y estudiar estructuras en cada uno de los niveles
anteriores?

14) En el siguiente cuadro, seale con qu instrumento ptico o electrnico podr observar
cada estructura

TIPOS CELULARES O
ESTRUCTURAS
DIAMETRO PROMEDIO INSTRUMENTO
Microtbulos 4 nm
Estructuras subcelulares nm-m
Virus 10 nm - 0.1m
Micoplasmas, ricketsias 0.1m-1m
Bacterias y algas cianofceas 0.5 m -5m
Levaduras 5m
Protozoos y algas unicelulares 10-200m
Clulas vegetales en general 10-200m
Clulas animales en general 10-60m
Ovulo humano 100m
Ovulo de avestruz 75 mm
Acetabularia (alga ) 80-100 mm


ORGANELAS CITOPLASMATICAS.- NUCLEO


OBJETIVOS
-Observar y reconocer al MO diferentes morfologas
celulares y localizacin de diferentes organelas.
-Esquematizar lo observado a travs de la observacin
e interpretacin de microfotografa electrnica
-Conocer la ultraestructura de los componentes celulares



BASES TEORICAS

Las bases tericas que figuran en las guas de TP tienen como funcin introducir a los
alumnos en el conocimiento del tema a fin de lograr su mejor desempeo durante el mismo,
no pudiendo suplir, al conocimiento que deber lograr mediante la consulta bibliogrfica de
cada caso.
En el TP N 1 se puso de manifiesto que dado que las clulas deben cumplir mltiples
papeles en la enorme gama de seres vivos diferentes, existe tambin una gran diversidad
celular.
Hay, una gran variedad de tamaos y formas celulares y en cada caso la estructura final y la
presencia o desarrollo de estructuras especiales es generalmente consecuencia del proceso
de diferenciacin que permite a las clulas cumplir con una funcin particular.
El siguiente cuadro sinptico presenta un resumen de las diversas estructuras que
presentan las clulas animales y vegetales

glucoclix
Cubiertas celulares cutculas
C pared celular(vegetales)

Membrana plasmtica
Sistema vacuolar
E citoplasmtico
Retculo endoplsmico
Aparato de Golgi
Organelas Envoltura nuclear
L Citoplasma citoplasmticas Lisosomas
Mitocondrias
Ribosomas
Plstidos (vegetal)
U Peroxisomas
Citoesqueleto


L Citosol


envoltura nuclear
A Nucleo carioplasma o matriz nuclear
cromatina (cromosoma en divisin)
nuclolo

Toda clula durante su vida pasa por dos perodos,uno de divisin y otro de
interfase o no divisin
Durante el perodo de interfase toda clula eucariota presenta tres componentes
o compartimentos especiales. Ellos son:

A.-Membrana Plasmtica
B.-Citoplasma
C.-Ncleo

Cada uno de estos componentes contiene a su vez diversas estructuras o
subcomponentes,tal como se ven en el cuadro precedente. De todos ellos nos
dedicaremos a:
1)Retculo endoplsmico rugoso
2)Aparato de Golgi

4)Plstidos

Todas estas estructuras se consideran organelas, ya que para ello cumplen
los siguientes requisitos:
a)estn presentes durante toda la vida de la clula o la mayor parte de ella
b)presentan una morfologa relativamene constante
c)cumplen una funcin particular



Fijaci n:
Tratamiento qumico o fsico que mata rpidamente las clulas y conserva sus
estructuras evitando la aparicin de fenmenos de autlisis o desintegracin.
La observacin por transmisin slo proporciona datos si ciertas regiones del objeto
absorben la luz ms que otras ,es decir, si este objeto presenta contrastes.
En general, los constituyentes celulares tienen muy pocos contrastes unos con
respecto a otros, por lo cual se deben emplear ciertos artificios para aumentarlos.
Es posible amplificar las diferencias muy pequeas que existen entre las diversas
regiones de la clula, recurriendo a montajes pticos que utilizan la naturaleza
ondulatoria de la luz, es el caso del microscopio de contraste de fases y del
microscopio de interferencia.
Por otra parte, se pueden crear artificialmente contrastes a nivel de ciertas
estructuras celulares, para lograrlo, se realizan combinaciones, entre sus
constituyentes qumicos y productos que absorben ciertas longitudes de onda de
luz, llamados colorantes.


Como las clulas vivas poseen un espesor medio de 10 m slo pueden estudiarse en
microscopios lumnicos, clulas aisladas o reunidas formando una capa delgada.
En la mayora de los casos las condiciones de espesor se logran efectuando cortes de no
ms de 5 m, para evitar que la superposicin de estructuras haga la imagen confusa.

Para efectuar cortes con micrtomo es necesario endurecer la muestra (por
congelacin, inclusin en parafina, etc.) previa fijacin.

Tratamiento qumico o fsico que mata rpidamente las clulas y conserva sus estructuras
evitando la aparicin de fenmenos de autlisis o desintegracin.

La observacin por transmisin slo proporciona datos si ciertas regiones del objeto
absorben la luz ms que otras, es decir, si este objeto presenta contrastes.
En general, los constituyentes celulares tienen muy pocos contrastes unos con respecto a
otros, por lo cual se deben emplear ciertos artificios para aumentarlos.
Es posible amplificar las diferencias muy pequeas que existen entre las diversas regiones
de la clula, recurriendo a montajes pticos que utilizan la naturaleza ondulatoria de la luz,
es el caso del microscopio de contraste de fases y del microscopio de interferencia.
Por otra parte, se pueden crear artificialmente contrastes a nivel de ciertas estructuras
celulares, para lograrlo, se realizan combinaciones, entre sus constituyentes qumicos y
productos que absorben ciertas longitudes de onda de luz, llamados colorantes.


TINCIN HEMATOXILINA-EOSINA
La tincin hematoxilina-eosina corresponde a la mezcla de hematoxilina y eosina. La tincin
hematoxilina y eosina es uno de los mtodos mas populares de tincin utilizado en histologa
y medicina diagnostica.

Hematoxilina
Se utiliza en histologa para teir los componentes aninicos (cidos) de los tejidos, a los que
da una coloracin violeta. Tie intensamente los ncleos de las clulas, dado que estos
contienen cidos nucleicos ricos en radicales cidos.
Si bien la hematoxilina es una sal neutra, suele ser denominada como un colorante bsico,
ya que el componente cromgeno reside en el complejo catinico (bsico) de la misma. Es
de notar que la tincin histolgica por hematoxilina no indica tanto la constitucin qumica de
los componentes celulares, sino la densidad de cargas elctricas negativas de los mismos.

Eosina
La eosina es un colorante basfilo (tiene afinidad por las sustancias alcalinas), de uso
ampliamente extendido en el mbito industrial, desde la industria textil hasta el estudio
biolgico e histolgico.

El mtodo supone la aplicacin de la tincin de hematoxilina, que por ser catinica o bsica,
tie estructuras cidas (basfilas) en tonos Azul y Prpura, como por ejemplo los ncleos
celulares; y el uso de eosina que tie componentes bsicos (acidfilos) en tonos de color
rosa, gracias a su naturaleza aninica o cida, como el citoplasma.

Resultados
Ncleo celular: Azul
Citoplasma: Rosa
Musculatura: Rojo , rosa o fucsia
Glbulos rojos: Rojo, anaranjado
Fibrina: Rosa

CIDO PERYDICO DE SCHIFF (PAS)
La tcnica de Schiff, es una reaccin colorimtrica que se usa comnmente en citoqumica.
Utiliza PAS, cido perydico de Schiff, o leucofucsina. La reaccin oxida los grupos
funcionales diol en glucosa y otros azcares, creando aldehdos que reaccionan con el
reactivo de Schiff para dar un color prpura-magenta.
Es una tincin utilizada para detectar glucgeno y otros polisacridos en los tejidos permite
la tincin de componentes celulares que contienen hidratos de carbono, por ejemplo algunas
membranas celulares, clulas caliciformes en la mucosa del intestino, fibras reticulares que
estn rodeados por hidratos de carbono, etc.


Tincion con Nitrato de plata (tcnica de Ramn y Cajal).
En esta tincion las proteinas son detectadas por la reduccion diferencial de los iones
plata que se unen a las cademas laterales de aminoacidos. Donde hay muchas
protenas, t ie de color marron.


Tincion con azul de toluidina:

Es un colorante Bsico, es decir que reacciona con los grupos anionicos de los
componentes del tejido a estudiar. Son los grupos fosfato de los cidos nucleicos (ADN y
RNA), los grupos SULFATO de los glucosaminoglucanos y los GRUPOS CARBOXILO de
las protenas. La reaccin de estos grupos vara segn el pH.

PARTE PRACTICA:
OBSERVACION DE DIFERENTES TEJIDOS Y LOCALIZACION DE ORGANELAS.

Clula vegetal

Finalidad:
*Realizacin de la preparacin microscpica.
*Observacin de los componentes celulares tpicos de una clula vegetal y las
caractersticas del tejido elegido

Materiales:
*Cebolla.
*Acido actico al 50%
*Lugol, azul de metileno o hematoxilina.
*Pinzas, tijera, escalpelo, portas y cubres, cuentagotas.

Mtodo:
1) Interesa como material, la epidermis interna de una escama de bulbo de cebolla.
Para obtenerla, se corta una cebolla en dos mitades. Se separa manual-mente en
cascos, sacando entre cada dos cascos una capa fina y translcida, que es,
precisamente, la epidermis interna, y se lleva a una cubeta de agua (o cpsula de
Petri) para que se desenrolle.
2) Cortar dos trozos de esta epidermis.
3) Un trozo se coloca entre porta y cubre con una gota de agua, cuidando que
quede bien extendido y sin burbujas de aire
4) El otro trozo se sumerge en cido actico al 50% durante 1 2 minutos
(fijacin); luego en el colorante elegido, durante 2 min y posteriormente se coloca
entre porta y cubre para su observacin.

Observacin:
(Recordar que para observar preparados sin teir, debe reducirse la entrada de luz, y
en todos los casos, comenzar con aumentos dbiles)
Las clulas de la epidermis de la cebolla, poligonales y grandes, se hallan
ntimamente adheridas unas con otras.
La pared se destaca muy clara teida por el colorante.
En las clulas vivas se ven los ncleos aplanados (con 2 o ms nucleolos) adosados
a la pared. A medida que las clulas van degenerando, el ncleo se redondea y
tiende a situarse en el centro.
El citoplasma tiene un aspecto bastante claro, en l se distinguen algunas vacuolas
grandes, dbilmente coloreadas.
En algunas ocasiones se observa que la preparacin tiene a manera de mosaico,
otros estratos de clulas; estas proceden de las capas ms internas de las hojas que
facilmente han podido ser arrancadas al desprender la epidermis. Para la
observacin es ms adecuado utilizar las zonas constituidas por un nico estrato
epidrmico.
Es caracterstica de las epidermis vegetales que sus clulas carezcan de
cloroplastos, con excepcin de las clulas estomticas.


1) Dibujar un trozo de epidermis de cebolla a pocos aumentos.

2) Dibujar una clula a gran aumento, sealando pared celular, vacuolas y
ncleo.






Diagnstico:...................... Coloracin:................... Aumento:..............

Plstidos

Objetivo:
Reconocer cloroplastos, cromoplastos y leucoplastos en material vegetal fresco

Caractersticas: Estas organelas exclusivas de la clula vegetal y algas
eucariontes, pueden diferenciarse en plstidos incoloros o leucoplastos y
plstidos coloreados cromoplastos y cloroplastos.

A.-Los leucoplastos estn rodeados por una doble membrana, no contienen
pigmentos y se caracterizan por acumular sustancias de reserva.
B.-Los cromoplastos tambin estn limitados por una doble membrana y
presentan pigmentos diferentes de la clorofila.Su funcin es dar color a las
flores y frutos,a fin de dotarlos de una coloracin atractiva para los animales
que intervienen en la polinizacin y dispersin defrutos y semillas.
C.-Los cloroplastos, de importancia fundamental para la clula vegetal, ya que en
ellos se lleva a cabo el fenmeno de fotosntesis. Poseen clorofila como
pigmento principal, pero, puede tener diversas cantidades de otros pigmentos.
El cloroplasto posee forma ovoide o de disco biconvexo con 10 um de largo x 3um de
dimetro. Est limitado por dos membranas que no presentan puntos de
contacto. En el interior presenta una matriz o estroma, donde se encuentran
ribosomas pequeos (tipo procarionte) y una molcula de ADN circular y un
sistema de membranas.
Las membranas internas del cloroplasto se disponen formando vesculas
aplanadas llamadas tilacoides.Estos se agrupan como pilas de moneda
formando los grana.Los grana tambin estn comunicados entre s mediante
vesculas.

Observacin de plstidos al MO

A.-Leucoplastos: en papa,puede observarse que los grnulos de almidn estn
incluidas en leucoplastos. Se los ve como delgadas capas concntricas
depositadas alrededor de un punto, el hilio.

B.-Cromoplastos:se pueden observar en pulpa de tomate o de morrn.
Se acumulan con mucha frecuencia alrededor del ncleo como pequeas esferas
coloreadas.

C.-Cloroplastos:en epidermis de hoja de lirio o malvn,se observa, entre las
clulas epidrmicas, unas clulas arrionadas agrupadas por parejas, que forman
los estomas; en estas clulas se encuentran cloroplastos, que se ven como esferas
de color verde.
A B

Diagnostico. Diagnostico..
Aumento- Aumento



Diagnostico. Diagnostico..

Clula animal

Finalidad: Observacin
de clulas anucleadas y mononucleadas


*Colorante May-Grndwal Giemsa

Observacin
En un frotis de sangre observamos distintos elementos que se diferencian entre s,
por su tamao, color y estructura del ncleo, cuando ste existe.
Los que predominan, son de tamao mediano, de color rojo anaranjado y sin ncleo:
los glbulos rojos, eritrocitos o hemates.
Si recordamos que el dimetro de los eritrocitos es de aproximadamente 7 um, esos
elementos nos podrn servir para calcular aproximadamente el tamao de los otros
elementos presentes en el mismo campo microscpico.
Otras clulas algo mayores (10 a 12 um ),tienen ncleo lobulado ( 2,3,4 5
lbulos) de color violeta oscuro. Son glbulos blancos que poseen granulaciones
citoplasmticas. De ah el nombre de granulocitos.

Otros glbulos blancos, de tamao similar al de los hemates (8 um) con ncleo
violeta oscuro, ligeramente escotado y escaso citoplasma, son los linfocitos. Los
monocitos,son tambin leucocitos de 12-20 um con ncleo redondeado u oval, de
color violeta oscuro.

Resultados

*Observe y dibuje los elementos de la sangre, sealando los tipos celulares segn
las descripciones anteriores (con 400X y 1000X)








Diagnstico:...................... Coloracin:................... Aumento:...............


Finalidad: Observacin de clula multinucleada (clula muscular estriada voluntaria)
en un preparado definitivo de corte de lengua

Observacin:
Las clulas o fibras del tejido muscular estriado voluntario de la lengua, cortadas
longitudinalmente, se presentan en forma de cintas angostas, de color rojo, con
varios ncleos situados en la periferia.
Con mayor aumento y movimiento del micromtrico es posible observar una
estriacin transversal, sumamente apretada que corresponde a las zonas claras y
oscuras de las miofibrillas(diferenciaciones citoplasmticas que intervienen
activamente en la contraccin muscular)
En corte transversal, las fibras aparecen poligonales, con ngulos redondeados,
todas ellas de espesor semejante, separadas unas de otras por tejido conectivo.
En estos cortes es posible establecer bien la posicin perifrica de los ncleos.

Resultados
-Observe y dibuje una fibra cortada longitudinalmente, sealando los ncleos y
estriacin transversal





Diagnstico:......................

Coloracin:...................

Aumento:...............





Retculo Endoplasmtico Rugoso


Finalidad:
Reconocer la localizacin del RER en clulas secretoras de un acino
pancretico


Caractersticas:
El RER constituye la mayor parte del sistema vacuolar citoplasmtico ( o sistema
de endomembranas).Est formado por tbulos y sacos aplanados cuya superficie
externa presenta ribosomas asociados, encargados de la sntesis de protenas.
Por esta razn se encuentra muy desarrollado en clulas que participan
activamente en la sntesis de protenas, como por ejemplo las clulas de los
acinos pancreticos que producen las enzimas del jugo pancretico.

Funciones del RER
1.-Sostn mecnico
2.-Acumulacin y procesamiento de protenas exportables
3.-Intercambios entre la matriz citoplasmtica y los compartimentos del
retculo (los iones y las molculas pequeas que son transportados a travs de
las membranas del retculo)
4.-Distribucin intracelular de sustancias


Observacin al M.O. del RER en clulas de acino pancretico

El pncreas es una glndula de secrecin mixta (endcrina y excrina). Como
glndula excrina produce un jugo que contiene enzimas importantes para la
digestin del alimento
El jugo pancretico va ser vertido en el intestino por un conducto. Las clulas que
sintetizan las enzimas se hallan dispuestas en las glndulas en pequeos acmulos,
cada uno de los cuales se llama acino. En ellos, las clulas estn dispuestas
rodeando una pequea luz central hacia donde envan su secrecin, que luego
pasar a un sistema de conductos. Cada clula del acino se asemeja a una porcin
de un pastel con base ancha y vrtice estrecho.
La secrecin, de acuerdo a esta disposicin es liberada por el vrtice de la clula
pudindose verse porque aparece en forma de cuerpos redondeados denominados
grnulos de zimgeno (o granulos de secrecion, contienen protenas enzimticas
inactivadas).
El citoplasma cercano a la base de la clula tiene color azul oscuro que pone de
manifiesto una considerable cantidad de ARN que se concentra en esta parte. Esta
gran cantidad de RNA debe su presencia a que se estn sintetizando protenas
activamente.

Con el ME se observa que estas partes basales que se tien intensamente
presentan vesculas aplanadas y tbulos membranosos muchas veces dispuestos
paralelamente, con ribosomas adheridos a sus superficies externas
Mtodo de tincin: Azul de toluidina







Diagnstico:...............................................................................................................

Coloracin..................................................................................................................

Aumento.....................................................................................................................


Aparato de Golgi-Dictiosomas


Finalidad
Reconocer la localizacin del aparato de Golgi en corte de epiddimo


Caractersticas: Es una parte diferenciada del sistema de endomembranas.
Al ME se observa como un apilamiento de sacos aplanados, dispuestos
concntricamente, con una cara convexa (proximal) y una cncava (distal), con
bordes dilatados y vesculas y vacuolas ubicadas cerca de esos bordes.
En las clulas que presentan una estructura polarizada su ubicacin es definida y
se presenta entre el ncleo y el polo de la clula, donde se libera la secrecin
El tamao y distribucin dentro de la clula y otras caractersticas (como el n de
sacos apilados) vara de acuerdo al estado metablico de la clula.
El aparato de Golgi en clulas animales es nico y bien desarrollado. En clulas
vegetales, en cambio, se divide en numerosas estructuras y recibe el nombre de
dictiosoma.
Todo el sistema vacuolar citoplasmtico parece ser una estructura muy dinmica.
Es muy probable que esa dinmica est dada por el flujo de membranas o
interconversiones entre las membranas de las distintas estructuras que lo
componen.

Funciones del aparato de Golgi

1.-Circulacin intracelular de sustancias
2.-Sntesis de polisacridos complejos (ejemplo: celulosa)
3.-Formacin de glucoprotenas de secrecin
4.-Concentracin, condensacin y empaquetamiento de sustancias de
secrecin dentro de una vescula limitada por una membrana
5.-Concentracin y empaquetamiento de enzimas hidrolticas dentro de una
vescula limitada por una membrana (formacin de lisosomas primarios)
6.-Formacin del fragmoplasto en la divisin de clulas vegetales


Observacin al MO de la localizacin de aparato de Golgi en epiddimo

El epiddimo es un rgano que forma parte del aparato reproductor masculino.
Est formado por un conjunto de tbulos que se ubican por encima de cada testculo
y cumple con la funcin de completar la maduracin de los espermatozoides, que
logran all su completo poder fecundante.
Se ha elegido este rgano para la observacin del aparato de Golgi por su gran
actividad secretoria que facilita la observacin de la organela en sus clulas.

Importante:
Recordemos que en el M.O. lo que se puede observar es la localizacin de las
organelas, ya que su estructura se encuentra por debajo del poder de resolucin
de este instrumento

Tcnica de tincin :Ramn y Cajal (Nitrato de plata)




Clulas caliciformes


Finalidad
*Reconocer vesculas de secrecin en clulas caliciformes,
en corte de vellosidad intestinal.



Caractersticas:Son clulas especializadas en secretar moco. Reciben su nombre
porque la porcin supranuclear de las clulas suele hallarse distendida por la
secrecin, tanto,que la clula adopta la forma de copa o cliz.
El ME muestra que la secrecin de las clulas caliciformes se halla acumulada en
las vesculas del Aparato de Golgi.
Elegimos un corte de vellosidades intestinales, porque ste presenta clulas
caliciformes en abundancia, las que mediante el moco que secretan, protegen a la
mucosa intestinal de los daos qumicos y mecnicos a los que se encuentra
expuesta.

Diagnstico:.............................
.................................................
.................................

Coloracin: ..
................................................

Aumento:..................................
....



Mtodo de tincin: P.A.S.(Schiff).Este reactivo se utiliza para el reconocimiento
de mucopolisacridos;que en este caso tie la secrecin de prpura.








Diagnstico:...............................................................................................................

Coloracin..................................................................................................................

Aumento.....................................................................................................................







BIBLIOGRAFIA
Alberts,B;Bray D;Lewis,U y col.Biologa Molecular de la clula.Ed Omega.
Espaa.1986
Berkaloff y col. Biologa y Fisiologa celular.Ed Omega.Espaa.1987.
Curtis Helen. Biologa.Ed Panamericana.BsAs.1992
De Robertis y De Robertis. Biologa celular y molecular.Ed El Ateneo.1986














ACTIVIDADES DE AUTOEVALUACION

1.- Diferencie:
Ncleo de nucleolo
REL de RER
cloroplastos de mitocondrias

2.-Cules son las principales diferencias entre una clula animal y una
clula vegetal?


3.-Cul es la interaccin entre ribosomas, retculo endoplasmtico, aparato de Golgi y
vesculas de secrecin, en la sntesis y envo del nuevo material de membrana y en la
exportacin de protenas por la clula?


4.-En funcin de los conocimientos de la relacin organelas-funcin que componentes
esperara que fuesen los ms destacados en cada uno de los siguientes tipos celulares?
-clula muscular
-espermatozoide
-clulas de las hojas verdes
-glbulos blancos

5) Por qu el REL no puede funcionar como RER ?

6) Que funcin cumplen las vacuolas en una clula? Por Que luego de un rato de mantener
el preparado de la clula vegetal en un portaobjetos vemos que se comienzan a arrugar?


F FO OT TO OS SI IN NT TE ES SI IS S y y R RE ES SP PI IR RA AC CI IO ON N

INTRODUCCION:

Es probable que, el primer organismo fotosinttico, haya aparecido hace
3000/3500 millones de aos atras. La atmsfera en la que evolucionaron las primeras
clulas no tena oxgeno libre. Con el advenimiento de la fotosntesis, los organismos
logran modificar el ambiente, y de tal forma, que en nuestros das la vida terrestre es
posible gracias a este proceso.
Esencialmente, en la Fotosntesis, las plantas captan la energa lumnica y la
emplean para formar carbohidratos y oxgeno libre a partir de CO
2
y H
2
O . Los
carbohidratos los utilizan como materia prima y la energa qumica, para su crecimiento;
el exceso lo almacenan como reserva, en forma de Almidon, Inulina, etc.
El proceso fotosinttico en su forma mas sencilla y concreta, consiste en:
Impulsar con la energa solar, una corriente de electrones desde el agua a un
aceptor cuyo potencial lo capacite para cederlo a una molcula de CO
2
que de
esta manera se reduce.
Para que ste fenmeno se lleve a cabo es ademas necesario, la clorofila, el
pigmento que poseen todos los vegetales verdes.

LA FOTOSINTESIS COMPRENDE DOS ETAPAS

Etapa lumnica
Ocurre en los tilacoides y se utiliza la energa luminosa
Se sintetizan productos que van a ser utilizados en la etapa siguiente como el ATP y el
NADPH , ademas se genera oxgeno que se libera a la atmsfera (O
2
) y agua.


Etapa oscura
Ocurre en el estroma del cloroplasto y es independiente de la presencia o ausencia de
luz.
En esta etapa se produce la fijacin y reduccin del dixido de carbono, mediante una
serie de transformaciones metablicas, resultando finalmente un compuesto orgnico
que va a ser utilizado en otros procesos metablicos con el fin de obtener energa
biolgicamente til para la clula.

La fotosntesis puede expresarse mediante la siguiente frmula

luz y clorofila
6CO
2
+6H
2
O C
6
H
12
O
6
(glucosa) +6O
2




Objetivos
A partir de los conocimientos referidos a los fenmenos de fotosntesis y respiracin,
el objetivo del presente prctico es desarrollar en el alumno la capacidad de:
- Interpretacin de tablas
- Interpretacin de grficos
- Razonamiento y resolucin de un problema experimental

A continuacin se describen dos experimentos tpicos en el estudio del fenmeno de la
fotosntesis, el ensayo I: Disco de hoja flotante y el ensayo II: Determinacin de la
liberacin de 0
2
/ fijacin de CO
2
por utilizacin de un indicador de pH.
Dichos experimentos fueron desarrollados para responder a los siguientes objetivos
- Inferir la existencia del desprendimiento de ciertos gases en un vegetal
- Determinar el efecto de presencia o ausencia de la luz como fuente de energia
- Relacionar el desprendimiento de O
2
con la presencia o no de Clorofila
- Relacionar los procesos de fotosntesis y respiracin

Luego de leer e interpretar la etapa experimental y los diferentes resultados
obtenidos, razone en particular, discuta en grupo y redacte las probables causas que
generaron los resultados obtenidos
ENSAYO DE DISCO DE HOJ A FLOTANTE

ETAPA EXPERIMENTAL I
1-Se rotularon 3 jeringas de 5 ml (1-2-3) colocndole en c/u 3 ml de solucin de Infiltracin
(Acido Ctrico (0.1M), PO
4
HNa
2
(0.2M) y 1 gota de detergente Tween 20)
2- Con un sacabocado se cortaron discos de hojas de 6 mm de diametro. A las jeringas 1 y 2 se
les coloc a c/u 10 discos de hojas de espinaca y a la jeringa 3 se le colocaron 10 discos de
hojas de planta jaspeada o blanca (Sansiviera o repollo blanco)
3- se tapa fuertemente el cono para evitar la salida de liquido y de presiono el embolo hasta ver
que que los discos vegetales sedimentaron
4- Se extrajo la solucin de infiltracin de las tres jeringas reeemplazndola por 5 ml de
solucin de bicarbonato [Acido Ctrico (0.1M), PO
4
HNa
2
(0.2M) y CO
3
HNa (0.02 M)].
5- Se ubicaron las jeringas 1 y 2 en una gradilla prximos a una lmpara encendida de 150
watt. interponiendo una cubeta con agua entre la lmpara y los tubos .
6- se cubrio la jeringa 3 con papel de aluminio y se lo llev a la oscuridad total.
7- Se toma el tiempo cero y a medida que los discos van ascendiendo en funcin del
tiempo.se van anotando en una planilla diseada al efecto. A los 60 minutos se da por
finalizado el ensayo

ETAPA EXPERIMENTAL II
No se realizara en el transcurso del TP

1- Luego de los 60 min del ensayo de la etapa experimental I, el tubo 1 es colocado en total
oscuridad.
2- Se toma el tiempo cero y a medida que los discos van descendiendo en funcin del
tiempo.se van anotando en una planilla diseada al efecto. A los 60 minutos se da por
finalizado el ensayo.


ENSAYO DE DISCO DE HOJA FLOTANTE
1 2 3

Colocar 3 ml de Solucin
de Infiltracin a cada tubo






Cortar con sacabocados los
discos de hoja de ambas especies
vegetales elegidas y colocar 10
discos en cada tubo




Aplicar vacio hasta que los
discos se depositen en el fondo
del tubo.






Retirar la Solucin de
Infiltracin y agregar 10 ml de
la Solucin de Bicarbonato a
cada tubo.

Llevar a una fuente de luz a los
tubos 1 y3
y dejar en total oscuridad al tubo
2







Interponer entre la fuente de luz y los tubos 1 y 3 una cubeta de vidrio
transparente llena de agua fria


LIBERACION DE OXIGENO/FIJ ACION DE
ANHIDRIDO CARBONICO
ESPINACA REPOLLO BLANCO
RESULTADOS

ETAPA EXPERIMENTAL I

Los discos sedimentados en los diferentes tubos experimentales comenzaron a
ascender en funcin del tiempo. Se recabaron los valores obtenidos y al cabo de una
hora de ensayo se obtuvieron los siguientes resultados.


Tabla 1 Cantidad de discos que ascendieron al final del ensayo (60 min) en los
diferentes tubos experimentales.( Media n= 5)

DETALLE TUBO TIEMPO INICIAL TIEMPO FINAL
Espinaca + Luz 1 arriba
0
abajo
10
arriba
10
abajo
0
Espinaca + Oscuridad 2
arriba
0
abajo
10
arriba
2
abajo
8
Jaspeada + Luz 3
Arriba
0
abajo
10
arriba
4
abajo
6


Tabla 2 Cantidad de discos que ascendieron en los diferentes tubos experimentales en funcin
del tiempo. ( Media n= 5)

T I E M P O (en min )
Tubo 0 5 10 15 20 25 30 45 60
1
0 2 4 5 6 7 8 10 10
2
0 0 0 1 1 1 2 2 2
3
0 0 1 2 2 2 3 4 4

Grfico 1: Evolucin del ascenso de los discos vegetales en funcin del tiempo en los
diferentes tubos experimentales. .( Media n= 5) (Tubo 1 ____ , Tubo 2 ......... y Tubo 3 - - - -
- )

Cuando se incorpor a los resultados el correspondiente desvio estandar para cada uno de los
puntos analizados se obtuvo el siguiente grfico

Grfico 2: Evolucin del ascenso de los discos vegetales en funcin del tiempo en los
diferentes tubos experimentales. .( Media Desvio estndar, n= 5)
0
2
4
6
8
10
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60
Tiemp o en mi nutos
N


d
e

d
i
s
c
o
s

f
l
o
t
a
n
t
e
s
0
2
4
6
8
10
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60
Tiempo en minutos
N


d
e

d
i
s
c
o
s

f
l
o
t
a
n
t
e
s
Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3

ETAPA EXPERIMENTAL II





Tabla 3 Cantidad de discos que se encuentran en la superficie del buffer (flotando) en
los diferentes tiempos de anlisis. ( Media n= 5)

T I E M P O (en min )
Tubo 0 5 10 15 20 25 30 45 60
1
10 10 9 7 6 5 3 1 0








Grfico 3: Evolucin del descenso de los discos vegetales en funcin del tiempo
( Media n= 5) (Tubo 1 ____ )
0
2
4
6
8
10
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60
Tiempo en minutos
N


d
e

d
i
s
c
o
s

f
l
o
t
a
n
t
e
s

INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS

La siguiente serie de items deber ser resuelta en grupos de no mas de 5 alumnos
quienes generaran un informe que deber ser presentado al final del trabajo prctico

1) En el primer paso de la etapa experimental I se utiliza una solucin de infiltracin
- Que utilidad tiene el Tween 20 ?

2) Cual es la razon para que los discos al inicio del ensayo floten en la solucin de
infiltracin?

3) Cual es la causa para que el vacio generado en el tubo haga sedimentar los discos?

4) Una vez sedimentados los discos de hoja, se reemplaza la solucin de infiltracin
por la solucin de bicarbonato.
- Que utilidad se le da al bicarbonato?
- Que sucederia si los discos se mantuvieran inmersos en agua destilada?

5) Cuando se colocan los tubos frente a la lmpara
- Porque cree que es imprescindible el colocar un recipiente con agua interpuesto
entre el
tubo y la fuente de luz?
- Que estima que sucedera si no lo coloca?

6) Cual cree que es la causa por la cual los discos comienzan a ascender?
- Fundamente en relacin al fenmeno de fotosntesis

7) Que resultados esperara encontrar si compara varios ensayos con fuentes de luz
de diferente intensidad?. Si obtiene diferentes resultados cual sera la causa
probable?

8) Fundamente las probables causas de las diferencias detectadas entre los diferentes
tubos del grafico 1

9) Cuando se incorpor a los resultados el correspondiente desvio estandar para cada
uno de los puntos analizados se obtuvo el grfico 2. Estimativamente, cree Ud que
existen diferencias significativas entre los tres ensayos? Porque?

10) Si Ud realizara un experimento comparativo relacionando discos de brotes de hoja
verde y discos de hoja verde adulta de la misma planta
- Espera encontrar diferencias?
- Si las hubiera, cual sera el resultado y cual sera la causa?

11) Si a la solucin de bicarbonato se le hubiera agregado un herbicida cuyo
mecanismo de accin reside en el bloqueo del fenmeno de fotosntesis,
- Que esperara observar y porque?
- Si a pesar de la presencia del herbicida los discos se siguen comportando igual,
cuales seran las caracteristicas particulares de esa planta frente a dicho
herbicida.

12) Cual es la causa que explique los resultados obtenidos en la segunda etapa (ver
Tabla 3 y Grfico 3)
ENSAYO II
LIBERACION DE OXIGENO/FIJ ACION DE ANHIDRIDO CARBONICO
ENSAYO CON INDICADOR DE pH

Materiales y drogas necesarios:

Pipetas de 5 y de 10 ml, tubos de ensayo, papel cartulina negro, estufa de cultivo, vaselina, Azul de
Bromotimol pH 7.8-8.0, Elodea o Microphillum (un brote)

Importante: La solucin de Azul de Bromotimol en esas condiciones de pH es de color azul y vira
al amarillo cuando el pH baja, es decir, cuando el medio se acidifica , volviendo a tomar el color
azul cuando el medio se alcaliniza

Etapa Experimental

En una serie de 4 tubos de ensayo se colocaron los reactivos y las cantidades que se indican a
continuacin en la Tabla N 1

Tabla N 1:

TUBO N 1 2 3 4
AZUL DE
BROMOTIMOL

10 ml

10 ml

10 ml

10 ml
INSUFLAR
AIRE

SI

SI

NO

NO
ELODEA
(un brote)

SI

NO

SI

NO
VASELINA
O.5 ml O.5 ml 0.5 ml 0.5 ml

El paso que consisti en insuflar aire se realiz con una pipeta burbujeando la
solucin del Azul de Bromotimol acidificando el medio hasta hacerlo virar.al color
amarillo

Vuelque en la Tabla N 2 el color que estima que presentar la muestra en cada tubo
al iniciar la experiencia

Inicio de la Experiencia

1- Los tubos 1 y 2 se expusieron a la luz. Los tubos 3 y 4 se cubrieron con cartulina
negra y se colocaron en estufa a 30 C

2- Se esper 90 minutos




ENSAYO CON INDICADOR DE pH
1 2 3 4

Colocar 10 ml de la solucin
de Azul de Bromotimol


Insuflar aire a los tubos 1 y 2










Col
ocar
la planta acutica en los tubos 1 y 3







Agregar 0,5 ml de Vaselina a
los 4 tubos








Poner la fuente de luz a los tubos 1 y 2 Colocar en estufa a 30C (en total
oscuridad) a los tubos 3 y 4


30 C
Oscuridad

3- Si Ud ha seguido el procedimiento paso a paso y teniendo en cuenta lo que ya
conoce sobre el proceso de fotosntesis y sumado a los datos que se le proporcionaron
sobre el Azul de Bromotimol, discuta con su grupo y responda lo siguiente:


INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS

1- Que utilidad cree Ud que tiene el agregado de los 0,5 ml de vaselina?

2- Porqu el medio se acidifica al insuflar aire haciendo que el indicador de pH vire al
amarillo?

3- Vuelque sus predicciones en la Tabla N2

Tabla N 2: Escriba en las correspondientes casillas del cuadro el color que presenta la
muestra al inicio de la experiencia y luego escriba el color que estima que presentar al
final


TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3 TUBO 4
INICIO
FINAL



4- Que cambios en el color de la muestra espera que ocurran en cada Tubo en el
transcurso de la experiencia?.
- Fundamente su prediccin relacionando con el proceso de fotosntesis el resultado
estimado en cada tubo

5) Observara en alguno/s de los tubos desprendimiento de gas ?
- En cual/les?
- Que gas supone que es ?
- Porque

6) Cuales diferencias espera encontrar si compara brotes jvenes con hojas ya
adultas?


R E S P I R A C I N C E L U L A R


La respiracin celular ocurre en la mayora de las clulas de plantas y animales. Tiene lugar
en la mitocondria, donde la energa de los nutrientes convierte ADP a ATP, el cual es
utilizado para todas las actividades celulares que requieren energa.
En este Practico Ud. va a analizar que sucede en el proceso de respiracin con semillas de
maz y investigara el efecto de la temperatura sobre la velocidad de respiracin.

De que manera puede ser medida la velocidad de respiracin?

C
6
H
12
O
6
(glucosa) +6O
2
6CO
2
+6H
2
O + ATP

Cuando uno observa la ecuacin para la respiracin celular, puede ver que hay por lo menos
tres formas de hacerlo:

1. Medir la cantidad de glucosa consumida.
2. Medir la cantidad de oxigeno consumida.
3. Medir la cantidad de dixido de carbono producido.
En este experimento nosotros vamos a medir la cantidad de oxigeno consumido.

Caractersticas y funci ones de un respirmetro

La ilustracin muestra las caractersticas
bsicas de un respirometro. Esto nos permite
medir cambios en el volumen de gas,
relacionado con el consumo de oxigeno.
Ud. podr construir un respirmetro poniendo
un pequeo organismo en un vial con una
pipeta adosada como se ilustra. En el
ejemplo se us un grillo, en el experimento de laboratorio que Ud. va a analizar se usara
maz, Recuerde, que la respiracin celular ocurre tanto en clulas de animales como de
plantas.



Pipeta: aire fresco
equilibrado con el aire del
vial, va este tubo.
El aire en el vial, es una
mezcla de gases, incluido
O2.
Organismo vivo: la mayora de
los organismos requieren O2.
Tapn: impide que
los gases y el agua
filtren dentro del
El algodn protege el
organismo del KOH
custico.
KOH se combina con CO2 para
formar un precipitado slido.
Como trabaja el respirometro

Cuando la pipeta del respirometro es sumergida, no puede entrar aire adicional Como el O
2

es consumido, la presin de los gases dentro del respirometro decrece, esto causa que entre
agua a la pipeta.
El CO
2
que se produce se combina con el KOH para formar un precipitado slido de K
2
CO
3
.
Note que a medida que el volumen de gas dentro decrece, la presin de agua fuera del vial
fuerza al agua a entrar en la pipeta. La cantidad de agua que entra a la pipeta es
directamente proporcional a la cantidad de oxigeno consumida por el organismo (en este
caso por el grillo).


Como se lee la pipeta

El agua en una pipeta se adhiere a los lados del tubo y
forma una superficie curva llamada menisco Por
practica comn, todas las lecturas son hechas sobre el
fondo del menisco. Las unidades para esta pipeta son ml
Di seo Experi mental

En este experimento se comparan las velocidades de respiracin en semillas de maz
germinadas, a la velocidad en semillas en estado latente (semillas secas). Ud. va a poder
comparar a dos diferentes temperaturas: 12
o
C and 22
o
C. Adems, Ud. podr comparar estas
velocidades a un control no metablico.
Porque es importante tener un control?
Es importante que los tres viales contengan un igual volumen de contenidos. Ud. debe
adicionar bolitas de vidrio al vial con semillas en estado latente, puesto que las semillas
secas ocupan menos espacio que una igual cantidad de semillas germinadas.



Recomendaciones :

1. Ud. necesita usar una capa de algodn no absorbente entre el KOH y las semillas.
2. El tapn debe estar firmemente colocado para un cierre hermtico. Chequee que las
semillas o las bolitas no bloqueen el orificio de la pipeta.
3. Deje los respirmetros equilibrar por algunos minutos en sus respectivos baos de
agua. Esto minimiza los cambios de volmenes debidos a cambios en la temperatura
del agua





















Mi di endo l a veloci dad de reacci n

El volumen de gas est relacionado a la
temperatura del gas. De acuerdo a la
Ley de los Gases (V=nRT/P), un cambio
en la temperatura va a causar un
cambio directo en el volumen.
Como la temperatura en el respirmetro
puede variar durante el curso del
experimento, Ud. debe corregir las
diferencias en volumen que son debidas
a fluctuaciones de temperatura antes
que a velocidad de respiracin. Para
lograr esto sustraiga cualquier
diferencia en el movimiento de agua en el vial con las bolitas de vidrio del vial experimental
mantenido a la misma temperatura. Registre el resultado como la diferencia correcta.
Anl isis de Resultados

Despus que Ud. ha colectado datos sobre la cantidad
de oxigeno consumido en funcin del tiempo por
semillas de maz germinadas y no germinadas a dos
diferentes temperaturas, Ud. puede construir un grfico,
colocando en el eje de las y los cambios de volumen y
en el de las x el cambio en el tiempo. Podr luego
calcular y comparar las velocidades de respiracin en
las distintas curvas.
Cmo se calcula la velocidad?
Velocidad es la pendiente de la curva o y
x
En este caso, y es el cambio en volumen y x es el
cambio en tiempo (10 min).

1. En cada uno de los 3
viales, empape el
algodn absorbente con
solucin de KOH.
2. Cubra con algodn
no absorbente seco

3. Al vial #1, sume 25
semillas de maz
germinadas, su
organismo vivo
4. Al vial#2, sume
25 semillas de maz
no germinadas, y
suficiente bolitas
de vidrio para
igualar el volumen
del vial#1
Tape cada vial
con un tapn
perforado con
una pipeta, con la
punta hacia fuera
Sume un
peso a
cada vial.
5. Al vial#3, sume
un igual volumen
de bolitas de
vidrio, su control
no metablico.
1.Coloque los tres respirmetros
en un bao de agua a 10C con
las puntas de las pipetas
apoyadas sobre un cabestrillo
por encima del nivel del agua.
Djelos en esta posicin algunos

2.Baje las puntas de las pipetas
en el agua.
3. Tome una lectura inicial de
cada respirmetro.
4. Tome lecturas de cada
respirmetro a intervalos de 5
minutos para los prximos 15
min..
5. Use el segundo set de tres
viales para medir la velocidad
de respiracin en un bao a
25C.

Analize la siguiente tabla


Vial 1
germin
Vi al 2
No
germ
Vial 3
Control
Vial 1
germin
Vial 2
No
germin
Vial 3
control
Tiempo 12
o
C 12
o
C 12
o
C 22
o
C 22
o
C 22
o
C

0 minuto


0.08

0.09

0.09

0.12

0.11

0.085

5 minutos


0.24

0.17

0.099

0.72

0.24

0.09

10 minutos


0.39

0.22

0.1

1.27

0.33

0.091

15 minutos


0.5

0.23

0.1

1.7

0.38

0.09

20 minutos


0.61

0.26

0.095

2.12

0.43

0.091


Cuestionario
Sobre la base del grfico responda las preguntas.
1. Cul de los siguientes aseveraciones es verdadera (basado en los datos)?.
La cantidad de oxigeno consumido por maz germinado a 22
o
C es aproximadamente dos veces la
cantidad de oxigeno consumido por las germinadas de maz a 12
o
C
La cantidad de oxigeno consumido es igual en ambos casos, en semillas de maz no germinadas y
germinadas durante el periodo inicial de 0 a 5 minutos.
La cantidad de oxigeno consumido en las semillas germinadas a 12
o
C a los 10 minutos es 0.4 ml
O
2
/minute
La cantidad de oxigeno consumida es mayor para semillas no germinadas a 12
o
C que a 22
o
C.
Si el experimento fuera desarrollado por 30 minutos la velocidad de consumo de oxigeno debera
decrecer.















Semillas germinadas a 22C.




Semillas germinadas a 12C.



Semillas no germinadas a 22C
Semillas no germindas a 12C


2. Cul es la velocidad de consumo de oxigeno en semillas de maiz germinadas a 12
o
C?
0.08 ml/in
0.04 ml/min.
0.8 ml/min.
0.8 ml/in
1.00 ml/in
3. Cul de las siguientes conclusiones es apoyada por los datos?
a) La velocidad de respiracin es mayor en semillas no germinadas que en semillas germinadas.
b) Semillas de maz no germinadas no son viables y no muestran diferencias en la velocidad de
respiracin a diferentes temperaturas.
c) La velocidad de respiracin en semillas germinadas debera haber sido mayor si el experimento
fuera conducido bajo luz solar.
d) La velocidad de respiracin incrementa como incrementa la temperatura en semillas germinadas
como no germinadas.
e) La cantidad de oxgeno consumida debera incrementarse si las semillas de maz fueran
reemplazadas por semillas de arvejas.

4. Cul es el rol del KOH en este experimento?
a) Sirve como un dador de electrones para estimular la respiracin celular.
b) Por descomposicin del KOH, el oxigeno necesario para la respiracin celular es liberado.
c) Sirve como fuente temporaria de energa para la respiracin del organismo.
d) Se une con el dixido de carbono para formar un slido, previniendo que la produccin de CO
2

afecte el volumen de gases.
e) Su atraccin por el agua causa la entrada de agua al respirometro.














BIOLOGA CELULAR Y SISTMICA
TRABAJO PRCTICO N 4

MITOSIS

Aunque resulta difcil de pensar, un ser vivo multicelular y complejo como un
mamfero, por ejemplo, fue alguna vez una nica clula: el huevo o cigota. Una vez
formada, la cigota comienza a dividirse activamente: una primera divisin dar lugar
a dos clulas hijas; luego, cada una de esas clulas hijas se dividir nuevamente en
dos, que sufrirn una nueva divisin y as sucesivamente.


El proceso de divisin celular por el que una clula madre
da lugar a dos clulas hijas idnticas entre s e idnticas a
las que les dio origen se denomina MITOSIS.



Cuando se indica que la Mitosis da lugar a dos clulas idnticas a partir de una clula
madre, se lo hace desde dos puntos de vista:

1.- con respecto a la informacin gentica
2.- en relacin con el nmero de cromosomas

EL PROCESO DE DIVISION MITOTICA:

Para poder estudiarlo con mayor claridad, en la divisin mittica se pueden distinguir
varias etapas. Adems, debe considerarse lo que ocurre antes del comienzo del
proceso, lo cual es clave para poder comprender la divisin en su totalidad.


INTERFASE

Si las dos clulas producto de una divisin mittica han de recibir el mismo
nmero de cromosomas que tena la clula madre que les dio origen, es evidente
que - antes de comenzar el proceso - el material gentico de esta ltima debe
duplicarse. En ese momento, cada cromosoma pasar de estar formado por una
cromtide (una molcula de ADN), a estar formado por dos cromtides (dos
molculas de ADN). Ambas molculas de ADN son idnticas entre s, es decir,
ambas llevan exactamente la misma informacin gentica. Dicho de otro modo, los
cromosomas pasarn de simples a dobles.
Para ser exactos, en este momento no podemos hablar con propiedad de
cromosomas. El material gentico en esta etapa de la vida de la clula se ve al
microscopio como una red difusa y laxa a la que llamamos cromatina. No es que los
cromosomas no existan en esta etapa; simplemente, no podemos reconocerlos ni
individualizarlos, ya que presentan un estado poco condensado.
Cromatina y cromosomas son trminos que aluden, ambos, a ADN unido a
protenas. Lo que los diferencia es el grado de plegamiento (y, consecuentemente,
de compactacin) del material que los forma y el hecho de ser observables en
distintos momentos de la vida de la clula (la cromatina en interfase y los
cromosomas durante la divisin).

PROFASE

Esta es la primera etapa del proceso. Los principales fenmenos que ocurren
en ella, son:

los cromosomas, que ya se haban duplicado en interfase, se han ido acortando y
aparecen como estructuras ms compactas.
la envoltura nuclear se desorganiza y deja de hacerse visible, como as tambin
el nuclolo.
los centrolos, que tambin se han duplicado, migran uno a cada polo de la
clula.
entre ambos centrolos se organiza el huso acromtico, formado por
microtbulos compuestos por una protena, la tubulina. Esta estructura ser la
que permitir la migracin de los cromosomas hacia los polos de la clula.

PROMETAFASE

Se denomina as a la transicin entre la profase y la metafase. Se trata de un
perodo muy corto durante el cual los cromosomas quedan en aparente desorden.
Posteriormente, las fibras del huso acromtico invaden la zona central y sus
microtbulos se extienden entre los polos de la clula.


METAFASE

Los cromosomas, completamente condensados, se unen a algunas de las
fibras del huso acromtico y se ordenan en el plano ecuatorial de la clula.

ANAFASE

Durante esta etapa los centrmeros de los cromosomas se dividen
longitudinalmente, por lo que ambas cromtides de todos los cromosomas se
separan y comienzan a dirigirse hacia los polos, unidos a fibras del huso acromtico.
En la anafase los microtbulos que forman el huso se acortan entre un tercio y un
quinto de su longitud.
Aqu podremos observar a los cromosomas en forma de V; los metacntricos
con brazos iguales, los submetacntricos con brazos distintos.




TELOFASE

El final de la migracin de los cromosomas a los polos de la clula seala el
principio de esta etapa:
los cromosomas comienzan a descondensarse, por lo cual vuelven a asemejarse
a filamentos delgados.
la envoltura nuclear de las clulas hijas se organiza y se torna visible. Lo mismo
ocurre con el nuclolo.

Lo que hemos visto hasta aqu ha ocurrido a nivel del ncleo celular. A esta divisin a
nivel nuclear se la conoce como cariocinesis.

No obstante, durante la telofase tambin se da una divisin citoplasmtica. A
esta divisin se la denomina citocinesis. En las clulas animales, el citoplasma se
constrie en la zona central de la clula, comenzando desde la periferia y
progresando hacia el centro. Esta constriccin se acenta y profundiza hasta que la
clula se divide, quedando los componentes citoplasmticos de la clula madre
repartidos entre las dos clulas hijas.

Si volvemos ahora a la cigota de la cual hablbamos al principio, vemos como
a travs de la divisin mittica, se ha dividido en dos clulas idnticas a ella, que
sufrirn posteriores divisiones por este mismo proceso.
De esta manera, la mitosis aparece como la base del proceso de crecimiento. Ms
tarde, ste estar acompaado por el fenmeno de diferenciacin. Adems del
crecimiento, tambin la mitosis es el proceso por el cual se produce la regeneracin
de tejidos y clulas.

OBJETIVOS DEL TRABAJO PRCTICO:

Se espera que los alumnos
En el plano conceptual:

Distingan y comprendan los principales fenmenos que ocurren durante la
divisin de clulas somticas.
Comprendan el proceso de divisin mittica en trminos de la conservacin de la
identidad de la informacin gentica y de la constancia del nmero cromosmico.

En el plano procedimental:

Observen cromosomas en las distintas etapas mitticas y registren los resultados
de dichas observaciones.
Observen imgenes animadas del proceso y extraigan las ideas principales.










DESARROLLO:

Primera parte: Observacin de cromosomas en clulas de raz de cebolla en
divisin (coloracin: hematoxilina frrica; aumento: 400X), identificacin de las
etapas mitticas y registro.

A.- Usted deber observar los preparados que se le presentarn, buscar e identificar
las etapas mitticas correspondientes y dibujarlas en los campos que figuran a
continuacin:


INTERFASE PROFASE PROMETAFASE

METAFASE ANAFASE TELOFASE


Segunda parte: Observacin de imgenes animadas del proceso mittico y
actividades.

B. - Luego de haber visto el video y luego de formar con otros compaeros un grupo
de no ms de cinco personas, deber resolver las cuestiones que se le plantean.

ACTIVIDADES:


De las siguientes afirmaciones referidas a la MITOSIS: cul/es consideran
correctas?

1. Es un proceso que, al producir variabilidad gentica, se torna importante para la
evolucin biolgica.

2. Las clulas sexuales maduras, luego de sufrir mitosis, restablecen el nmero
diploide de cromosomas.

3. Luego de completado el proceso mittico, cada una de las clulas hijas ha
heredado una de las cromtidas hermanas de cada uno de los cromosomas de la
clula. Esquematice con dos colores distintos.

4. Previo a la mitosis, luego del proceso de duplicacin del ADN, cada molcula de
ADN ha pasado a estar formada por dos cadenas polinucleotdicas.


5 Si en una especie hipottica el nmero haploide fuera n = 18 cul es el
nmero de cromosomas que tendra una clula somtica de un organismo de
dicha especie? Qu cantidad de molculas de ADN encontraramos en el
ncleo de dicha clula en el momento en que est por comenzar la mitosis?
Y al finalizarla?

6 Supongan que cuentan con ciertas clulas eucariotas diploides que pueden
dividirse asexualmente in vitro, en un medio con nutrientes especiales. El
experimento comienza con clulas que no han comenzado la fase S
premittica, que como recordarn, es la fase en la que ocurre la replicacin
del ADN. Se colocan esas clulas en una solucin de nutrientes que contiene
numerosos nucletidos radiactivos que pueden incorporarse a las nuevas
cadenas de ADN sintetizadas por la ADN polimerasa. Utilizando dos colores
distintos, esquematicen la doble hlice del ADN de un cromosoma en las
situaciones siguientes:

a) En G1, es decir, antes de la fase S.

b) En G2, previo a la divisin mittica.




MEIOSIS



OBJETIVOS
-Distinguir en observacin microscpica ncleos interfsicos y ncleos en
division
-Observar e identificar las distintas fases meioticass. .
-Observar fases meiticas en microfotografas.
-Relacionar los procesos de meiosis y gametognesis.




Introduccin:
Los procesos de mitosis y meiosis, sus fases y resultados, fueron exhaustivamente
analizados en las clases tericas previas al trabajo prctico. Por lo tanto, solo se
revisarn los conceptos bsicos de cada tema.



MEIOSIS:
Es un proceso que comprende dos divisiones nucleares, seguidas de sus
correspondientes divisiones citoplasmticas.
A partir de una clula diploide, se obtienen en la primera divisin meitica, dos
clulas haploides (con cromosomas constitudos por dos cromtidas), y en la
segunda divisin meitica, cada una de ellas da lugar a dos clulas haploides
as se obtienen cuatro clulas haploides, a partir de la diploide original.
Como recordar, en la Profase I meitica ocurre intercambio de material gentico
entre cromosomas homlogos, por lo que las cuatro clulas producto de meiosis, son
geneticamente diferentes entre s y con respecto a la que les diera origen. La meiosis
ocurre en clulas sexuales, y tiene como resultado la formacin de gametas (vulos y
espermatozoides haploides).
A ste proceso se lo llama GAMETOGENESIS y segun el resultado sea la formacin
de vulos o espermatozoides, al proceso lo denominamos Ovognesis o
Espermatognesis.



MEIOSIS I - Divisin reduccional
Para su mejor estudio describimos varios perodos: Profase I, Metafase I, Anafase I y
Telofase
PROFASE I: Es el perodo ms prolongado de la meiosis, a la vez para su mayor
comprensin consideramos varias subetapas:
a. Leptonema: Los cromosomas se presentan como largas
fibras, delgadas, poco espiralizadas. Las cromtidas no son visibles.

b. Cigonema: Los cromosomas homlogos se alinean y aparean
de una manera altamente especfica, este proceso es llamado
sinapsis.

El apareamiento comprende la formacin del complejo
sinaptonmico, una estructura protenica que se halla interpuesta
entre los homlogos. Al par de cromosomas homlogos apareados
lollamamos bivalente.


c. Paquinema: Los homlogos se aparean ntegramente ( en
toda su longitud ). Los cromosomas se visualizan ms cortos y
gruesos debido al alto grado de espiralizacin. Cada unidad es
ahora una ttrada, compuesta por dos homlogos, es decir cuatro
cromtidas. Las dos cromtidas de cada cromosoma se denominan
cromtidas hermanas.
Durante el Paquinema es caracterstico el intercambio de
segmentos, proceso llamado entrecruzamiento o crossing-over. Este intercambio
de material cromosmico es una fuente importante de variabilidad gentica.

a. Diplonema: Los cromosomas apareados empiezan a separarse,
aunque permanecen unidos en los puntos de intercambio o
quiasmas.















b. Diacinesis: La contraccin de los cromosomas llega a su mximo, los
cromosomas homlogos siguen unidos por los quiasmas que ahora se ubican en los
extremos ( terminalizacin de los quiasmas ).

Mientras ocurren los procesos antes mencionados, se desorganiza la envoltura
nuclear y se organiza el huso acromtico.

METAFASE I
Los homlogos unidos como en diacinesis se asocian por sus centrmeros a las
fibras del huso, ubicndose en el plano ecuatorial de la clula.

ANAFASE I
Se separan los homlogos cada uno hacia polos distintos de la clula. Hacia finales
de esta etapa puede observarse el comienzo de la citocinesis ( divisin del
citoplasma ). Cabe aclarar que la migracin de los cromosomas hacia polos opuestos
de la clula es al azar.


TELOFASE I

Los cromosomas ubicados en los polos de la clula se reagrupan. Cada polo recibe
la mitad del nmero de cromosomas de la clula origina. Se completa la citocinesis.
Luego de este perodo puede existir un intervalo llamado intercinesis.
MEIOSIS II - Divisin ecuacional
Esta segunda divisin es muy parecida a la Mitosis, excepto que no va precedida por
una duplicacin del ADN.
Al comienzo de esta divisin los cromosomas pueden haberse dispersado un poco,
pero vuelven a condensarse.
Tambin aqu describimos varios perodos.
PROFASE II
Se organiza nuevamente el huso acromtico. Los cromosomas se unen a las fibras
del mismo por sus centrmeros.
METAFASE II
Los cromosomas ( cada uno formado por dos cromtidas ) se ubican en el plano
ecuatorial.



ANAFASE II

Al igual que en la anafase mittica las cromtidas hermanas de cada cromosoma se
separan, migrando hacia polos distintos de la clula.
TELOFASE II

Se desorganiza el huso acromtico, se forman las envolturas nucleares. Ahora hay
cuatro ncleos hijos, cada uno de los cuales tiene la mitad del nmero de
cromosomas de la clula progenitora.
La citocinesis ocurre del mismo modo que tras la mitosis.
CONSECUENCIAS DE LA MEIOSIS
La meiosis desde el punto de vista gentico se considera un mecanismo destinado a
distribuir al azar los genes maternos y paternos en las gametas. Esta distribucin al
azar es la consecuencia de dos procesos que tienen exclusivamente durante la
meiosis. Ellos son: - La recombinacin gentica o crossing over.
- La segregacin al azar de los cromosomas homlogos.
Ambos sucesos son fuente de variabilidad gentica. A su vez las fallas en la
segregacin al azar de los homlogos en la Anafase I y II, conduce a aberraciones
cromosmicas que provocan graves patologas (por ej. El Sindrome de Down).
GAMETOGNESIS
El proceso antes descripto es el que ocurre en aquellas clulas destinadas a formar
clulas sexuales. Segn el tipo de organismo del que se trate, podemos hablar de
una gametognesis (es decir que la meiosis produce gametas ) o esporognesis (
cuando los productos son esporas ). En el caso de las gametas, se originan por
meiosis los vulos femeninos y los espermatozoides masculinos. En ambos casos,
se trata de clulas especiales, las gametogonias, las que en los rganos
reproductivos (ovarios y testculos ) van a experimentar la meiosis y as originar las
gametas.
La serie de cambios que conducen a la formacin de espermatozoides, empieza con
la conversin de las espermatogonias en espermatocitos I, son stos los que
experimentan la primera divisin meitica, originando dos espermatocitos II, estas
clulas ya son haploides.
Cada uno de los espermatocitos II experimentan la segunda divisin meitica, dando
origen as a cuatro espermtidas. Posteriormente estas clulas se diferencian en
espermatozoides a travs de un proceso denominado espermiognesis .
Para la formacin de los vulos en los ovarios, la clula primordial es la ovogonia que
se diferencia en ovocito I. ste pasa por una divisin meitica para producir un
ovocito II y un cuerpo polar, que es una clula de pequeo tamao. Esta primera
divisin comienza en la mujer en el tercer mes de vida fetal, se detiene en profase I
avanzada reinicindose en el momento de la ovulacin. La segunda divisin meitica
que produce el vulo y un segundo cuerpo polar, slo ocurre despus de la
fecundacin. El cuerpo polar tambin puede dividirse pero de todas formas son
clulas que no intervienen directamente en la fecundacin.



COMPARACIN ENTRE MITOSIS Y MEIOSIS




AUTOEVALUACINA.- Observe, analice y compare los siguientes esquemas:
ESPERMATOGENESIS

Clulas germinales
o o o o embrionarias
Mitosis ...........................
o o espermatogonias
Crecimiento ...........................
o espermatocito
Meiosis I ...........................
o o espermatocito II
Meiosis II ............................
o o o o espermtidas
Diferenciacin ............................


0 0 0 0 espermatozoides


OVOGENESIS

Clulas germinales
O O O embrionarias
Mitosis .......................
O O ovogonias
Crecimiento .......................
o ovocito I
Inicio meiosis I .......................
detencin en profase I
o ovocito I
Completamiento .......................
de meiosis I
o o ovocito II
Meiosis II .......................
o o o o vulo
corpusculos polares .......................

1) Para cada clula nombrada en los esquemas, complete la lnea de puntos
indicando:
a) si es 2n o n
b) si los cromosomas son dobles o simples


2) Nmero de clulas como resultado final.
En la Ovognesis:.....................................clulas
En la Espermatognesis:.........................clulas


3) Las gametas resultantes son haploides o diploides?

...............................................................................................................................

4) Son genticamente iguales o distintas entre s?

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5) Teniendo en cuenta las caractersticas de las clulas que se forman como
resultado de la mitosis. En que procesos biolgicos tiene importancia la misma?

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6) Cual es la importancia biolgica de la meiosis ?

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7) Que proceso biolgico tiene como base la meiosis ?

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C) Observe las microfotografas de fases meiticas
Analcelas e interprtelas



CUADRO COMPARATIVO



D) Completar los datos omitidos en el siguiente cuadro comparativo entre los
procesos de mitosis y meiosis.



M E I O S I S M I T O S I S
En clulas de la lnea germinal
(gametognesis)
(animales de repr. sexual)

En clulas somticas
Apareamiento de homlogos .............................................
Profase I compleja y complicada N O
Se segregan homlogos en Anafase I
(no hay ruptura de centrmeros)
..............................................
.............................................................. Una divisin nuclear
..............................................................
..............................................................
..............................................................
Producto final:
2 clulas diploides
a partir de 1 celula diploide
El ADN se duplica solo una vez ...............................................
Variabilidad gentica:
a) Segregacin independiente y al
azar de homlogos en Anafase I
(Probabilidad: 2
n
)
b) Intercambio de fragmentos de ADN
(Crossing-over)


...............................................
...............................................
...............................................



1.- Distinga entre cromtidas hermanas y cromosomas homlogos. Indique en
que etapa del ciclo celular se sintetiza el material que forma las cromtidas
hermanas

2.- Compare la gametognesis femenina y masculina humana en cuanto a:
a) duracin del proceso de divisin
b) frecuencia con que se realiza durante la vida del individuo
c) momento en que se completa la divisin
d) nmero de clulas funcionales ( aptas para la reproduccin) resultantes

3.- Explique y ejemplifique la diferencia que existe entre un organismo haploides y
diploide


4.- Considere una clula 2n=6 . Esquematice una meiosis de sta clula
suponiendo la existencia de un entrecruzamiento en cada par de homlogos
Indique en que momento se produce la divisin reduccional y cuando se
separan las cromtidas hermanas